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Abstract: This paper presents a new type of auto-detection measurement instrument which is composed of infrared photodiode,measuring circuit and frequency counter and designed for measuring the single pendulum period. It enriched the content of traditional classical experiments with new content of modern measurement techniques, and thus effectively improved the experiment precision of measurement of acceleration of gravity using pendulum.
Key words: single pendulum;infrared photodiode;frequency count;experiment equipment
中图分类号:TH11文献标识码:A文章编号:1006-4311(2011)04-0039-01
0引言
基础物理实验是物理教学的重要内容,不断改进实验教学手段,使用高新技术方法和高精度检测、计量仪器研制新的基础物理试验仪器,尽可能减少人为实验误差,提高实验精度是物理工作者的一项很有意义的工作[1]。在做用单摆测量当地的重力加速度的实验时,单摆摆动周期测定的是否准确,直接影响实验结果的精确度。在以往的实验教学中,我们一般都是采用秒表来测量单摆摆动周期的,为了减小误差一般都是采用测量单摆摆动50个周期的时间,然后求得平均值,而且要连测3-5次。在具体的操作过程中既要卡时间又要盯摆球,单摆周期数多数或少数的现象时有发生,加上停表存在的超前或滞后现象,所测结果误差较大。下面介绍我们对传统的单摆周期测量仪进行改进所得到的一种单摆周期的自动检测计量仪。
1单摆周期自动检测仪结构
单摆周期自动检测仪在原单摆实验仪的基础上增加了自动检测和自动计量电路 ,在单摆实验仪的垂直立柱下方加装一个槽型光电开关。槽型光电开关使单摆进入凹槽,从而进行遮光,接受检测。
2电检测原理
自动测量原理框图如下所述,槽型光电开关由直射型发射、接收红外光电二极管构成。把一个光发射器和一个光接收器面地面的安装在一个凹槽的两侧,发射二极管能发出红外光,在无阻挡情况下,接收光电二极管两端的电压不变;但当被测物体(金属摆球)从槽中通过时,光被遮挡,光电接收二极管会产生一个跳变的电压,输出一个开关控制信号,从而完成一个二次控制动作,槽型开关的检测因受整体结构的限制,一般距离只有几厘米,为了提高光电二极管的接收灵敏度,在接收红外光电二极管前采用聚光透镜(直径约为15mm,焦距约为30mm),凹形槽制作尽量选用黑色材料,因此有效作用距离可增加20~30倍。用成品频率计数器可直接数显该脉冲波频率或周期。单摆摆动一个周期,金属摆球将两次通过红外光电二极管,使得红外检测脉冲变化两次,将该周期乘2即为单摆摆动的周期[2]。
3测量电路由以下二部分组成
3.1 发射电路为了使发光二极管的亮度始终保持一定,由VD1、Vt1、R0、ZD1和R1构成恒流源红外发射电路。
3.2 接收电路接收电路采用了集成放大器,故线路简单,体积小,这里采用TDA4050集成电路及元件组成前置放大器,微弱的红外信号由光电二极管VD2(采用聚光透镜)接收,首先经晶体三极管vt2放大由8角输入,3角输出一个经放大的方波脉冲信号,然后送入成品频率计数器的输入端,后者可直接数显该脉冲频率或周期(或示波器),见图1[3]。
电路还设计有稳定度较高的直流稳压电源,此处不再赘述。
频率计数器选用一般通用频率率计数器即可,这里选用了系列等精度频率计数器,可获得7位有效数字(小数点后6位),直接显示频率或周期。
4测试结果
测试实验中测得摆长l=0.595米,在摆角?谆<5°的条件下,测得脉冲波周期为0.7739秒(取小数点后4位),乘2可得单摆周期T=1.5478秒,代入单摆周期计算公式:
T=2π
可算得重力加速度g=9.7950米/秒2
按照原仪器的采用秒表计数法测量,记录单摆摆动周期50次,秒表显示时间为76.95秒,可以计算出单摆的周期为1.539秒,代入上式计算得重力加速度:
g=9.9074米/秒2
此结果与实际值的误差较大,主要是除理论误差和仪器误差外,实验观察和秒表控制所带来的测量技术误差较大且难以控制,一般采用多次测量(数十次或上百次)取平均或进行统计分析。
这种单摆周期的自动检测仪只需在原有单摆实验仪的基础上增加少量器件和实验室通用设备――频率计数器,便可以方便、快捷地完成单摆实验,且消除了实验观察记录摆动次数和秒表控制所带来的测量技术误差,提高了实验精度,有较好的实用性。
参考文献:
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随着机器人技术的普及,机器人进课堂成为一种趋势。但是,从目前的机器人教学的内容来看,机器人只是作为学习的对象,有关机器人技术的本体知识构成了机器人课程的核心或全部内容,模拟实验或模拟再现生产生活中的科技产品成为机器人课程的主要教学方式。尽管这对学习机器人的基础知识和基本技能来说非常有效,但不应该成为机器人教学的全部。而科学探究,作为一个世纪以来国际基础教育改革所努力追求的方向,却在教学实践层面没有得到足够的重视。
实际上,世界各国一直提倡学生科学探究能力的培养,我国的新课程改革也特别强调科学探究活动。我们认为,将机器人作为科学探究的一种工具和平台,开展科学探究活动,是中小学机器人教育的一个重要发展方向。因此,在探究单摆周期的课堂活动中,我们将红外数字避障传感器作为科学探究实验的一种工具,搭建探究单摆周期的实验装置。这将不仅能够帮助学生学习机器人的基础知识和基本技能,掌握与单摆实验相关的知识,还能够培养学生的科学探究能力,提高他们学习机器人的积极性。
方案设计
1. 教学内容和学生情况分析
本课的教学内容是利用Arduino探究单摆的周期,并学会红外数字避障传感器的使用方法。本课的教学对象是温州中学高一学生,他们已经对Arduino机器人产生了浓厚的兴趣,并已理解了Arduino机器人的输入输出,掌握了传感器及串口监视器的使用方法,熟悉了Mixly的基本模块。
2. 教学目标
(1)掌握Arduino机器人中红外数字避障传感器的使用。
(2)通过自主设计探究单摆实验的方案,体验科学探究的过程和方法。
(3)通过利用Arduino做科学探究的实验,感受传感器为工作带来的便利,使学生对学习机器人产生积极的态度。
3. 教学重点和难点
本课的教学重点是通过利用Arduino探究单摆周期的实验,理解科学探究的一般过程与方法,难点是自主制定计划、设计探究实验方案。
4. 探究单摆周期实验的方案设计
由教学内容及教学目标可知,本课题最重要的是让学生在理解单摆实验原理的基础上,自主制定探究活动的实验方案,从而体验科学探究的一般过程与方法,提高学生学习机器人的兴趣。因此,综合考虑教学内容、教学目标及课堂时间等因素,本课题设计了如表1所示的实验方案。
硬件搭建
利用Arduino探究单摆的周期实验所用到的硬件器材有:Romeo控制器、红外数字避障传感器、USB数据线以及3P线等。
1. 红外数字避障传感器
红外数字避障传感器也称红外接近开关,是一种集发射与接收于一体的光电开关传感器。传感器在接收到信号后,会引起后测指示灯的亮灭。这款传感器背面有一个电位器,可以根据需要调节障碍的检测距离。当探头前方无障碍时,红外数字避障传感器输出高电平,有障碍时则相反。
2. 硬件搭建
红外数字避障传感器自带了3P接线,其中红线对应5V,绿线对应GND,黄线对应信号线,将其按照对应颜色的接线接在Romeo控制器的数字针脚即可。本文中接线接在了2号数字针脚,接线图如图1所示,实物图如图2所示。
图1 接线图
图2 实物图
程序编写
程序编写需解决两个问题:一是记录单摆来回摆动的次数和时间;二是根据检测到的次数和时间自动输出单摆的周期。由于单摆刚开始摆动时不很稳定,因此有必要略过前几次摆动的次数及时间。这里,我们从单摆摆动的第三次开始计时和计数。测出需要摆动的次数和时间后,就可以用总时间除以总次数,求出单摆的周期。要注意的是,每次传感器检测到小球经过最低点时,是经过了半个周期,因此在计算单摆周期时,需将次数除以2,具体程序如图3所示。
图3 程序代码
教学实践
在本次教学实践中,教师主要通过以下四个环节完成教学。
1. 抛出问题 引入新课
教师出示一张钟摆的PPT,同时给学生抛出一个问题:有同学注意到家里摆钟的钟摆在有规律地摆动,经认真观察发现,钟摆来回摆动一次的时间刚好是1秒。那么,是不是所有的钟摆来回摆动一次的时间都是1秒呢?教师让学生上网查找资料并以小组为单位展开讨论,最后请小组代表发表组内意见,同时对学生的观点给予肯定或者纠正。教师再以PPT的形式展示物理实验中单摆实验的示意图,并向学生解释周期的概念及钟摆的工作原理。教师接着向学生展示传统单摆实验的装置,并引导学生思考这样做实验可能产生的误差和不足。经各抒己见后,教师做出总结:当人观察到小球到达最低点时,开始用秒表计时并人为计数,这样操作存在很大的人为误差。那么能否利用Arduino制作一套这样的实验装置,避免人为误差呢?即这套装置应该具有如下功能:检测到小球摆到最低点时,次数自动加1,同时自动计时,自动求出单摆的周期时长。
2. 讲解新知 制订计划
通过前面的学习,学生已了解到传感器最大的优势在于能够自动获取数据,因此教师向学生提问“可以利用哪种传感器检测小球是否到达了最低点,并开始自动计时、计数呢”,引发学生思考。学生讨论后,教师向学生介绍一款新的传感器――红外数字避障传感器。在为学生简单介绍其使用方法之后,教师让学生自己完成传感器与Romeo控制器的连接并编写程序,通过串口监视器观察当传感器检测到障碍物和检测不到障碍物时的输出值。
接着,学生以小组合作的形式制定探究计划并设计实验。由于之前学生没有接触过科学探究的实验,为鼓励学生顺利完成实验任务,教师为学生提供了一份有关科学探究一般步骤的表格,作为他们的学习支架,如表2所示。在学生制定探究计划的过程中,教师要作为参与者参与其中。当学生探究遇到问题时,教师也要作为引导者引导学生走出困境。教师请小组代表汇报本组的探究计划,并请其他小组成员对他们的汇报内容进行评价,最后教师对学生的计划进行总结。探究活动结束之后,教师要给学生留一定的时间,让他们结合刚才同学及教师的意见,对探究计划做进一步的修改和完善。
表2 利用Arduino探究单摆周期导引
科学探究的步骤 具体内容
提出问题 摆钟来回摆动一次的时间都是1秒吗
形成假设 查找资料,形成自己的假设
制定计划和设计实验 1.所需器材
2.所需控制的变量
3.实验步骤
进行实验和收集数据 数据记录表
分析数据和得出结论 数据可视化、假设正确与否
评价与反思 对实验进行总结
3. 进行实验 收集数据
让学生按照制定好的实验步骤,以小组的形式进行具体的实验操作,并在实验过程中做好相关的数据记录。最后,通过对数据的处理分析,各小组得出实验结论,验证或证伪假设。
4. 得出结论 评价交流
学生以小组为单位汇报本组获取的实验数据以及得出的实验结论,并能够对本组和其他小组的探究实验做出正确的评价。
教师首先让完成探究实验的小组展示他们的实验装置,再汇报他们获得的数据和分析结论。本次教学,全班一共30名学生,3名学生为一组,一共10组。在这10个组中,单摆来回摆动一次的时间都不是1秒,并且有5个小组经过控制变量的方法得出:当摆角和小球的质量一定时,摆线越长,单摆的周期越长,反之则越短;当摆线和小球的质量一定时,单摆的周期与摆角无关;当摆线与摆角一定时,单摆的周期与小球质量无关。最后,教师选取了一个小组的探究实验作为范例,从器材选取、变量控制、程序算法、数据处理、误差分析等多个角度对作品进行了评价。在学生掌握了评价尺度后,再让各个小组对其他小组的实验过程及结论进行评价,并投票选出最佳的探究实验方案。
5. 拓展提升 课堂总结
单摆在摆角小于5°时,可近似认为是简谐运动。此时,单摆运动的周期公式为:T=2π√(L/g),其中L指摆长,g是当地重力加速度。为了鼓励学生利用已有知识,提高上网查阅资料的能力,在完成单摆周期的实验探究之后,教师提出了一个新问题:如何利用单摆实验测出当地的重力加速度?
最后,教师对本课进行总结:本课重点是掌握科学探究的一般过程和方法。因此,不仅要学习Arduino机器人本身的知识与技能,更希望大家在遇到问题时,将它作为探究过程中强有力的辅助工具,帮助我们更准确地获取数据、更方便地解决问题。
本次教学主要是让学生通过自主设计探究单摆实验的方案,体验科学探究的一般过程与方法,并能感受利用Arduino自动获取数据的优势及其给我们的工作带来的便利,从而激发学生学习机器人的兴趣。从学生的任务完成情况来看,全班一共30名学生,全都制定了探究实验的方案,并得出了实验结论。对于拓展任务,由于时间原因,许多学生只查阅了相关资料。但令人欣喜的是,有2组学生在好奇心的驱动下,利用课余时间完成了测量重力加速度的任务。另外,本次教学还有一些需要改进之处。比如,在让学生制定探究计划之前,对知识点的讲解不够全面;在编写程序的环节,对学生的提示和引导不够细致等。
[关键词] 细胞周期蛋白激酶抑制剂;肿瘤;细胞周期
[中图分类号] R979.1 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616(2014)13-44-04
[Abstract] As normally accepted, the cell proliferation is regulated through cell cycle and the occurrence of tumor may lie in deregulation of cell cycle, directly resulted from the abnormal of the complex of cyclin dependent kinase(CDK).It has become one of the most effective strategies to inhibit the activity of the complex for dealing with tumors.Thus,the study on CDK/Cylclin complex inhibitors is one of hot focuses in antitumor drug discovery.This thesis mainly discusses the types of CDK/Cyclin inhibitors and their clinical issues.
[Key words] Inhibitor;Cancer;Cell cycle
细胞周期的调控过程是在检查点的监视下,各种调控因子依次激活或灭活,从而启动细胞完成DNA复制,分裂为2个子代细胞的过程。在诸多细胞周期调控因子中,细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin dependent kinase,CDK)是处于核心位置,其与细胞周期蛋白Cyclins、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子(CKIs)等组成细胞周期调控的网络系统[1]。CDKs是一类丝氨酸/苏氨酸激酶,目前有13种包括CDK1~13,分别在细胞周期调控CDKs(1~6)和转录调控CDKs(7~13)起作用。细胞周期的调控事实上就是检查点的调控,其中以G1/S调控点最为重要。细胞周期受到外界信号如生长因子等刺激时,催化亚基CDK4/CDK6与调节亚基CyclinD结合后,CDKs残基被磷酸化/去磷酸化修饰而被激活,CDKs激活后催化Rb蛋白使之磷酸化,Rb基因(retinob lastoma gene)又称为视网膜母细胞瘤基因,是第一个被克隆的抑癌基因,其蛋白磷酸化后与转录因子(如E2F)形成复合物的能力丧失,E2F在细胞周期调控中起重要作用,能诱导CyclinE和CDK2的表达并形成CyclinE/CDK2复合体,后者进一步使Rb蛋白磷酸化,充分释放E2F,随后E2F进入核内激活一系列细胞周期进入S期的必须基因的表达。在S期内DNA复制晚期,CDK2被cyclinA激活,使转录因子E2F及时失活,阻止了由持续激活的E2F导致的细胞凋亡[2-3]。
1 CDK/Cyclin抑制剂的种类
研究统计显示,有超过90%的人类癌症中CDK、Cyclin、CKI和Rb途径中相关基因发生了变异,其中CDK和其相应的调节亚基Cyclin的失常最为频繁[2-3]。此外,细胞周期的波动促进了化疗的抗性,降低了化疗的效果。因此恢复细胞周期正常的CDK/Cyclin活性调控是治疗肿瘤的策略之一。药物研究人员已经把寻找不同类型CDK和Cyclin抑制剂作为前沿的抗肿瘤药物的重点研究方向。目前CDK抑制剂主要有内源性的和外源性的两种。
1.1 内源性小分子抑制剂
1.1.1 小分子量蛋白 内源性小分子抑制剂中最大的一类是低分子量蛋白质,根据结构功能的差异分为两大类:一类称双重特异家族INK4,包括p15,p16,p18,p19,该蛋白家族可抑制cyclin D相关激酶的活性,其抑制作用依赖蛋白与相应的游离CDK4结合,从而阻断CDK4与相应cyclin D结合形成具有催化功能的二聚体复合物。另一类叫Kip家族,包括p21,p27,p57,该蛋白家族可以和cyclin E/CDK2与cyclinA/CDK1组成的二聚体复合物再组成三聚体,通过封闭二聚体的催化活性中心从而发挥其抑制作用这些内源性抑制因子与激酶复合物结合后,可特异性地调节其活性,从而精确调节细胞由G1期向S期的转化过程,内源性CDK调节剂的存在不仅提示细胞本身的分裂、增殖具有精密的调控机制,而且也反应了该信号转导系统在细胞周期调控中的重要作用与地位[1-5]。研究表明,多种肿瘤的发生、发展过程与CDKs/cyclins的过度表达或其内源性抑制因子表达下降有关,如p16的缺失与小细胞和黑色素瘤、肺癌、乳腺癌和结直肠癌的发生密切联系[4-7];p27蛋白的缺失常见于乳癌,前列腺癌,结肠癌以及消化道肿瘤[8-12]。因此,内源性CDKs抑制因子的缺失或基因突变是肿瘤诊断的重要参考指标。
1.1.2 非编码小RNA 内源性小分子抑制剂还有一类是近年来发现的一类重要的非编码RNA――microRNA,MicroRNA是一种长度在21~23nt的非编码RNA,通过与靶基因mRNA 3’UTR区的靶位点区域相互结合而快速有效地降解mRNA或抑制蛋白的翻译,将蛋白控制在生命活动所需的较低或最佳的水平上。已发现的参与细胞周期调控的microRNA已有10余种,其中miR-1-2与miR-34分别靶向CDK4,细胞周期被停滞于G1期,近而抑制肿瘤细胞增殖[13-15];miR-22靶向CDK6细胞周期停滞于G1期,诱导乳腺癌细胞衰老。在不同的生物学过程中,这些miRNA通过靶向E2F、CDK、cyclin、p21、p27、DNA多聚酶α等促进或阻滞细胞周期的关键调节因子,进而调控细胞周期的进程。
1.2 外源性小分子抑制剂
外源性的抑制剂包括反义核酸、抗体、小分子RNA干扰(siRNA)和小分子化合物四种。小分子化合物是最主要的一类外源性CDK抑制剂。
1.2.1 小分子化合物 近几年来,由于对晶体结构的了解允许人们进行分子模拟研究,在设计开发高效、有选择性的CDKs化学抑制剂的研究方面取得了突破性进展,可以说这类化合物每天都有新的成员在增加[15-17]。目前小分子CDK抑制剂可分为以下13类:(1)嘌呤类(Roscovitine and Olomoucin)、(2)嘧啶类(PD-033299)、(3)黄酮类(Flavopiridols)、(4)噻唑类(SNS-03)、(5)吲哚类及其衍生物(SU951)、(6)哌酮类(Paullones)、(7)咪唑并吡啶、吡唑并吡啶类(AZ703),(8)吡嗪类(AT751)、(9)丁酸内酯类(butyrolactone-1),(10)十字苞碱类(UCN-01)等13种,其中发展较快的为嘌呤类、嘧啶类、氨基噻唑类、黄酮类、吲哚咔唑类似物、Paullones、靛玉红及其衍生物和吡嗪类。已有13个小分子抑制剂进入临床实验阶段。它们都是平面杂环的小分子化学物,与ATP竞争性地结合在CDK激酶的ATP结合位点上。如Seliciclib[CYC202,(R)-roscovitine]是一个2,6,9-三元取代的嘌呤类似物,选择性抑制CDKs/Cyclins,尤其是对CDK2/cyclinE的抑制作用最强。在体外对激酶活性的影响IC50值分别为CDK1/cyclinB(2.69μM)、CDK2/cyclinA(0.71μM)、CDK2/cyclinE(0.10μM)、CDK4/cyclinD1(14.21μM)、CDK7/cyclinH(0.49μM)、ERK-2(1.17μM)、PKA>50μM、PKC>100μM和SAPK>20μM。在体外,CYC202对多种人肿瘤细胞株的增殖有抑制作用,如乳腺癌、前列腺癌、肺癌等。IC50值范围是7.9~30.2μM,在24h,达到80%凋亡率时,CYC202浓度是20μM。对正常细胞的毒性明显低于对癌细胞的毒性,IC50在22.2~100μM这个范围。CYC202能抑制凋亡抑制基因的表达,通过抑制MDM2的表达,阻滞p53的降解,诱导肿瘤细胞周期停滞G1/S与G2/M期,降低pRb的磷酸化水平,诱导细胞周期各个时相的细胞凋亡。体内实验表明,CYC202耐药性好,口服生理活性良好,对由人结肠癌、子宫癌细胞接种裸鼠体内的实体瘤有明显的抑制作用。CYC202正在进行2个Ib期剂量增加的临床实验,在Ib期研究中发现,10例患有卵巢癌的患者服用CYC2024个月以上,肿瘤没有增加和严重的治疗相关的副作用,其中1个患者的肿瘤缩小了30%以上,治疗1年以上的患者病情稳定。Ⅱ期临床研究发现,CYC202单独应用效果稍差,与其他化疗药物联合应用治疗效果显著。CYC202联合卡培他滨治疗乳腺癌,联合2,2-二氟脱氧胞嘧啶核苷或顺铂治疗肺癌、鼻咽癌的IIb期临床实验也在进行[18-24]。
1.2.2 小分子RNA干扰 小分子RNA干扰技术的发展和应用,使特异性的干预靶分子的基因表达的研究成为可能,有不少科学家开始从基因水平干预CDK/Cyclin的合成。Lima等[25-26]将靶向CyclinE的siRNA转染到肝癌细胞Hep3B、HepG2、SNU449(CyclinE过表达),HuH7(CyclinE没有过表达)后发现,在过表达CyclinE的细胞中,CyclinE的表达下降了90%,DNA合成明显下降,细胞发生凋亡。Galimberti等[27]将分别靶向CyclinE、CDK2、CDK1的siRNA转染鼠肺癌细胞HOP-62、H-522、H-23后,发现CyclinE/CDK2能引起细胞凋亡,抑制肺癌细胞的增殖,而CDK1siRNA对细胞凋亡无影响。CDK1 siRNA干扰导致的CDK1表达降低只引起细胞期阻滞,细胞增殖减慢;而CDK1和CDK2 siRNA的共同干扰作用导致的CDK1、CDK2表达同时降低,引起细胞周期S期和G2/M期的阻滞,同时诱导了细胞的凋亡。曹银芳等[28]成功将靶向CDK2/CyclinE的siRNA重组表达载体转染肝癌HepG2细胞后,发现CDK2和CyclinE mRNA表达显著下降,细胞周期停滞于S期发生阻滞,G1期细胞明显增多,Caspase-3活性增强,HepG2细胞发生了凋亡,并且细胞周期的改变与转染后HepG2细胞体外增殖力下降是一致的。
2 问题与展望
CDK1,CDK2,CDK4,CDK6是热门的抗癌靶标,但由于激酶ATP结合位点高度的保守性,选择性小分子抑制剂的设计与开发是一个公认的难题。因激酶结构的保守性而产生的耐药性和毒副作用,严重阻断了化疗药物的抗肿瘤效应,限制和影响了治疗的效果。研究发现CDKs/Cylcins抑制剂的临床应用出现的最大问题是肿瘤的耐药性导致了肿瘤的复发,疗效明显降低。其抗性的产生与该致癌激酶基因的扩增、补充途径及信号通路的反馈调节相关。此外,其抗性还与药物靶点的单一或群体突变有关,导致了药物与靶点的亲和性差。
siRNA药物诱导的RNAi具有特异性和高效性,是对成瘾性致癌基因实施靶向治疗的理想选择。研究发现,化疗药物与siRNA联合作用于肿瘤细胞,具有协同作用,基因治疗可作为化学治疗药物外的补充途径。Wang等[29]发现,用livin-siRNA表达载体转染肿瘤细胞导致livin基因沉默后,可激活caspase-3并增加肿瘤细胞对紫外线等其他促凋亡刺激信号的敏感性。用RNAi技术下调bcl-2或XIAP基因表达,可增加人乳腺癌细胞MCF-7依托泊苷及阿霉素的敏感性,表现为肿瘤细胞的数量与活性下降、凋亡率增加,较单一化疗药物处理组活性细胞数目明显减少。Chistiane等[30]将针对多药耐药基因MDR1编码的P-gp-siRNA转染人胰腺癌细胞EPP85-181RDB和人胃癌细胞EPG85-257RDB,发现上述细胞对柔红霉素的耐药性分别下降了89%和58%。具有MDR特性的K562细胞经上述siRNA处理后,也观察到类似效果。因此,siRNA干扰技术可能是解决临床上药物抗性的主要手段之一。
CDK及其相关蛋白表达异常与肿瘤的发生和发展密切相关。不少外源性或者是内源性的CDK抑制剂在抑制CDK后,都能很好的抑制肿瘤的发生和发展。然而单独CDK抑制剂治疗,会有肿瘤逃逸的现象,而无法根治肿瘤。因此与其他治疗手段联合的治疗方式,将是CDK抑制剂研究的方向之一。
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【关键词】 胃癌前病变 蛋白激酶C 细胞周期素E 益气化瘀中药 大鼠
Abstract:Objective To observe the effect of Yiqi Huayu Recipe on the expression of protein kinase C (PKC) and CyclinE in rats with gastric precancerous lesions (GPL). Methods The model of GPL was established mainly through N-methyl-N-nitro N-nitrosoguanidine (MNNG) together with other factors including alcohol stimulation and undue hunger and overeating. The survived rats after modeling were randomly pided into spontaneous recovery, and high-, moderate- and low-dose Yiqi Huayu group. After the corresponding treatment, the expression of PKC and CyclinE were detected by immunohistochemical method in each group. Results The expression of PKC and CyclinE in trement group were distinctly lower than those in spontaneous recovery group (P
Key words:gastric precancerous lesions;protein kinase C;CyclinE;Yiqi Huayu Recipe;rat
慢性萎缩性胃炎(CAG)伴中重度不典型增生或/和不完全性结肠型化生是胃癌的重要癌前病变。益气化瘀法是临床治疗胃癌前病变的主要治疗方法,取得了很好的治疗效果。为了探讨其作用机制,特设计本实验,现报道如下。
1 材料与方法
1.1 主要药物、试剂及仪器
甲硝基亚硝基胍(MNNG)为Fluka公司产品,每周用双蒸水配成1 g/L的母液,4 ℃避光储存,临用时用双蒸水配成所需浓度;脱氧胆酸钠购自湖北省医药公司;雷尼替丁由杭州赛诺菲圣德拉堡民生制药有限公司生产;蛋白激酶C(PKC)小鼠抗大鼠单克隆抗体为Santa Gruz公司产品;生物素化山羊抗小鼠IgG(二抗)、辣根酶标记链亲合素(三抗)、DAB、封闭用山羊血清等为博士德试剂公司产品;细胞周期素E (CyclinE)单克隆抗体购于福州迈新生物技术开发公司。益气化瘀中药主要由太子参、石斛、三七、郁金、白花蛇舌草等组成,浓度2 g/mL。
1.2 造模及给药
选用SPF级6周龄SD雄性大鼠62只,体质量100~120 g。造模参照严氏等[1-3]综合造模方法并加以改进。大鼠自购进后适应性喂养1 d。从62只大鼠中随机抽取13只作为正常组,其余49只用于造模。正常组大鼠不做任何处理;造模大鼠每日自由饮用100 mg/L MNNG液(饮料瓶用油漆涂黑避光)、进食含0.3 g/L雷尼替丁的纯鼠饲料、上午用56 ℃ 150 g/L的氯化钠液按10 mL/kg灌胃,进食2 d,禁食l d,进食当天下午用8.5 g/L脱氧胆酸钠溶液按l0 mL/kg灌胃,禁食当天下午用400 mL/L乙醇按l0 mL/kg灌胃,连续24周。24周末时随机抽取正常组和造模大鼠各1只,杀检,观察组织病理学变化(以HE染色光学显微镜下观察的结果为主),确认模型是否成功。
造模型成功后,将造模存活的48只大鼠随机分为自然恢复组l2只,中药高、中、低剂量组(简称高、中、低剂量组)各12只。高剂量组每日每只按20 g/kg(相当于成人1 d用量的2倍)灌胃,中剂量组按10 g/kg(相当于成人1 d用量)灌胃,低剂量组按5 g/kg(相当于成人1 d用量的一半)灌胃。治疗16周。自然恢复组同正常组大鼠常规饮食。40周末所有动物禁食1 d,处死,剖腹取胃,沿胃大弯剪开,生理盐水冲洗,肉眼观察,平铺于硬纸板上,于胃窦部剪取组织1块,40 g/L多聚甲醛固定,石蜡包埋,切片5 mm,免疫组织化学染色。
1.3 检测方法及判断标准
免疫组织化学用SP法,按试剂说明书操作,DAB显色,PBS代替一抗作阴性对照,已知阳性切片作阳性对照。CyclinE定位于细胞核,免疫组化染色阳性信号为棕色和棕黄色;PKC主要存在于胞浆,免疫组化染色阳性信号为黄色。
CyclinE每张切片随机选取4个400高倍视野。“-”:无阳性细胞或阳性细胞数50%细胞染色。染色总评分为染色强度+染色范围。
1.4 统计学方法
计数资料用卡方检验,计量资料用t检验,数据用x±s表示, P
2 结果
(见表1、表2)表1 各组大鼠PKC蛋白表达情况(略)注:与自然恢复组比较,*P
3 讨论
PKC是1977年由日本学者Nishi zuka等首次在鼠脑的胞质成分中发现的一种依赖磷脂和钙的蛋白激酶,其广泛分布于真核细胞中,由多种具有不同生物学特性的同工酶组成,是细胞内信号传导的重要递质。PKC通常处于失活状态,被激活后可由细胞质转位到细胞膜,能够使众多蛋白质中的丝氨酸和苏氨酸发生磷酸化而发挥作用。因此,PKC的活化不仅与正常细胞和异常细胞的生长、分化、凋亡等多种生物学效应有关,更在肿瘤的发生、发展、转移和多药耐药等方面发挥重要作用。有人采用不同浓度的PKC抑制剂Staurosporine(ST)作用于人胃癌细胞株MGC 803和SGC 7901后,细胞增殖受到明显抑制,表明PKC在胃癌细胞增殖中具有重要作用[5]。胃癌细胞增殖时,PKC活性表现为上调趋势,而诱导胃癌细胞凋亡时,它表现为下调趋势[5-7],一些化疗药物和抑制增殖及诱导凋亡的药物如特异性环氧化酶2抑制剂也通过下调PKC活性而抑制胃癌细胞生长[8-9]。CyclinE是细胞周期G1/S期转移调控的一个正性调控因子,在细胞周期中含量是呈周期性变化的细胞周期调控蛋白[10]。异常情况下CyclinE蛋白失去周期性表达,而在整个细胞周期中表达水平高,则可使细胞发生异常增殖[11],从而参与肿瘤的发生发展。
本实验结果表明,以MNNG为主的多因素联合攻击法诱发的大鼠胃癌前病变(自然恢复组)黏膜PKC、CyclinE蛋白表达明显增高,益气化瘀中药治疗组能使PKC蛋白表达及CyclinE蛋白阳性例(率)明显下降,与自然恢复组比较,P
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[关键词] 生物蛋白胶;高位肛周脓肿
[中图分类号] R657.1+5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701(2009)36-95-02
Goligher[1]认为高位肛周脓肿包括高位肌间脓肿、直肠后脓肿、骨盆直肠窝脓肿等。因其脓腔位置高、创面大,故愈合时间较长。尤其术后换药时冲洗脓腔,给患者带来较大的疼痛。我科于2006年5月~2008年12月采用生物蛋白胶Ⅱ期封堵术治疗高位肛周脓肿30例有较好的效果,能缩短伤口愈合时间,减轻换药时的疼痛,现总结如下。
1资料与方法
1.1一般资料
从2006年5月~2008年12月抽取观察组和对照组均30例,入选病例均符合高位肛周脓肿的诊断标准。观察组30例,男18例,女12例;年龄22~48岁,平均(35.4±1.9)岁;病程5~14d,平均(7.9±1.1)d;均为1个外口;术前均行腔内B超检查,结合术中探查,其中诊断为骨盆直肠窝脓肿22例,高位后马蹄形脓肿8例。对照组30例,男17例,女13例;年龄26~50例,平均年龄(34±2.3)岁;病程4~8d,平均(3.5±1.5)d;均为1个外口;其中诊断为骨盆直肠窝脓肿18例,高位后马蹄形脓肿12例。
1.2诊断标准及病例选择
西医诊断标准采用2000年4月中华医学会外科学分会肛肠外科学组成都会议“暂行标准”[2,3]。
1.3纳入标准
①符合西医诊断标准;②符合中医诊断标准。
1.4排除标准
①排除特异性感染、急性感染者和嵌顿型混合痔者;②排除有严重全身合并症(如血液病、心肺肝肾功能严重不全等)者;③排除瘢痕体质、过敏体质及多种药物过敏者。
1.5手术方法
观察组和对照组术前肠道准备、术后抗生素使用均一致。术前清洁灌肠,鞍麻或硬外麻,封堵左侧脓腔采用左侧卧位,封堵右侧脓腔采用右侧卧位。先行脓肿切开根治术,尽可能在齿状线附近找到内口并切开内口,术中须尽可能用刮匙搔扒脓腔内腐烂组织,完全切除脓腔壁硬结组织。术后换药时创面填塞油纱,使创面充分引流,术后使用敏感抗生素积极抗感染治疗,待创面肉芽新鲜、分泌物少时,可择期行生物蛋白胶Ⅱ期封堵术。Ⅱ期封堵术仍采用鞍麻或硬膜外麻醉,麻醉满意后,先用无醇型安尔碘消毒液冲洗创面,再用生理盐水棉球或纱布彻底清洗整个创面,然后用配置好的丰联纤维蛋白封闭剂10mL从高位脓腔顶部注入创面,使之充分充满空腔,封堵创面,术毕后,外敷生理盐水纱布。对照组采取传统切开挂线术,以球头探针自人造外口沿主管道向肛内探查,于内口拉出肛外,先将通过内括约肌、外括约肌皮下部、浅部的低位管道部分作放射状切开,切除外口周围组织,搔刮腐败坏死组织,瘢痕组织一并切除。对波及外括约肌深部和耻骨直肠肌的高位管道则通过探针挂入橡皮筋并拉紧结扎,其余支管一并切除,修剪切口成V形。
1.6观测指标
术后疼痛程度(采用视觉模拟评分法)、创面愈合时间、治愈率。
2结果
根据1992年全国肛肠学会制定的疗效标准,超过半年随访,观察组治愈28例,2例复发,治愈率93.3%;对照组治愈27例,3例复发,治愈率90.0%。观察组伤口愈合时间及疼痛程度优于对照组,见表1。
3讨论
医用生物蛋白胶也称为纤维蛋白封闭剂,是从血液中提取相关成分、,模拟人体凝血过程的最后阶段、最终形成乳白色凝胶物而在外科手术中发挥各种临床功能的一种高科技医用生物材料。通常用于手术过程中术野渗血及小静脉出血的局部止血;封闭缺损组织;防止组织粘连,促进创伤愈合。国内外已将此材料广泛用于临床各类瘘管,如肠瘘[4]、肠吻合口瘘、食管胃吻合口瘘、胰瘘、淋巴瘘、消化道外瘘等,并取得良好的效果。国内暂未见医用生物蛋白胶治疗肛瘘及脓肿的文献。当它与脓腔创面接触时,能迅速形成凝块,有效地填堵、封闭缺损的组织――脓腔。组织生物相容性好,无局部异物反应[5],且在2周左右可被组织吸收,不需从脓腔中排出。生物蛋白胶经自带的导管系统被输送到脓腔的顶端,在脓腔顶端深部混合形成凝块,发挥填堵效应。随着导管系统边注胶边退出,使脓腔由深至浅完全填堵封闭。其方法简便易行、效果确切,适用范围广,为高位脓肿的治疗提供了一种新方法。为达到理想的治疗效果,行生物蛋白胶Ⅱ期封堵术的时机选择在脓肿切开排脓根治术后,脓腔创面肉芽组织新鲜,且分泌物少。封堵前,应尽量将脓腔用生理盐水清洗干净,然后用干纱布吸净脓腔内液体,尽可能填充所有的脓腔,不留残腔。因纤维蛋白封堵剂的主要成分为蛋白质,与酒精、碘和重金属接触会引起蛋白质变性;因此,应避免与上述物质接触,术后仅用生理盐水纱布外敷创面即可。术后3日内控制排大便,以防排便时肛旁肌肉组织收缩而引起脓腔内所填塞的凝胶外漏。
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