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根据国务院《退役士兵安置条例》和《省人民政府关于做好我省年冬季退役士兵接收安置工作的通知》(府〔〕80号)精神,结合我市实际,现就做好我市年冬季退役士兵接收安置工作通知如下:
一、接收安置对象
年冬季退役士兵接收安置对象为:符合国务院《退役士兵安置条例》和《省人民政府关于做好我省年冬季退役士兵接收安置工作的通知》(府〔〕80号)规定的年冬季退出现役的士兵。
二、安置原则
年冬季退役士兵安置工作实行“扶持就业为主,重点安置为辅”的安置原则。对重点安置对象实行“按系统分配任务,包干安置”的原则,由各级政府下达指令性计划一次性安置就业,并务必于接收退役士兵的6个月内,开出安置介绍信,并督促有关单位尽快落实,确保退役士兵真正上岗就业。待安置工作期间,由安置地人民政府按最低生活保障标准发给其生活补助费。对于无正当理由不服从分配者,政府不再负责安置。本人选择自谋职业的,按规定发给一次性安置补助金。一般安置对象,没有选择自主就业的城镇退役士兵,可领取自谋职业一次性安置补助金,选择自主就业的城镇退役士兵,可领取一次性经济补助金;没有选择自主就业的农村退役士兵,可领取一次性生产生活补助金,选择自主就业的农村退役士兵,可领取一次性经济补助金。一般安置对象由政府提供优惠政策扶持就业。
(一)重点安置对象(符合下列条件且未选择自主就业安置的退役士兵,可以选择由政府安排工作或者自谋职业的方式安置)。
1、服现役满12年的士官;
2、服现役期间获得大军区以上(含大军区)单位授予荣誉称号、平时荣立二等功以上奖励或者战时荣获三等功以上奖励的士兵;
3、因战致残被评定为5级至8级残疾等级的士兵;
4、烈士子女士兵;
5、服现役满10年、11年符合全程退役条件的士官;
6、服现役满上士军衔规定年限的直接从非军事部门招收的士官;
7、因公致残被评定为5级至8级残疾等级的士兵;
8、退出现役前父母已双亡的退伍义务兵和退出现役前父母已双亡的未婚退役士官。
(二)除重点安置对象外,其余的退役士兵为一般安置对象。
(三)年冬季开始,在退出现役1年内,退役士兵可自主选择参加高等职业教育、成人高等教育、普通高等教育和最短不少于3个月职业技能培训,每人只能选择其中1项,退出现役1年以上的,参加职业技能培训按《国务院关于加强职业培训促进就业的意见》(国发〔〕36号)规定执行。
三、补助金标准及资金来源
(一)、和区补助金标准
1、城镇退役士兵一次性安置补助金(一次性经济补助金)标准,根据全市上年度在岗职工人均工资收入水平确定,即中心城区城镇退伍义务兵、服役满一、二期的城镇复员士官基本补助金标准按我市上年度在岗职工人均工资收入的100%发放,转业士官基本补助金按我市上年度在岗职工人均工资收入的150%发放,从服满义务兵年限后第一年算起,每多服役一年,增加上年度在岗职工人均一个月工资的补助。
2、农村退役士兵一次性生产生活补助金(一次性经济补助金)标准,根据当地上年度农村居民人均纯收入确定,即农村退伍义务兵、服役满一、二期的复员士官基本补助金按照当地上年度农村居民人均纯收入的100%发放,从服满义务兵年限后第一年算起,每多服役一年,增加上年度农村居民人均一个月纯收入。
3、获得大军区以上(含大军区)单位授予荣誉称号或荣立二等功(含二等功)以上的、烈士子女、弟妹接枪入伍、退役时父母已双亡的退役士兵,以及七、八、九、十级残疾军人增发20%的补助金;五、六级残疾军人增发50%的补助金。
(二)、和区经费来源
金平、龙湖和濠江区的城镇退役士兵的一次性安置补助金(一次性经济补助金)及市举办的职业技能培训费用(培训标准每人按800元计),由市、区财政按1:1比例负担。农村退役士兵一次性生产生活补助金(一次性经济补助金)由区财政负担,省财政按照当地上年度农村人均纯收入的50%给予补助。
(三)、、区和县可根据上述(一)、(二)原则,制定具体补助标准,资金来源按原财政渠道解决。
【关键词】人格教育;心理素质
一、通过人格教育构建学员健全的心理结构
人格是人的素质的重要组成部分,是人心理面貌的集中反映。人格教育是着眼于发展受教育者全部心理面貌的教育,其目标是使个体具有良好的心理素质与健康的心理状态,促进个体心理结构的健全发展,构建一个多层次、高效能的心理调节与控制系统,使个体潜力得到最大的发挥。通过人格教育可以促进知、情、意协调统一,建立一种完整和健全的心理结构,提高人的总和心理素质,从而有助于个体更好地适应社会环境。军队院校人格教育的基本内容应该从认知、情感和自我意识三个方面入手。首先是认知教育。军校教育不仅要帮助学员掌握先进的军事理论和广泛的军事知识,更要培养学员适应未来现代化战争所应具备的快速的思维能力、精准的判断力,合理的认知方式和健全的认知结构。其次是情感教育。情绪是心理健康的晴雨表,要使学员认识常见的负性情绪,学会调节和控制自己的情绪,防止负性情绪对心理健康的伤害,使自己经常保持稳定的情绪状况,以适应高强度、超负荷的现代化战争。第三是自我意识教育。自我是人格的核心,只有正确地认识自己,才能形成健全的人格,正确的自我认知是心理全面发展的基础。对自己能有正确认识的人是自尊、自强、自信的人。能正确认识自己的人往往具有较强的亲和力与团队合作精神,具备自我调控能力,能努力改变和发展自身的能力素质,适应不断变化的客观环境。
二、通过人格教育锻造学员坚韧的意志品质
学员健康人格的形成是与克服脆弱、鲁莽、多疑等性格弱点和各种困难相联系的。战争是以鲜血和生命为代价的激烈角逐,学员身系重大责任,将面对未来高技术战争下异常的心理压力,因而必须塑造他们勇敢顽强、坚忍不拔的意志品质。坚韧的意志品质不是与生俱来的,只有经过后天的培养和有意识、有目的的磨砺才能获得。这就要求在教学与训练中要有意识地创设困难情境,指导、鼓励学员刻苦磨练,锻造他们坚毅顽强的优良性格。实践证明,在越困难的环境下,越有能力克服困难完成任务的人,人格越完善,才能是越有希望取得成功的人。具有坚韧意志品质的军人,往往有更强的心理承受能力,面对各种应激事件时能应付自如,处变不惊,临危不惧,更好的适应战场环境,完成任务使命。因此,锻造坚韧的意志品质应成为军校学员人格教育的一项重要内容。
三、通过人格教育帮助学员树立坚定、正确的信念。保持统一的人格
信仰危机最容易造成人们心理上的崩溃,没有了精神支柱,人很难承受各方面强大的心理压力。军校学员正处在人生观、价值观的形成时期。作为年轻人他们看问题往往容易偏激和片面,常常不能正确对待和处理好自己在现实生活中遇到的挫折和困难,以致引起心理冲突和矛盾,如果长时间不能排解,就有可能积聚成心理疾患。同时,由于他们的知识和经验有限,对复杂社会问题的分析判断能力还不高,对不健康的思想意识往往缺乏分辨力和抵抗力,容易形成一些错误的态度,甚至做出非理性的行为。因此,通过人格教育,帮助学员树立和巩固正确的人生价值目标的同时,引导他们把个人理想与远大理想、社会期望结合起来,把个人的兴趣、爱好同军队发展的实际结合起来,引导他们从点滴做起,从现在做起,要让他们真正明白由“小”到“大”、不积跬步,无以至千里的道理。最终要落实在具体行动上,落实在日常的学习、训练、生活中,在实践中不断完善自己的人格,保持主观世界客观世界的和谐统一。
一、革命残废军人因战致残,经医疗终结评残发证以后一年内因伤口复发死亡,根据《革命烈士褒扬条例》的规定,经团以上政治机关或县、市、市辖区人民政府审查批准为革命烈士,不分在职还是在乡,均由家属居住地的县、市、市辖区民政部门按革命烈士的抚恤标准发给其家属一次抚恤金,其家属享受革命烈士家属的待遇。
二、革命残废军人因战致残,经医疗终结评残发证一年以后因伤口复发死亡和因公致残的革命残废军人伤口复发死亡,在乡的由县、市、市辖区民政部门,按因公牺牲军人抚恤标准发给其家属一次抚恤金,其家属享受因公牺牲军人家属的待遇;在职的(包括在军队、机关、企事业单位工作的),由所在单位按本单位执行的有关因公牺牲或因工死亡的抚恤规定办理。
三、革命残废军人伤口复发死亡,必须由医院鉴定并出具证明,在乡的由县、市、市辖区人民政府审查属实,在职的由所在县(团)级以上单位审查属实,才能予以确认。
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军队人员级别|政府工作人员津贴、工资级别 | 附 注
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团|正 团| 14 |
|副 团| 15 |1.军龄满五年以上之老战士,按副班级待遇;
级|准 团| 16 |
---|---|--------------| 满三年以上不足五年者,按老战士待遇;
营|正 营| 17 |
级|副 营| 18 | 不足三年者按新战士待遇。
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连|正 连| 19 |2.准师级以上人员转业者,按其新任职务,符
级|副 连| 20 |
---|---|--------------| 合其具体条件评定。
排|正 排| 21 |
级|副 排| 22 |3.转业到不执行各级人民政府工作人员津贴、
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班|正 班| 23 | 工资标准之单位的人员,不适用此比照表,
级|副 班| 24 |
---|---|--------------| 可按其所在单位执行之工资标准评定工资。
战|老战士| 25 |
[摘要] 目的 探讨姜黄素对铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa,Pa)感染的肺上皮细胞的体外抗炎效应。 方法 体外培养肺上皮细胞系NCI-H292,加入姜黄素和培养的Pa感染不同时间。Western blot检测和实时定量PCR分别检测NCI-H292细胞中红素氧合酶1(Heme oxygenase-1,HO-1)mRNA和蛋白表达情况;ELISA检测IL-1β和IL-8的产生。同时采用RNA干扰HO-1表达后,观察对Pa诱导IL-1β和IL-8产生的影响。 结果 Pa感染NCI-H292细胞后,IL-1β和IL-8含量分别为(87.52±7.96)pg/mL和(205.63±34.25)pg/mL,50 μg/mL姜黄素孵育8 h后,其含量分别降至(15.78±10.74)pg/mL和(49.82±14.28)pg/mL,处理前后差异有统计学意义(P < 0.05)。同时,姜黄素能在转录翻译水平分别调控HO-1 mRNA和蛋白表达,其中50 μg/mL姜黄素能将HO-1 mRNA增高19倍,蛋白表达水平提高4.8倍(P < 0.05)。HO-1 siRNA沉默HO-1表达后,与Pa组相比,IL-1β和IL-8分泌进一步增高。 结论 姜黄素可能通过上调HO-1的表达而发挥对肺上皮细胞的抗炎作用。
[关键词] 血红素氧合酶-1;姜黄素;铜绿假单胞菌;肺上皮细胞;白介素-1β;白介素-8
[中图分类号] R734.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2013)11(b)-0013-04
Study of molecular mechanism of the effect of Curcumin on pseudomonas aeruginosa-induced cytokines production in lung epithelial cells
LI Bo LUO Jinhua HE Zhiguo
Department of Infectious Diseases, the Third Affiliated Hospital, University of South China, Hu′nan Province, Hengyang 421000, China
[Abstract] Objective To investigated the anti-inflammatory effects of Curcumin in pseudomonas aeruginosa -infected lung epithelial cells in vitro. Methods Lung epithelial cell line NCI-H292 was cultured in vitro, and was incubated with Curcumin and pseudomonas aeruginosa for various times. Expression of Heme oxygenase-1 (HO-1) mRNA and protein was detected by real-time PCR and Western blot, respectively; production of IL-8 and IL-8 was detected by ELISA. RNA interference was used to silent HO-1 expression, and pseudomonas aeruginosa-induced production of IL-1β and IL-8 were detected. Results After pseudomonas aeruginosa infection, the concentration of IL-1β and IL-8 was (87.52±7.96) pg/mL and (205.63±34.25) pg/mL, respectively. When incubated with 50 μg/mL Curcumin for 8 h, IL-1β and IL-8 decreased to (15.78±10.74) pg/mL and (49.82±14.28) pg/mL (P < 0.05). Curcumin could also induce NCI-H292 cells expression of HO-1 mRNA at the transcriptional and translational level, and 50 μg/mL Curcumin increased the mRNA and protein 19 and 4.8 fold, respectively (P < 0.05). Furthermore, silencing of HO-1 expression could increase NCI-H292 cell secretion of IL-1β and IL-8, as compared with pseudomonas aeruginosa group. Conclusion Curcumin exhibits anti-inflammatory activity through induction of HO-1 expression in lung epithelial cells.
[Key words] Heme oxygenase-1; Curcumin; Pseudomonas aeruginosa; Lung epithelial cells; IL-1β; IL-8
[基金项目] 湖南省衡阳市科学技术发展计划项目(编号2012KJ28)。
血红素氧合酶(Heme oxygenase-1,HO-1)是催化血红素降解为CO、Fe2+和胆红素的限速酶,并在机体的抗炎症、抗氧化损伤中发挥重要作用[1]。研究显示,铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa,Pa)感染后,肺上皮细胞可反馈性表达HO-1从而在一定程度上对抗Pa感染所诱导的氧化应激损伤[2-3]。因此,以HO-1为出发点,寻求相应的诱导剂,可能对Pa感染所导致的肺黏膜损伤具有重要意义。姜黄素(Curcumin)是从姜科姜黄属植物的根茎中提取的一种植物多酚,大量研究证明,姜黄素具抗氧化、抗炎、清除自由基、抗肿瘤、抗炎症以及对心血管系统、消化系统等多方面药理作用[4-5]。本研究旨在探讨姜黄素对肺上皮细胞表达HO-1的影响,并观察其是否能抑制Pa感染所诱导的细胞因子产生。
1 材料与方法
1.1 主要试剂
姜黄素购自Sigma公司。SYBGREEN PCR Mix购自ABI,TRIZol为Invitrogen产品。cDNA逆转录试剂盒购自Fermentas;RIPA裂解液、ECL试剂盒为Pierce产品;IL-1β和IL-8 ELISA购自深圳博盛生物科技有限公司。BCA试剂盒购自江苏碧云天生物技术公司,HO-1和β-actin多克隆抗体购自Santa Cruz。RPMI1640培养基和胎牛血清购自Gibco。
1.2 细胞和Pa菌培养
人肺上皮NCI-H292细胞细胞系购自中科院上海细胞库,细胞用含10%胎牛血清的RPMI1640培养基,在37℃ 5%CO2环境中培养。获取Pa单菌落,接种于LB液体培养基,37℃培养3 h。随后取200 μL菌液接种至LB琼脂平板中,37℃条件下过夜培养。洗脱并收集平板上细菌,10 000 r/min条件下离心5 min,随后用无菌PBS洗涤2次。采用分光光度计于650 nm波长下测定菌液OD值并计算细菌的浓度。
1.3 Pa感染和姜黄素处理
NCI-H292细胞铺于96孔板(1×106/mL,0.1 mL),24孔板(1×106/mL,1 mL),或者6孔板(1×106/mL,2 mL),培养48 h,当其达到80%汇合度后,用无菌PBS漂洗,当细胞生长成片生长时,加入培养的Pa(1×109 cfu/mL)以及不同浓度(10、30 μg/mL和50 μg/mL)的姜黄素处理并继续培养24 h。
1.4 实时定量PCR检测HO-1 mRNA的表达
细胞处理结束后,根据试剂盒操作说明提取总RNA并逆转录为cDNA,产物用RNA酶处理。设计特异性引物用于检测HO-1 mRNA表达的定量。HO-1其正向引物:5′ - GCTCAAAAAGATTGCCCAGA -3′;反向引物:5′ - GCGGTAGAGCTGCTTGAACT - 3′。50 μL反应体系包括:25 μL 2 × SYBR Green Master Mix(200 nmol/L dATP、dGTP和dCTP;400 nmol/L dUTP;2 mmol/L MgCl2,0.25 U UNG,0.625 U AmpliTaq Gold DNA聚合酶,25 pmol正向和反向引物,2 μL cDNA。利用ABI Prism 5700仪对HO-1进行扩增。首先50℃ 2 min,95℃ 10 min。随后95℃ 15 s;60℃变形、延伸60 s,共40个循环。同时采用β-actin为内参。mRNA表达倍数改变采用2ΔCt表示,ΔCt=(Ct对照基因-Ctβ-acin)-(Ct待测基因-Ctβ-acin)。
1.5 Western blot分析HO-1蛋白表达
6孔板中细胞经PBS漂洗后,加入RIPA细胞裂解液裂解30 min,4℃ 12 000 g离心15 min,上清即为细胞总蛋白。裂解液中的蛋白用Bradford试剂在分光光度计中测定OD595处吸光度。50~70 μg总蛋白在5%~10%聚丙烯酰胺凝胶中电泳,并转移至PVDF膜上,经5%无脂牛奶封闭后,分别用孵育一抗,二抗。ECL发光,显影。
1.6 IL-1β和IL-8检测
收集感染后24孔板中细胞上清液,按照ELASA 试剂盒说明书检测IL-1β和IL-8水平。即100 μL细胞上清液加入到每个捕获抗体包被的微孔板中,室温孵育2 h。洗板后,加入100 μL检测抗体,室温继续孵育2 h。随后弃混合物,每孔加入100 μL streptavidin-HRP,室温避光孵育20 min。最后,每孔加入100 μL底物,室温避光孵育20 min,然后加入50 μL终止液,分光光度计检测450 nm处OD值。
1.7 HO-1基因沉默实验
HO-1基因特异性siRNA序列由Invitrogen公司合成(forward:5′-AACUUUCAGAAGGGCCAGGUGTT-3′,reerse:5′-CACCUGGC CCUUCUG AAAGUUTT-3′),转染方法按照Ambion公司提供的试剂盒说明进行。生长于100 mm培养皿中的NCI-H292细胞加入0.5 mL瞬时转染液(含8 μL siPORT Amine,20 nmol/L siRNA),使siRNA转入细胞内。37℃、5% CO2条件下孵育5 h后,加入1.5 mL完全培养基并继续孵育48 h,HO-1的干扰效果采用Western blot加以验证。
1.8 统计学方法
计量资料数据以均数±标准差(x±s)表示,多组比较采用单因素方差分析并行Student's t检验。计数资料以率表示,采用χ2检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 姜黄素下调Pa感染所诱导的细胞因子产生
ELISA结果显示,NCI-H292细胞未刺激时IL-1β和IL-8水平较低。Pa感染能显著促进其分泌细胞因子。而经不同浓度姜黄素处理后,细胞因子产生显著降低,见表1。
表1 姜黄素对Pa感染诱导细胞因子产生的影响(pg/mL,x±s)
注:与对照组比较,*P
2.2 姜黄素诱导NCI-H292细胞表达HO-1 mRNA
Pa感染虽然能轻度上调HO-1 mRNA表达,但经10~50 μg/mL姜黄素孵育8 h后,real-time PCR结果显示,30 μg/mL姜黄素能使HO-1 mRNA增高2.4倍,而50 μg/mL姜黄素处理后,HO-1 mRNA增高了19倍,见图1。
与Pa感染组比较,*P < 0.05;1.阴性对照组;2.Pa感染组;3.Pa+10 μg/mL姜黄素组;4.Pa+30 μg/mL姜黄素组;5.Pa+50 μg/mL姜黄素组;Pa:铜绿假单胞菌
图1 姜黄素对NCI-H292细胞表达HO-1 mRNA的影响
2.3 姜黄素对NCI-H292细胞HO-1蛋白表达的影响
如图2所示,不同浓度的姜黄素刺激NCI-H292细胞后,HO-1蛋白的表达量随其浓度的递增而增高,其中50 μg/mL姜黄素能将HO-1蛋白表达水平提高4.8倍。而内参β-acin在所有处理组中保持恒定。
1.阴性对照组;2.Pa感染组;3.Pa+10 μg/mL姜黄素组;4.Pa+30 μg/mL姜黄素组;5.Pa+50 μg/mL姜黄素组;Pa:铜绿假单胞菌
图2 不同浓度对姜黄素诱导NCI-H292细胞表达HO-1蛋白的影响
2.4 RNA干扰HO-1表达后对Pa诱导IL-1β和IL-8的影响
HO-1 siRNA沉默HO-1表达后(图3A),与Pa感染组相比,IL-1β和IL-8分泌进一步增高(图3B)。
3 讨论
HO-1 是一种诱导性表达酶。基因定位于染色体22q12,几乎表达于所有组织,以内质网含量最高,在各种损伤性刺激下表达增高,又称为热休克蛋白32(HSP32)。HO-1能催化血红素降解为CO、亚铁离子和胆绿素,胆绿素随后在胆绿素还原酶的作用下转变为胆红素。研究表明HO-1及其代谢产物在维护细胞稳态的过程中具有抗炎、抗增殖、抗氧化以及抗凋亡等作用[6]。例如,HO-1表达的降低或缺失(药物性抑制作用或HO-1基因敲除小鼠)使机体对氧化应激的耐受性降低,从而诱发广泛的氧化性损伤或器官衰竭[7]。Zhang等[8]的实验证实了HO-1源性CO能加强cav-1和TLR4的相互作用,进一步减弱了LPS诱导的炎性反应。此外,HO-1源性胆红素既可直接清除氧自由基,还可以通过抑制补体活化而减少炎症细胞的聚集[1]。本实验中以Pa感染的NCI-H292细胞为实验对象,结果显示,Pa感染后能增加IL-1β和IL-8水平,姜黄素能诱导NCI-H292细胞表达HO-1mRNA和蛋白,RNA干扰HO-1表达后,Pa诱导的IL-1β和IL-8的产生进一步增高,这表明HO-1能一定程度上对抗Pa感染所诱导的细胞因子表达,同时也从侧面说明姜黄素可能通过上调HO-1表达从而具有一定的抗炎症效应[9],从这种意义上讲,姜黄素诱导产生的HO-1可能是抑制肺炎症损伤的重要因素。同时本研究也发现,RNA干扰HO-1表达后,不能完全抑制细胞因子的产生,这表明HO-1可能不是唯一调控IL-1β和IL-8产生的因素。因为细胞因子基因的上游也存在NF-κB、AP-1等转录因子结合位点,因此也可能参与IL-1β和IL-8的基因表达同时,HO-1产物胆红素和CO具有抗氧化、抗炎症、抗凋亡和舒血管活性,可对拮抗各种损伤因素导致的肺黏膜损伤[10]。此外,体内外研究证明,通过胃肠道给予动物和人服用高剂量姜黄素后,尚未发现明显的毒性。这表明姜黄素具有良好的安全性,同时也有临床实验发现,给予志愿者单次口服高达8000 mg的姜黄素,均没有出现明显的毒性作用。姜黄素在胃肠道的吸收率为60%~66%。给药后,主要通过肠道排泄,而静脉给药则主要通过胆汁排泄[11-12],而本研究采用的最高浓度为50 μg/mL,因此即便服用也可达到诱导HO-1表达所需要的浓度。总之,Pa感染的肺腺癌细胞中,姜黄素通过上调HO-1表达,抑制了细胞因子的过度分泌。由于细胞因子过度分泌是各种感染性疾病发生的重要机制,此从这种意义上讲,诱导姜黄素诱导的HO-1产生对于各种感染性疾病的防治可能具有重要意义。
[参考文献]
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