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雪对人有利也有害处,在三四月份的仲春季节,如突然因寒潮侵袭而下了大雪。就会造成冻寒。所以农谚说:“腊雪是宝,春雪不好。”
雪对人体健康的作用
《医药养生保健报》 冬季,大雪纷飞,苍茫无际。人们在观赏玉树琼花之时,往往忽视了雪的作用。雪对人体健康有很多好处。《本草纲目》早有记载,雪水能解毒,治瘟疫。民间有用雪水治疗火烫伤、冻伤的单方。
经常用雪水洗澡,不仅能增强皮肤与身体的抵抗力,减小疾病,而且能促进血液循环,增强体质。如果长期饮用洁净的雪水,可益寿延年。这是那些深山老林中长寿老人长寿的”秘诀”之一。
雪为什么有如此奇特的功能呢?因为雪水中所含的重水比普通水中重水的数量要少1/4。重水能严重地抑制生物的生命过程。有人作过试验,鱼类在含重水30-50%的水中很快就会死亡。雨雪形成最基本的条件是大气中要有“凝结核”存在,而大气中的尘埃、煤粒、矿物质等固体杂质则是最理想的凝结核。如果空气中水汽、温度等气象要素达到一定条件时,水汽就会在这些凝结核周围凝结成雪花。所以,雪花能大量清洗空气中的污染物质。故每当一次大雪过后空气就显得格外清新。
据测定,一般新雪的密度每立方厘米为0.05-0.10克。所以,地面积雪对音波的反射率极低,能吸收大量音波,能为减少噪音作出贡献。
雪的保温作用
积雪,好象一条奇妙的地毯,铺盖在大地上,使地面温度不致因冬季的严寒而降得太低。积雪的这种保温作用,是和它本身的特性分不开的。
我们都知道,冬天穿棉袄很暖和,穿棉袄为什么暖和呢?这是因为棉花的孔隙度很高,棉花孔隙里充填着许多空气,空气的导热性能很差,这层空气阻止了人体的热量向外扩散。覆盖在地球胸膛上的积雪很象棉花,雪花之间的孔隙度很高,就是钻进积雪孔隙里的这层空气,保护了地面温度不会降得很低。当然,积雪的保温功能是随着它的密度而随时在变化着的。这很象穿着新棉袄特别暖和,旧棉袄就不太暖和的情况一样。新雪的密度低,贮藏在里面的空气就多,保温作用就显得特别强。老雪呢,象旧棉袄似的,密度高,贮藏在里面的空气少,保温作用就弱了。
为什么物体里贮藏的空气越多,保温效果越强呢?
这是因为空气是不良导体的缘故。我们知道,任何一个物体,它本身都能通过热量,这种能够通过热量的性能,称做物体的导热性。在自然界常见的几种物质中,空气的导热性最差。所以物体里容纳的空气越多,它的导热性就越差。由于积雪里所能容纳的空气量变化幅度较大,因此,积雪的导热系数变化幅度也较大。一般刚下的新雪孔隙大,保温效应最好,到春天融雪后期,积雪为水所浸渍,这时它的导热系数就更接近于水了,积雪的保温作用便趋于消失。
2、据测定,昆仑雪菊主要含有黄酮类、挥发油、多糖、皂苷、绿原酸等成分;其中含有17种氨基酸,8种为人体必需的氨基酸,占氨基酸总量的40.3%,游离氨基酸总量达到10.81%。现代药理研究证实,昆仑雪菊具有降血脂、降血压、抗衰老、抗癌、抗炎、抗病毒、降低血糖和改善微循环的作用。
3、昆仑雪菊药性寒凉,容易伤人脾胃,不能长期饮用,否则可引起胃部不适、胃痛、腹泻、消化不良等症状。身体虚寒、胃肠功能不太好、低血压、低血糖的人不适宜饮用;另外,冬天比较怕冷、手脚冰凉、小便清长,容易拉肚子的人,喝昆仑雪菊会损伤正气,越喝则阳虚症状越严重。
4、血压偏低的人不宜饮用,因为雪菊本身就有降血压的作用,由于昆仑雪菊自身有药用功效,其中的有些成分可能会与其他药物产生反应,给身体带来不必要的伤害,
【摘要】 目的研究积雪草苷对小鼠脓毒症致急性肝损伤的保护作用,并初步探讨其作用机制。方法建立盲肠结扎穿孔(CLP)诱导的小鼠脓毒症致急性肝损伤模型,随后用不同剂量的积雪草苷(15,45 mg/kg)干预,24 h后检测血清丙氨酸氨基转移酶 (alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶 (aspartate aminotransferase,AST)、肿瘤坏死因子-alpha (tumor necrosis factor alpha,TNF-α)的含量; 免疫印迹法检测肝组织中环氧合酶-2 (cyclooxygenase-2,COX-2)的表达,并取部分肝组织进行组织病理学分析。结果积雪草苷剂量依赖性地减少脓毒症诱导的血清中ALT、AST及TNF-α的升高,抑制肝组织中COX-2蛋白的表达,病理切片显示积雪草苷组肝组织受损程度较模型组为轻。结论积雪草苷对CLP诱导的肝损伤具有一定的保护作用,其机制可能与抑制炎症介质COX-2和TNF-α有关。
【关键词】 积雪草苷; 脓毒症; 盲肠结扎穿孔; 急性肝损伤; 环氧合酶-2
Abstract:ObjectiveTo study the protective effect and mechanism of asiaticoside on sepsis-induced acute liver injury in mice.MethodsSepsis-induced acute liver injury was induced by cecal ligation and puncture (CLP) in Kun Ming mice. Subsequently,different doses of asiaticoside (15 mg/kg,45 mg/kg) were used to intervene. 24h later,serum alanine aminotransferase (ALT),aspartate aminotransferase (AST) and tumor necrosis factor alpha (TNF-α)levels were measured,western blotting was used to determine cyclooxygenase-2(COX-2) expression in liver tissues and histopathology examination was performed by hematoxylin-eosin(HE) staning method.ResultsThe results showed that asiaticoside decreased serum ALT,AST and TNF-α levels,inhibited COX-2 expression in liver tissues,and histopathological changes of liver were improved by asiaticoside as compared to model group,and these effects were dose-dependent.ConclusionAsiaticoside has protective effect against sepsis-induced acute liver injury,and the mechanism is probably associated with the inhibition of TNF-α in serum and COX-2 expression in liver tissues.
Key words:Asiaticoside;Sepsis;Cecal ligation and puncture;Acute liver injury;Cyclooxygenase-2
脓毒症及随后的多脏器功能障碍综合征(multi organ dysfunction syndrome MODS)已成为当今外科重症监护病房中的首要死亡原因之一。据统计,全球每年有600 000例脓毒症患者死亡[1],其死亡率高达50%。在脓毒症发展过程中,肝脏是最易受损的器官之一。脓毒症患者出现肝功能异常是其病情加重的标志。因而,寻求脓毒症诱发的急性肝损伤的有效防治途径成为危重病医学亟待解决的问题。积雪草苷(Asiaticoside)为积雪草提取物三萜皂苷的主要成分之一[2,3],具有促进伤口愈合、抗溃疡、抗炎等作用[4],临床上用于治疗慢性炎症、皮肤病等[5]。本实验针对积雪草苷对炎症有效的特点,利用经典的小鼠盲肠结扎穿孔(Cecal ligation and puncture,CLP) 模型,研究积雪草苷对脓毒症诱发的急性肝损伤是否具有治疗作用并初步探讨其作用机制。
1 材料
1.1 药品与试剂积雪草苷(纯度>95%,无色结晶,分子式:C48H78O19,相对分子量:959.15),由广西昌洲天然植物开发有限公司提供,批号20060205;丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)测定试剂盒为南京建成生物工程研究所产品;小鼠TNF-α ELASA检测试剂盒(德国Bender公司);BCA蛋白定量试剂盒(pierce公司);诱导型环氧合酶2(COX-2)抗体(Abcam公司)。
1.2 动物及分组成年昆明小鼠,体质量18~22 g,40只健康小鼠,各半[重庆医科大学实验动物中心提供,实验动物生产许可证号SCXK(渝)20070001,使用许可证号SYXK(渝)20070001]。随机分为4组:假手术组,模型组,积雪草苷小、大剂量干预组(15,45 mg/kg),每组10只。
2 方法
2.1 CLP动物模型的制作[6,7] 行CLP手术之前1 h,假手术组与模型组给予等体积生理盐水,积雪草苷组腹腔注射对应剂量药物。造模方法:动物在实验前1 d禁食,0.3%的戊巴比妥钠(30 mg/kg)腹腔注射麻醉,于小鼠腹正中线做一长约1 cm切口,找出盲肠并结扎其根部,保留血供,选用8号针头穿刺已结扎盲肠1次,挤出肠内容物少许,1-0丝线关闭腹腔。生理盐水复苏(0.5 ml/10 g背部皮下注射)。按照相同的方法处理假手术组的动物,但盲肠不穿孔不结扎,术后禁食不禁水。
2.2 小鼠生存率的观察CLP后24 h每6 h观察记录小鼠生存情况。
2.3 血清ALT和AST的检测24 h后存活小鼠眼球取血,离心(3 000 r/min,10 min)取血清,按试剂盒说明书检测血清中ALT和AST的活性。
2.4 血清TNF-α的检测24 h后存活小鼠眼球取血,离心(3 000 r/min,10 min)取血清,按ELASA试剂盒操作,检测血清中TNF-α的水平。
2.5 肝组织COX-2蛋白表达的免疫印迹法检测24 h后处死小鼠,称取100 mg肝组织,研磨后裂解细胞提取蛋白,BCA法蛋白定量。取40 μg蛋白上样,SDS-PAGE电泳后,转移至硝酸纤维素膜上,室温下封闭1 h;加入一抗4℃冰箱封闭过夜;次日脱洗3次,二抗孵育1 h,再脱洗5次后,ECL显色,X线片曝光,洗片。
2.6 病理检查24 h后处死小鼠取肝脏左叶10%甲醛固定,脱水、脱钙后石蜡包埋切片,HE染色。
2.7 统计学处理各组数据以 ±s表示,运用SPSS软件对两样本均数t检验,P
3 结果
3.1 小鼠死亡率观察结果见图1。与假手术组比较,模型组中小鼠死亡率明显升高;而积雪草苷组可明显降低脓毒症致急性肝损伤引起的小鼠死亡率,且具有一定的剂量依赖性 (P
3.2 血清ALT、AST测定结果见图2。模型组与假手术组比较,血清ALT、AST活性明显升高;而积雪草苷组可明显降低脓毒症致急性肝损伤引起的ALT、AST活性升高,且具有一定的剂量依赖性 (P
3.3 血清TNF-α含量测定结果见图3。模型组血清TNF-α含量明显高于假手术组;而积雪草苷组可明显降低脓毒症致急性肝损伤引起的TNF-α含量升高,且具有一定的剂量依赖性(P
3.4 积雪草苷对肝组织中COX-2蛋白表达的影响结果见图4。模型组COX-2蛋白表达明显高于假手术组;而积雪草苷可显著降低急性肝损伤中COX-2蛋白的过量表达,并呈现出一定的剂量依赖关系。
3.5 病理学检查结果结果见图5。假手术组小鼠光镜下肝小叶结构完整,肝细胞索排列整齐,以中央静脉为中心呈放射状排列,肝细胞核位于肝细胞中央,圆而边界清。模型组小鼠肝小叶失去正常结构,肝细胞索解离,肝细胞普遍变性坏死,肿胀,并可见大量炎性细胞浸润。积雪草苷组肝细胞仍有部分变性坏死,且有少量中性粒细胞浸润,但病变程度远比模型组轻。与模型组比较,**P
c-积雪草苷 15 mg·kg-1d-积雪草苷 45 mg·kg-1图4 积雪草苷对CLP致急性肝损伤小鼠肝COX-2表达影响a-假手术组 b-模型组 c-积雪草苷15 mg·kg-1 d-积雪草苷 45 mg·kg-1图5 积雪草苷对CLP致急性肝损伤小鼠肝组织影响
4 讨论
盲肠结扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)导致的脓毒症是一个经典模型,被广泛用于模拟临床脓毒症。盲肠穿孔导致驻扎在肠道的微生物渗出,造成腹部局部感染、细菌性腹膜炎,随后引起全身性炎症反应(systemic inflammatory response syndrome,SIRS),MODS 甚至死亡[8]。脓毒症时,肝脏损伤发生较早,最终可发展为肝衰竭。因此CLP模型是筛选和研究治疗或预防脓毒症时肝损伤药物的理想模型。CLP诱导的脓毒症引起急性肝损伤,肝细胞细胞膜因脂质过氧化反应而功能受损、结构破坏,细胞内的ALT、AST释放入血,使血清中ALT与AST活性升高。本实验显示积雪草苷各剂量组明显抑制脓毒症引起的ALT、AST活性升高,减轻了肝损伤的程度,同时显著减轻了肝脏组织病理学变化,明显降低了CLP诱导的脓毒症致急性肝损伤引起的小鼠死亡率,并表现出一定的剂量依赖关系,对CLP诱导的脓毒症致急性肝损伤有一定的保护作用。
在脓毒症状态下,细菌及其毒素等产物刺激机体产生过量的细胞因子,导致机体正常调控机制失灵,形成炎症级联反应。在这些细胞因子中,TNF-α发挥着重要的作用,研究显示阻断TNF-α的作用或减少TNF-α的释放都能降低CLP术后小鼠的死亡率[9]。TNF-α具有潜在的细胞毒性并能引起炎症级联反应,其在肝损伤的病理机制中起着重要作用[10]。在CLP诱导的脓毒症致急性肝损伤中,炎症反应被激活,TNF-α大量生成,导致肝细胞进一步坏死、凋亡,加重了肝损伤程度。本实验表明积雪草苷显著降低了小鼠血清中的TNF-α水平。
环氧化酶-2(COX-2)是催化花生四烯酸生成前列腺素类物质的限速酶,在正常生理状态下,大多数组织中表达甚微,但细胞因子、生长因子、内毒素、炎症等可诱导其表达。在脓毒症所致急性肝损伤中,过量表达的COX-2及其PGs产物可参与炎症进程,加重肝损伤程度。研究显示COX-2抑制剂可减轻小鼠CLP术后脓毒症引起的急性肝损伤[11]。本实验中积雪草苷能明显抑制肝组织中COX-2的表达,这也可能是其肝保护作用的主要机制之一。
综上所述,积雪草苷对CLP诱导的脓毒症致急性肝损伤小鼠有明显的保护作用,该作用可能与减少TNF-α的释放及COX-2的表达有关,其具体机制还需进一步探讨。
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雪花是一种美丽的结晶体,它在飘落过程中成团攀联在一起,就形成雪片。单个雪花的大小通常在0.05——4.6毫米之间。雪花很轻,单个重量只有0.2——0.5克。无论雪花怎样轻小,怎样奇妙万千,它的结晶体都是有规律的六角形,所以古人有“草木之花多五出,度雪花六出”的说法。雪花多么美丽而轻盈呀!我越来越喜欢雪花了,如果能够再次目睹大地白雪皑皑,绿树披银装,真是一件赏心悦目的趣事。
“瑞雪兆丰年”是我国广为流传的农谚。在北方,一层厚厚而疏松的积雪,像给小麦盖了一床御寒的棉被。雪中所寒的氮素,易被农作物吸收利用。雪水温度低,能冻死地表层越冬的害虫,也给农业生产带来好处。所以又有一句农谚“冬天麦盖三层被,来年枕着馒头睡。”
雪的作用很广,但雪对人类有很大的好处。首先是有利于农作物的生长发育。因雪的导热本领很差,土壤表面盖上一层雪被,可以减少土壤热量的外传,阻挡雪面上寒气的侵入,所以,受雪保护的庄稼可安全越冬。积雪还能为农作物储蓄水分。此外,雪还能增强土壤肥力。据测定,每1升雪水里,约含氮化物7.5克。雪水渗入土壤,就等于施了一次氮肥。用雪水喂养家畜家禽、灌溉庄稼都可收到明显的效益。
雪对人有利也有害处,在三四月份的仲春季节,如突然因寒潮侵袭而下了大雪。就会造成冻寒。所以农谚说:“腊雪是宝,春雪不好。”
朋友们,听了我的介绍,你是否对雪更加喜欢和了解了呢?
[关键词] 六月雪水提取物;血浆纤维蛋白原;凝血酶原时间国际标准比值;活化部分凝血活酶时间
[中图分类号] R965.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2014)10(b)-0012-03
六月雪为民间常用草药,一直用于治疗病毒性肝炎及肝硬化,为茜草科六月雪属植物六月雪[Serissa serissoides (DC.)Druce(SSD)][1]。研究显示,六月雪含有多种丙烯苯并呋喃类化合物以及β-谷甾醇和豆甾醇[2]。有研究显示,六月雪对实验性胃黏膜损伤具有明显的保护、抑菌及提高免疫功能等作用[3-7],复方六月雪还具有体外抗HBV作用和治疗肾脏疾病的功能[8-9]。课题组已经报道了六月雪水提取物的促凝血作用及机制[10],现继续报道关于其促凝血作用及机制的研究。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 六月雪水提取物的制备 取干燥六月雪0.3 kg,用适量双蒸水(过液面2 cm)浸泡24 h,次日煮沸2次,30 min/次,过滤,合并滤液并浓缩至600 ml左右,冷却后加3倍量95%的乙醇,混匀后放冰箱静置过夜,次日减压过滤,滤液继续浓缩至300 ml,使药液为相当于生药1.0 g/ml。调整pH为7.0,置冰箱中备用。
1.1.2 试验动物 健康成年SD大鼠(购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司)45只,体重300~400 g,雌雄各半,随机分为3组,每组5只。
1.1.3 药品与试剂 水合氯醛(青岛高昌益网络科技有限公司德源化工,批号:20110407);枸橼酸钠(1:9)真空采血管(江西富尔康实业集团有限公司,批号:20110903)。
1.1.4 仪器 凝血因子分析仪(美国海伦娜)、KDC-2046低速冷冻离心机、日本日立7600-020+1SE全自动生化分析仪,LG-PABER血小板聚集器凝血因子分析仪等。
1.2 方法
1.2.1 分组及给药 大鼠随机分为生理盐水对照组、低剂量六月雪水提取物组(1.5 g/kg)、高剂量六月雪水提取物组(3.0 g/kg)。高、低剂量组每天以相应量的药物灌胃,盐水对照组给予等量生理盐水灌胃,1次/d,连续5 d。
1.2.2 方法[11-12] 末次给药后1 h,从大鼠心脏取血,分离血浆,置离心管中,56℃加热10 min,然后3000 r/min离心10 min,参照LG-PABER凝血因子分析仪操作规程进行测定,记录血浆纤维蛋白原水平。
从大鼠心脏取血,置入含3.8%枸橼酸钠的离心管中,混匀后以3000 r/min的速度离心10 min,离心后用微量进样器分别取所需血浆量,参照LG-PABER凝血因子分析仪操作规程进行测定,记录活化部分凝血活酶时间。
取待测血浆0.1 ml,37℃水浴孵育3 min,加0.2 ml凝血活酶,混匀,用秒表记录凝固时间,即为PT值(s)。每个样品重复实验5次,取其平均值。然后按公式INR=(PTtest/PTnormal)ISI(其中ISI为国际敏感指数)计算凝血酶原时间国际标准比值。
1.3 统计学处理
应用SPSS 14.0统计软件包对数据进行分析,计量资料以x±s表示,采用t检验,以P
2 结果
2.1 六月雪水提取物对血浆纤维蛋白原水平和活化部分凝血活酶时间的影响
1.5、3.0 g/kg的六月雪水提取物均能显著升高大鼠血浆纤维蛋白原水平和活化部分凝血活酶时间,且有一定的剂量依赖性(表1)。
表1 六月雪水提取物对血浆纤维蛋白原水平和活化部分凝血活酶时间的影响(x±s,n=5)
与生理盐水组比较,*P
2.2 六月雪水提取物对凝血酶原时间国际标准比值的影响
1.5、3.0 g/kg的六月雪水提取物能显著降低凝血酶原时间国际标准比值,且有一定的剂量依赖性(图1)。
图1 六月雪水提取物对凝血酶原时间国际标准比值的影响
与生理盐水组比较,*P
3 讨论
凝血过程可由“内源途径”和“外源途径”引发,是一个多因子参与的复杂过程,同时凝血时间和凝血酶原时间可分别反映”内源途径”和”外源途径”的功能状况,纤维蛋白降解也是体内重要的抗凝血过程之一。
六月雪为茜草科六月雪属植物,是民间常用草药。课题组已对六月雪水提取物进行了促凝血作用及机制的研究,前期研究显示,六月雪水提取物能明显缩短体外凝血时间、血浆凝血酶时间,还可以减小凝血酶原时间,延长优球蛋白溶解时间[10]。本实验在前期研究的基础上继续深入研究其对血液凝固的影响,结果显示六月雪水提取物具有明显的促进血液凝固作用。
本研究结果显示,六月雪水提取物能明显升高血浆纤维蛋白原,显著降低活化部分凝血活酶时间和凝血酶原时间国际标准比值,提示六月雪水提取物既能影响内源性凝血途径,又能作用于外源性凝血途径,其作用机制可能与上述因素有关。六月雪促凝血作用的有效成分还有待进一步的研究。
致谢:感谢赣南医学院曾靖教授对论文的指导。
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