表白的情书

前言：想要写出一篇令人眼前一亮的文章吗？我们特意为您整理了5篇表白的情书范文，相信会为您的写作带来帮助，发现更多的写作思路和灵感。

表白的情书范文第1篇

想送你玫瑰可惜价太贵，想送你安慰可惜没学会，想送你戒指可惜还在保险柜，只好发个信息把你，追希望我们永不吹。

天气预报：今夜到明天上午有点想你，预计下午转为持续想你，受此低情绪影响，傍晚将转为大到暴想，心情降低五度，预计此类天气将持续到见你为止。

世上最凄绝的距离是两个人本来距离很远, 互不相识, 忽然有一天, 他们相识, 相爱, 距离变得很近。 然后有一天,不再相爱了, 本来很近的两个人, 变得很远, 甚至比以前更远。

失望，有时候也是一种幸福，因为有所期待所以才会失望。因为有爱，才会有期待，所以纵使失望，也是一种幸福，虽然这种幸福有点痛。

牵你的手，朝朝暮暮，牵你的手，等待明天，牵你的手，走过今生，牵你的手，生生世世。

你知道吗?这几天没见到你，我六神无主只想自杀：我尝试过用面条上吊，用豆腐砸头，用棉条割脉，用可乐做毒药，用降落伞跳楼!

你知道吗?爱你并不容易。当我陶醉在爱的世界，享受爱情的甜蜜时，也使我深深的体会到“爱一个人真的好难”。

男女的区别;女人胖是丰满，瘦是苗条，高是修长，矮是秀气。男人胖是肥猪，瘦是排骨，高是竹竿，矮是冬瓜!

哪怕是世界末日,我都会爱你。

没有你的天，不蓝!没有你的花，不艳!没有你的饭，不香!没有你的眠，不甜!亲爱的，你为什么还不回来?

馒头和面条打架结果馒头被打哭了就回家把花卷包子叫来去找面条结果是方便面开门馒头说小样把头烫了就不认识你了照打

孤单不是与生俱来，而是由你爱上一个人的那一刻开始。

不是每一朵花都能代表爱情，但是玫瑰做到了;不是每一种树都能耐得住干涸，但是白杨做到了;不是每一头猪都能收到短信，但是你做到了;也不是每个人都喜欢猪 ,但是我做到了 。

不是恋爱的感觉让我幸福而是爱上你的感觉让我幸福。

宝贝宝贝我爱你，就象老鼠爱大米，你是天上的凤凰飞啊飞，我是地上的豺狼追啊追，我不打你也不骂你，我用感情折磨你。

宝贝：最近我牙齿痛，因为常常晚上想你，那感觉太甜蜜了，会蛀牙。

白天有你就有梦,夜晚有梦就有你.你要好好照顾你自己,不要感冒流鼻涕;要是偶尔打喷嚏,那就代表我想你!

爱情使人忘记时间，时间也使人忘记爱情。

喜欢一个人，是不会有痛苦的。爱一个人，也许有绵长的痛苦，但他给我的快乐，也是世上最大的快乐。

我之所以活到现在的全部意义，是为了此刻能对你说，我爱你，我会在你身后永远守护你。

我在佛祖面前许了一个心愿，希望化座一颗小树，矗立在你每天经过的路旁。我将爱恋与思念挂满枝头，希望有一天你会与我相恋!

我们要天天思念，但不要天天相见。我负责美丽妖艳，你负责努力赚钱。你可以和别人相恋，但不要让我发现，若被我碰见，哼……耗子药煮面!

我很想对你说，在我心中你是我的全部，我不祈求你以同样多的爱对我，只想有你的安慰和理解。

我爱月，爱它纯，爱它明，爱它圆。我爱你，爱你真，爱你善，爱你美。

我爱你....为了你的幸福，我愿意放弃一切---包括你。

正是因为爱才悄悄的躲开，躲开的是身影，躲不开的是默默的情怀;今天我终于鼓起勇气，向你表达我的爱。

这么多年来，我一直在寻找理想的爱情，但没有一个人能像你那样在最初的时刻打动了我，而且越来越深沉的打动。

在你孤独、悲伤的日子里，请你悄悄地念一念我的名字。并且说：有人在怀念我，在世上我活在一个人的心里。

在繁忙的工作中请您接受我最真挚的诚意和祝福;愿我的祝福消除一天工作带来的疲劳;愿幸福和快乐伴随着您生活的每一天。

在爱情的世界里,我一无所有,也一无所知,在情感的小站里,我愿你是第一位来客,也是永远的主人,伴着我宠着我;一生一世!

表白的情书范文第2篇

孤单不是与生俱来，而是由你爱上一个人的那一刻开始。

失望，有时候也是一种幸福，因为有所期待所以才会失望。因为有爱，才会有期待，所以纵使失望，也是一种幸福，虽然这种幸福有点痛。

爱情还没有来到，日子是无忧无虑的;最痛苦的，也不过是测验和考试。当时觉得很大压力，后来回望，不过是多么的微小。

缘起缘灭，缘浓缘淡，不是我们能够控制的。我们能做到的，是在因缘际会的时侯好好的珍惜那短暂的时光。

我以为爱情可以克服一切，谁知道她有时毫无力量。我以为爱情可以填满人生的遗憾，然而，制造更多遗憾的，却偏偏是爱情。阴晴圆缺，在一段爱情中不断重演。换一个人，都不会天色常蓝。

同一个人﹐是没法给你相同的痛苦的。当他重复地伤害你﹐那个伤口已经习惯了﹐感觉已经麻木了﹐无论在给他伤害多少次﹐也远远不如第一次受的伤那么痛了。

表白的情书范文第3篇

【关键词】 青光眼； 白内障； 联合手术； 泪液黏蛋白5AC； 眼表功能

中图分类号 R775 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2015）35-0022-03

The Influence of Cataract，Glaucoma Combined Operation to Sticky Protein 5AC Levels and Ocular Surface Function of Tear in Patients with Glaucoma//ZHANG Fan，WU Lei.//Chinese and Foreign Medical Research，2015，13（35）：22-24

【Abstract】 Objective：To study the influence of cataract，glaucoma combined operation to sticky protein 5AC Levels（MUC5AC） and ocular surface function of tear in patients with glaucoma.Method：32 cases of patients with glaucoma were selected from April 2012 to April 2014 in our hospital as the object of study，all patients underwent the combined surgery of glaucoma and cataract，the tear MUC5AC levels and eye table function score was measured and compared of patients 1 day before operation and postoperative 1，3，6 months.Result：Tears of the patients with MUC5AC in operation after one month was significantly lower than before，and the difference was statistically significant（P0.05）；Postoperative 6 months were higher than those of 1 day before，and the difference was statistically significant（P

【Key words】 Glaucoma； Cataract； Combined operation； Tear mucin 5AC； Ocular surface function

First-author’s address：Aier Ophthalmology Hospital of Chengdu，Chengdu 610000，China

doi：10.14033/ki.cfmr.2015.35.011

青光眼主要是由间断或持续性眼内压力上升而导致的一种致盲性眼部疾病，是我国常见致盲原因之一[1]。目前，主要是通过手术对青光眼进行治疗，但手术会对患者的眼部产生不良影响，如惧光、眼痒、眼部干涩等[2]。本文旨在研究青光眼白内障联合手术对青光眼患者MUC5AC水平和眼表功能的影响，指导青光眼的临床治疗，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取笔者所在医院2012年4月-2014年4月收治的青光眼患者32例（33眼）归为研究对象，其中，男14例（15眼），女18例（18眼），平均年龄（66.3±8.4）岁，开角型青光眼7眼，急性闭角型青光眼缓解期8眼，慢性闭角型青光眼18眼，所有患者均通过病史、临床表现、相关检查诊断为青光眼合并白内障。所有患者均无糖尿病、眼部手术史、严重的代谢或自身免疫性疾病以及角膜接触镜配戴史。

1.2 方法

所有患者行青光眼白内障联合手术，在术前1 d，术后1、3、6个月对两组研究对象的泪液MUC5AC含量进行测定，同时对眼表功能进行评分。分析比较患者手术前与手术后各时期泪液MUC5AC含量及眼表功能评分。

1.3 标本采集和检测

采集标本前嘱患者在标本收集室休息15 min，标本收集室应相对安静，光线强度适宜。用玻璃毛细吸管收集下结膜囊泪液5 μl，加压注入200 μl Ep 管中，-20 ℃下冷冻保存，采用ELISA法对已解冻的泪液标本中的MUC5AC的含量进行测定[3]。

1.4 眼表功能评分标准

眼表功能评分标准如下，无结膜充血、视力波动及眼痒、畏光、异物感、灼烧感等眼表不适症状为0分；偶尔出现上述不适症状为1分；经常出现上述不适症状为2分；长期持续出现结上述不适症状为3分[4]。

1.5 统计学处理

采用SPSS 13.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，比较采用t检验；P

2 结果

2.1 手术前后MUC5AC含量对比

患者术后1个月的泪液MUC5A含量为（9.1±7.2）ng/ml，

低于术前1 d（14.3±11.9）ng/ml，比较差异有统计学意义（P0.05）；术后6个月的泪液MUC5A含量为（21.3±16.2）ng/ml，高于术前1 d，比较差异有统计学意义（P

2.2 手术前后眼表功能评分比较

青光眼患者眼表功能评分术前1 d为（2.1±0.5）分，术后1个月为（2.8±0.7）分，术后3个月为（1.9±0.4）分，术后6个月为（0.9±0.2）分，术后1个月与术前1 d比较，差异有统计学意义（P0.05）；术后6个月与术前1 d相比，差异有统计学意义（P

3 讨论

MUC5AC是结膜杯状细胞分泌的一种黏蛋白，是泪膜的主要成分之一，其作用在于维持泪膜稳定性、降低眼球表面张力、促进泪膜在眼表的分布从而起到、保护眼部的作用，结膜杯状细胞对MUC5AC的分泌主要受神经、体液、炎症因子等多重因素的调节[5]。青光眼患者在接受青光眼内障联合手术后MUC5AC的分泌减少的原因主要在于：（1）手术切口引起上皮损伤，进而促发机体发生炎症反应，合成分泌大量的炎症因子，抑制杯状细胞分泌MUC5AC；（2）青光眼手术在切除小梁组织建立结膜下房水引流时会对眼表结构造成破坏，使杯状细胞的数目减少，从而导致泪液中MUC5AC分泌减少[6]；（3）白内障手术的角膜切口使角膜知觉暂时或永久性下降，瞬目次数减少，影响滤过滤邻近区域角膜表面的泪膜分布进而引起局部角膜干燥能的下降，从而导致泪液中MUC5AC分泌下降[7]。

本次研究结果显示，青光眼患者术后1个月的泪液MUC5AC含量较术前1 d低，眼表功能评分较术前1 d高，提示青光眼白内障联合手术可对眼表功能及MUC5AC的分泌带来不良影响，但至术后3个月泪液MUC5AC含量和眼表功能评分均逐步恢复，至术后6个月泪液MUC5AC含量较术前1 d高，眼表功能评分较术前1 d明显降低，表明手术对眼表功能和MUC5AC分泌的影响是短暂的、可逆的，与周容仲[8]研究结果一致。

综上所述，青光眼白内障联合手术可短暂性的降低MUC5AC的分泌量，对眼表功能造成暂时性的损害，但这种影响可随术后时间的延长逐渐的消失。

参考文献

[1]欧阳平波，段宣初.局部用抗青光眼药物对眼表的损伤及预防[J].中华眼科杂志，2012，48（6）：557-561.

[2]尹则琳.青光眼及其视神经损害的免疫学研究进展[J].中华实验眼科杂志，2013，31（3）：298-302.

[3]苏明.抗青光眼药物治疗现状[J].中国现代药物应用，2011，5（18）：115-117.

[4]高妍，刘新玲，李筱荣.糖尿病患者眼表及泪液蛋白改变的临床分析[J].眼科新进展，2011，31（3）：267-270.

[5]李升锦，周向东.人MUC5AC基因启动子荧光素酶报告基因载体的构建及其转录活性分析[J].中南大学学报（医学版），2010，35（8）：792-799.

[6]贺翔鸽.重视长期局部应用抗青光眼药物对眼表组织的损伤[J].中华眼科杂志，2011，47（2）：101-104.

[7]梁裕琴，向浩天.小切口白内障青光眼联合手术临床观察[J].重庆医学，2014，43（13）：1576-1578.

表白的情书范文第4篇

[关键词] 肝纤维化；基质金属蛋白酶-1；基质金属蛋白酶组织抑制因子-1

[中图分类号] R575 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）08（b）-0022-03

肝纤维化是由于各种致病因子引起肝脏的损伤和炎症，导致纤维组织广泛增生和沉积，其发生、发展过程与细胞外基质（extracellular matrix，ECM）的沉积与降解相对失衡有关，而ECM的变化和组织基质金属蛋白酶-1（MMP-1）及基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）表达有密切的关系，本研究通过动物实验方法，结合既往实验基础上[1]，采用酶联免疫吸附测定法、免疫组化染色法分别检测正常及肝纤维化大鼠血清及肝组织MMP-1及TIMP-1表达的变化，分析两者在肝纤维化中的作用，以期为肝纤维化预防提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 选择2011年11月～2013年11月，SPF级SD大鼠20只，体质量180～200 g，雄性，购自南方医科大学动物实验中心[SCXK（粤）200620015粤监证字2006B2008]。于广东省药物研究所标准SPF级动物实验室（合格证号：2006C125号）进行动物饲养及实验。

1.1.2 试剂 大鼠MMP-1及大鼠TIMP-1定量检测试剂盒（ELISA）（上海西唐生物科技有限公司），大鼠抗MMP-1及大鼠TIMP-1单克隆抗体（武汉博士德生物工程有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 肝纤维化模型建立：根据前期实验[2]及相关文献建模[1-3]。

1.2.2 实验分组及处理 20只雄性SD大鼠适应饲养1周后，随机分为2组，正常组10只大鼠，不作其他处理，常规饲养12周；模型组10只大鼠，腹腔注射CCl4 0.025 mL（用花生油1∶6稀释），每周3次，动物实验共12周。动物实验结束后，采用摘眼球采血法最大量取血，并置于未加抗凝剂的普通干净玻璃试管中。剖开大鼠腹腔暴露肝脏，留取肝脏左叶，留取部分肝组织于4%中尔马林液固定，置于包埋盒中，于切片机切片，厚度3 μm，裱片于普通载玻片上进行免疫组化染色。

1.2.3 指标检测 按照试剂盒说明书以ELISA方法检测血清MMP-1和TIMP-1含量；免疫组化染色检测肝组织MMP-1和TIMP-1表达，组织中出现棕色或黄色的部位为阳性表达部位，在高倍镜（400×）下，每张切片随机选择10个视野，采用专业显微彩色图像分析软件计算每个视野下阳性部位面积的百分比，取其均值为该张切片的阳性表达面积，再进行统计学处理。

1.3 统计学方法

采用统计软件SPSS 12.0对数据进行分析，正态分布计量资料以均数±标准差（x±s）表示，两独立样本的计量资料采用t检验；计数资料以率表示，采用χ2检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血清MMP-1及TIMP-1含量比较

模型组大鼠血清中MMP-1含量较正常组明显降低，差异有高度统计学意义（t = 13.38，P < 0.01），血清中TIMP-1含量升高明显，差异有高度统计学意义（t = 31.92，P < 0.01）。见表1。

2.2 肝组织MMP-1及TIMP-1阳性百分比分析

MMP-1模型组阳性表达面积比例[（5.60±1.51）%]与正常组比较明显下降，差异有高度统计学意义（t = 14.37，P < 0.01）。TIMP-1阳性百分比分析，模型组阳性表达面积与正常组比较明显升高，差异有高度统计学意义（t = 38.96，P < 0.01）。见表2。

3 讨论

肝纤维化的发生是一过复杂的过程，往往会带来肝硬化甚至肝癌等不良的后果，积极探索肝纤维化发病机制，寻求有效治疗措施对降低肝硬化发病率具有重要意义。肝纤维化发生的原因较多，一般是ECM的生成与沉积增加，造成ECM积累，最后导致肝纤维化。肝纤维化的形成过程主要取决于胶原的合成、沉积、降解、吸收的动态平衡，其消退的特征是肝纤维化基质的降解和正常肝组织的恢复，其发生、发展过程与ECM，特别是胶原的沉积与降解相对失衡有关，这种过度沉积不仅是由于ECM合成增多，更大程度上是由于降解减少引起[4-5]，提示促进ECM各成分的降解是抗肝纤维化的重要途径，影响ECM降解的主要是MMPS和TIMPS，而ECM主要是Ⅰ、Ⅲ型胶原的沉积。目前在肝内共发现了8种基质金属蛋白酶，其中MMP-1能够降解纤维化中肝脏中ECM的主要成分Ⅰ、Ⅲ型胶原[6]，TIMP-1增加和（或）MMP-1减少，可使ECM降解减少，特别是胶原降解减慢，导致组织纤维化发生，反之，导致ECM发生破坏性重建[7]。TIMP-1是体内MMP-1的特异性抑制剂，它能通过其N-末端特异性地与MMP-1催化活性中心的锌离子结合，从而封闭其催化活性，使有活性的MMP-1失活[8]，TIMP- 1是抑制MMP活性的一组多功能因子家族的主要成员之一，是一种分子质量单位约为28.5 kd的糖蛋白，在肝脏中由枯否细胞、肝星状细胞及肌纤维母细胞产生。活化的肝星状细胞表达TIMP-1最强，TIMP-1主要抑制MMP-1活性[9]，TIMP-1主要由激活的肝星状细胞、肝细胞、内皮细胞分泌，主要作用是抑制胶原酶的活性，同时抑制基质分解素和明胶B，在肝纤维化时其表达明显增加，主要由位于肝中央静脉、汇管区周围及肝窦壁的间质细胞分泌[10]，因而TIMP-1在肝组织中的表达水平可以反映肝组织学纤维化程度[11-12]。前期研究显示，经复方中药干预的大鼠肝组织中的Ⅰ、Ⅲ型胶原含量明显降低，造模组MMP-1表达降低、TIMP-1表达升高，复方中药组MMP-1表达明显升高，与造模组相比，正常组及复方中药组MMP-1表达显著升高，TIMP-1表达明显降低[13-16]，与本实验结果相一致。本研究结果显示，血清及肝组织MMP-1及TIMP-1与肝纤维化关系密切，史玉岭[17]使用ROC曲线评估TIMP-1诊断肝纤维化的敏感度、特异性，明显高于肝纤维化标记物HA、PC Ⅲ、C Ⅳ、LN ，提示血清 TIMP-1诊断肝纤维化有较高的敏感度和特异性，其水平可反映肝纤维化的程度。

本研究为肝纤维化判断指标提供实验佐证并为临床上寻找治疗肝纤维化药物打下了实验基础，而如何调节MMP-1及TIMP-1两者的平衡，抑制TIMP-1的表达将为防治肝纤维化提供新的研究方向。

[参考文献]

[1] Wu J，Norton PA. Animal models of liver fibrosis [J]. Scand J Gastroenterol，1996，31（12）：1137-1143.

[2] Hernandez-Munoz R，Diaz-Munoz M，Suarez-Cuenca JA，et al. Adenosine reverses a preestablished CCl4-induced micronodular cirrhosis through enhancing collagenolytic activity and stimulating hepatocyte cell proliferation in rats [J]. Hepatology，2001，34（4）：677-687.

[3] 陈月桥，毛德文.肝纤维化动物模型制备的研究进展[J].实用肝脏病杂志，2007，10（3）：205-207.

[4] Roderfeld M，Geier A，Dietrich CG，et al. Cytokine blockade inhibits hepatic tissue inhibitor of metalloproteinase-1 expression and up-regulates matrixmetallo-proteinase-9 in toxic liver injury [J]. Liver International，2006，26（5）：579-586.

[5] Henderson NC，Iredale JP. Liver fibrosis：cellularmechanisms of progression and resolution [J]. Clin Sci，2007，112（5）：265-280.

[6] 袁建，杨宇.基质金属蛋白酶-1、基质金属蛋白酶抑制剂-1与肝纤维化的中医治疗[J].井冈山大学学报：自然科学版，2010，31（5）：106-108.

[7] Boeker K H，Haberkorn CI，Michels D，et al. Diagnostic potential of circulating TIMP-1 and MMP-2 as markers of liver fibrosis in patients with chronic hepatitis C [J]. Clin Chim Acta，2002，316（21）：71-81.

[8] 孙妩弋，桂双英，吴丽，等.芍芪多苷对肝纤维化大鼠肝脏星状细胞基质金属蛋白酶13及组织金属蛋白酶抑制因子1表达的影响[J].中国中药杂志，2010，35（11）：1447-1451.

[9] 郑伟达，王小众.基质金属蛋白酶及其抑制物与实验性肝纤维化[J].世界华人消化杂志，2004，12（2）：428-430.

[10] 韩立娟.中西医结合疗法治疗肝纤维化的疗效及对基质金属蛋白酶组织抑制剂1水平的影响[J].中国医药，2011，6（2）：187-188.

[11] Eaudll R，BrennerDA. Liver fibrosis [J]. J Clin investing，2005，115（2）：209-219.

[12] Rockey DC. Antifibrotic therapy in chronic liver disease [J]. Clin Gaetroenlerol Hepatol，2005，3（2）：95-107.

[13] 舒建昌，付景，王红利，等.复方中药1号对大鼠肝纤维化疗效观察[J].中药材，2009，6（32）：954-956.

[14] 舒建昌，邓亮，吕霞，等.护肝解纤汤对肝纤维化大鼠血清学指标的影响[J].胃肠病学和肝病学杂志，2010，5（19）：420-422.

[15] 毛小荣，岳伟，朱骏，等.碱性成纤维细胞生长因子与慢性乙型肝炎及肝纤维化临床检测指标的关系[J].临床肝胆病杂志，2012，28（4）：281-284.

[16] 张占卿，陆伟，王雁冰，等.基于年龄与氨基酸比例构建的Logistic回归分析模型诊断乙型肝炎相关肝纤维化程度的效能评价[J].临床肝胆病杂志，2013，29（5）：330-335.

表白的情书范文第5篇

【关键词】 热证／中药疗法

摘要：【目的】探讨清热复方对大鼠热休克蛋白70(HSP70)表达的调控作用。【方法】将70只大鼠随机分为热休克模型组、热休克加白虎汤组、热休克加黄连解毒汤组、内毒素模型组、内毒素加白虎汤组、内毒素加黄连解毒汤组和正常对照组7组，每组10只。采用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)对热休克模型组、内毒素模型组和正常对照组大鼠的肝、肺组织进行了HSP70 mRNA表达的检测，观察清热复方白虎汤和黄连解毒汤分别对两种模型大鼠肝、肺组织HSP70 mRNA表达的影响。【结果】热休克模型组、热休克加白虎汤组和热休克加黄连解毒汤组中HSP70 mRNA的表达高于正常对照组（P＜005）；热休克加白虎汤组和热休克加黄连解毒汤组均高于热休克模型组（P＜005）；内毒素模型组、内毒素加白虎汤组和内毒素加黄连解毒汤组之间的HSP70 mRNA表达以及与正常对照组相比均无显著性差异（P＞005）。【结论】提示不同因素导致的热证状态下HSP70的基因表达不一致，清热复方可诱导热休克大鼠肝、肺组织中HSP70表达的增加，从而提高细胞的耐受力，避免细胞组织的损伤。

关键词：热证／中药疗法；白虎汤／药理学； 黄连解毒汤／药理学；

热休克蛋白70；疾病模型，动物

生物体在高温或其他因素刺激下会诱导基因开放而合成一组新的蛋白质―热休克蛋白(heat shock proteins，HSPs)。许多研究证实整体动物的热处理可预防随后的心、脑、肺、视网膜等损伤，并认为全身热处理对这些器官的保护作用与HSPs的表达有关［1］。HSPs作为分子伴侣，在维持细胞的正常形态及功能中起着重要作用，参与其他蛋白质的折叠、转运、合成等过程，与细胞内的其他肽类蛋白质结合，参与细胞的抗损伤、修复和热耐受过程，其在多种疾病过程中的重要作用已经被大量证据证实。本研究主要采用逆转录聚合酶链反应(RTPCR）观察白虎汤和黄连解毒汤对热休克、内毒素两种大鼠热证模型的HSP70基因表达的调控，以探讨清热解毒中药对HSP70表达的影响。

1 材料与方法

11 研究对象

清洁级健康雄性SD大鼠70只，体重(200±10)g，由中山医科大学实验动物中心提供，动物合格证号：2696001。

12 药物与试剂

药物：白虎汤(石膏30g、粳米9g、知母9g、甘草3g)，每剂水煎浓缩至50mL，相当于生药1g/mL；黄连解毒汤(黄连9g、黄芩6g、黄柏6g、栀子9g)，每剂水煎浓缩至30mL，相当于生药1g/mL，4℃保存备用。

主要试剂：总RNA提取试剂盒和逆转录PCR反应试剂盒(大连宝生物工程有限公司提供)；RTPCR引物(Canada，Stress Gen Corp，STM507);βaction引物(上海生工生物工程公司提供)；DL2000 DNA Marker(大连宝生物工程有限公司提供)。

13 主要仪器

TGL16G型台式高速冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂)；DNA／RNA纯度检测仪(Gene Quant American Pharmacia Biotech Corp)；PE9600型PCR扩增仪(American Perkin Corp)；EDAS120电泳凝胶图象分析系统(American Kodak Corp)。

14　动物分组及处理

70只雄性SD大鼠随机分为热休克模型组、热休克加白虎汤组、热休克加黄连解毒汤组、内毒素模型组、内毒素加白虎汤组、内毒素加黄连解毒汤组、正常对照组7组，每组10只。

141 热休克组大鼠模型的制备与处理

将大鼠按不同组别分别用生理盐水、白虎汤、黄连解毒汤灌胃(100g/kg)，1h后进行第2次灌胃，再经1h将大鼠置恒温烤箱中进行热休克处理，参考Cruiie方法［2］，温度控制在约55℃，测量大鼠肛温达到42℃，维持10～15min，密切观察大鼠动态，大鼠出现烦躁、乱窜动、毛发竖立、爪底湿润后，断头处死，取肺、肝组织备用。

142 内毒素组大鼠模型的制备与处理

将大鼠按不同组别分别用生理盐水、白虎汤、黄连解毒汤灌胃(100g/kg)，1h后于尾静脉注射内毒素(15mg/kg)，1h后再重复灌胃，3h后观察大鼠出现烦躁、乱窜动后，断头处死，取肺、肝组织备用。

143 正常对照组

生理盐水灌胃，不经其他任何处理，断头处死，取其肝、肺组织备用。

15 实验方法

采用RTPCR法检测各组大鼠肝、肺组织中HSP70 mRNA的表达。

βaction引物序列：Sense Primer 5′ ACCACAGTCCATGCCATCAC 3′；Antisense Primer 5′ TCCACCACCCTGTTGCTGTA 3′。

HSP70引物序列：Sense Primer 5′ CTCCAGCATCCGACAAGAAGC 3′；Antisense Primer 5′ ACGGTGTTGTGGGGGTTCAGG 3′。

βaction扩增片段长度为450个碱基对(base pair，bp)，HSP70扩增片段长度为234bp。

RTPCR反应体系组成：MgCl2 60μL，10×RNA　PCR　Buffer 80μL，TaKaRa LA Taq05μL，HSP70上下游引物各1μL，βaction上下游引物各1μL，Rnase Free dH2O 615μL，总反应体积为80μL。PCR扩增反应条件为：前预变性94℃ 2min，1个循环；95℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸30s，共28个循环；后延伸15min。取出反应液约10μL，在2%琼脂糖凝胶上电泳，溴乙锭染色，将电泳结果置于EDAS120电泳凝胶图象分析系统内扫描并摄片。采用Gelbase电脑软件对HSP70 DNA与βaction DNA条带进行光密度扫描，计算HSP70 DNA和βaction DNA吸收峰面积之比，即D值，以此估计HSP70 mRNA的表达情况。

16 统计学处理

用SPSS100软件进行多组间两两比较。

2 结果

各组大鼠肝、肺组织中HSP70 mRNA转录水平的比较结果见表1。表1 各组大鼠肝、肺组织中HSP70 mRNA转录水平（略）

结果显示，热休克各组与内毒素各组大鼠的肝、肺组织中HSP70 mRNA表达不同，热休克各组HSP70 mRNA表达均比正常对照组高（均P＜005），而内毒素各组的表达与正常对照组相比均无显著性差异（P＞005）。说明热刺激(热休克)比致热源更容易刺激细胞组织合成热休克蛋白，从而增加对组织细胞的耐热性和保护作用。热休克加白虎汤组及热休克加黄连解毒汤组的HSP70 mRNA的表达高于热休克模型组（P＜005）；热休克加黄连解毒汤组大鼠在肝、肺组织中HSP70的表达与热休克加白虎汤组相比有显著性差异（P＜005）。表明白虎汤和黄连解毒汤均能诱导HSP70表达的增加，从而增强对肝、肺组织的保护作用。相比之下，白虎汤较黄连解毒汤在肝、肺组织中更能诱导HSP70的表达。内毒素模型各组HSP70的表达与对照组相比差异无显著性（P＞005），内毒素模型各组之间HSP70的表达亦无显著性差异（P＞005）。表明给大鼠静脉注射内毒素不能诱导HSP70表达的增加，中药清热复方亦不能诱导内毒素模型组中HSP70表达的增多，提示内毒素导致的炎性发热不能刺激组织细胞合成对细胞有保护作用的HSP70。

3 讨论

一切生物在受到高温、缺氧、感染、创伤及乙醇等因素的刺激时，会发生细胞应答反应，其共同特点是产生一组具有生物活性的蛋白――热休克蛋白。HSPs是一组高度保守的伴随细胞蛋白，可使细胞非特异性抗损伤能力增加，能对抗更为严重的应激损伤。HSPs与一些基本的细胞功能有关，如蛋白转运、折叠和装配，是存在于细胞内的一种主要“分子伴侣”，在维持组织细胞的自身稳定和环境适应性方面有重要作用，对细胞抗御外界损伤具有保护作用，在生理和应激条件下均能表达。据报道，热休克时细胞中许多编码正常功能蛋白质的基因关闭，使大部分蛋白质的合成受抑制，而热休克基因被开启，HSPs合成增加［3］。自20世纪70年代以来，按照分子量的大小HSPs有HSP90、HSP70、HSP60及小分子HSP等家族，其中HSP70是目前国内外研究较多的，也是最重要的一类热休克蛋白。

目前认为HSP70有多种功能，是一种非特异性保护蛋白，人体在高温及各种有害因素刺激下，HSP70合成明显增加，以提高机体耐热和抗病毒能力，其广泛的生理和病理作用已成为当今生命科学研究的热点［4］。王燕如等［5］采用Western印迹法发现热休克预处理使肺泡巨噬细胞(PAMs)中HSP70 mRNA表达增多，且获得抵抗H2O2损伤的能力；用放射菌酮和放射菌素D分别从蛋白合成及基因转录水平阻断热休克基因的表达，能取消热休克对H2O2所致PAMs损伤的保护作用。李国成等［6］发现其自制健脾益气方能诱导大鼠提高HSPs的表达，防止胃粘膜损伤，促进溃疡的愈合，认为HSPs可能介导胃粘膜防御。

本研究结果表明，不同因素导致的热证状态下HSP70的基因表达是不一致的，热休克反应更类似中医所说的“阳明气分热盛证”，其表达的增强是细胞保护作用的体现，而白虎汤诱导其表达的进一步增强，一方面从HSP70的角度阐明了白虎汤对“实热证”的治疗效应；另一方面更证实了中医辨证论治的正确性。

参考文献：

［1］Minowada G，Welch W J.Clinical implications of the stress response ［J］．J Clin Invest，1995，95:3.

［2］Currie R W，Tanguay R M，Kingma J G.Heatshock response and limitation of tissue necrosis during occlusion/reperfusion in rabbit heart［J］．Circulation，1993，87:963.

［3］Rinaldo J E，Gorr Y M，Stuieter R，et al.Effect of endotoxininduced cell injury on HSP70KD heat shock protein in bovine lung endothelial cells［J］．Am J Respir Cell Mol Biol，1990，3:245.

［4］Linquise S，Craig E A.The heat shock proteins［J］．Annu Rev Genet，1998，22:631.