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百度、腾讯等大佬入局,资本躁动
2015年,各路大佬“屯兵”VR忙得很。先是全年都在传来VR创业公司高额融资或者“抱上粗壮大腿”的消息:红杉资本投资蚁视、迅雷投资大朋、乐视投资灵镜、APUS投资焰火工坊、腾讯投资Pocket Gems、华谊兄弟等投资暴风魔镜……表现更为抢眼的是暴风科技,其推出的暴风魔镜可以算得上是市面上最博眼球的一款产品。2015年9月,暴风搭建了VR业务群,CEO冯鑫表示,他在互联网圈呆了20年,这是迄今为止最兴奋的一次。“VR是值得All In(全投)的方向。”他说。不少评论认为,暴风科技33个涨停板的奇迹,这个虚拟现实的“故事”起了非常重要的支撑作用。
进入2015年年底,酝酿许久的大佬们开始发力了。2015年12月4日,百度视频宣布进军虚拟现实,隆重上线VR频道,成为国内VR内容聚合平台的先驱。2015年12月21日,腾讯正式公布Tencent VR SDK以及开发者支持计划,Tencent VR团队也首次公开亮相。这不禁让人想起在刚刚结束的乌镇第二届世界互联网大会上,马化腾在谈到“微信未来会被什么产品颠覆”的时候表示,那可能是VR,他认为虚拟现实技术正成为继智能手机之后的下一个“风口”。
2015年12月23日,乐视也在京了VR战略,并了其首款终端硬件产品――手机式VR头盔LeVR COOL1,售价仅为149元。除此之外,乐视还透露不仅会在硬件上发力,还将与国内外的内容提供商共同打造中国最大的VR内容应用平台,涵盖影视、音乐、体育、旅游、教育、游戏、纪实等诸多领域。
大公司希望借助于既有平台、生态、资源将优势平移到未来热门领域里,而创业公司也雄心勃勃。“现阶段,VR的很多技术还没有OK,如果用手机对比,还处在‘大哥大’的阶段,在这个拼技术的阶段,创业公司也有大把的机会。”蚁视科技CEO覃政表示。蚁视在国内是比较早涉足VR领域的公司,早在2014年5月就推出了首款虚拟现实套装。
2020年将达到1500亿美元市场
所谓VR虚拟现实,即利用计算机技术模拟产生一个三维空间的虚拟世界,使用者佩戴特定设备后,视觉、听觉、触觉、嗅觉等感官都会被“欺骗”,使人产生“身临其境”的虚拟感知,也就是所谓的“沉浸式体验”。
2014年,Facebook斥资20亿美元收购沉浸式虚拟现实技术公司Oculus VR,扎克伯格的此次大手笔震惊了全球业界,大家都认可虚拟现实是未来,但并不知道这个未来还有多远,大佬们虽然已经开始屯兵,但终究还是怕前驱变为先烈。
但现在,情况似乎发生了变化,几乎大半的主流消费电子品和互联网公司都在卖力地推动虚拟现实技术从行业应用进入消费者市场,加速虚拟现实的概念落地。Oculus Rift、三星Gear VR、HTC Vive、索尼PlayStation VR、微软的HoloLens都已经是站位已久,并将计划2016年开始陆续登陆消费市场。
但是,不得不看到,在这个至今尚未有正式产品发售、也未有公司赢利的领域里,全球范围已出现多家估值超10亿美元的“独角兽”公司,而且目前在市场上已出现两家巨型体量的VR创业公司,一家正是被Facebook以20亿美元收购的Oculus,另一家则是由google投资、目前估值已达35亿美元的AR(增强现实)创业公司Magic Leap。这意味着:要么这是个大泡沫,要么就是大风口。
据分析机构Manatt Digital Media预测,全球虚拟现实市场规模将在5年内,即2020年达到1500亿美元。另根据国外研究机构HIS的预计,2016年Oculus和HTC Vive总销量将达到100万台,而PlayStation VR预计将卖出150万台。而国内,目前暴风魔镜已累计售出40万套,目前日活跃用户在2万~3万,单日用户使用时长在30分钟左右。
行业门槛高,发展还处于初级阶段
但VR可不是一个低门槛行业,技术壁垒高,而且非常烧钱,大把的银子投入也未必能够换来实质性的进展。目前的VR设备主要是三种类型:一是头戴式移动VR终端,简单来说,就是一个可以把手机放到里面的“眼镜盒子”,需要配合智能手机使用;二是“头盔”式VR终端,它是PC或游戏主机输入的;三是“一体机”,不需要适配其他设备,可以独立使用。
这三类的VR设备技术含量和价格逐一增高,尤其是一体机,目前价格还非常昂贵,几乎还没有能够进入消费市场的产品。目前,各厂商的策略都是逐一进阶,先用百元的眼镜盒子普及用户,以吸引用户购买更高级的头盔和一体机。眼镜盒子作为最容易普及的VR产品形态,目前仅仅在中国市场上,已经有几百个不同形态的VR眼镜盒子产品,主流价格在一百到几百元之间。
“目前的VR行业整体还处在很初级的状态,行业的各个环节是割裂的,各个厂商还只停留在单点突破的思路上,这也是每一家企业都无法突破的原因。只有从云平台到内容源到终端的价值链垂直整合才能启动VR行业,只有生态开放和生态创新才能规模化开启VR的消费市场。”乐视控股战略副总裁阿不力克木・阿不力米提告诉《中国经济周刊》记者。毕竟,人们购买设备目的终究是为了消费内容,而目前的问题是,VR的内容极端缺乏。
“指望硬件赚钱太难,终端和内容结合打造生态才有机会。”焰火工坊创始人兼CEO娄池对《中国经济周刊》记者表示。
【摘要】 目的 对聚乙二醇化海葵神经毒素(mPEGrhk2a)修饰产物进行分离与纯化。方法 将聚乙二醇(PEG)化反应所得混合产物超滤除盐后,采用SP650S强阳离子交换层析柱和CM650S弱阳离子交换层析柱进行分离纯化,收集不同NaCl离子浓度下的梯度洗脱液,经超滤除盐、冷冻干燥、SDSPAGE电泳检测,确定分离纯化mPEGrhk2a的色谱条件。结果 在保证mPEGrhk2a稳定性的前提下,随着缓冲液pH值的降低,2种阳离子交换柱与mPEGrhk2a的结合量均增加;在同一pH值下,强阳离子交换柱的结合情况更好。用SP650S强阳离子交换层析柱进行分离纯化时,洗脱液中溶液电导率在5~7 ms/cm时,mPEGrhk2a能被洗脱下来,而且盐离子浓度梯度变化越缓,mPEGrhk2a修饰产物各洗脱峰的分离度越高;用CM650S弱阳离子交换层析柱进行分离纯化时,修饰产物mPEGrhk2a主要在穿透峰中出现。结论 使用SP650S强阳离子交换层析柱,用pH 4.0的0.02 mol/L醋酸盐缓冲液与含0.5 mol/L NaCl 的pH 4.0的0.02 mol/L醋酸盐缓冲液(后者比例变化为0%50%)进行梯度洗脱,修饰产物mPEGrhk2a与未修饰的rhk2a得到了很好的分离。
【关键词】 聚乙二醇化海葵神经毒素;阳离子交换层析;分离;纯化
Abstract:Objective To isolate and purify mPEGrhk2a.Methods The mixture obtained from pegylated reactions was separated by Toyopearl SP650 column for strong ion exchange and Toyopearl CM650 column for weak cation exchange after desalted by ultrafiltration and the effluent of gradient elution was collected at various concentrations of sodium chloride,ultrafiltrated and freezedried,detected by SDSPAGE electrophoresis to determine chromatographic condition of isolate and purify mPEGrhk2a. Results With the preconditions of keeping mPEGrhk2a stable and reduced pH of buffer solutions,the binding capacity of both cation exchange columns and mPEGrhk2a increased. However,the capacity of the strong cation exchange was more than the week one. MPEGrhk2a was eluted by Toyopearl SP650 column for strong cation exchange when the concentration of NaCl was in the range of 5%~7%. The more slowly the concentration gradient changed,the higher of the resolution of perse eluting peaks amongst modified products was. When using the Toyopearl CM650 column for weak cation exchange,the mPEGrhk2a mainly presented in penetration peaks. Conclusion The gradient elution was finished under the condition of 0.02 mol/L acetate buffer solution with pH 4.0 and the same acetate buffer solution (with the proportion change from 0% to 50%) containing 0.5 mol/L NaCl by using Toyopearl SP650 column for strong cation exchage. The products including pegylated and unmodified rhk2a were successfully isolated,which has laid a foundation for our further research on the properties of purified mPEGrhk2a.
Key words:mPEGrhk2a; cation exchange column chromatography; isolation and purification
PEG修饰蛋白质技术由于能够在保证药用蛋白活性的同时降低其在体内的免疫原性和毒副作用,延长血浆半衰期,增强其化学稳定性,增大溶解性,提高药用蛋白在体内的生物利用度,增加患者的顺应性,已成功用于改善多种蛋白质药物的性质。2000年中山大学生命科学院利用基因工程技术获得一种重组海葵神经毒素rhk2a,其对心肌组织产生很强的正性肌力作用,在治疗充血性心力衰竭方面有极好的应用前景[1]。为解决海葵肽类毒素rhk2a临床应用时存在稳定性差、毒性较大等问题,本课题组将PEG修饰技术应用于rhk2a,通过对各种反应条件的优化,得到了最佳工艺条件下的甲基聚乙二醇(mPEG)修饰的海葵神经毒素产物mPEGrhk2a[2]。但在mPEG修饰rhk2a过程中,由于大部分mPEG与rhk2a的偶联反应都是随机性亲核反应,所以偶联修饰产物往往都是由多种不同的偶联蛋白异构体组成的混合物。本研究旨在对mPEGrhk2a修饰产物进行分离与纯化。
1 材料与仪器
SP650S强阳离子交换层析柱料、CM650S弱阳离子交换层析柱料(日本TOSOH公司生产); Amicon TM Stirred Cell超滤装置、再生纤维素超滤膜(截留分子量1000)(美国Millipore公司);Biologic LP层析系统(美国BioRad公司);BETA18K型冷冻干燥机(德国CHRIST公司);Delta320pH计(梅特勒托利多公司)。
2 实验方法
将rhk2a按照最佳工艺条件修饰后得到的mPEGrhk2a 修饰反应混合物, 用截流分子量为 1 000的超滤膜超滤除盐,然后用被缓冲溶液平衡后的阳离子层析柱进行分离纯化[3,4],考察不同盐离子浓度缓冲液的分离效果,收集各洗脱峰的流出液,将收集液超滤除盐后, 转入50 mL离心管中, 于-80 ℃下预冻3~4 h,在-35~-20 ℃下抽真空冷冻干燥24 h,所得产物用TrisTricine系统进行SDSPAGE电泳检测。
2.1 平衡、洗脱缓冲液pH值的选择
2.1.1 SP650S强阳离子交换层析柱平衡、洗脱缓冲液pH值的选择 取试管7支,各加 1 g SP650S强阳离子交换层析柱料后,分别用纯水洗涤,每次10 mL,洗5次。考虑到mPEGrhk2a的稳定性[5,6],各加入pH值分别为4.0、4.6、5.0、5.4的醋酸钠醋酸缓冲液与pH值分别为6.0、6.5、7.0的磷酸钠磷酸缓冲液淋洗,每次10 mL,洗5次,待柱料平衡稳定,在每管中加入2 mg 的mPEGrhk2a,摇动试管5~15 min,静置待柱料下沉,取每管上清液于280 nm下测定其紫外吸收值。
2.1.2 CM650S弱阳离子交换层析柱平衡、洗脱缓冲液pH值的选择 取试管7支,各加 1 g CM650S弱阳离子交换层析柱料后,余下操作同“2.1.1”。
2.2 2种离子交换层析柱分离纯化修饰产物的条件
SP650S强阳离子交换层析柱的规格为2.6 cm×4 cm(柱容量1 CV=25 mL),柱平衡液为3 CV的pH4.0的0.02 mol/L醋酸盐缓冲液,流速为1 mL/min,检测波长为280 nm,色谱柱清洗液为5 CV 的0.5 mol/L NaOH溶液。CM650S弱阳离子交换层析法的色谱条件同上。
SP650S强阳离子交换层析法用于梯度洗脱的缓冲液见表1;CM650S弱阳离子交换层析法依次更换的洗脱液为NaCl含量分别为0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1 mol/L 的pH 4.0的0.02 mol/L醋酸盐缓冲液各5 CV。
3 结 果
3.1 SP650S强阳离子交换层析和CM650S弱阳离子交换层析洗脱条件的选择与比较表1 SP650S强阳离子交换层析法所用的梯度洗脱液醋酸盐缓冲液的比例第一组100%0%0%100%(20 CV)第二组前半段100%40%0%60%(20 CV)后半段40%0%60%100%(10 CV)第三组100%50%0%50%(20 CV)
用一系列不同pH值的缓冲液平衡2种离子交换层析柱料,测得其相应上清液的紫外吸收值,结果如表2所示,随着缓冲溶液pH值的升高,上清液的紫外(UV)吸收值增加,即洗脱液中的蛋白质含量增加;缓冲液的pH值越低,离子交换柱料与mPEGrhk2a的结合量越大,在同一pH值下,SP650S强阳离子交换柱料的mPEGrhk2a结合情况优于 CM650S弱阳离子交换柱料。因此,选用pH4.0的0.02 mol/L醋酸盐缓冲液平衡、洗脱2种层析柱,此时色谱柱有效交换容量最大,mPEGrhk2a的分离效果相对较好。表2 不同pH值缓冲液下SP650S与CM650S柱料上清液的紫外吸收值
3.2 SP650S强阳离子交换层析法分离修饰产物
用pH4.0的0.02 mol/L醋酸盐缓冲溶液平衡SP650S强阳离子交换柱后上样,mPEGrhk2a修饰反应所得混合产物依次采用盐离子浓度梯度逐渐变缓的3组缓冲液进行洗脱,分离结果分别如图1的A、B、C所示洗脱液中溶液电导率在5~7 ms/cm时,mPEGrhk2a能被洗脱下来,盐离子浓度梯度变化越缓,mPEGrhk2a修饰产物各洗脱峰的分离度越高,则可将色谱图3所对应的洗脱条件作为强阳离子交换层析法的最佳分离条件。
收集在最佳分离条件(第3组缓冲液洗脱)下的吸收峰①、②、③、④所对应的流出液,超滤除盐、冻干,将分离产物进行SDSPAGE电泳检测,结果如图2所示:mPEG修饰产物与未修饰的rhk2a得到很好的分离,由各电泳条带的分子量初步判断,单修饰产物mPEGrhk2a在峰③中出现。
3.3 CM650S弱阳离子交换层析法分离修饰产物
用pH 4.0的0.02 mol/L醋酸盐缓冲溶液平衡CM650S弱阳离子交换柱后上样,mPEGrhk2a修饰反应所得混合产物,依次更换含NaCl盐离子浓度不同的缓冲液进行梯度洗脱,结果如图3所示,主要修饰产物被穿流洗出。收集图3中吸收峰①、②、③所对应的流出液,超滤除盐、冻干,将分离产物进行SDSPAGE电泳检测,结果如图4所示:mPEGrhk2a修饰产物主要在穿透峰中出现,未修饰的rhk2a在0.1
4 讨 论
由于mPEGrhk2a偶联蛋白异构体除了分子量和表面电荷的细小差别之外,其他的理化性质非常接近,因此偶联产物的分离纯化一直是蛋白质PEG化技术的难点之一。蛋白质与PEG偶联之后表面电荷会发生变化,利用这种电荷差异可以将偶联蛋白分离,故国内外多采用离子交换层析法分离PEG修饰混合物[7]。
rhk2a中N末端氨基与mPEG共价结合后,失去与氢质子的结合能力,蛋白质分子中的正电荷会减少,因此mPEGrhk2a的等电点比rhk2a低。另一方面,由于mPEG长链会阻碍rhk2a与离子交换剂之间的电荷相互作用,即产生立体屏蔽作用,导致mPEGrhk2a在离子交换层析中的流出行为与rhk2a有所不同。这两方面因素决定采用离子交换层析法能够分离纯化mPEGrhk2a修饰反应混合物[7]。
由于阴离子交换树脂结合的主要是蛋白质的羧基,受氨基修饰影响较小,因而选择阳离子交换树脂分离纯化mPEGrhk2a。本文实验结果也证明,用强阳离子交换层析法分离mPEGrhk2a修饰反应混合物时,修饰产物mPEGrhk2a在柱上的保留时间比未修饰的rhk2a要短。说明mPEG修饰确实降低了rhk2a的等电点,屏蔽了rhk2a与离子交换剂之间的静电作用,使得在相同pH值条件下,修饰产物在柱上的吸附能力较弱。
用弱阳离子交换层析法分离mPEGrhk2a时,mPEGrhk2a修饰产物主要在穿透峰中出现,是因为mPEG修饰显著地降低了mPEGrhk2a的等电点,导致弱阳离子交换层析柱对mPEGrhk2a的结合力太弱,无法获得理想的分离效果。
本研究证明,修饰产物mPEGrhk2a,在平衡液的pH值为4.0时,与SP650S强阳离子交换层析柱有良好的结合;在洗脱液中溶液电导率在5~7 ms/cm时,可被洗脱下来,并且与未修饰的rhk2a分离度良好,因此获得了纯度较高的mPEGrhk2a,为下一步的深入研究奠定了基础。
参考文献
[1] 黄慧,潘育方,杨帆,等.海葵神经毒素药理作用研究进展[J].宜春学院学报,2008,30(2):127-129.
[2] 杨帆,潘育方,黄慧,等.重组海葵神经毒素rhk2a的修饰产物、其修饰方法及应用:中国,200910038615.2[P].2009-09-23.
[3] 王磊.重组海葵神经毒素在大肠杆菌中的高表达、纯化、活性、构效关系及作用机理的研究[D].中山大学博士学位论文,2004.
[4] 刘文华.海葵神经毒素的基因克隆、重组表达、纯化及生物学活性鉴定[D].中山大学博士学位论文,2001.
[5] DAVIS F,VAN E S T,PALCZUK N C. Nonimmunogenic polypeptides:USP,4179337[P].1979-12-18.
首先让我们看看LPL春季赛及其相关赛事的晋级规则:
1.春季赛常规赛四强,可晋级总决赛,争夺50万RMB的冠军奖励;
2.春季赛赛1-6名,可获得夏季赛的比赛资格;
3.春季赛常规赛1.2名与夏季赛常规赛1.2名,可获得S3中国选拔赛的比赛资格。
可能有朋友已经注意到了,S3选拔赛的资格只有常规赛的前两名才能获得,也就是说总决赛的目的仅仅是争夺奖金罢了,各大战队最关心的自然还是S3的入场资格,因此最后一周比赛的激烈程度可见一斑。
IG以50积分居于榜首,最大黑马OMG因为在与OMG的失策失败之后失去冠军地位位居其后,WE以48分跻身前三,PE以2分之差险胜皇族.狼蛛位于四强最后名额. LM以36分获得第六名,得到夏季赛比赛资格。而华义Spider与WoA黎明之翼虽然给我们带来很多精彩的比赛,可经验不足的他们只能慢慢摸爬滚打了。
皇族的新辅助Atu拿到本周最多助攻,相信随着和队伍磨合度的提升皇族也会拿到更好的成绩。
无状态再次顶替Uzi拿下每分钟补兵榜首位,微笑与若风紧随其后,其他变动不大。
最近PDD大火,尤其从11日比赛的发挥来看实在亮眼,也让人更期待接下来全明星赛中国队的发挥了。
White再次拿下击杀榜首位,巨人PDD则位居2位,另外华义几位选手都取得不错的击杀数,或许是新战术奏效的缘故。
鉴于LPL春季赛场数实在太多,同时每支战队都有了极不小地进步,国内的LOL界也不再是WE、IG称霸的时代了,对一些不常关注比赛的玩家来说,笔者会挑出比较有意义的赛事做重点解说。
节奏制胜!OMG完胜LM
LPL英雄联盟职业联赛第110场,由?OMG对阵LM。
2分钟,大虫子被OMG蜘蛛打成丝血被逼闪现,一血差点发生。
6分钟,OMG泰坦选择GANK上路,蜘蛛直接就走到身边再E,配合泰坦的控制,泰坦拿到一血。
8分钟,OMG拿掉第一条小龙,LM甚至是没有发现小龙丢了。
10分钟,双方打野也是同时选择来到下路进行GANK,婕拉后手的控制直接让交了闪现过来打算搞LM下路的泰坦直接交出了性命。
15分钟,双方的打野和上路都选择来到中路,企图强杀LM三人但是LM的撤退都做的十分好,反而是桑立卓的一个位移直接击杀了状态并不好的泰坦,但是用光所有技能的桑立卓也是被发条的QW配合普攻击杀。
17分钟,婕拉先是被击杀,OMG先手打小龙但是却被猪妹抢掉了,随后一波三换四,LM的经济却没有和OMG相差太远。
20分钟,LM也是没有发现OMG轻轻松松拿掉了大龙。
30分钟,发条还在上路带线,桑立卓直接位移到锤石身边,以致锤石甚至还没反应过来就直接被大嘴击杀了。
34分钟,OMG在中路再次抓到大嘴,没有大嘴的闪现吃了发条一个大招是直接就被秒掉,但是此时蜘蛛也是被大虫子击杀,此时OMG也是选择了去打大龙,但是复活出来的中路AP也是迅速支援到了线上,OMG的状态十分不好,大嘴秒掉了锤石,虫子也是击杀了泰坦,此时大龙已经剩下不多血了,LM选择拿掉了大龙,然后只能选择卖掉辅助,剩余人撤退。
44分钟,婕拉走位不慎直接被发条秒掉,此时少了一个反手控的LM又损失了一个猪妹,OMG最后完成收割以后又是拿掉了一条大龙,并且推掉了中路上路的高地水晶,恢复完毕的OMG从下路等待兵线进入高地选择强行开团,VN先是击杀了婕拉,LM的装备不足以和一个已经神装的发条抗衡,一波推掉LM,恭喜OMG。
OMG连胜神话被终结,PE正能量击败黑暗势力!
一直有着黑暗势力之称的OMG在ogoing大哥的带领下已经有了12连胜的不败战绩,在这场比赛前某微博上还有 大朋友要殴打小朋友的预言。但就是这群小朋友,给我们带来了完美的小逆风逆袭,以及稳定均势,扩大优势,成就胜势的成熟稳重的样貌!
PE ban掉了大熊 、扎克、戴安娜
OMG ban掉了蜘蛛女皇、伊芙琳、维鲁斯
PE首先抢到兰博,OMG拿下了下路双线组合,锤石与格雷夫斯把皇子留给了PE。 PE便顺势把皇子与劫收入旗下。OMG也选择了AD中单卡兹克和人马,PE最后拿到了琴女,VN。OMG祭出石头人。
战斗开始,OMG率先进入对方野区,强迫开一级团,双方打的难舍难分,召唤师技能已经用掉大半,虽然没有人员阵亡但是都已经残血,中单两个AD英雄在对线的时候PE的皇子配合队友偷掉OMG的红,不过刚从家里出来的OMG队友及时赶到。这场2分钟的一级团,卡兹克拿到VN一血,男枪也收下皇子人头,并且拿掉红BUFF,甚至双召唤师都在。
PE上下组合换线,双方互相压线推外塔,人马已经赶到下路配合推塔,虽然皇子已经到了,但是缺少AOE技能,防御塔也是马上被磨掉。兰博在塔破的瞬间被锤石勾到,人马配合男枪拿到人头。此时上路VN也推掉上塔,在8分钟的时候因为视野和防御塔的优势,OMG轻松拿掉小龙,此时PE甚至没有察觉。
9分30秒,PE所有人赶来下路包夹OMG下路组合,不但击成功击杀掉用过召唤师技能的男枪与锤石,还顺势拔掉下路的防御塔,OMG做出回赠推掉上路并拿下皇子人头,经济差仍然是1000。
14分钟,OMG利用PE对小龙时间的不确定,继续拿掉小龙,此时经济领先2000。双方一直平稳对线,直到皇子在清眼时被锤石闪现勾到并在此走位失误被人马恐到并击杀打破僵局,OMG推中被先手,人马走位过于靠前被劫达成残血兰博顺势放大,琴女也完美在塔下打到两个人,人马锤石被秒。
PE果断大龙,石头人开大没能抢到,反被PE打了1换3加大龙,此时人头比7:7,PE经济反超1000。
在21分钟的时候PE辅助琴女带出400排掉小龙视野,拿掉第三条小龙,此时OMG已经处于团战的劣势。
26分钟,OMG推中,此时兰博的装备已经不再是前期被石头人压制将近百刀的装备。做出冰杖的兰博伤害极高,皇子大招直切后排大到3个人,兰博R的非常完美!人马恐惧VN却被闪现逃脱,率先击杀男枪的VN配合队友打出了恐怖的伤害,刚刚想逃脱的石头人被VN极限的E到了强上直接带走!没有输出的OMG被打了0换3,PE趁势拿下第二条大龙。
30分钟,皇子EQ大招有点脱节被人马反推并击杀掉,PE攻势稍缓,但OMG下路2塔依然被推,稍后上路的最后一座2塔也不不能幸免。
35分钟OMG躲在草丛死角准备阴一波PE,但是PE的嗅觉非常灵敏,开着皇冠重整阵型,
38分钟,双方在大龙附近互相徘徊,OMG标记中路直插中路推线却被回防的皇子大招框住,琴女刚刚闪现缺正好撞在人马的恐惧上技能未交便直接被秒,收割卡兹克被劫终结,双方互换了个人头,尽管推掉中路外塔,但被PE复活后的VN与队友4人拿下大龙。
42分钟,PE推下,OMG拼尽全力秒掉VN,但自身两人阵亡其他人全部残血,下路高地告破。PE稍作调整,面对有春哥的VN以及高爆发的劫、兰博,OMG已经无力回天,中上路高地三路被破。守护雅典娜的节奏,无奈OMG只能放弃,恭喜PE获得这场比赛胜利!
职业联赛春季赛第四轮第19场iG vs WE WE的复仇!致命卡牌!
状态已经回来的WE再次遇到势不可挡的IG,狭路相逢,必将勇者胜!ban/pick中,IG首先ban掉皇子,IG已经发现WE的状态已经回来,作为老对手深深知道WE是一个团战能力极强的队伍,线上能力强、支援能力强、团战抱团能力更强!加上PDD对新英雄扎克的理解以及出色发挥打算ban掉开团能力极强的嘉文用扎克取而代之,利用扎克的线上消耗压榨草莓,而WE也深知老对手PDD的极强个人能力,打出魔人布偶感觉的扎克果断ban掉了。IG再次ban掉卷毛琴女,强队较量中,往往辅助的控制是会给团队带来毁灭的打击!辅助的闪现是最适合用来进攻的,而卷毛对辅助的理解以及驾驭能力达到了一个极限,先ban先选却不可能选择一个辅助位置,ban掉琴女应该是一个很好的选择!WE果断ban掉死哥卡尔萨斯,这很符合WE的风格,WE就是线上只要不吃亏,团战就会变成凶狠的队伍,姿态的死歌进攻性强,操作细腻,绝对是要ban掉的。IG最后没有ban掉若风卡牌,而是选择ban掉石头人墨菲特,不想让WE拿到太多团控英雄,而自己先ban先选只要拿到人马,团战的先手就会大于WE! 看见IG没有ban掉卡牌,WEban掉很针对卡牌且团战作用极强的戴安娜!抢卡牌势在必得!!
拿到人马的IG之后WE选择卡牌锤石,卷毛渐渐的把锤石代替了机器人,更好的进攻性,更好的防守型, 以及远程骚扰能力都远远大于机器人,小孩的维鲁斯是肯定要选的,小孩游神在春季赛发挥最好的便是维鲁斯。辅助位IG为了针对WE的开团强、支援强,便要把团控英雄一手掌握,女坦便是唯一选择。发现IG阵容的后期强势后,WE则把阵容放到了前期,有着卡牌和锤石在手,便要把线上做到强势,等待诺导的强而好笑的是虽然已经发现落单的拉克丝,仅仅只有若风闪现跟上黄牌点燃,诺导并没有学技能,这让WE不但没有拿到一血,还让卡牌损失了双召唤师技能。
中路二人都失去了闪现,这让双方打野都有很好的GANK方式,可能是影子认为自己上路的线太危险,不想早早的破掉上塔而去上路补线支援,但却让AOE能力过强兵线靠前的姿态死于非命,诺导抓住了这个机会!非常强势的拿掉了一血。
下路兵线一直压制着草莓,因为前期草莓的经验落后很多,笑笑准备越塔击杀,可能是沟通问题和小孩优先吃到了防御塔的仇恨,草莓不但没有死,还让下路两个人吃掉势GANK!推线强,前期爆发稳健的格雷夫斯,和线上双突进,高伤害,有眩晕的最强上单鳄鱼已经属于WE的队伍。IG最后拿掉拉克丝和大虫子,打算打发育后期。WE最后的打野位就是gank能力不亚于人马的狗熊。
比赛开始的野区闹出了个小笑话,因为WE的一级团战能力极强, 狗熊的回血以及控制,卡牌的远程输出和控制,男枪的高爆发,锤石的控制和高伤害,还有鳄鱼的控制。这让IG只能分散开观察WE的动向,但不知道是不是姿态的刻意卖萌,又或是草丛的视角问题,没有看到步步逼近的WE5人,了大量伤害变成了餐费,嗅觉灵敏的诺导赶来闪现 背回小孩维鲁斯打算配合草莓击杀,可影子与姿态及时赶到,不但化解了诺导的GANK,并且反杀诺导狗熊扳平了人头。4人在下路不到6分钟便推掉了下塔。
推掉下路的IG想顺势拿掉小龙,可前期防御低血量少,卡牌开大传送过来远程骚扰让IG没有能力继续击杀小龙,反而让赶来的草莓鳄鱼配合若风卡牌击杀掉恋战的姿态,若风的经济开始领先姿态。
到达6级的若风开始展示自己卡牌强势的一面。早早破掉了下路,为了补兵小孩游神的走位过于靠前,直接被若风抓住机会,开大黄牌配合锤石的神勾带走小孩的维鲁斯,这让小孩在下路更加的被动。
影子抓住若风的走位失误,打算与姿态击杀若风的卡牌,可若风对于伤害的计算可以说是令人发指,从容的打了拉克丝一套黄牌加Q,闪现回塔再次黄牌顶住影子,回身用Q刮死了残血拉克丝,让人眼前一亮!
而残血回家的影子被及时赶来的锤石闪现勾到让微笑拿下了人马的人头。顺势将中路防御塔拆到只有不到200滴血,此时三座外塔基本已经告破。没有外塔支持的IG在线上已经难受的不行,卡牌的支援能力,不是眼位能够防住的。
在12分钟卷毛带着真眼开始控制小龙视野,没有外塔的保护,IG也不敢轻举妄动。在WE已经打上小龙的时候,影子与众人一拥而上,强掉小龙,可葬送了两个人头,WE顺势带破中塔。在13分钟的时候将经济高出IG4000的WE,已经把雪球滚了起来。
卡牌的优势已经开始无限扩大,下路不敢补兵、打野不敢反野、哪怕是上单排眼的时候也在自己家的蓝BUFF被抓了,赶来的微笑收下人头,与队友配合拆掉上路!IG5人开始抱团,不想再让卡牌抓单,中路消耗的时候卷毛锤石被拉克丝隔墙Q到,与队友一套击杀。不过因为技能丢失无法防御小龙。在19分钟的时候,WE拿掉第二条小龙。
22分22秒,大龙视野已经被WE彻底拔掉,若风在下路牵制ADC,锤石和狗熊在中路做障眼法,给鳄鱼和男枪争取了偷大龙的时间,影子感觉出了一点端倪,急忙赶往大龙。可卡牌迅速飞到中路,4打5,还是劣势这让WE轻松拿掉大龙。
草莓依旧赖在上路一路通关,PDD不得不经常去上路防御。而卡牌也在下路拆塔,中路的男枪也开始拆塔,1-3-1的分推让IG没有还手余地,因为卡牌的存在可以变成瞬间以多打少。可分散开被兵线牵制不得不防守。IG的三路慢慢的只剩下高地防御塔。
WE继续稳扎稳打,若风甚至用传送飞回中路守中路一塔,不给IG任何机会。慢慢蚕食掉IG外塔后,加上小龙经济,在30分钟已经有了12000的经济优势。已经可以拿掉大龙一波推掉IG了。若风继续老招新用,下路拆塔队友打龙。如果防守大龙就务必会被卡牌拆掉基地,无奈回防后,WE轻松拿掉第二条大龙!把经济优势提升到15000。
IG无奈将气撒到落单的卷毛身上,卷毛在IG红BUFF插眼的时候被IG五人抓掉,不惜用了所有人大招瞬间秒掉了卷毛。WE继续猥琐带线,无限扩大优势。卡牌发现上路拉克丝带线过于靠前,开R接近拉克丝并闪现躲过了拉克丝的E,Q,击杀拉克丝。回到5打4强上高地,没有APC的输出支持、装备压制、人数的缺少。被WE一波团灭。 WE获得了这产比赛的胜利!
经过这场比赛再次证明,若想击败WE,就不要放出卡牌;如果想打败WE,就千万不要给诺导机会。
WEvs皇族对拆基地逆袭!!
在WE被皇族经济领先的情况下,竟然发生了极为有趣的一幕!
微笑:往下面打,往下面打~
若风:打不住他们,我跟你说~,稻草人状态不好我跟你说~
微笑:他们中路复活了
草莓:我觉得可以直接.我..他们.要回去,要回去,他们直接基地了!
若风:他们直接拆基地了。BBBBBB.
微笑:B什么啊!我们也可以拆基地啊!你们这些人在想什么啊!
若风:我们拆!来来来!快快快!
草莓:直接拆,不要。不要内个,不要管内个!直接拆!直接拆基地(草莓君,这是水晶你不拆不让你拆家的-。-)
微笑:直接拆基地!不要管那个(微笑君, 你也卖萌)
诺导:要管!!
草莓:不要管不要管!(草莓!你已经丧心病狂了)
诺导:要管!要管!(还是诺导你冷静!)
此时台下已经惊呼一片!!
诺导:别打兵!别打兵!,全力A塔!(放开那个兵~)
若风:啊,赢了赢了!赢了!!
微笑:啊 ,!!啊!
草莓:啊 啊!
卷毛:啊啊!
诺言:。。。。。。。。。。。。nice!
卷毛:刀锋还太难,还是太难打扎克了。
草莓:刀锋太难打扎克了。唉~
若风:这个阵容如果我们经验多点会好打很多~
诺言:大鼻子,我看你空大几次了!大鼻子!
2、清明节的由来
清明节,是中国传统节日重要的祭祀节日,主要活动以祭祖和扫墓为主,时间在阳历4月5日前后,清明节是我国的法定节假日,时间三天。清明节又叫踏青节,因为清明节在春分后15天,是踏青的好时节。
3、清明节的诗句
(1)《清明》
清明时节雨纷纷,路上行人欲断魂。借问酒家何处有?牧童遥指杏花村。
(2)《途中寒食》
马上逢寒食,途中属暮春。可怜江浦望,不见洛桥人。北极怀明主,南溟作逐臣。故园肠断处,日夜柳条新。
(3)《寒食》
春城无处不飞花,寒食东风御柳斜。日暮汉宫传蜡烛,轻烟散入五侯家。
3、清明节的对联
(1)年年祭扫先人墓;处处犹存长者风。
(2)禁火今年逢节早;飞花镇日为谁忙。
(3)寒食雨传百五日;花信风来廿四春。
(4)春风已解千层雪;后辈难忘先烈恩。
(5)有胸中韬略无穷;流水夕阳千古恨。
关键词:整地;作用;时机;方法
中图分类号:S341.2 文献标识码:A 文章编号:1674-0432(2012)-12-0111-1
“草长莺飞二月天,拂堤杨柳醉春烟。”这是清朝高鼎《村居》中的诗句,说明了田野绿遍,漫山尽染,万紫千红春满园。古人也早已把握到春来的脉膊:“阳动于下,推阴而上。”推者,就是使万物滋生萌发的意思。通过推,可使被严寒摧残了的衰草纷纷萌芽,令冬日里的枯枝渐渐现蕾,天地间万物争荣。
1 春光融融
暖流是什么?暖流就是天气开始回暖了。南方的暖气团实力加强,把北方的冷气团顶回去,天气一天比一天暖和了,这就是春来的信息。
春天来了,唤醒了熟睡的草木,令万物复苏。于是积雪消融,冰河解冻,小溪唱起欢歌,水面荡着涟漪;杨柳返青,吐翠生枝,在春风中摇曳;榆树挂钱,桃杏花开,成群的蜜蜂在花枝间奔忙;芳草萌生,绿遍大地,结伴的蝴蝶在草丛中游荡。青蛙于沟底争鸣,饱食的春鸟在枝头合唱,弹奏着春的乐章;春天来了,山温水暖,坡坡岭岭披上绿装,绘制着春的画卷;春天来了,姹紫嫣红,草木争荣枝繁叶茂,田野间弥散着春的馨香。顽童戏春,弄花捕蝶,一派春的欢乐,一派春的情趣。乳燕闹春,在晴空中展翅翱翔,时而直上云宵,时而贴地乘飞。布谷鸟飞鸣催种,万物逢春蓬勃兴旺,到处呈现出一派生机盎然、欣欣向荣的闹春景象。
2 整地的作用
整地的措施很多,包括耙地、耢地和镇压等。要知道整地的保墒作用,就得明白土壤里的水分是怎样跑掉的。一般来说,土壤水分跑掉有两条路:一条是水分沿着土壤里的毛细管孔隙(即土壤里很微小的孔隙)向上走,好象灯油顺着灯芯往上走一样,一直跑到表层,然后蒸发掉。如果土壤紧密,上下之间的毛细管孔隙相互联结,水分就容易向上运动,跑掉的就越多。另一条是水分在土壤里变成水汽,水汽通过土壤里的大空隙跑到大气里。因而,土壤里的孔隙越多越大,跑墒也就越多。土壤墒情好的时候,跑墒常以前一条路为主,干旱的时候,跑墒则以后一条路为主。总之,无论墒情好坏,地面不平,坷垃多,土壤中的空隙大,跑墒都是严重的。
所以,要保墒就得使地面平整,没有坷垃,使土壤上暄下实,破坏上下毛细管的联结,在春旱时要尽量使土壤紧实,不透风。耙、耢、压所以能保墒,就是能产生上述作用。耙地,可以耙碎坷垃,使表土松碎,地面平整,达到上暄下实破坏上下毛细管联接的目的。耢地,可以进一步平土、碎土,疏松表层。镇压可使土壤变紧变实。所以耙地是在翻地后,或墒情好的时候,用于为保墒措施。镇压则在春旱和翻地、顶浆起垄等容易使土壤过于疏松的农事作业之后及时进行。耢地在耙地、镇压之后都可以使用。
3 整地的时机和方法
惊蛰过后,便是春分。这时天气转暖,气温回升,正是早春整地的大好时机。“抓住暖流早整地”是保证适时播种,及早出苗并达到苗全苗壮的主要措施。
春分过后,气温升高,蒸发量加大,土壤里的水分一天天地减少,这便是对春耕播种极为不利的跑墒现象。如何避免呢?便是进行早春整地,不留土坷垃。早春要抓住土壤一冻一化(即早晚冻中午化)的有利条件,进行拖茬、耙地和顶浆打垄等各项保墒工作。拖茬能平整地面,破碎土块,改变土壤表层结构,保住土壤底墒不被蒸发,是一项防旱抓苗的好办法。耙地可以耙碎土坷垃,破除土壤板结层,弥补土壤裂缝和孔隙,而且切断了毛细管,阻止了下层土壤水分的上升和逸失,从而保蓄了土壤中的水分,是保证适时播种的有效措施。顶浆打垄的好处是:(1)由于土壤上面化土层松散,下面又有冻底,蹚起来非常省力;(2)打垄以后,由于破坏了蒸发面,可以蓄水保墒;(3)打垄以后,可加快播种进度,提高播种质量;(4)打垄以后,土头暄、水分多、温度高,有利于种子发芽和出苗。
不同的地块整地的时机不同。在没有进行秋翻的谷茬、糜茬、稗茬等硬茬子地块,要趁有冻用拉子拖茬子或用磙子压一遍,因为这些茬子都不能刨,而且数量多又很硬,播种时土块容易把种子架空,透风跑墒,影响抓苗。对于秋翻地块,要抓住早春回暖期,在土壤化冻4~5厘米深时,尽早进行拖耙,越早越主动,效果也越好。一般是用拖拉机带钉齿耙,耙后拴上耢子,随耙随耢,耙细耢匀,不重不漏,做到地平土碎,防止水分蒸发。对那些没有秋翻的豆茬、玉米茬、高粱茬、向日葵茬、甜菜茬等软茬子地块,待垄台化到够深时就要动手刨茬子,刨后要用耢子耢一遍,把刨坑拖平,以防止土壤板结,弥补地隙,防止水分蒸发。当土壤化够一犁深时,就要立即开犁进行顶浆打垄。
为了保证适时播种抓全苗,就要掌握好时机,进行早春整地。稍一迟疑,就会贻误战机,如待开始煞浆:①再整地,就会造成土壤失墒,如没有春雨补充,种子容易落干,造成出苗不齐,将会减产和欠收。