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关键词:梅毒;酶联免疫吸附法;梅毒螺旋体明胶颗粒凝胶实验;快速血浆反应素环状卡片试验
梅毒是由梅毒螺旋体感染引起的性传播疾病,具有高度传染性。梅毒血清学实验是目前国内外诊断梅毒的主要实验室检查方法。我实验室用酶联免疫吸附法(ELISA)、梅毒螺旋体明胶颗粒凝胶实验(TPPA)和快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)对231例疑似梅毒患者血清样本进行检测,并对三种检测结果和方法的优缺点进行分析比较。
1 资料与方法
1.1一般资料 血清标本均来自内江市中医医院2011年~2013年临床做输血前和手术前检查的患者14412例。
1.2试剂与仪器 ELISA试剂由北京万泰生物药业股份公司提供,RPR实验试剂由上海科华生物技术公司提供,TPPA试剂由日本富士株式会社提供。仪器为安图2010酶标仪。
1.3方法 所有血清标本分别用ELISA和RPR法同时进行检测,对两法或其中一法筛查出结果为阳性的231例标本进一步做TPPA实验,操作严格按照各说明书进行。ELISA检测以OD>CUTOFF值为阳性,TPPA>1:80为阳性,RPR以出现肉眼可见凝集为阳性。检测结果进行比较分析。
2 结果
2.1所有14412例标本中,ELISA法检出228例阳性,检出率为0.19%(228/14412),RPR法检出53例阳性,检出率为0.02%(53/14412),两法符合率为98.74%(14231/14412)。
3 讨论
人体感染梅毒螺旋体后机体主要产生两类抗体,一类为抗梅毒螺旋体的特异性抗体,感染2~4w既可检出,本实验中ELISAT和TPPA实验即为此类实验;另一类是抗梅毒螺旋体破坏患者组织后释放出的某些物质的抗体,称为反应素,检出时间比特异性抗体的时间迟2w本实验中RPR实验即为此类实验。
RPR实验检测的是血清反应素,即类脂质非特异性抗体,多种疾病如急性病毒感染、自身免疫性疾病等患者体内均出现反应素。一般在硬下疳出现后4w才能检出,RPR实验一期梅毒阳性率较低,二期梅毒的阳性率较高,隐性梅毒的阳性率也明显低于另两种检测方法。仅用RPR实验做梅毒筛查实验漏检率相当高,本次实验结果也证实了这一点。国内林益根[1]等人报道其敏感性仅74.71%。但其滴度变化与治疗和病程变化有关,所以可以作为疗效观察和随访有无复发或再感染的指标。
TP-ELISA法是目前随着梅毒螺旋体基因工程抗原的研制成功而建立的方法,具有双重识别机制使假阳性和假阴性不易出现,故敏感性和特异性均较高。ELISA法具有操作简便,易自动化,检验结果由仪器分析客观准确的特点,适合大批量的检验。
TPPA是将纯的梅毒螺旋体特异性抗原包被在凝胶颗粒上,当抗原和血清中抗体发生特异性反应时就会出现颗粒凝集现象,凝集的强度与抗体浓度成正相关。因此,TPPA具的特异性强,敏感性高的特点,特别适用潜伏期梅毒和非螺旋体实验阴性而又高度怀疑的患者,是目前公认的较常用的梅毒确认实验。但是其操作烦琐,耗时长、试剂体格昂贵,结果依赖肉眼判断且不易保存,对操作者要求较高,不适于大批量的筛选实验。
TP抗体在血清中持续存在,不易转阴也不随病程发展和治疗好坏而变化,可终身或半终身保留,符合医院手术前或输血前需要对患者的梅毒现病史和继往病史有所掌握的要求。
国内李晓梅[2]报道TPPA法对梅毒患者诊断敏感性为83.72%,ELISA法敏感性为87.21%,两种方法的特异性均为100%。
ELISA和RPR法简单适用,具备常规使用方法的特点,因此两种联合运用,可减少假阳性和假阴性,用于输血前患者和手术前患者的常规检查以及疑似梅毒患者的筛查,具有更重要的价值。
参考文献:
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[关键词]梅毒;血清学试验;分析
[中图分类号]R446.11 [文献标识码]B [文章编号]1673-7210(2007)12(a)-135-02
梅毒是由梅毒螺旋体感染所引起的一种传染性疾病,几乎可以侵犯全身各器官,并产生多样的症状和体征,对人体危害极大。为了解本地区于我院就诊人群的梅毒感染状况,本文对2006年1月~2007年6月于我院就诊并做梅毒血清学试验的5774例检测结果分析如下:
1 对象与方法
1.1 检测对象
检测对象为我院住院患者术前、产前、输血前医疗上要求必须检测者及在门诊就诊需检测者。年龄最大者91岁,最小者仅4h。空腹静脉采血分离血清,于-20℃保存备用。
1.2 试剂
梅毒螺旋体抗体(Anti-TP)诊断试剂盒(北京万泰生物药业有限公司生产)。
1.3 仪器
Reader2010型酶标仪(奥地利产);anth.sfiudo洗板机(郑州博赛生物工程有限责任公司生产)。
1.4 方法
双抗原夹心ELISA法,严格按照试剂盒使用说明书操作,用酶标仪判断结果。
2 结果
2.1 检测结果
5774例梅毒血清学试验检测结果显示:阳性219例,占检测总数的3.79%。其中,男性阳性85例,占检测总数的1.47%,占男性检测数的3.02%;女性阳性134例,占检测总数的2.32%,占女性检测数的4.53%。小于1岁年龄段共检测122例,阳性15例,占检测总数的0.26%,占该年龄段的12.30%。1~20岁年龄段共检测497例,男性阳性0例,女性阳性7例,均为16岁以上的人群。21~40岁年龄段共检测2644例,阳性131例,占检测总数的2.27%,占该年龄段的4.95%,其中,男性44例,占检测总数的0.76%,占该年龄段的1.66%;女性87例,占检测总数的1.51%,占该年龄段的3.29%。41~60岁年龄段共检测1699例,检出阳性53例,占检测总数的0.92%,占该年龄段的3.12%。61岁以上年龄段共检测812例,阳性13例,占检测总数的0.23%,占该年龄段1.60%。见表1。
2.2 阳性患者的年龄分布情况
219例感染者中男性85例,占阳性总数的38.81%;女性134例,占阳性总数的61.19%。感染者女性多于男性,有非常显著性差异(P<0.01)。21~50岁年龄组感染者168例,占阳性总数的76.71%;其余年龄组感染者51例,占阳性总数的23.29%,两者比较,有极显著性差异(P<0.001)。见表2。
3 讨论
梅毒是由梅毒螺旋体引起的一种性传播疾病,其传染性强,感染率呈逐年上升趋势,它的发展威胁着我国公共卫生的安全。因此,方便、快速、敏感和特异性高的血清学检测方法对尽早诊断并控制传染源具有非常重要的意义。梅毒可产生多种多样的症状和体征,也可多年无症状而呈潜伏状态,主要是通过性关系传播,也可通过胎盘传给下一代。其次,还可通过接吻、哺乳、输血以及意外直接接触等途径传播。人体是梅毒的唯一传播源,因此,未经治疗的病人在感染后的1年内最具有传染性,有报道称,半数人类感染量(IDso)为50条梅毒螺旋体。本文检测5774例,检出阳性219例,占总检测人数的3.79%,较文献报道高,这可能与检测对象有一定的关系。本次检测主要是以我院住院患者术前、产前、输血前医疗上要求必须检测者为对象,其余则为门诊医生怀疑感染者及主动要求检测者。
过去认为,怀孕16周前胎盘绒毛细胞滋养层对梅毒螺旋体有屏障作用,孕24周后胎盘绒毛细胞萎缩,梅毒螺旋体才得以通过胎盘进入胎儿血液循环引起宫内感染。近年来,经过电镜检查发现细胞滋养层细胞存在于整个妊娠期,并有在早期流产胚胎组织内检测到梅毒螺旋体的报道。故认为梅毒螺旋体在妊娠的任何时期均可穿过胎盘引起胎儿宫内感染。本文检测出小于1岁年龄组感染者达15例之多。笔者追踪检查,结果显示感染儿母亲均为梅毒感染者,这充分说明胎儿是在宫内被母体已感染的血液感染所致。
【关键词】 血清学试验检测;TRUST;TPPA;梅毒
doi:10.3969/j.issn.1004-7484(x).2012.08.548 文章编号:1004-7484(2012)-08-2853-01
梅毒是常见的性传染疾病,致病的病毒为梅毒螺旋体。目前在临床医学上检测梅毒主要有两种方法,即病原学的检测方法与血清学的检验方法[1]。血清学试验检测的方法又包括了多种检测方法。而在国内被广泛采用的试验检测方法是甲苯胺红不加热血清的试验,简称为(TRUST)与明胶颗粒凝集的试验,简称为(TPPA),(TPPA)试验检测利用了病毒螺旋体的特异性来完成。本研究采用了100例已经确诊为梅毒患者的血清,并采用TRUST与TPPA两种血清学试验检测方法对梅毒患者的血清进行了检测与分析,现将具体内容报道如下。
1 临床资料
100例梅毒患者都为本院的性病门诊部收治并确诊的患者,100例患者中,有男性患者61例,有女性患者39例;患者年龄的具体情况为:年龄最小者为17岁,年龄最大者为71岁,平均年龄为43.5岁。患梅毒的病理特征情况为:Ⅰ期梅毒的患者有58例,Ⅱ期梅毒的患者有32例,Ⅲ期梅毒的患者有20例。
2 方法
TRUST与TPPA两种血清学试验检测方法所使用到的试剂分别为:上海宏盛生物科技有限公司所提供的TRUST试剂,日本富士欧必株式会社所生产的TPPA试剂。TRUST与TPPA两种试剂都是在其有效期的时间范围内使用。具体的血清学试验检测方法如下。TRUST试验检测方法为:在室温条件下,将普通生理盐水进行稀释,稀释的浓度为1:32,于血液样本中加入心磷脂用于抗原。接下来是将患者血液样本放置于振荡器进行水平振荡,振荡的时间为8分钟,每分钟振荡的次数为100次;振荡后观测血液样本的凝集结果,将血液的阳性滴度确定下来。TPPA试验检测方法为:在室温条件下,用稀释液把U型板上的血清稀释,然后分别加入未致敏与致敏明胶颗粒,让患者的血液样本孵育两个小时之后,观察试验检测的结果。
3 结果
在100例梅毒患者的血清样本中,采用TRUST试验检测方法的结果为:9例血清结果检测为阳性,阳性率为9%;采用TPPA试验检测方法的结果为:11例血清结果检测为阳性,阳性率为11%。在100例梅毒患者的血清样本中,TRUST试验检测方法与TPPA试验检测方法同时检测出为阳性的有6例,TRUST试验检测为阴性而TPPA试验检测为阳性的有两例;TPPA试验检测为阴性而TRUST试验检测为阳性的有1例。
4 讨论
梅毒是常见的性传染疾病,病情较为严重,可累及患者全身的各脏器;该病可能在患者的体内潜伏,多年无临床表现症状[2]。梅毒的早期症状主要表现为病毒侵犯皮肤的黏膜组织,此时该病的传染性较强;而梅毒晚期患者的血管及神经系统已遭到侵犯,且病毒的破坏能力极强。梅毒不仅会导致患者的全身器官遭到损害,而且病毒会由胎盘传染给胎儿,导致先天梅毒。根据不同的传播途径,可将梅毒划分为两大类,即后天获得梅毒和先天梅毒,这两种梅毒又可以依据不同的病期,划分成早期梅毒及晚期梅毒。若人体感染了梅毒,在体内便会产生不同的两种抗体。一种为针对螺旋体病毒的特异抗原抗体,另一种为针对血液类脂质的非特异抗原抗体。TRUST方法为类脂质抗原抗体的检测试验,即为筛选试验。TPPA试验方法则是一种直接检测螺旋体病毒的抗体试验,即为确认试验。人体感染梅毒之后,并不是一定可以将以上两种抗体检测出[3]。TRUST试验检测方法是由VDRL试验改良所形成的,因加入EDTA与氯化胆碱等试剂,可以使血清不再需要经过加热处理就能达到延长抗原的保存期与灭活的目的。甲苯胺红与胶性碳的加入,更便于使用肉眼观察检测结果,对设备的要求相对简单、具备高敏感性、报告快速,其检测结果可以作为观察梅毒疗效、随访是否再次感染及复发的指标[4]。TPPA试验检测法为将纯化致病梅毒的菌株成分放置于明胶粒子中,如血液中含有梅毒螺旋体的抗体,则可用肉眼观察到红细胞出现凝集反应。TPPA试验检测法可将非特异性的反应排除,因此具有较高的敏感性与特异性,临床上常用作确认梅毒的试验。TRUST试验检测法具有价格低廉、快速、操作简便等优点,但是在梅毒一期初期,患者血清所含抗体量较少,采用TRUST试验检测的结果会呈阴性,漏检率高。对于晚期的梅毒患者来说,TPPA试验检测结果一般呈阳性,这一点表明早期的梅毒患者产生非特异性与特异性的抗体,都需要时间;还有可能是因为二期梅毒的患者血清当中含心磷脂的量过多,从而对TRUST阳性反应起到了抑制作用,即为前滞现象[5]。在本次试验中,TPPA试验检测法的敏感性虽略高于TRUST试验检测,但是仍然存在漏检的患者,因此,在对梅毒的血清进行检查时,应考虑同时做TRUST与TPPA试验检测,这两种血清学试验检测法对于梅毒的早期诊断及治疗有着重要的参考价值。
参考文献
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【摘要】 目的 揭示多种疾病梅毒血清学生物学假阳性的疾病谱。 用TRUST及TPPA做梅毒血清学检测。结果 4913例TRUST试验,57例发生生物学假阳性反应,麻风发生率最高,占麻风病例的31.82%,依次为类风湿关节炎17.78%,系统性红斑狼疮(SLE)17.02%,变应性血管炎6.67%,乙型肝炎5.43%,硬皮病3.33%,皮肌炎3.13%,活动性肺结核1.82%,孕妇0.68%,正常人0.08%。结论 所有生物学假阳性反应的TRUST定量试验,滴度均≤1∶8,其中91.23%的TRUST定量为1∶2,而未经的二期显发梅毒TRUST定量一般≥1∶16。有利于临床的鉴别诊断。
【关键词】 TRUST;梅毒血清;生物学假阳性;疾病谱
【Abstract】 Objective To disclose the meaning of the biological false positive syphilis serology. Methods Detect the syphilis serology with TRUST and TPPA. Results Among 4913 TRUST tests,57 occur the biological false positive reactions,the most occur the lepra,about 31.82% of the lepra patients,secondly RA 17.78%;systemic LE 17.02%,hepatitis 5.43%,scleroderma 3.33%,dermatomyositis 3.13%,activity tuberculosis 1.82%. Conclusion base of all kinds of TRUST quantitive tests of biological false positive reactions is ≤1∶8 and 86.8% TRUST quantivity is 1∶2;however,the TRUST quantivity of untreated Ⅱ developed syphilis is ≥ 1∶16. All of these are useful for the differential diagnosis.
【Key words】 TRUST;syphilis;BFP;disease spectrum
多年的临床试验工作经验,我们发现了一些病人的梅毒血清学生物学假阳性结果有一定的疾病谱,而且其定量检验滴度变化有一定的性,可以帮助临床的正确诊断。因此,我科自1986~2005年对门诊及体检各种疾病患者所做梅毒血清学检验结果进行,现将研究结果报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 检验病例4913例,包括结缔组织病201例,其中系统性红斑狼疮(SLE)94例,类风湿关节炎45例,皮肌炎及系统性硬皮病62例;变应性血管炎15例;瘤型麻风22例(由望都麻风病院提供血清);病毒性疾病412例,其中乙型肝炎350例,带状疱疹52例,病毒性心肌炎10例;活动性肺结核55例;寻常型银屑病212例;玫瑰糠疹170例;高脂血症(胆固醇>6mmol/L)220例;性传播疾病2100例;艾滋病及感染者8例;静脉吸毒者6例;正常孕妇292例;正常人查体1200例。共计八组疾病、一组孕妇和一组正常人。并做61例二期显发梅毒患者(未经治疗)梅毒血清学检验,作为对照组。
1.2 材料 试剂TRUST均采用兰州生物制品公司或武汉生物制品公司生产的试剂,TPPA采用进口日本富士公司生产的试剂。
1.3 试验方法 初筛试验TRUST定性试验阳性者均做定量试验,同时做TPPA证实试验,严格按照试剂盒内试验操作程序进行操作,严格控制试验条件。
2 结果
【关键词】 梅毒; 规范治疗; 血清滴度; 临床意义
doi:10.3969/j.issn.1674-4985.2012.33.018
随着近几年性疾病的传播又呈现上升的趋势,曾经几乎绝迹的梅毒再次引起了人们的关注。很多地方把该病列为医学检查的必检项目[1]。为了观察梅毒患者在经过治疗后的效果,笔者所在医院选择了确诊为梅毒的319例患者进行定期随访。随访期间进行TRUST和TPPA跟踪检测,现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 本次所选的319例梅毒患者全部来自传播性感染门诊,男162例,女157例,年龄18~60岁,平均年龄(30.21±2.64)岁,病程为1个月~2年。根据患者的生活史,病史,临床表现,病原体以及血清学的检查而确诊。治疗方法主要是进行肌肉注射青霉素,1次/周,共注射3周;青霉素过敏的用红霉素代替,让患者口服,2 g/d,分为4次,连续服用15 d。
1.2 方法 分别于治疗后的3个月和6个月进行复查,取患者血清行初筛实验-TRUST试验,试验阳性者进行血清滴度测试,同时还要做TPPA试验。
1.3 统计学处理 采用SPSS 13.0统计学软件进行分析,计数资料行 字2检验,P
2 结果
2.1 患者在接受治疗后6个月的阴转情况 所选患者经过TRUST初筛和TPHA,有60例被确诊为梅毒,其中有30例一期梅毒,其TRUST滴度在0~1:16之间,治疗后6个月复查,有19例阴转,占63.33%;有30例为二期梅毒,其TRUST滴度0~1:64,治疗后6个月复查有17例阴转,占56.66%;259例隐性梅毒患者,其TRUST滴度1:2~1:256,治疗后6个月后复查,有30例阴转,占11.58%。一期梅毒、二期梅毒以及隐性梅毒患者在治疗后6个月其TRUST阴转数比较差异有统计学意义( 字2=59.56,P
表1 梅毒一、二期和隐性梅毒疗效 例(%)
梅毒分期 阴性 阳性
一、二期(n=60) 36(60.00) 24(40.00)
隐性(n=259) 30(11.58) 229(88.42)
合计(n=319) 66(20.69) 253(79.31)
2.2 梅毒患者在治疗后6个月采用TRUST检测血清抗体滴度的变化情况 306例采用苄星青霉素治疗,治疗后3个月和6个月复查,经过TRUST初筛以及定量试验后的结果为:治疗3个月后阴转45例(14.7%),治疗后6个月阴转45例(14.37%),TRUST滴度从12.66分别降到5.32和4.12,见表2。
2.3 13例隐性梅毒患者使用红霉素治疗,在治疗后的3、6个月复查,进行TRUST初筛以及定量试验,2例阴转(15.38%),血清滴度由14.37分别降到6.06和4.59,青霉素治疗组和红霉素治疗组比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。
3 讨论
近年来梅毒患者比例增高的原因如下:(1)第一期梅毒和第二期梅毒的症状不明显,并且有隐伏的特点,在隐伏期间,患者常以为病好了而未及时治疗。(2)女性患者同时患有其他妇科疾病的容易掩盖梅毒的早期症状。(3)近年来的梅毒患者多发现在农村,其文化素质低,较多,不清楚梅毒的症状,不知道自己的病程,更不清楚流行病史。因此应该加强对这类人群的检查、宣传、教育,使他们能得到尽早诊断和尽早治疗[2]。
由表1可以看出,第一期梅毒和第二期梅毒在治疗后6个月的TRUST阴转率较高,为60%,但是隐性梅毒在治疗后6个月的TRUST阴转率比较低,为11.85%,两者比较差异有统计学意义( 字2=59.56,P
本次治疗的319例梅毒患者,其中306例患者是使用苄星青霉素治疗,其TRUST滴度均在0~1:256,GMT为12.66,分别在治疗3、6个月后复查进行TRUST初筛以及血清滴度检测,治疗后3个月阴转45例(14.7%),GMT降为5.32;治疗后6个月阴转45例(14.37%),GMT降为4.12,比较差异有统计学意义(t=9.06,P
梅毒滴度是梅毒血清学检查血清中抗体的点子,滴度的高低反应了患者血清中抗体的多少。梅毒滴度是判断梅毒治疗疗效转归的重要指标之一,一般早期梅毒在规范治疗3、6个月后进行梅毒血清学检测。如果血清滴度下降,则抗梅毒治疗有效。如果规范治疗后,复查中血清滴度下降后又重新升高,则抗梅毒治疗失败[3-4]。梅毒滴度患者是唯一的传染源。关键是通过由破损处传染,梅毒滴度螺旋体大多存在于皮肤黏膜处,在唾液、乳汁、、尿液中也可见。未经治疗的患者在梅毒滴度一年内最具传染性。梅毒患者的皮肤、黏膜中含梅毒螺旋体,未患病者在与梅毒患者的性接触中,皮肤或黏膜若有细微破损则可得病[5]。极少数可通过输血或其他途径传染。获得性梅毒的早期梅毒患者是传染源,大约95%是通过不洁传染,也有少数通过接吻,握手、输血、接触污染的内衣,湿毛巾、茶杯、烟斗、哺乳、尿布等传染[6]。由于梅毒滴度螺旋体为厌氧性,体外不易生存,而且对干燥极为敏感,通过各种器物的间接传染极少。输血时如供血者为梅毒滴度病号可传染于受血者。
参考文献
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