十大古曲

前言：想要写出一篇令人眼前一亮的文章吗？我们特意为您整理了5篇十大古曲范文，相信会为您的写作带来帮助，发现更多的写作思路和灵感。

十大古曲范文第1篇

Most people didn't know who Sheena Matheiken was. Her passion is in getting children in the slums into the school in India. To help raise awareness and money for the Akansha Foundation， she pledged to wear the same dress every day for a full year.

At first， the project did not gain much attention. However， each day， Sheena Matheiken photographed herself in the outfit. Through the clever use of accessories and folding， she prepared a different look each day. The creative combinations and blog posts soon thrust her into the public eye and raised a media storm. The one outfit that she wore each day was none other than the little black dress. In fact， she originally called her project Little Black Dress for 365 Days， according to the Uniform . However， it soon became known as the Uniform Project when she exceeded her goal of $100，000 and then opened it up to other women who wanted to join her. Joining is simple. All you have to do is pledge to wear one little black dress for 365 days and donate the savings to underprivileged1） children in the slums.

同一条裙子

绝大多数人以前都不知道希娜・马思肯这个人。她致力于让印度贫民窟里的孩子们进学堂。为了帮助“阿坎莎基金会”提高知名度并募集资金，她承诺在一整年内每天都穿同一条裙子。

起初，这一计划并没有获得多少关注。不过，每一天，希娜・马思肯都把自己穿同一条裙子的装扮拍下来。通过巧妙地使用配饰和折叠方法，她每天都把自己打扮得不一样。这些创意的组合和博客帖子很快就把她推进公众的视野，还掀起了一场媒体风暴。她每天所穿的那件衣服无非就是一条小黑裙。按照“同服项目”网站的说法，其实她最初就管这个计划叫“小黑裙的365天”。然而当她募集到的资金超过了目标十万美元并把这个计划向其他想要加入的女性开放时，这一计划很快就以“同服项目”一名而变得为大家熟知。参与计划很简单，你所需要做的就是承诺在365天里穿同一件小黑裙，并把省下的钱捐献给贫民窟里无法上学的孩子们。

Stunt Driving Librarian

According to World of ， Sue Harding was not born with a thirst for adventure. However， she hated the stereotype that librarians were boring just as much as she cared for the Warwickshire and Northamptonshire Air Ambulance Service. She frequently thought about ways to combat the image of the boring librarian. She then came up with the idea to destroy the stereotype by involving herself in a stunt driving course. In the process she raised funds. According to The Times， people could come out and watch. All proceeds2） were to be donated to the Warwickshire and Northampton Air Ambulance Service.

When the big day came， she had far exceeded her initial goals and her stunt driving skills turned out to be quite impressive for a librarian. Not only did it smash the stereotype but it also raised money for the ambulance service. It is still considered one of the more unusual ways for raising money for an ambulance， but according to their official website， they were just glad that Sue Harding didn't have to use their service.

表演特技驾驶的图书管理员

根据“不同的世界”网站所述，休・哈丁并不是天生就渴望冒险。然而，她厌恶人们认为图书管理员无趣这一成见，一如她喜欢沃里克郡和北安普敦郡空中救护服务队。她经常思考打破无趣的图书管理员这一形象的方法，然后就想到了通过让自己学习特技驾驶来消除人们的成见。在学习的过程中她就募集到了资金。据《泰晤士报》报道，人们可以出来观看她的表演。所有的收入都将捐给沃里克郡和北安普敦郡空中救护服务队。

最终表演的日子到来的时候，募集到的资金已经远远超出了她最初的目标。而且，就一名图书管理员来说，她的特技驾驶技能结果也着实令人钦佩。这不仅粉碎了人们的成见，而且为救护服务队募集到了资金。就为救护服务募集资金而言，这仍然被认为是比较与众不同的方式之一。不过按照该救护服务队官网的说法，他们实在很高兴休・哈丁不需要使用他们的服务。

The Ron Swanson Mustache

Few mustaches have become quite so iconic as the Ron Swanson mustache. Famous for his character， Ron Swanson， in Parks and Recreation， actor Nick Offerman came up with an idea to support pediatric3） cancer efforts. He offered to shave off his mustache， put it back together， mount4） it， and present it to the winning bidder. The proceeds would then go entirely to the charity Because of .

The sale itself was private. However， the mustache was successfully removed， reassembled， glued， and then mounted behind glass. To ensure that it had the proper shape， the mustache was reassembled against a mold of Nick Offerman's face.

荣恩・斯沃森的胡子

很少有谁的胡子能变得像荣恩・斯沃森的小胡子那么出名。演员尼克・奥弗曼因在《公园与游憩》中饰演荣恩・斯沃森而出名，他想出了一个资助儿科癌症工作的点子。他提议剃掉自己的胡子，然后整理成原样并固定好送给中标者。所募集的善款全部交给慈善团体Because of 。

拍卖本身并没有公开。不过，荣恩・斯沃森的胡子被成功地剃掉、重新整理好、粘合后固定好放入了玻璃罩中。为了确保胡子保持本身的形状，重新整合的工作是在尼克・奥弗曼的脸部模具上完成的。

Skydiving for the Blind

Most men in their 70s look for tamer ways to raise money for their favorite charities. However， Larry Ekstrom decided that the best way to celebrate his 70th birthday and raise money for Leader Dogs for the Blind was to sky dive 70 times on his birthday. According to the Huffington Post， this is not the first time he has done a feat5） like this. On his 60th birthday， he jumped 60 times to raise money for multiple sclerosis6） research as his wife suffers from it.

He succeeded in raising a significant amount of money， although he did not say how much.

为失明者跳伞

绝大多数70多岁的人会寻求更为安全些的方式为自己喜欢的慈善机构募捐。然而，拉里・埃克斯特龙认定庆祝自己70岁生日并为导盲犬训练学校募集资金最好的方式就是在生日那天跳伞70次。据《赫芬顿邮报》报道，拉里做这类的壮举已经不是第一次了。在他60岁生日的时候，他曾跳伞60次为多发性硬化症研究募捐，因为他的妻子患有这种疾病。

尽管他并未透露具体数目，但他成功地募集到了一大笔善款。

Stop Bieber

There are two types of people in this world： those who love Justin Bieber and those who can't stand him. However， even those who love Justin Bieber sometimes tire of listening to his music non-stop. And evenfans sometimes have certain songs that they absolutely hate. According to ， one of those songs is "Baby".

The Evanston Township High School of Illinois wanted to raise cash to redecorate a cafe and art center. When they ran into walls at other fundraisers， they decided that the best solution was to play the Justin Bieber song Baby over the loud speakers. Over the top of this， the students would urge their fellow students to contribute. They needed to raise $1，000 to achieve the goal. Reaching the goal was the only way to make the song stop. The school actually gave them one week to raise this money. However， they reached and exceeded the goal within three days， according to Sun Times. The song played approximately 20 times before just about everyone in the school caved7）. Even the teachers and the workers donated to stop the "Baby" song， according to CBS.

阻止贾斯汀

十大古曲范文第2篇

赚取时间 就是赚取了财富

李秀恒，男，1954年生，港事顾问，经贸商会会长，香港金宝时计集团董事长，1991年香港十大杰出青年，1993年获香港青年工业家奖。10年间他一手建立10亿资产的钟表王国，坐拥两亿元物业，收藏了数百万元的名表、名古董，在香港被称为“钟表大王”。这位亿万身家的“钟表大王”，手上却只戴着价值200余元的自产手表，他说他看重的不是身分，而是时间。

说起来，做钟表不是我先前的兴趣，只是当时看报纸的招聘栏，见到这行业招人就选择这行业。如果当年我选择地产，我现在的会议室可能都有两千多尺啦！（笑）

不瞒你说，小时候我的理想是当作家，幻想将来写文艺小说和爱情散文。中学时我的书法和作文经常得奖。可惜那时候我家里太穷，父亲是解放前从广东清远移居来港的，在一家电灯公司做线路检查工。我们一家4口住在50平方尺的板间房，我年年暑假都必须做暑假工赚点生活费。这么穷，让我当作家的梦都不现实，因为靠稿费养家糊口是不行的。中学毕业本来已考上大学，可我怕家里负担太重，索性放弃了上大学的机会，到钟表行当了文员。

俗话说“人穷志短”，可我却偏偏最有志气。因为我知道我没有回头路，一回头便没有生活，唯有向前走，所以我的斗志和毅力比谁都强。工作、再工作，是突破贫穷的唯一办法。做钟表不是为兴趣，是为生活，但干得久了，对行业熟悉了，兴趣也就来了。由于是做钟表，我更懂得生命的短暂、时间的宝贵。

在钟表行当文员当了两年，我就跳槽到一家日本公司，专门推销日本手表和零件。当时香港几乎没有自己的手表工业，市场全让瑞士表占领了，港人当时也是非瑞士表不买。所以刚开始推销日本产品还是很困难的。不过尽管瑞士表确有质高、精巧和品牌老的盛名，但与价廉物美的日本新兴石英电子钟表相比，已落后于时代。由于看到这一点，我推销表时不怕麻烦，不辞劳苦，以诚待客，结果业绩不错，我很快被提升为营业经理，这是当时华人在这家公司里的最高职位。别人都很羡慕，可我却希望自己拥有

生产钟表的工厂，而且梦想香港有朝一日能够超过瑞士、日本，成为世界生产和出口钟表的王国。

到了80年代，高科技的电子表更是大批量进入市场，大有一举取代传统机械表之势。我立即意识到，电子表由于成本低，价廉物美，走时准确，款式新颖，将会为愈来愈多的消费者所接受，这是个难得的机遇，于是决定辞职另立门户。我用自己11年的打工积蓄和钟表业经验，成立了自己独资拥有的“金宝时计”，引进日本先进的设备、零配件和技术，一方面在自己的工厂生产，另一方面输入给同行，并辅助培训本地厂家生产装配技术，推动厂商们利用低成本生产钟表，然后再掉转头来同日本公司竞争。我自己也以多品种多款式生产了大量礼品式钟表，以独特的经营方式搏击市场，很快获得了成功。

你问我成功的秘诀？嘿（笑），谈不上。不过体会是有的。一是快，香港这地方没什么资源，可那么多人成功了，靠什么？就是快，必须永远走在人家前面，所以香港的生活节奏这么快。二是靓，这是广东话，意思是要将事情做得漂亮、完美，否则光快是没有用的。比如同样是制作一张名片或贺卡，制作得好与坏那差距可就大了。所以我做事不是要求100分，而是要求101分！三是变，即是创新。事业稳定之后一定要不断创新，否则你就没有进步，就会落伍。我曾经给别人打过比方，说自己是一座电脑（笑）。当然是一座有用的电脑，要Update（不断更新）软件和硬件。我说的软件就是脑袋，要靠进修来充电；而硬件是外表，你看我40都出头了，可人家老觉得我长着一张娃娃脸，所以我要靠打扮和留胡子来增加外表的稳重（笑）。不过相比之下，我更重视软件的Update，参加工作之后，为了弥补低学历造成的知识欠缺，我用了7年的业余时间读完了美国圣提巴拉大学函授课程，取得了工商管理硕士学位，而现在又在攻读广州暨南大学工业经济博士。不过，有投入也就有产出（笑），眼下，我给《星岛日报》《信报》《文汇报》《香港商报》《东方日报》《东周刊》等多家报纸开专栏，写财经和工商分析方面的文章，人家还称我“专栏作家”哩（笑）！因为有这么多事要做，我必须千方百计赚取时间，因为赚取时间你就赚取了财富。

你问我创业者最重要的素质是什么？要我说，最重要的是找个好老板、找份你喜欢做的工作，然后脚踏实地。即使是专职扫地的，若能像我这样在钟表业

中干20年的话，此后跳槽到任何公司，也会得到不错的待遇。换句话说，“专”是很重要的，经常转换工作的话，便不能为自己建立基础，也不会有提升机会。此外，决心也是很重要的，只要肯下决心苦干，你就能获得成功。

记得我获得青年工业家奖后出席某个演说，有个年轻人挑战我，说：“你有这么多成就，又有这么多机会，当然这样说啦！”我想告诉年轻人，今日我是老板，一样求才若渴，我很想给年轻人机会，但年轻人没有证明给我看他值得我给予机会。一万元工资，他就只做一万元成绩，你给我两万时，我才交两万的表现。大家只在想：你先给我机会我才搏给你看，但做老板的又岂会这样用人？所以，不是没有机会，是你们有没有争取机会。

小时候我形容自己是精忠报国，因为我背后有一颗大痣（笑），我知道自己必定要毕生辛苦作战，因此我加入了钟表行，一切也要自己辛苦摸索；但到了现在年长了，若我仍要拼命开展事业的话，便成了为金钱打工，那是我不愿意的。为了让自己轻松一点，我学习了日本人的一套维系员工基础的系统，放权让下属替我负起责任，自己却能掌握大权，因此我现在便能“不务正业”（笑），时常抽出时间来读书写作。

十大古曲范文第3篇

【关键词】股市 散户 投资 误区

近些年来，“炒股”成了我们生活的重要话题。从2007年10月开始，A股市场一路下行，累计跌幅已超过60%。在日常的股票投资活动中，笔者发现多数散户投资者多多少少都会犯一些这样那样的错误，导致投资损失。在散户投资的众多误区中，笔者根据自己的实践经验总结出散户朋友的十种典型错误，为散户朋友们今后的投资提供一些参考。

一、买入价本位思想

即无论何时、何种市况，都是以自己的买入价作为卖出或是继续持有的标准。散户朋友们这一错误具体表现为缺乏行之有效的“止赢止损”方法和原则。小赚不跑，小亏不出，大亏认赔，亏了不忍心割肉,放手让亏损持续扩大，这是很多散户投资者容易犯的错误。今年以来，A股市场的大幅下跌，有的投资者甚至自作聪明，为摊薄成本向下买入摊平，结果越套越深。“会买的是徒弟，会卖的是师傅，会割肉的是爷爷”是投资高手总结的经验。割肉一方面是为了保存资金实力，另一方面就是提高资金的使用效率，是综合考虑了资金的时间成本和机会成本的。“买入价本位思想”是散户朋友投资理念狭隘的体现，也是散户投资者易犯的常见错误。

二、持股过于分散或集中

投资过于分散，表面上看起来可以分散风险，但是对于一般的散户来说，其实是一种极其分散精力的行为和一种缺乏信心的表现。我有一位朋友只有7万块钱，持有10只股票。这位朋友以为分散持股可以东方不亮西方亮，殊不知一匹再大的黑马有再大的力气，也拉不动装着9头瘸驴的车。投资过于集中，只买一只，违背了把“鸡蛋放在同一篮子”一损俱损的教训。乔治.索罗斯说的好：“承担风险无可指责，但同时记住千万不能孤注一掷!”根据笔者的经验，持股适度按股票行业和地域分配比较好，3-6只股票适宜，持仓要讲究立体性，投资和投机结合，短线和中长线结合。

三、依据所谓专家、朋友、小道消息或者是媒体的建议作为买卖的标准

在股票市场，我的经验是不要轻易相信股评专家等人的结论，他们的话只能参考。他们说的涨、跌和你所理解的涨跌不同。大多数情况下一般股民理解的都是短期行为，而证券研究报告说的却是中长期。缺乏主见和自己的投资标准，人云亦云，没有正确判断风险和市场的能力，只能让自己永远停留在业余水平。沃伦.巴菲特说：“风险来自你不知道自己正在干什么”，正确的做法应如江恩所说：“顺应趋势，花全部的时间研究市场的正确趋势，如果保持一致，利润就会滚滚而来!”成为股市赢家需要建立自己正确的投资哲学与方法，不能有不劳而获的思想。不要把“中国是政策市”等作为不学无术的借口，炒股实战技巧需要反复总结和摸索，不断地深入学习和领悟，才能为炒股赢利奠定坚实的基础。

四、买卖时只喜欢限价交易，而不会利用非现价（市价）交易

有的散户往往会因为一、两分钱的便宜而因此误了最佳进入时机，这是典型的“拣芝麻丢西瓜”、“占小便宜吃大亏”的失败投资者。短线投资高手利用信息炒作波段，看准时机，利用市价果断成交，快进快出，往往受益匪浅。当然资历尚浅的散户投资朋友是不能理解其中的奥妙的。

五、不敢买正在创新高的股票或板块，而喜欢买处于长期下跌趋势的股票

比如2007年6-10月，有色、煤炭、钢铁等资源型股票天天新高，但很多散户朋友在此类股票面前望而却步。以笔者周边的股票投资者为例，90%的人不会也不敢买那些正在创新高的股票，缺乏赚大钱的气魄和思想。美国人威廉. 欧奈尔说：“主流类中的股票，常能涨得惊天动地，但其他平庸个股，连一丝涟漪都不会起！”这类投资者不敢买入高价股，只喜欢买便宜股，他们不知道高价有高价的理由和“强者恒强”的道理。

六、急功近到，不愿长期持有

笔者身边很多散户朋友买卖股票就是典型的T+1，今天买明天卖，追涨杀跌，总想在最短的时间内，不费力气赚大钱。这种急功近利的思想，普遍存在于大多数的散户投资者思维当中。忍耐是一种等待，是庄家酝酿盈利的一种高超手段。很多好股票就是忍出来或捂出来的，对那些优质、成长性好和垄断行业的股票可以有长期投资的思想。万科董事长王石有个朋友叫刘元生，从万科创业起即买入其原始股持有到现在，400万元变为6.32亿元股票。巴菲特的一生中重仓过13只股票，7只股票赚了270亿美金。巴菲特最骄人的业绩是持有《华盛顿邮报》股票30年，股票价值增长128倍。

七、难以克服贪婪之心和不冷静的心态

很多股民朋友将人性的贪婪这一缺点在投资股票时进一步放大，表现得淋漓尽致。典型的是自己的账户资金升值已达20%、50%或更多，但还是不死心，不平仓，挣多了还想再挣更多。跌了甚至到深套以后，从恐惧、谩骂、后悔到连死了的心都有。比如经历2007年5月30日的风暴之后，笔者周边的很多散户朋友的市值大幅缩水，更别说今年以来的大跌，散户朋友跌的面目全非，中间永远不止损。但到现在上证指数2300点，周边散户在恐惧中抛售所有股票，把股票卖在地板价上。反复的追涨杀跌，陷入无休止的恶性循环，最终心灰意冷，以大幅的亏损离场而去。股民朋友炒股投资,就一定要克服人性贪婪和不冷静的心态这两个缺点。

八、不擅长学习和做功课

很多散户朋友喜欢把小道消息和电视上的股评当饭吃，不擅长学习是散户朋友投资股票的大敌。“股票是经济的睛雨表”，制约股票的涨跌因素相当复杂，股票供求、通货膨胀率、国内外的政治、军事、经济、自然等因素的变化，都会直接影响股票的升降。这要求散户投资者要兢兢业业，勤勤恳恳，认真学习，不断进步，做好功课。投资总有失误甚至犯错误的时候，重要的是我们应该懂得怎样在失败当中吸取教训，更重要的是不要让同样的错误多次发生。“成功的方法在于发现和改正自己的问题，把自己的弱点变成长处”。投资的成功是建立在已有的知识和经验基础上的。美国投资大师杰姆. 罗杰斯说：“决定命运的不是股票市场，也不是上市公司本身，而是投资者本人的学习、经验和判断”。

九、对股市缺乏基本的判断和信念

如很多朋友毫无道理的笃信大盘暴跌时，政府一定会出面救市；奥运会前股票一定涨；市盈率低的股票就是好股票；ST股票绝对不能买等等。把这些无稽之谈当成投资宝典，其实是误入歧途而毁己不倦。股票的投资经验需要时间积累和总结，或者前辈们反复总结出来的精华散户朋友可以借鉴和参考（仅此而已），如买进有信心、持股要耐心、卖股靠决心；短线炒消息，中线炒题材，长线炒业绩；买股要慢，卖股要快，持股要稳。不要在大涨后追高买进，不要在大跌后低位杀出；不要在利好公布后买进，不要在利空公布后卖出，不要买进有明显缺陷的股票等等，这些都是股民高手朋友们结合中国股市特点总结出来的精华，散户朋友当可以学习和引以为鉴。

十、心态不正，不够平常心

赚了嫌少，后悔自己没有在股市高点获利了结；亏了闷闷不乐，不敢坦然面对和接受自己的错误和失败。在股市投资，这些朋友是以健康受损和心灵受折磨为代价来投资的。不论盈亏，“知足者常乐，而贪婪者常悲”。炒股要有平常心，要有纯净的境界，证监会尚主席说的好，炒股要三闲：闲钱、闲时间和闲心态，这是散户投资者投资股票的一个真理。

在股票投资的误区中，以上十点是散户最容易犯的错误。当然，仁者见仁，智者见智。但对于想靠炒股致富的散户朋友来说，如果不注意克服以上十种错误，则对炒股非常不利。实际上，我们要通过炒股发现自己的人性缺点，然后逐一克服，不断提升自己的素养，这样我们的炒股水平和生活质量才会大大提高，财源就会滚滚而来。

十大古曲范文第4篇

关键词：去势大鼠；骨质疏松；基因表达谱

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2012.12.011

中图分类号：R446 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2012）12-0029-03

Preliminary Analysis on Gene Expression Profiles of Osteoporosis in Ovariectomized Rats GAO Feng1， MO Xin-min1， LI Jin-ping2， LIU Shi-jie1， ZHANG Xiao-jun1 （1.Hunan University of TCM， Changsha 410007， China；2.College of Pharmacy， Central South University， Changsha 410013， China）

Abstract：Objective To investigate the difference of the gene expression profile between osteoporosis of ovariectomized rats and normal rats， and analyze the characters of the gene expression profile of the osteoporosis of ovariectomized rats. Method The gene expression difference between osteoporosis of ovariectomized rats and normal rats was tested by using cDNA microarray technology. The gene information of the gene expression difference was analyzed in Gene Ontology （GO） database， and the different genes were analyzed by GO analysis using the software Agilent Genespring GX11. Results A total of 118 significant differentially expressed genes were detected， among them， 48 genes were up regulated， 70 were down regulated. Conclusion Many abnormal genes expression related with osteoporosis in ovariectomized rats.

Key words：ovariectomized rats；osteoporosis；gene expression profiles

骨质疏松症（osteoporosis，OP）是以骨量减少、骨的微观结构退化为特征，骨的脆性增加易于发生骨折的一种疾病。骨质疏松症的发生、发展是一个复杂过程，其演化过程涉及大量的基因突变、缺失、扩增及失活等异常表达信息，因此，发挥基因芯片技术多样本、高通量、高效率和平行监测识别功能，对阐明骨质疏松症的病因，揭示其发病机制以及开辟新的诊断途径和治疗方法有广阔前景。本研究利用大鼠全基因组微珠芯片初步探讨OP基因表达谱系的变化，并对差异表达基因进行生物信息学分析，以探讨原发性骨质疏松症的发生机制。

1 材料与方法

1.1 动物

采用3月龄SD雌性大鼠20只，体质量250 g左右，SPF级。饲料为标准普通饲料，湖南中医药大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK（湘）2009-0004。

1.2 试剂

RatRef-12_V1 55900970鼠全基因组微珠芯片，美国Illumina公司制作；Cy3 Amersham pharmalia Biotech；反转录酶（SuperscriptⅡ），Gibco BRL；Oligo（dt）18，生研（上海）

基金项目：国家自然科学基金（30873291）

通讯作者：莫新民，Tel：0731-85539630，E-mail：moxinmin52@

生物科技有限公司；dNTP，PROMEGA。

1.3 主要仪器

电动玻璃匀浆机，DY89-1，宁波新芝科器研究所；电泳仪FR-280，上海复日科技凝胶成像仪FR-200，上海复日科技；杂交箱DND-9052型，上海精宏实验设备有限公司；杂交舱联合基因，S-200纯化柱，S-200HR Columns Amersham Pharmacia Biotech Inc.；核酸分析仪；Gene Quant pro Biochrom Ltd. Cambridge CB4 OFJ England；Milli-Q 水生成仪，Milli-Q Biocel MILIPORE Ltd；扫描仪Bead Station 500 System， illumina，Inc.；分析软件，Bead Studio Gene Expression Module，illumina，Inc.；低温高速离心机，Biofuge fresco， Heraeus instrumennts；移液枪，200、10、1 000 ?L，GILSON，法国；核酸定量检测仪，美国INFINIGEN公司；Unigamma骨密度仪（意大利）；MIAS医学图像分析系统；Motic B5显微摄像系统；WDW-000Ⅲ微机控制电子式万能实验机。

2 实验方法

2.1 分组

动物适应性饲养1周后，随机分为模型组和假手术组，每组10只。

2.2 造模

按照绝经后骨质疏松症动物造模方法[1]，以2%戊巴比妥钠（0.2 mL/100 g）麻醉，在无菌条件下从距离大鼠第一胸腰椎外侧1 cm处纵向切开皮肤及两侧肌肉，摘除双侧卵巢；假手术组则切除等同于卵巢体积大小的脂肪。止血后分两层缝合，术后连续3 d大腿肌肉注射青霉素，每只大鼠4万U/d。

2.3 指标检测

2.3.1 造模指标检测 造模13周后处死大鼠，取完整左右后肢及第2～4腰椎，保留骨膜，去除其他组织。骨密度检测：取第2～4腰椎骨用湿纱布包裹，送湖南中医药大学附属第一医院骨密度室；骨生物力学检测：取右胫骨用湿纱布包裹，送国防科技大学物理系测骨最大弯曲强度；病理学检测：取左胫骨用4%多聚甲醛固定48 h，然后用5%硝酸脱钙1周，送湖南中医药大学病理检验中心观察组织形态变化，测量平均骨小梁密度。

2.3.2 RNA 提取、纯化、质检、放大 取左侧股骨加液氮研磨按照Unizol试剂（上海博星基因芯片有限责任公司）提取方法提取总RNA。使用QIAGEN Rneasy Kit纯化总RNA。经分光光度计检测吸光度（A），并进行保温试验，于-20 ℃和70 ℃保温1 h后，用1%琼脂糖凝聚电泳检测28 s，18 s 条带进行质检。然后使用Ambion Illumina RNA Amplification Kit进行RNA线性扩增。

2.3.3 芯片杂交、洗涤 将基因芯片和杂交探针分别做94 ℃水浴变性后，加入混合探针，置42 ℃杂交箱中避光杂交16～18 h。按顺序用1×SSC/0.2%SDS、0.1×SSC/0.2%SDS、0.1×SSC洗涤，室温晾干，避光保存于干燥器中。

2.3.4 基因芯片数据处理与分析 应用illumina微珠芯片扫描仪和illumina微珠芯片分析软件对图像信号进行处理，对原始数据选择的归一化方法为Cubic Splinc，差异基因的筛选标准为Diffscore值小于-20或大于20即为差异基因。将数据导入分析软件Genespring，通过美国国立医学生物技术信息中心（NCB，Ihttp：//ncbi.nlm.nih.gov）对差异表达基因进行基因信息学分析。

3 结果

3.1 骨生物力学、骨密度及骨小梁密度检测结果（见表1、图1）

表1 2组大鼠骨生物力学、骨密度、骨小梁密度比较（―x±s，每组10只）

组别 胫骨最大抗弯曲度 第2～4腰椎骨密度 胫骨骨小梁密度

假手术组 375.02±8.88 0.268±0.012 3 0.915 6±0.009 5

模型组 315.00±7.40 0.224±0.012 0 0.869 3±0.013 2

注：与模型组比较，P

模型组 假手术组

图1 大鼠胫骨组织形态病理图（×400）

3.2 RNA抽提结果

电泳结果显示，2 个样品总RNA均有清晰的18 s和28 s条带，没有明显的降解发生，A260/A280比值符合芯片实验要求，2个样品质量均符合芯片实验要求。样品处理结果见表2、图2。

表2 2组大鼠RNA样品基本信息

组别 总量（?g） A260 A280 A260/A280

模型组 158.508 33.023 15.648 2.11

假手术组 208.128 43.360 20.485 2.12

图2 假手术组与模型组样品总RNA电泳图

3.3 表达谱芯片结果分析

3.3.1 探针标记和芯片杂交扫描结果 杂交后芯片荧光信号强度较高，背景均一，没有明显缺陷，符合芯片结果分析。

3.3.2 芯片杂交质量判定结果 Cy3杂交信号的相关性符合预期标准，显示出样品间的差异性和实验操作的影响都较低。芯片上内参基标准基因的杂交信号强度高，样品间的表达变化较小，比值稳定，表明实验操作对结果稳定性影响较小。见图3。

图3 信号强度相关性散点图

3.3.3 骨质疏松症差异表达基因 筛选标准值Diffscore≥20或≤-20，经筛选发现OP差异表达基因共有118条，其中48条基因上调，70条基因下调。见表3、表4。

3.3.4 差异基因Gene Ontology分析结果 在生物过程中涉及的基因有Agt、C1dn5、Pcaf、Bnip3、Sncg、Adipoq，其中Agt几乎参与了整个生物过程；分子功能中涉及的基因有Fn1、Sparc、Mt3、Aoc3；细胞组分中涉及的基因有Ces3、Mt3、Scd1、Adipoq、Hsd11b1、F2r、Fn1、Carhsp1、Pctp、Ca5b、Abhd5、Tra1、Cav2、Nucb2、Gpd1、Golph3、Cdo1、Rpsq、Bnip3、Qscn6、RT1-Ba、RT1-A2、RT1-BA、Rcn2。功能分类比例为：细胞质部分35%，内质网13%，脂代谢调节9%，铜离子结合5%，主要组织相容性蛋白复合物8%，胶原蛋白结合3%。

表3 上调基因

基因 功能描述

Pctp 脂质结合；脂质转运

C1dn5 蛋白特异结合

Sparc 胶原结合；铜离子、钙离子结合；成骨

Mt3 去超氧化物自由基；铜、锌、金属离子结合

Rcn2 钙离子结合；蛋白结合

RT1-A2 蛋白结合

Qscn6 内质网

Tra1 钙离子结合；低密度脂蛋白受体结合

Carhsp1 蛋白结合；钙介导信号

表4 下调基因

基因 功能描述

RT1-Ba 免疫相关

Sncg 周围神经发育

Rps9 蛋白合成

Ces3 羧酸酯水解酶活性，催化活性

Cdo1 半胱氨酸、牛磺酸代谢；氧化还原酶、半胱氨酸双加氧酶活性

Aoc3 氧化还原酶活性；蛋白结合

Pcaf 组蛋白乙酰化酶，转录因子活性；负向调节细胞增殖

Fn1 蛋白酶活化剂活性；损伤应答；细胞基质黏附

F2r 细胞凋亡；G蛋白偶联；凝血酶活性

Hsd11b1 脂代谢

Ca5b 金属离子结合；裂解酶活性

Abhd5 脂代谢；蛋白结合；氧化还原酶活性

Cav2 负向调控内皮细胞增值；突触蛋白结合；蛋白质二聚体活性

Nucb 钙离子动态平衡；钙离子结合

Gpd 磷酸葡萄糖脱氢酶；三磷酸-甘油脱氢酶活性

Golph3 高尔基体

Bnip3 蛋白质二聚体活性；氧和活性氧代谢；负向调控基因产物活性

Scd1 氧化还原酶活性；铁离子结合；脂肪酸生物合成

Agt 丝氨酸内肽酶抑制剂活性；平滑肌细胞分化

Adipoq 蛋白结合；激素活性；脂肪细胞补体相关蛋白；正向调节脂肪

酸代谢；负向调控糖异生

4 讨论

本实验研究观察到，OP模型共有118个差异表达基因，其中48条基因上调表达，70条基因下调表达，经GO分析后发现，下调基因主要与脂代谢、酶活性、蛋白质结合、钙、铁离子结合相关，上调基因与钙离子结合、铜离子结合、胶原结合、低密度脂蛋白受体结合相关。

脂代谢与骨代谢之间有密切的联系，脂肪细胞和成骨细胞之间也可以相互转化[2]，已有研究发现，血脂水平与破骨细胞活性呈正相关[3]，n-3脂肪酸对骨有保护作用[4]，下调与肥胖呈负相关的脂肪分泌蛋白Adipoq[5]和上调Tra1-predicted均可致血脂升高，与以往研究结论一致。铁是很多酶的活性中性，

在体内催化一系列成骨的化学反应[6]，本研究中Scd1下调表达。铜是许多氧化酶的组成成分，对骨的生长发育和修复等有重要作用，铜缺乏可引起胶原合成障碍，骨质疏松患者铜含量降低[7]，Sparc、Mt3均上调，可能是负向调节的结果。与胶原结合及蛋白酶活化剂活性相关的Fn1下调表达，Fn能通过与CD44相互作用影响破骨前体细胞分化与成熟[8]。基因在骨质密度方面可能起到50%～80%的作用，而且不同基因在不同年龄阶段起着不同作用[9]，Agt几乎参与了整个生物过程，Agt、Adipoq共同参与脂代谢调节，占生物过程40%，值得进一步研究。从分子水平上推测OP的发生发展是多基因多途径调控的双向动态调整的复杂过程。

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十大古曲范文第5篇

我还没吃到一粒饭的时候，茶机的电话又响了，我烦死了，上会是大姑丈让我们去他家，这回又是谁让我们去他家啊！不用说肯定是我的弟弟朱泳培。

真是他！ 这回是小姑丈家的朱泳培打来的，他说等会吃饭的时候让张然到他们家里玩。我点点头说："哦！"然后我就挂了朱泳培打来的电话。

这下我可犯难了，去谁家呢？去大姑丈家朱泳培会责怪我们不去他家。去朱泳培家大姑丈会责怪我们不去他家。去于是我问上知天文，下知地理的老爸。