前言:想要写出一篇令人眼前一亮的文章吗?我们特意为您整理了5篇车前草的作用范文,相信会为您的写作带来帮助,发现更多的写作思路和灵感。
【摘要】 目的:观察单味中药金钱草、石韦、车前子对大鼠肾结石模型肾的保护作用。方法:90只大鼠随机分为五组,采用1.25%乙二醇和1%氯化铵制备大鼠肾结石模型。造模同时用上述三种单味中药的免煎剂型分别按剂量给各中药组大鼠灌胃,模型组给予生理盐水灌胃,枸橼酸钾组用枸橼酸钾灌胃。4周后观察各组大鼠肾脏损伤情况。结果:各中药组大鼠肾脏损伤情况(肾充血、炎细胞浸润、肾小管扩张)明显轻于模型组(P
【关键词】 大 鼠 肾结石 金钱草 石 韦 车前子 枸橼酸钾
Abstract Objective:To investigate the protection effect of Chinese herbs Christina loosestrife,Pyrrosia and Plantago on kidney injury in experimental rats with calcium oxalate stones.Methods:Calcium oxalate stoneinduced kidney injury in 90 male SD rats was induced by injection of 1.25% ethylene and 1% ammonium chloride.Rats with kidney injury were randomly pided into 5 groups.Of them,3 groups were treated with Christina loosestrife,Pyrrosia and Plantago,respectively,rats in the positive control group were given tripotassium citrate,and the model group was given saline.All rats were treated for 4 weeks before execution.Results:The kidney injury in rats of Chinese herbs was significantly milder than that in the model group (P
Key words rat renal calculi Christina loosestrife Pyrrosia Plantago tripotassium citrate
泌尿系结石是泌尿外科常见病、多发病,我国泌尿系结石发病率为1%~5%。有关单味中药防治肾结石的现代研究报道较少。本研究通过动物实验验证单味中药金钱草、石韦、车前子对大鼠肾结石模型肾的保护作用,现报道如下。
1 材料与方法
1.1 实验动物 雄性SD大鼠90只,体重180~220g,普通级。购自上海中科院实验动物中心(上海斯莱克实验动物中心)。动物许可证号:SCXK(沪) 20070005。
1.2 药物和试剂 金钱草、石韦、车前子免煎剂型(均购自深圳三九医药股份有限公司);乙二醇(无锡市佳妮化工厂);氯化铵(浙江衢州巨化试剂有限公司);枸橼酸钾(上海化学试剂采购供应站)。成石液配制:每升液体含乙二醇12.5g+氯化铵10g[1]。
1.3 实验仪器 离心机;普通光学显微镜
1.4 方 法 利用随机分组表将90只大鼠随机分为模型组、金钱草组、石韦组、车前子组、阳性对照组(枸橼酸钾组)。每组18只。适应性饲养3天,3天后五组均每天每只大鼠给予成石液10ml(自由摄取)+水30ml(自由摄取)[2];造模同时,模型组每天给予生理盐水2ml灌胃;金钱草组、石韦组、车前子组分别给予金钱草、石韦、车前子免煎剂每天每只0.6g,均配置成2ml液体灌胃;枸橼酸钾组给予枸橼酸钾每天每只0.5g(配置成2ml液体灌胃);所有动物给予正常足量饲料,但控制饮水量。共饲养4周。
1.5 观察指标 饲养4周后,同期用下述方法取标本。用10%水合氯醛1ml腹腔注射,麻醉大鼠成功后即剖腹取左肾,固定后常规切片染色,普通光学显微镜下观察,由同一名病理科医生按同一标准(个人习惯标准)采用半定量法判定肾脏充血、炎细胞浸润和肾小管扩张情况。
1.6 统计学方法 应用SPSS11.5统计软件包,等级资料采用非参数检验(秩和检验)的MannWhitney U检验。
2 实验结果
2.1 实验动物数量 饲养给药过程中,金钱草组和车前子组各死亡1只大鼠,故取得实验数据的共有88只大鼠。
2.2 五组左肾充血情况 半定量法测定左肾充血情况,四药物组的左肾充血情况均明显轻于模型组(P均
2.3 五组大鼠左肾炎细胞浸润情况 半定量法检测大鼠左肾炎细胞浸润情况,四个药物组大鼠的肾炎细胞浸润均轻于模型组(P
图1 肾皮质充血明显,静脉淤血(模型组)图2 肾髓质充血明显(模型组)图3 高倍镜下,肾小管内白细胞浸润(模型组)2.4 五组大鼠左肾小管扩张情况 四药物组大鼠的左肾小管扩张情况均明显轻于模型组(P0.05),见表3。模型组肾小管扩张见图4。
3 讨 论
通过互联网数据库查询,目前有关中药治疗肾结石的文章,多属于中药验方论文。随机选取27份各种肾结石中药方,经统计后发现使用最多是“三金”(金钱草23/27,鸡内金22/27,海金沙21/27)、“二石”(石韦18/27,滑石13/27)、“二子”(冬葵子12/27,车前子13/27)。“三金”(金钱草、鸡内金、海金沙)清热利湿、通淋排石,用于溶石排石,同时有防石护肾的作用,同属一类;“二子”(冬葵子、车前子)属于清热利尿药,用于预防结石、保护肾脏较有效;“二石”(石韦、滑石)属于利尿通淋药,也用于预防结石、保护肾脏。笔者在三组药物中各选一药进行实验研究,以观察、比较疗效。
中药现代研究表明,金钱草的药理作用为:①增加尿量,②增强输尿管蠕动;③抑制结晶形成过程;④调节pH值;⑤具有抗炎镇痛、细胞免疫抑制、抗菌、抗氧化、抑制肝脏脂质过氧化作用等。车前子具有利尿作用 ,能增加尿素、尿酸及氯化钠的排泄。石韦利尿通淋、清热止血的功效。用于热淋、血淋、石淋、小便不通、淋沥涩痛[3,4]。利尿及促进输尿管蠕动作用在中医属“排石”作用;抑制结晶形成过程、影响调节因子、形成络合物属“防石”作用;调节pH值属“溶石”作用;而抗炎、抑菌、镇痛等则属“护肾”作用[4]。
枸橼酸是一种很强的钙离子螯合剂,可降低钙离子活性、浓度及其饱和度,从而减少钙盐结晶的形成。枸橼酸钾能抑制草酸钙和磷酸钙结晶的析出,阻断结石的成核、生长和聚集过程,同时也可碱化尿液,且具有利尿作用[5]。本实验表明,枸橼酸钾能明显减少大鼠肾集合系统内草酸钙结晶形成,减轻大鼠肾脏损伤。
实验结果显示,三种单味中药均能减轻大鼠肾脏损伤,疗效与枸橼酸钾相当。且应用单味中药制剂后尿中草酸钙结晶排泄明显高于模型组,而枸橼酸钾组却并不明显。这表明单味中药金钱草、石韦、车前子预防肾结石、保护肾脏的作用可能主要是通过增加尿中草酸钙结晶的排泄,减少其在肾内堆积而达到的,但其详细机制尚待进一步研究。
参考文献
1 赵宗江,于 波,宋秀英,等.筛选乙二醇法复制大鼠肾结石模型最佳剂量的比较研究.中国中西医结合肾病杂志,2007,8(11):628630
2 钟 铃,熊爱华,杨秀华,等.乙二醇法复制肾结石模型给药途径和方法的比较.中国病理生理杂志,2000,16(1):381382
3 吴金英,贾占红,孙建宁.复方石韦片主要药效的实验研究.浙江实用医学,2005,10(5):311313
民间有关车前草的传说很多,有说禹王治水时发现的,有说西汉霍去病命名的,也有说马武命名。今天我们就来说说这最后一种。马武为西汉名将,河南人。据说他在征讨羌人的战斗中,由于地形不熟,被困荒无人烟的地带。时值盛夏,天热无雨,士兵们又饥又渴,人困马乏,纷纷病倒。而且患病后的表现都很相似,就是小便淋漓不尽,尿赤涩痛,小腹胀痛,痛苦不堪。随军郎中诊为“血尿症”,治疗需清热利湿药物。但前不着村后不靠店,去哪里找呢?正在危难之际,一马夫手捧一种绿叶草进见,言他管的马吃了这种草不尿血了,他试着采来吃,不多时也尿了长长的尿、尿色由红变清,感觉精神也好了许多。马武让官兵们采此草试之,结果不几天人与马都奇迹般地恢复了健康。因此草在战车前发现,马武便将此天赐良药命名为“车前草”。
以后,车前草治病在民间经过长期流传和医家的发掘整理,成为清热、利尿、祛疾、明目、凉血、解毒的要药。现代医学研究认为,车前草(子)除有利尿、通淋作用外,还具有镇咳、抑菌、降压、降血清胆固醇和抗炎抗衰老等多种药理作用。
车前草生长在原野及路旁,在我国分布很广,民间有车轮菜、猪耳朵菜、牛舌草、地衣等别称。春天采嫩草,洗净,开水焯后,用清水漂洗数次,炒食或凉拌、做汤、做粥,味鲜质嫩。临床用其治病的单方颇多。如:经常用车前草叶沏水代茶饮,可防治反复发作的口疮;洗净,绞取汁,每用50~100毫升,炖沸后待温,空腹服,一日2次,可治疗尿血;车前草洗净,捣烂外敷患处,冶热毒疮疡;车前子研粉,每晚入睡前和早晨起床后用温开水冲服1匙,可治疗习惯性便秘;车前子适量,捣烂研末,加精盐少许,用凡士林调糊,肚脐以75%酒精清毒后,敷上药糊,覆盖纱布固定,可治疗术后尿潴留。
马武命名车前草,自然是民间的传说。但车前草确为中草药中的良药,却是不争的事实。或许随着时间的不断推移,人们还会发现它所具有的新的疗效。
(文中方剂使用之前,须根据个人情况咨询医生。)
1、对泌尿系统的影响:车前草有一定利尿作用,可使犬、家兔及人的水分排出增多,并增加尿素、尿酸及氯化钠的排出。正常人内服车前子煎剂10g,有利尿作用,但煎剂总容量及每日入水量均无记载,缺乏严格对照。正常人及家兔服车前草种子煎剂则无明显利尿作用。平车前种子亦无利尿作用。
2、镇咳、平喘、祛痰作用。
3、抗病原微生物作用:车前草水浸剂在试管内对同心性毛癣菌、羊毛状小芽孢癣菌、星状奴卡菌等有不同程度的抑制作用。平板打洞法证明金黄色葡萄球菌对车前草高度敏感,宋氏痢疾杆菌中度敏感,大肠杆菌、绿脓杆菌、伤寒杆菌轻度敏感。
4、对胃、肠道作用:给巴甫洛夫小胃及胃瘘的狗灌服车前草水提物或浸剂0.5g/kg,对胃液分泌有双向调节作用;对毛果芸香碱所致胃液分泌过多和肾上腺素所致胃液分泌过少,均有对抗作用。
(来源:文章屋网 )
【关键词】 车前草;纯化;超氧化物歧化酶
车前草又名车前、车轮菜、猪耳草等,为车前科植物车前(Plantago asiatica L)、平车前(P.depresssa Willd) [1]的干燥全草。车前以种子和全草入药,用于治疗小便不利、水肿、暑热泄泻、痰多咳嗽、热毒痛肿等。随着现代中药化学的不断发展,从车前中分离出许多有效成分[2]:①多糖类;②黄酮及其苷类,如:木樨草素;③环烯醚萜类,如:桃叶珊瑚甙(aucubin)、京尼平甙酸(geniposidicacid)等;④苯乙酰咖啡酰糖酯类,如:连翘酯甙(acteoside);⑤还有熊果酸、乌苏酸、生物碱、小分子的酸性物质、β-谷甾醇苷等,从而揭示了部分传统药效的作用机制,还发现了许多传统用药所没有的新的药理作用,如:镇咳祛痰、平喘、抗衰老、缓泻、抗菌等。但是对车前草中大分子成分如蛋白、多糖等的研究很少,车前草超氧化物歧化酶的分离提纯文献尚未见报道。本文探讨了从车前中分离纯化超氧化物歧化酶的方法并鉴定其种类,为植物性超氧化物歧化酶的应用提供依据。
1 材料与仪器
1.1 材料
车前草购自广州程岗路农贸市场,由广州总医院邓伟杰主管药师鉴定为车前科植物车前(Plantago asiatica L)的干燥全草。
1.2 主要仪器
凝胶层析系统(LKB)( Pharmacia Biotech);二两装高速中药粉碎机(浙江瑞安市永历制药机械有限公司);General TU-1901紫外分光光度计(日本岛津公司);LGJ12冷冻干燥机(北京松源华兴科技发展有限公司);Sorvall RC-5C低温高速离心机;电子天平TP-320A(湘仪天平仪器设备有限公司);电子天平BP210S Sartorius(德国);垂直电泳仪(BIO-RAD);TGL-16H台式离心机(Beckman公司);Universal hoodⅡ凝胶成像系统(BIO-RAD);BYQ6044-383恒温金属浴(杭州博日科技有限公司);PHS-25C pH计(上海康仪仪器有限公司)。
1.3 主要试剂
超氧化物歧化酶(华灿生物制药技术公司);超氧化物歧化酶活性测定盒(南京建成生物工程研究所);葡聚糖凝胶(G-75)层析填料(Pharmacia公司);CM-Sepharose Fast Flow(Pharmacia公司);三羟甲基氨基甲烷(Tris)(德国Merck公司);TEMED(BIO-RAD);丙烯酰胺(上海奥伯生物科技有限公司);N-N亚甲基双丙烯酰胺(广州化学试剂厂);十二烷基磺酸钠(SDS)(广州威佳科技有限公司,进口分装);过硫酸铵(APS)(宝泰克公司);考马斯亮蓝R-250(中国医药上海化学试剂公司);牛血清白蛋白(BSA)(中国科学院上海生物化学研究所);小分子蛋白质分子量标准(Mark)(Takara宝生物工程有限公司);透析袋(分子量8 000-15 000)(北京鼎国生物公司)。
2 方法
2.1 酶活力的测定
采用南京建成生物工程公司的SOD活性测定试剂盒测定样品酶活力。酶活力单位:每毫升反应液中SOD抑制率达50%时所对应的SOD量为一个SOD活力单位(U),计算公式:总SOD活力(U/mL)=A对照-A样品/A对照÷50%×反应体系的稀释倍数×样本测试前的稀释倍数
2.2 蛋白质浓度的测定
采用Bradford法测定蛋白质浓度,最低检出量为1 μg蛋白/mL。
2.3 酶的分离纯化
2.3.1 乙醇提取液浓度的确定 取新鲜车前草用蒸馏水洗净,甩干表面水分,称取9份,每份50 g,分成3组,粉碎后分别用30%,40%,50%(φ)乙醇100 mL,4 ℃浸提4 h,4层纱布过滤后收集滤液4 000 r/min离心1 min,取上清液用量筒稀释至150 mL,测定样品中的蛋白浓度和SOD活性,总体比较采用单向方差分析,多重比较采用LSD法,结果见表1。方差齐性检验:F=0.698,P=0.534;三组数据总体差异显著(F=8.801,P=0.016);多重比较1∶2(P=0.010),1∶3(P=0.011),2∶3(P=0.942)。故选择比活较高的40%乙醇作为提取液。
表1 不同浓度乙醇提取后比活比较(略)
Tab.1 Comparison of specific activities after extraction with ethanol at different concentrations
2.3.2 乙醇提取液体积的确定 取新鲜车前草用蒸馏水洗净,甩干表面水分,称取9份、每份50 g,粉碎后分成3组,分别用40%乙醇1∶1,1∶2,1∶3(W∶V),4 ℃浸提4 h,4层纱布过滤后收集滤液4 000 r/min离心1 min,取上清液用量筒稀释至175 mL,测定样品中的蛋白浓度和SOD活性,总体比较采用单向方差分析,多重比较采用LSD法,结果见表2。方差齐性检验:F=1.371,P=0.323;三组数据总体差异显著(F=7.2,P=0.025);多重比较1:2(P=0.335),1∶3(P=0.039),2∶3(P=0.010)。故选择比活较高的40%乙醇,1∶1为提取工艺。
表2 不同体积40%乙醇提取后比活比较(略)
Tab.2 Comparison of specific activities after extraction with ethanol of different volumes
2.3.3 所用丙酮体积的确定 将2.3.2中第一组的3份样品合并,再平分成9份,每份58 mL,分别按照1∶1,1∶2,1∶3(体积比)的比例加入丙酮沉淀(4 ℃,2 h),而后离心收集沉淀用5 mL蒸馏水溶解(4 ℃,1 h),最后离心取上清液用容量瓶定容至10 mL,测定样品中的蛋白浓度和SOD活性,总体比较采用单向方差分析,多重比较采用LSD法,结果见表3。方差齐性:F=1.052,P=0.406;三组数据总体差异显著(F=246.45,P=0.000);多重比较1∶2(P=0.008),1∶3(P=0.000),2∶3(P=0.013)。故选择比活较高的1∶1(体积比)丙酮作为提取工艺。
表3 不同体积丙酮沉淀后比活比较(略)
Tab.3 Comparison of specific activities after acetone precipitation with different volumes
2.3.4 粗酶液的制备 取新鲜的车前全草,用蒸馏水洗净后甩干表面附着的水分,称重200 g,用剪刀剪碎后置高速中药粉碎机中打成浆,移至大烧杯中按1∶1(体积比)加入40%乙醇液,4 ℃浸提4 h,用10 000 g高速冷冻离心机离心15 min,收集上清液。按1∶1(体积比)缓慢加入预冷的丙酮,边加边搅拌,在4 ℃静至2 h,3 000 r/min离心10 min,弃去上清液,收集沉淀。加2 mL蒸馏水4 ℃静至1 h溶解沉淀,3 000 r/min离心2 min,得上清液,用容量瓶定容至5 mL,即为粗酶液。
2.3.5 CM-Sepharose Fast Flow柱层析 装柱(10 mm×200 mm)后用pH4.6,0.02 mol/L的醋酸盐缓冲液平衡5个床体积。每次上样量0.4 mL,流速36 mL/h,紫外监测波长280 nm。先用平衡液洗去杂质,换用pH4.6,0.2 mol/L的醋酸盐缓冲液洗脱,半小时后换用pH4.6,0.2 mol/L(含0.5 mol/L氯化钠)的醋酸盐缓冲液洗脱,收集并测定洗脱峰的蛋白浓度和SOD活力,保留活力较高的峰,透析脱盐后冷冻干燥浓缩。
2.3.6 Sephadex G-75凝胶过滤 装柱(10 mm×200 mm)后用蒸馏水平衡5个床体积。经CM-Sepharose Fast Flow柱层析并透析浓缩过的SOD蛋白质用2 mL蒸馏水溶解后上柱,每次上样1 mL,流速36 mL/h,紫外监测波长280 nm。收集并测定洗脱峰的蛋白浓度和SOD活力,保留活力较高的峰,冷冻干燥浓缩得到纯化的SOD酶蛋白。 转贴于
2.3.7 亚基分子量的测定 采用SDS-PAGE,分离胶浓度为15%。
2.3.8 酶种类的鉴定 采用抑制敏感性实验,Cu、Zn-SOD对氰化物和过氧化氢均敏感;Mn-SOD对氰化物和过氧化氢均不敏感,而Fe-SOD对氰化物不敏感,对过氧化氢敏感[3]。
3 结果
3.1 粗酶液的纯化
粗酶液过CM-Sepharose Fast Flow柱分离纯化,结果如图1所示,收集峰4和峰5,合并后透析、冷冻干燥浓缩后进行G-75凝胶柱纯化,结果如图2所示。收集峰1,冷冻干燥浓缩后进行SDS-PAGE,结果如图3,从图3可以看出经过两步纯化得到亚基分子量20.1 KDa的电泳纯SOD样品。
图1 车前草提取液的CM-Sepharose Fast Flow柱层析(略)
Fig.1 Column chromatogram of superoxide dismutase in plantain on CM-Sepharose Fast Flow
图2 经CM-Sepharose Fast Flow柱分离的SOD的G-75凝胶过滤图形(略)
Fig.2 Gel filtration patterns through CM-Sepharose Fast Flow column of SOD separated by G-75 column chromatography
1.车前草提取液;2.丙酮沉淀的粗酶;3.经CM-Sepharose Fast Flow柱分离的峰4和峰5;4.峰4和峰5冷冻干燥后;5.过Sephadex G-75的峰1;6.过Sephadex G-75的峰2;7.MARK(从上至下分子量依次为97.2,66.4,44.3,29.0,20.1,14.3 KDa)
图3 车前草SOD纯化前后的SDS-PAGE图谱(略)
Fig.3 SDS-PAGE pattern of crude SOD purified SOD from plantain
光谱带宽:2 nm;采样间隔:0.50 nm;峰1为295 nm
图4 车前草SOD的紫外吸收光谱(略)
Fig.4 The ultraviolet absorption spectra of plantain
3.2 酶种类的鉴定
取Sephadex G-75的峰1 200 μL分别与200 μL蒸馏水,2 mmol/L NaCN,10 mmol/L H2O2混匀后4 ℃放置20 min,测定SOD活力,结果5 mmol/L H2O2使经过G-75凝胶过滤的SOD活性完全失活,而1 mmol/L NaCN对其活性无影响,这表明车前草中SOD为Fe-SOD。
3.3 紫外吸收性质
通过Sephadex G-75收集到的峰1经SDS-PAGE显示为单一条带,亚基分子量20.1 KDa,对H202 敏感,氰化物不敏感,冷冻干燥后呈黄褐色粉末,以上特性与文献报道[4]的Fe-SOD一致。
4 讨论
SOD活性测定试剂盒中所有试剂的配制均应在前一天进行,以使其充分溶解。测试前从冷藏箱拿出的试剂及样品要在室温放置30 min后再用。试剂盒中的试剂一和试剂四是关键成分,为了减少取样误差,可以把两者先按比例10∶1混合再加到测试管中。空白对照管中的蒸馏水最好要新鲜配制,如放置时间过久等原因引起污染,均会造成对照管吸光度偏高,从而导致样品SOD活力增高。
实验中用到离子交换和凝胶过滤是比较传统的方法,目前运用较多的金属离子亲和层析有吸附容量大、成本低、易于再生等特点,但缺陷在于容易发生非特异性地吸附,尤其是洗脱过程中金属离子容易脱落混入蛋白成分中,影响产品质量。利用酶-底物、酶-抑制剂等生物作用原理制成生物性亲和层析,其选择性远远高于金属离子亲和层析。因此通过酶-抑制剂的亲和层析方法制备高比活的车前草超氧化物歧化酶是今后研究的一个主要方向。
通常SOD有很强的组织特异性,而且各种生物的不同发育阶段SOD的含量和种类也极不相同,豆芽中SOD含量明显高于其种子,辣椒的二叶期SOD含量最高[5]。应该对车前草不同的生长期,以及不同组织进行超氧化物歧化酶分离纯化并进行比活的比较,以获得最佳的提取材料。
通过Sephadex G-75收集到的峰2 SOD活力弱于峰1,冷冻干燥后也呈黄褐色粉末,但亚基分子量与文献不符,是否为峰1的同工酶还需做SOD活性染色及抑制性试验等进一步确定。
参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部[S].北京:化学工业出版社,2005:46.
[2]李敏,程敏. 中药车前草化学成分与药理研究的新进展[J].现代中医药,2005,3(3):60-61.
[3]川春美,钟秋平. 超氧化物歧化酶的现状研究进展[J].中国热带医学,2005,5(8):1731.
1、车前草泡茶喝的功效:缓解小儿腹泻,用车前草泡水具有很好的止泻作用。还可以祛痰止咳,有效的缓解慢性支气管炎,百日咳等,还可以预防多种慢性疾病,还有助于身体的恢复。
3、对于胃肠道功能来说也有很好的作用,可以促进胃肠的分泌可以抵抗病原微生物,可以抵抗炎症,缓解口舌生疮等症状。
(来源:文章屋网 )