诊断试剂

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诊断试剂范文第1篇

作为专业名词，“体外诊断试剂”可能有很多人都不能准确说出它的定义，但是，如果说到献血时需要做的各项检查，包括艾滋病、乙肝检测等，或许大家就不会陌生了。北京万泰生物药业股份有限公司（以下简称万泰药业）就是这样一家从事体外诊断试剂和基因工程疫苗研发、生产和销售的创新型企业。

“体外免疫诊断试剂是用于疾病诊断检查的一类医学试剂，这类试剂主要通过血液等作为检查对象，检测其中的病毒或抗体，以作为诊断疾病的一种手段”。据万泰药业总经理邱子欣介绍，通过21年的不懈努力，万泰药业从设立之初的小规模实验室已经发展到年销售额超过4亿元的生物制药高新技术企业，并成为国内最大的输血安全诊断产品提供商和亚太地区最大的艾滋病诊断试剂生产基地。

立足，源于把握市场需求

据统计，自2003年起，万泰药业的艾滋病诊断试剂已连续9年全国市场占有率第一，拥有超过30%的市场份额。

他们的艾滋病第三代诊断试剂在2001年获国家科技进步二等奖，同时被列为年度国家重点新产品和北京市重大科技成果转化项目；也是中国性病艾滋病防治协会唯一推荐使用产品，卫生部艾滋病哨点监测指定使用试剂。

如今在艾滋病诊断试剂上风光无限的万泰药业，其实也是从“苦日子”里熬出来的。

上世纪90年代中期，万泰药业正处于起步阶段，尽管在1995年，他们就做出了国内第一个艾滋病的检测试剂盒，但日子依然过得紧巴巴。

与此同时，我国第三代艾滋病诊断试剂依赖进口，国产试剂还停留在第二代的水平。艾滋病抗体试剂研发升级的关键原料艾滋病重组抗原，长期以来完全依赖进口，导致我国艾滋病诊断试剂在灵敏度和特异度方面始终与国际主流试剂有相当大的差距。

伴随着国家对艾滋病诊断愈加重视，尤其是1995年开始，国家要求献血时必须对捐献者做艾滋病检测，艾滋病诊断试剂的市场需求被打开。

国内艾滋病诊断试剂在技术上升级换代的迫切需求和应用市场的巨大机遇都为国内企业留下了广阔的发展空间。谁能抢占先机，谁就有可能在激烈的市场竞争中脱颖而出。

“我们很幸运，企业的发展正好与国家相关产业发展同步”，邱子欣嘴里说的“幸运”，换句话讲，就是机会只眷顾有准备的人。

1999年，万泰药业和厦门大学科研人员共同研制出国内唯一一个能完全满足艾滋病毒抗体诊断试剂盒生产要求的艾滋病毒重组抗原，填补了国内的空白。

此后，双方研制出了国内第一个第三代艾滋病毒抗体诊断试剂盒，质量与国际一流产品水平一致，与国产第二代产品相比，在灵敏度和特异性上实现了质的飞跃，结束了外国公司对国内市场的垄断。同时，万泰药业将科研成果迅速转让给占我国艾滋病诊断试剂市场75%以上的10余个主要诊断试剂厂商和临床单位，使国产艾滋病毒诊断试剂盒在2001年实现全面更新换代。

但是在征服艾滋病的道路上没有止境，万泰药业于2008年推出国内首家上市的国产HIV第四代诊断试剂，进一步提升了我国的艾滋病诊断能力，使国产试剂达到国际领先水平。在2011年度全国艾滋病抗体诊断试剂临床质量评估工作中，万泰药业的艾滋病抗原抗体诊断试剂敏感性、特异性、功效率均为100%；产品性能均位居同类参评试剂榜首。

在艾滋病感染监测领域，由于我国现有的各种艾滋病诊断试剂均针对血液标本，需要进行侵袭性采样，难以满足人群监测的需求，这也是目前我国艾滋病报告感染人数远远低于实际感染人数的主要原因之一，而对各种高危人群以及正常人群进行艾滋病感染的密切监测和进行自愿咨询检测已成为我国艾滋病防治的最重要工作之一。

2009年春天，全球“甲流”爆发，我国科研人员立即研发“甲流”的快速检测试剂，当时主要是对患者的鼻腔分泌物和咽拭子进行快速检测。

用相同的原理，可不可以将这一技术应用于艾滋病的快速检验？正是这份灵感，才有了2011年万泰药业的艾滋病唾液检测试剂。

人体感染艾滋病后，一般需要一段时间才会产生抗体，1～2个月左右血液中才可检测到，这段时间就叫窗口期，但窗口期同样具有传染性。艾滋病的窗口期漏检是一个全球性难题，万泰药业的唾液检测试剂的横空出世有效缩短了窗口期的漏检时间。

这种艾滋病唾液检测试剂，由于采用先进的免疫渗滤法，操作简便、无痛，30分钟内即可观察检测结果，不会对受试者造成针刺损伤，不容易发生职业暴露，大大提高了样品的易获得性和使用的方便性，同时极大降低被检测者和医护人员受感染的风险。

2012年，万泰又推出了国内首个RIBA法的的艾滋病确证试剂，缩短了确证试验的窗口期，性能达到国外试剂的先进水平。

过硬的产品质量和优质的售后服务树立了万泰公司良好的品牌形象，赢得了客户的广泛认可。目前，以艾滋病诊断试剂为龙头，万泰药业的丙肝、戊肝等多种体外免疫诊断试剂都相继占据了国内行业的领先地位，公司的销售额从1997年的不足100万元，发展到2011年销售额3.4亿元。“2012年，我们的销售额有望达到4.5亿元，最近10余年，公司年平均复合增长率超过25%。”说到此处，邱子欣脸上满是欢喜。

创新，就要先人一步

除了艾滋病诊断试剂的系列产品外，万泰药业在戊肝病毒诊断试剂、戊型肝炎疫苗和宫颈癌疫苗等多个国家一类创新药物上取得了重大突破和丰硕的成果。

在外行看来，不论是早期的艾滋病诊断试剂，还是如今的戊肝疫苗，万泰药业的产品研发路线似乎总是剑走偏锋，在寻找冷门。

“这可能是一种误解，其实在国内的免疫诊断领域，我们很多产品也属于大众产品。比如丙肝病毒诊断试剂、乙肝病毒全套诊断试剂、甲型流感、EV71型手足口病等用于血站和医院临床的酶免及金标法快速诊断试剂，以及临床生化系列诊断试剂，都是比较领先的。”邱子欣认为，之所以有所谓的“冷门”，并不是他们刻意去寻求的研究突破点，而是万泰人在免疫诊断领域多年的深入研究后，发现了一些与其已有研究相关但尚未开展起来的领域。而他们凭借深厚的研发功底，较早地在这些陌生领域中取得骄人成绩，让别人有了这样的错觉。

“万泰药业一贯的发展，告诉我们，只有先在某一领域做‘深’，才能有日后做‘宽’产品线的基础，才能爆冷。所以，我们并不是只做冷门，但做冷门的东西，有可能做到世界第一的。”尽管不认同“万泰药业=冷门专业户”的看法，但是在邱子欣的眼中，创新确实需要先人一步，在别人还没有注意时，就要做起来。而万泰药业研发的全球首个戊肝疫苗恰恰印证了这个观点。

2012年1月11日，由厦门大学和万泰药业联合研制的“重组戊型肝炎疫苗（大肠埃希菌）”已获得国家一类新药证书和生产文号，成为世界上第一个用于预防戊型肝炎的疫苗。重组戊肝疫苗是迄今唯一使用大肠杆菌表达系统研制的病毒疫苗，它的成功研制扭转了国际医药界中“原核系统不能用于病毒疫苗研制”的传统认识。

戊肝是由戊肝病毒感染所致的急性病毒性肝炎。

一般而言，由病毒引起的肝炎目前可分为甲型、乙型、丙型、丁型和戊型5种。其中，戊肝发现最晚，在1989年之前，它一直被称作非甲非乙型肝炎。

戊肝病毒是人类了解最少，也是最复杂的致病病毒之一。在目前已经发现的至少4种基因型戊肝病毒中，1型和2型主要感染人类，3型和4型则是人畜共患病毒。

“到目前为止，公众对戊肝了解不多，事实上，戊肝流行率低于甲肝，但危害性更大，以猪作为主要宿主的戊肝病毒，与人们日常生活联系紧密。其死亡率约为1%～3%，孕妇病死率可高达20%，目前尚无有效治疗手段，而疫苗是预防戊肝的最有效手段。”据邱子欣介绍，早在14年前，万泰药业就在对其他肝炎的研究中，对戊型肝炎有了初步了解，并意识到了它的危害性。

从1998年起，每年万泰药业把诊断产品的部分利润投入戊肝疫苗的研发，经过14年艰辛研发，累计投入资金5亿元，凭着锲而不舍的精神取得了疫苗的研发成功。

“我们的戊肝疫苗采用的是基因工程技术。”邱子欣告诉记者，与传统灭活疫苗和减毒活疫苗比较，基因工程疫苗的研发不依赖于病原体的培养，因此对于大量尚未建立成熟体外培养技术的病原体也能进行疫苗的研制。在生产过程中，基因工程疫苗完全不涉及病原体，消除了由于病原体灭活不彻底或减毒不完全导致的安全性问题。不仅如此，基因工程疫苗的研发还可通过精心设计的纯化过程实现对生产过程中伴随的各类杂质的高效清除和残余成分的高度可控，降低了由于杂质导致的各类接种副反应的风险，提高了疫苗的安全性和耐受性，同时还能提高不同疫苗生产批次间的均一性。

万泰药业的戊肝疫苗是国内少有的具有原始创新型的新型疫苗，它的成功让很多疫苗企业看到了自主创新模式的希望，无疑将会给中国疫苗市场带来巨大震动。

业内人士表示，戊肝疫苗的成功上市能为中国企业摆脱现有仿制模式的助推器，增强中国市场的信心，加大自主创新投入，投身于更多创新型疫苗的研发中。这对加快我国疫苗行业转型，促进疫苗产业总体水平的提高十分有利。

近年来我国戊肝发病率逐年上升，已在成人急性肝炎中位居首位。卫生部网站的数据显示，2011年戊肝发病人数已和甲肝非常接近，但死亡人数远远超过甲肝。这种戊肝疫苗的成功上市必将成为人们的健康福音。

实力，来自科企长期互信

作为国家生物高技术产业化示范工程基地，近年来万泰药业的高速成长不是偶然的。

可以说，万泰药业对科研攻关的高度重视和对技术研发的长期投入为其持续发展不竭的能量与动力，形成了基于基础研究与产业化实践的自主创新模式。其中，万泰药业和厦门大学10多年的持续合作，为万泰药业平添了强大的技术后盾。

如前述的艾滋病抗原及诊断试剂、戊肝疫苗和重组人瘤病毒疫苗（预防宫颈癌和尖锐湿疣）等重大医药领域产品及项目，都是在双方同心协力下结出的硕果。

1993年，来北京办事的邱子欣结识了在京进修的厦门大学教授夏宁邵。当时，对艾滋病诊断研究抱有同样兴趣的两人，可能不曾想到，以后两人的合作会一直延续至今，并从个人的志同道合转变为两个单位的密切合作。

1997年，当邱子欣来到万泰药业后，将已经找到艾滋病抗原的夏宁邵实验室，推荐给公司，双方志趣相投，一拍即合。

“都是穷出身，底子都很薄，我没有多少钱给你，你的东西一开始也不见得多好。怎么办呢？大家不断磨合，越磨越好。就我们的经验而言，产学研合作中，最好不要给对方提太多的要求，关键是足够的信任，才能使合作持续下去。”邱子欣半开玩笑地道出了合作初期双方的境遇。

万泰药业2001年加盟养生堂有限公司，成为养生堂涉足制药领域的重要支柱。养生堂公司也进一步加大了对夏宁邵实验室的投入，万泰药业与厦门大学之间就形成了一个产研转化链条。

“自1997年到2007年，公司的销售收入增长了71倍。厦大与万泰合作的实验室也成长为国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心。目前，中心年科研经费达到3000万元，科研人员队伍也壮大到180多人。万泰与厦大堪称产学研成功合作的典范。”邱子欣称，现在的研究机构很多，研究成果也很多，但怎样把成果转化为市场所接受的产品，万泰有自己的独到之处。

邱子欣说：“双方已经有了良性的互动。现在的合作并不是说谁给谁投资，而是互相离不开了。他的东西没有我来做产业化，他不放心。没有他的技术，我也没有好产品。所以变成一种互相需求。我们所有合作，都不存在技术买断的形式。我们都很反对买断，因为产品的改进是无止境的，在合作过程中谁也离不开谁。项目技术过来之后，在市场销售过程中还需要改进，这时候双方还是离不开。”

好的产品赢得市场，但利益如何分配呢？这样的问题，往往在实际操作中困扰着科企合作的稳定关系。同样的问题，在邱子欣看来，产学研合作很大的一个问题就是双方没有信任。“我一旦给你东西了，你就把我甩掉了，甩掉了我的好处就不够多了，企业外的科研机构很担心这个。而企业担心的是，我花一大笔钱去买，这个东西是不是足够有价值？我们跟厦大合作为什么能够成功呢？大家把这些抛开，一起来耐心地做产品。”

正如邱子欣所说，除了充分相信对方，在医药产业中搞产学研结合，需要足够的坚韧。众所周知，药品从研发到生产的周期比较长，不像IT、房地产那么快，而且审批非常慢。夸张的说，合作双方对项目的进展可能会看不到头，难免会互相埋怨，情绪会慢慢出来，所以倒过来讲还是信任。“如果要投（资）医药或生物技术项目，就要有足够的耐心，否则你就去投房地产、投IT。”

据了解，多年的合作，万泰药业和厦门大学在成果转化方面已经有了相当丰富的经验，万泰药业专门配备了100多位科研人员与该实验室对接，专门研究成果的转化问题。“即便这样，人手仍然紧张。”邱子欣表示。

诊断试剂范文第2篇

【关键词】Binax Now 疟疾快速诊断试剂卡疟疾检测效果

【中国分类号】R531.3 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484(2010)08-00-02

Binax Now malaria rapid diagnostic reagents card detect malaria impact evaluation

【Abstract】ObjectiveTo evaluate the Binax Now Malaria rapid diagnostic reagent card for clinical testing in patients with malaria is malaria results, for future applications at the grassroots level to carry out on-site basis.MethodsThe etiology of microscopic examination results or effects of drug treatment, based on determined evaluation Binax Now Malaria rapid diagnostic reagent for detecting malaria card sensitivity and specificity. ResultsThe clinical "Four hot" patients to evaluate Binax NowMalaria rapid diagnostic reagents card and pathology 2 methods examined 53 cases, 24 cases were positive, negative 25 cases, sensitivity of 100% (24/24) specificity of 86.21% (25/29), both consistent with the rate 92.46%(49/53), a single display Binax Now Malaria rapid diagnostic reagent card positive in 4 cases. But have not done in 15 cases of pathogen detection, Binax NowMalaria rapid diagnostic reagent card positive in 5 cases, a single display Binax Now Malaria rapid diagnostic reagent card positive in 9 cases, after chloroquine phosphate tablets / Peter chloroquine phosphate tablets drug or combination of Artemisia Ether effective treatment or cure, confirmed that the other non-falciparum malaria or Plasmodium falciparum malaria. ConclusionThe Binax Nowmalaria diagnosis malaria positive patients are sensitive (100%), compared with the etiology microscopy, Binax Now Malaria rapid diagnostic reagent card fast, simple, reliable, sensitive and specific high, for at the grassroots level to promote the use.

【Key words】Binax Nowmalaria rapid diagnostic reagents, Malaria Testing results

疟疾是严重危害人类健康的传染性寄生虫病,及时诊断和及时治疗是WHO推荐的首要疟疾控制策略。以往确诊靠制厚薄血片在显微镜下镜检,需要好的仪器和镜检人员技术娴熟,随着疟疾基本消灭,以往技术娴熟镜检人员大批退休,年轻镜检人员见疟原虫机会少,给诊断带来了困难。但随着快速诊断实验(RDT)技术发展,疟疾快速诊断试剂被推荐在疟疾防治中使用。四川省疾病预防控制中心为解决基层疟疾诊断技术,2007年8月―2009年为我区疾病预防控制中心提供了美国INvweness Medical Innovation公司生产:Binax Now疟疾快速诊断试剂卡,通过两年多现场应用实验,取得了满意的效果,现将观察结果报告如下:

1 材料与方法

1.1 材料

Binax Now疟疾快速诊断试剂卡系美国Invweness Medical Innovation研发生产,为双虫卡,可同时检测3种人疟原虫(间日疟原虫、卵形疟原虫、三日疟原虫)和恶性疟原虫。在有效期内使用,常温下保存。

1.2 检测对象

由各医疗机构推荐的临床“四热”病人考虑是疟疾患者和到过云南、贵州、海南、缅甸和非州国家等发热人员(T>37.5℃)为检测对象。

1.3 方法

按Binax Now 疟疾快速诊断试剂卡说明书进行操作。同时涂制厚薄血膜片2张,用吉氏染液染色15―20min后镜检疟原虫。实验采用双盲法,即在最终实验结果确定前,镜检者与RDT检测者互不知道结果。

2 结果

2.1 检测基本情况

共使用Binax Now 试剂卡检测69次,其中1次无效,即质控区(C)+测试区1(T1)+测试区2(T2)均无条带显色,测试无效率1.47%,表明该试剂卡质量及操作正确度均达到质控要求。共检测发热病人68例,其中男性40例,占58.82%,女性28例,占41.18%,年龄3―86岁。职业:主要以农民和外出务工人员为主。

2.2 检测结果比较

Binax Now 试剂卡检测68例,检出阳性33例,其中接受Binax Now 疟疾试剂卡和病原学2种检测的53人,2种方法均为阳性24例,阴性25人。总体敏感性为100%(24/24),特异性为86.21%(25/29),总体符合率为92.46%(49/53),单一显示Binax Now 试剂卡阳性4例,Binax Now 疟疾试卡和病原学的阳性率分别为100%(28/28);85.72 %(24/28);实验证明Binax Now 疟疾试剂卡阳性检出敏感性明显高于病原学检查,仅接受Binax Now 疟疾试剂卡检测的15人,阳性5例(见表1)。

2.3 Binax Now 试剂卡与患者治疗效果的符合情况

对Binax Now 试剂卡检测阳性(恶性疟1例,非恶性疟原虫的其它疟原虫8例),患者采用蒿甲醚注射液、磷酸伯氨喹片组合药治疗的效果进行追踪观察,均治愈或有效(表2),表明均是疟疾患者。

3 讨论和分析

(1)美国INvweness Medical Innovation公司生产的疟原虫抗原检测试剂盒(胶体金法)既可用于检测疟原虫感染,也可以对恶性疟原虫感染做出鉴别诊断[1]。该试剂卡在泰国现场应用效果很好。

(2)本次现场实验所使用Binax Now 疟疾快速诊断试剂卡均在常温下保存,使用中无效卡仅1次,无效率为1.47%。说明该试剂卡质量可靠[2]。

(3)病原学检查受设备、染液、制片技术、镜检人员技术等因素的影响,且操作较繁琐,费时和受条件限制。而Binax Now 疟疾快速诊断试剂卡阳性敏感性和特异性高,且有简便、快速、可靠等优点。

(4)通过两年多的现场实验,结果显示,该试剂卡在临床上用于疟疾现症患者的诊断明显优于病原学方法。具有快速、简便、准确、直观以及不需要特殊仪器等优点,是目前适用于在基层推广应用的一种快捷、实用性好检测疟疾的首选免疫学诊断方法。

参考文献

[1]郑香,汤林华,许永湘,等.快速免疫色谱测试卡诊断恶性疟和间日疟的效果评价[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志,1999,17(4):235―236.

诊断试剂范文第3篇

（黑龙江省绥化市北林区动物检疫站 152000）

1 材料与方法?

1.1 材料?

1.1.1 病料来源?

病料来源为绥化市某县市中随机选出的三个鸡场中疑似大肠杆菌感染的 7日龄鸡群中分别各取出 10只进行临床诊断和实验室诊断。?

1.1.2 培养基和试剂?

主要培养基和试剂有麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂、革兰染液，普通肉汤培养基、普通琼脂培养基、三糖铁琼脂、药敏片、葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、乳糖、蔗糖、枸橼酸盐及各类生化反应试剂、大肠埃希菌O型抗血清。?

1.1.3 仪器?

主要仪器有显微镜、试管、培养皿、吸管等。?

1.2 进行雏鸡大肠杆菌实验的方法?

分别对三个鸡舍的鸡群总数、发病数和死亡数作出统计。无菌采集病死鸡的心、肝、脾、肺、肾等组织，将病料触片和血液涂片，分别进行革兰染色和碱性美蓝染色、镜检。对A、B、C三个样病例进行细菌分离培养和血清型鉴定。从三个样中随机挑取两个总共组成6个 （a、b、c、d、e、f）紫黑色带有金属光泽的菌落接种到斜面培养基上，37℃恒温培养18~24h。观察细菌生长及菌落特征。?

1.2.1 动物回归试验?

将分离纯培养的 6个病原菌菌液颈部皮下接种 30 只 7 日龄雏鸡，每只 0.2mL（约2×108cfu）。并设10只为对照组，每只颈部皮下注射0.2mL灭菌肉汤。隔离饲养，观察1 星期。?

1.2.2 药敏试验?

将斜面培养基中增菌纯培养的菌株培养液均匀涂布于普通琼脂培养基表面，37℃干燥8min。然后用灭菌镊子取 10种抗生素药物纸片，将其分别对称地贴在培养基表面，每个平皿贴4种，37℃恒温培养18~20h后观察结果。使用的 10种药物为呋喃妥因、复方新诺明、庆大霉素、链霉素、青霉素、丙氟哌酸、头孢他啶、利福平、磺胺嘧啶、新生霉素。还做了平板凝集试验和生化试验。?

2 结果与分析?

2.1 镜检、血清型鉴定和生化试验结果?

病料涂片染色与病料接种培养后染色镜检，均检测到革兰阴性短杆菌。选择攻毒试验中对鸡呈现高致病力的菌株 a、b、c、d、e与禽大肠杆菌 O型单因子血清分别进行平板凝集试验，三个样A、B、C的血清型鉴定鉴定结果都包含O1、O2、O78。A、B、C三个群体总共30只病例中，有 16只分离株是可以定型的，其中以 O1、O2、O78为主，这三种血清型在种类上占总量的 53.3%（16/30）因此，可以认为 O78、O1、O2 可能是绥化地区的优势血清型。对分离的病原菌进行生化试验，均能分解葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇及蔗糖，产酸产气，初步判断为大肠杆菌。?

2.2 动物回归试验结果及分析?

采用相同菌株攻毒，鸡只死亡数量具体见表1。?

通过用6组菌株分别给6组鸡攻毒结果来看，有4组都是阳性，其病理变化原发病鸡基本一致。无菌采集病死鸡脏器进行细菌学检测，结果分离到与送检病例一致的大肠埃希菌。?

诊断试剂范文第4篇

[关键词] 流式细胞术；胸腔积液；p53

多种胸腔疾病均能导致胸腔积液，其中良恶性胸腔积液的鉴别诊断是临床上的一个难题。虽然说目前的检测手段比较多，但是仍然有一部分患者得不到及时的明确诊断。流式细胞术（Flow Cytometry， FCM）是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段，它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，与传统的荧光镜检查相比，具有速度快、精度高、准确性好等优点，成为当代最先进的细胞定量分析技术[1]。P53是目前发现的与人类肿瘤密切相关的癌基因之一，因此通过检测p53蛋白可以了解p53突变情况。本文采用流式细胞术对良恶性胸腔积液进行鉴别诊断。现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料

选择在我院进行治疗的胸腔积液患者20例为研究对象，所有患者均经过细胞学或组织学诊断明确。共收集标本20份。其中良性标本和恶性标本各10份。良性胸腔积液包括脓胸4例，结核性胸膜炎3例，其他3例。

1.2 研究方法

1.2.1 细胞培养 取出细胞冻存管放入37摄氏度的水浴中，溶化后，酒精消毒瓶口，取出悬液，加入培养液10ml 离心，去上清后再重复以上步骤一次。然后加入培养液后转入培养瓶，在37摄氏度5%CO2条件下进行培养，更换培养液，继续培养。每天观察细胞培养情况，符合情况后，弃去培养液，PBS液冲洗一次。加入消化液，当细胞完全从瓶上脱落后，加入培养液停止消化。收集细胞，离心后去上清，加入培养液继续培养。在收集细胞前24小时换1次培养液，然后消化液消化，培养液终止消化，细胞计数，浓度定为5×106个/ml。吸取培养液和消化液后，加入冻存的培养液，制成细胞悬液后置入无菌冻存管，每管1-1.5ml。置入液氮罐中冻存。待测。

1.2.2 流式细胞术 胸水200-500ml。加入抗凝剂，分装后，离心去上清。洗涤后再次离心取上清。对红细胞沉淀较少的标本，加入红细胞裂解液，混匀后静置10min，离心去上清。PBS液洗涤细胞2次，离心后去上清。冷存后待测。红细胞沉淀多的标本加入白细胞分离液，PBS液洗涤，混匀后贴壁加入含有白细胞分离液的试管中，离心，中层为白细胞，取中层离心去上清，PBS洗涤1次后离心去上清，冷存后待测。

1.2.3 p53检测 采用直接免疫荧光标记法。调整标本细胞混悬浓度为1×106个/ml，分别加入两个待测管，为测试管和对照管，每管50μL。加入固定液混匀。室温下培育15分钟，加入PBS液洗涤后离心去上清，加入穿透液混匀，室温下培育5分钟。测定管加入p53抗体2μL，对照管加入小鼠同型对照，混匀。室温避光培育30min。加入PBS液洗涤后离心，弃上清。后加入PBS液500μl重悬细胞，筛网过滤，检测。采用流式细胞仪测定p53。

1.3 评价指标

p53平均荧光强度>1.0为阳性，p53阳性细胞百分率>90%为阳性。细胞学检查检测出恶性癌细胞为阳性。

1.4 仪器与试剂：使用FACS calibar流式细胞测定仪（美国BD公司生产）与配套的荧光免疫试剂。

1.5 统计学方法

采用SPSS12.0统计学方法进行数据处理。计量资料采用均数±标准差表示，采用t检验。P

2 结果

2.1 良、恶性胸腔积液p53阳性细胞百分率比较

恶性胸腔积液p53阳性细胞百分率为（91.8±30.6）%，良性胸腔积液p53阳性细胞百分率为（38.5±14.1）%，两组比较，差异有统计学意义（P

2.2良、恶性胸腔积液p53平均荧光强度检测

恶性胸腔积液p53平均荧光强度（4.98±2.12），良性胸腔积液p53平均荧光强度（0.47±0.10），两组比较，差异有统计学意义（P

2.3 p53平均荧光强度与p53阳性细胞百分率的相关性

见表2。p53平均荧光强度与p53阳性细胞百分率的诊断符合率为90%（18/20），具有较高的诊断符合率。

3 讨论

胸腔积液的良恶性鉴别是临床的常见问题。恶性肿瘤在一些情况下虽然导致胸腔积液，但是积液内的恶性细胞并不多，而其他原因如肿瘤继发的肺不张、合并心力衰竭等导致的胸腔积液与良性疾病难以鉴别[2]。目前用于鉴别胸腔积液良恶性的方法比较多，但有一定的局限性。

流式细胞术在临床上的应用越来越广泛，可以用于分析细胞周期，不受细胞增生状态的影响。p53基因可以抑制细胞向恶性转化，因其不能修复细胞的凋亡，当p53发生突变的时候，会丧失正常的功能，不能调控细胞的增殖[3]。本文的研究结果显示，采用流式细胞术检测p53蛋白，恶性胸腔积液的阳性率显著高于良性胸腔积液。而p53表达的荧光强度也高于良性胸腔积液，两个结果具有高度的相关性。两个结果与细胞学检测结果也具有高度的相关性。

综上所述，采用流式细胞术检测胸腔积液细胞p53蛋白的阳性细胞率可以用于良恶性胸腔积液的鉴别诊断。

[参考文献]

[1] 张韫，杨鑫，李忻. 流式细胞术在临床检验中的应用。中日友好医院学报，2012，26（5）：303-306.

诊断试剂范文第5篇

关键词：癫痫；脑电图；诊断

中图分类号：R741.044；R742.1

文献标识码：A

文章编号：1008－2409(2007)03－0621－03

癫痫是一种常见病和多发病，而癫痫发作是可治的病症，关键是在发病早期能得到正规的合理的治疗。癫痫发作可与许多发作性疾病相混淆，而脑电图(EEG)是一种无创、价格低廉、方便有效并为临床广泛使用的检查手段，是诊断癫痫的金指标。但常规脑电图对癫痫的检出率不足30％，因此，寻找和开发新的、安全有效的检查手段具有非常重要临床价值。动态脑电图及诱发试验在近几年得到了迅速的发展，明显提高癫痫患者发作间期痫样放电(EFO)的检出率，同时对与发作性疾病的鉴别诊断有非常重要的意义。

1　脑电图诱发试验的基本原理

1．1脑电图的基本原理

EEG与脑生物代谢密切相关。多环节和多层次电化学过程产生细胞外电流即经头皮可描记的EEG，是大脑代谢所产生的一种现象。其中任何一个环节或一种成分破坏都可产生异常改变，故脑电图可发现脑部各种损害，特别是识别癫痫患者癫痫样放电。癫痫发病时兴奋性神经递质含量增高，神经元兴奋性增强，而抑制性神经递质含量减少，抑制作用减弱，兴奋与抑制平衡失调，导致细胞游离钙水平升高，诱发神经元过度兴奋，产生痫样放电。癫痫就是大脑皮层神经细胞过度同步放电的结果。用微电极记录脑细胞内的电活动，可以发现各种癫痫灶的神经元在发作间隙期可出现一种特殊电现象，即发作性去极化偏移(PDS)。PDS是病灶内神经元产生反复去极化引起持续时间较长的高波幅和高频率棘波放电。当大脑皮层某一点由PDS而产生癫痫样放电，其邻近区域神经元也产生同步放电，同步放电的结果使整个区域产生癫痫样放电，神经元去极化发展到一定高度就有棘波形成。目前的动态脑电图鉴测，方法是将电极安装在患者头皮上后，导线可插到带有放大器的腰盒，腰盒内除放大器外，还有录音带或光盘以供记录脑电讯号，待检测完毕后，把记录到的脑电讯号放到主机荧光屏显示。

1．2诱发试验的基础原理

脑电图诱发试验是指在清醒安静闭目状态下描记的脑电图，有可能是正常或轻度异常，但如果给予能改变大脑兴奋水平的直接或间接刺激，或者改变患者的生理学、生化学条件，使患者处于与安静时不同的状态，有时就诱发出潜在性异常所见或者能使已经存在的异常所见显得更明显。比较广泛被使用的有以下几种。

1．2．1过度呼吸、睁闭眼、闪光刺激的诱发试验(即常规诱发试验)①过度呼吸诱发试验是指患者由于过度呼吸(每分钟有20～50ml空气交换)血中二氧化碳浓度低下成为碱中毒状态，结果引起脑血管收缩，脑血流减少，造成脑细胞环境的变化，易发生异常波。②睁闭眼诱发试验主要用于了解大脑在视觉刺激时的反应情况。⑨闪光刺激诱发试验是用强烈光线作闪光刺激视网膜引起脑电图的变化，可诱发出发作性的异常波和临床发作。

1．2．2 睡眠剥夺和睡眠诱发试验 睡眠剥夺是指受试者少睡觉，最好24h不睡，增加身体的生理负担从而降低了抽搐闽值，使阳性率增加。睡眠诱发是指只睡眠时由于中脑网状结构上行性激活系统机能的低下，大脑皮层和边缘系统脱离了激化系统的控制，结果造成发作波发生的适宜条件。

1．2．3 药物诱发试验 最常见是贝美格诱发试验。贝美格(Bemegride，BM)又称美解眠(Regicide)是一种中枢神经系统兴奋剂，结构与巴比妥类似，系巴比妥类竞争性拮抗剂。贝美格可提高中枢神经系统兴奋性，对癫痫的患者可明显提高检查时痫样放电阳性率。

1．2．4癔病诱发试验癫痫可与许多发作性疾病相混淆，最常见的一种是癔症性非痫性发作。癔症患者往往伴有很强的暗示性。癔病诱发试验就是运用癔症患者很强的暗示性，在暗示诱发发作后记录脑电图。80年代Cohen等16]就应用了癔症诱发试验，获得了良好鉴别痫性发作与癔症性发作的效果。癔病诱发试验操作法现有多种，如静脉注射lO％葡萄糖酸钙10～15ml，出现温热时即可发作，或者给予静脉注射生理盐水即可发作。但不论用何种方法，核心是在做癔病诱发试验(HPT)之前要针对该方法的内容做好暗示。

2　在癫痫诊断中的临床价值

癫痫的诊断必须有反复癫痫发作和引起这种发作的细胞过度放电即痫样放电(EFD)。没有痫样放电的癫痫是不存在的或非癫痫性的，有癫痫发作就一定有痫样放电，故发作的脑电图的异常已成为癫痫诊断的基本要素之一。按照国际脑电图和临床神经生理联盟名词委员会所下的定义：痫样放电是指突然发生的并与背景或基本电活动相区别的放电。常见的痫样放电①棘波：指时程为20～80ms的放电可为单相、双相或三相，以双相为多，主要是负相。②尖波：指时程为70～200ms或以上的突发放电。③棘慢波、尖慢波：指由一个棘波或尖波后面紧随一个慢波按顺序出现。④其他：多棘波、多棘慢波、3Hz棘慢波，2.5Hz以下的尖一慢波。目前，常规的过度呼吸、睁闭眼、闪光刺激的诱发试验，能捕捉到痫样放电的7％～30％。有些诱发试验可进一步提高EFD的检出率。解学礼报告对50例常规脑电图未见异常的癫痫患者和15例健康志愿者24～34h禁睡后记录脑电图，结果癫痫组EFD检出率为42％而健康组15例中无1例有EPD。李晓燕报告对64例癫痫患者行剥夺睡眠一睡眠联合诱发试验，其中大发作14例，小发作8例，局限性发作10例，精神运动性发作7例，植物神经性22例，不能分类3例，常规脑电图未见异常或可疑。结果剥夺睡眠诱发后有30例阳性(占75％)，大发作14例有8例阳性，局限性发作10例有7例阳性，精神运动性发作7例全部异常，失神发作8例有6例阳性，植物神经性发作22例有14例阳性，不能分类3例中有2例阳性。白勤等对98例临床确诊的癫痫患者分别进行常规脑电图检查和剥夺睡眠诱发及睡眠诱发脑电图试验。结果常规脑电图检查异常78例，占80.4％，剥夺睡眠脑电图异常86例，占87.8％，睡眠诱发脑电图异常80例，占81.6％。睡眠诱发有2种：①自然睡眠。②药物睡眠。自然睡眠优于药物睡眠，睡眠诱发是安全可靠、较为理想的符合生理学的方法。潘映辐等对478例行贝美格诱发试验(EEG．BMT)，结果EEG―BMT对癫痫组EEG阳性率可提高到80.2％，但非癫痫组的阳性率亦达37.5％。但值得指出的是颞叶性发作44例的BMT阳性率高达91％，其中局灶性EFD为52.5％，对辅助临床诊断起到了一定的作用。国内有作者报

告Its]，对49例常规EEG无EFD的癫痫患者和22例癔病性痉挛发作者进行EEG－BMT，结果癫痫组EFD发生率为96％，而癔病组EEG均未见异常反应。

3　在鉴别诊断中的作用

癫痫可与许多发作性疾病相混淆，最常见的一种是癔症性非痫性发作。癔症占门诊患者的18％～23％，住院患者中占5％～15％，而且难治性癫痫(IE)中有癔症者占5％～20％。癫痫与癔病的关系争论了数个世纪。若不正确诊断，将导致不必要的抗癫痫治疗和其他如就业、择偶及人际关系一系列问题。而不恰当地应用抗癫痫药物不但对发作没有帮助，实际上还可能诱发或增加发作，使发作顽固性。因此，及时地识别和诊断发作的性质非常必要。Langcman等静脉注射生理盐水诱导法对癫痫与癔病发作的鉴别敏感率为77％，特异性为100％。潘映辐等1983～1986年曾对108例患者进行了HPT的EEG和临床观察(第1组疑为癔病63例，第2组为IE疑伴有癔病发作13例，第3组肯定为非癔病的和不伴癔病的其它发作者32例)。结果第1组中53例阳性(84.1％)，第2组6例为阳性(46.2％)，第3组无1例HPT阳性者。经1年以上随诊第1组余10例中8例为癫痫，2例为癔病；第2组另7例仅为IE；癔病和伴癔病者61例，HPT阳性者59例，阳性率为96.7％，无假阳性，亦无明显不良反应。李国良等[1钉对96例发作性疾病患者进行24h动态脑电图监测及癔病诱发试验(AFFG－HPT)研究。结果，难治性癫痫疑伴癔病组18例中14例阳性为77.8％，癔病或癫痫发作诊断不定组36例中24阳性为66.7％，癫痫组18例1阳性为5.6％，癔病组24例中22阳性为91.7％。96.O％的患者明确诊断。