刺猬的拥抱

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刺猬的拥抱范文第1篇

【关键词】矿用；隔爆型真空可逆电磁启动器；保养；维修

【分类号】：TM615

一、矿用隔爆型真空可逆电磁启动器的维修原理

1、根据电路及工作原理查找故障范围

弄清楚被检修电路、设备的结构和工作原理，是循序渐进、避免盲目检修的前提。查找故障时，先从主电路入手，看换向器合、分是否正常，然后检查主电路的触头系统、热元件、熔断器及线路本身是否有故障，接着根据主电路与控制电路的控制关系，检查控制回路的线路接头、自锁或连锁触点、电磁线圈是否正常，PLC的输入、输出电压是否正常，从而找出故障部位。如能通过直观检查发现故障点，如 PLC 的指示、线圈脱落、触头（点）、线圈烧毁等，则检修速度更快。

2、从控制电路动作程序检查故障范围

通过直观观察无法找到故障点，断电检查仍未找到故障时，可对电气设备进行通电检查。通电检查前要先切断主电路，将控制器和转换开关置于零位，然后用万用表检查电源电压是否正常，有没有缺相或严重不平衡。进行通电检查的顺序为先检查主电路，后查控制电路；先检查交流系统、后检查直流系统；通电检查控制电路的动作顺序，观察各元件的动作情况，或断开隔离开关，取下所有熔断器，然后按顺序逐一插入要检查部位的熔断器，合上开关，观察各电气元件是否按要求动作。

3、利用仪表检查

在煤矿电气修理中，对于隔离开关的分合是否到位，触头（点）的接触电阻等是否正常，对于工作电压、控制回路部分电压等可用万用表检查；对线路、主回路的元件的有关绝缘电阻，可用兆欧表检查。利用仪表检查电路或电器的故障具有速度快、判断准确、故障参数可量化等优点，因此，在电气设备维修中应充分发挥仪表检查故障的作用。正确的使用电工仪表是准确确定故障点的一种行之有效的检查方法。常用的测试工具和仪表有校验灯、测电笔、万用表、钳形电流表、兆欧表等，主要通过对电路进行带电或断电时的有关参数如电压、电阻、电流等的测量，来判断电器元件的好坏、设备的绝缘情况以及线路的通断情况。在用测量法检查故障点时，一定要保证各种测量工具和仪表完好，使用方法正确，还要注意防止感应电、回路电及其他并联支路的影响，以免产生误判断。常用的测量方法有：

（1）电压分阶段测量法。设备回路（包括控制回路）在通电的情况下，用万用表电压档（注意交直流选择）以测量电压的方式，根据电压数值来分析判断电路的故障情况。可以是从两端测量（端电压），也可以是回路当中的某个点对地电压测量，具体要根据原理图分析判断。

（2）电阻分阶段测量法。

（3）短接法。

4、机械故障的检查

在矿用隔爆电磁启动器控制线路中，有些动作是由电信号发出指令，由机械机构执行驱动的。如 KBZ-630/500、400 低压馈电开关。如果机械部分的连锁机构、传动装置及其他动作部分发生故障，即使电路完全正常，设备也不能正常运行。在检修中，应注意机构故障的特征和表现，探索故障发生的规律，找出故障点，并排除故障。在煤矿井下生产过程中由于环境因素，开关控制线路中，可能发生故障的线路和电器较多。有的明显，有的隐蔽；有的简单，易于排除；有的复杂，难于检查。在检修故障时，应灵活使用上述修理方法，及时排除故障，确保生产的正常进行。检修中注意书面记录，积累有关资料，不断总结经验，提高修理能力。

三、矿用隔爆型真空可逆电磁启动器的维修方法

1、经验法

（1）弹压活动部件法：主要用于活动部件，如接触器的衔铁、继电器、按钮等。通过反复弹压活动部件，使活动部件灵活，同时也使一些接触不良的触头产生摩擦，达到接触导通的目的。

（2）元件替换法：对于值得怀疑的元件，可采用替换的方法进行验证。如果故障依旧，说明故障点怀疑不准，可能该元件没有问题。但如果故障排除，则与该元件相关的电路部分存在故障，应加以确认。在实际维修中，根据具体情况，选择合适的方法。

2、检测法

检测法是指采用仪器仪表作为辅助工具对煤矿电气线路故障进行判断的检修方法。由于仪器仪表种类很多，且有日新月异之势，故检测法发展很快，准确率大大提高，手段也日益增多。例如我们使用的 ds-11 的多功能测试仪，可以由仪器对接触器的三相同步、线路板、综合保护器等进行检测，据有关部门提供的数据，故障查找率在 90%以上。但比较常用、比较实用的方法仍为利用万用表、兆欧表和电流表对电路进行测试。电路在通电测试时，根据变压器的输出不同，各点之间的电压也不同。由此测出不同元件的工作情况，找出故障点。

三、矿用隔爆型真空可逆电磁启动器的修复与保养

当找出真空电磁启动器设备的故障点后，就要着手进行修复、试运转、记录等，然后交付使用，但必须注意以下事项：

1、在找出故障点和修复故障时，应注意不能把找出的故障点作为寻找故障的终点，还必须进一步分析查明产生故障的根本原因。

2、找出故障点后，一定要针对不同故障情况和部位采取正确的修复方法。

3、在故障点的修理工作中，一般情况下应尽量做到复原。

4、电气故障修复完毕，需要通电试运行时，应和操作者配合，避免出现新的故障。

5、每次排除故障后，应及时总结经验，并做好维修记录。记录的内容包括：工业机械的型号、名称、编号、故障发生的日期、故障现象、部位、损坏的电器、故障原因、修复措施及修复后的运行情况等。记录的目的：作为档案以备日后维修时参考。并通过对历次故障的分析，采取相应的有效措施，防止类似事故的再次发生或对电气设备本身的设计提出改进意见等。

四、结束语

总而言之，要想做好矿用隔爆型真空可逆电磁启动器的修复与保养工作，就应该熟悉了解启动器本身的结构原理，当出现故障时，通过望、问、摸、闻、听、切来了解故障前后的操作情况和故障发生后出现的异常现象，根据故障现象判断出故障发生的部位，借助检测仪表，不断积累经验，我们即可准确地判断井下防爆开关的故障，并给予快速排除故障，确保生产活动的正常进行。

参考文献：

[1]常卫星. 可逆真空磁力启动器故障原因及检修的探讨[J]. 河北煤炭，2012，02：39-40+44.

刺猬的拥抱范文第2篇

树突状细胞（dendritic cell，DC）是已知功能最强的抗原呈递细胞，是机体T淋巴细胞特异免疫应答的直接启动和调控者，在机体的抗肿瘤免疫应答中发挥着重要作用。在体外培养DC并用肿瘤抗原致敏后，携带肿瘤抗原信息的DC，在体内外激活针对该肿瘤细胞的特异性杀伤细胞。本试验在体外用人胃癌细胞SGC提取肿瘤抗原致敏DC后诱导CIK，通过其对SGC的杀伤作用的研究为DC治疗胃癌的研究提供理论及试验依据。

1 材料与方法

1.1 主要试剂

SGC由福建省肿瘤医院分子生物学研究室提供；rhIL?鄄2、rhIL?鄄4、CD3 mAb购自Peprotech公司；rhGM?鄄CSF、Ficoll淋巴细胞分离液购自军事医学科学院；胎牛血清(超级)购自杭州四季青生物制品公司；人AB血清由福建省血液中心提供；1640培养基购自Gibco公司；FITC标记的小鼠抗人CD83、HLA?鄄DR、CD14、CD86及同亚型对照抗体购于晶美生物工程有限公司。

1.2 方 法

1.2.1 SGC的培养

SGC在5％CO2、37℃条件下，用含有10％胎牛血清RPMI1640培养液常规培养。

1.2.2 肿瘤细胞总蛋白的获取

将培养贴壁肿瘤细胞用胰酶消化悬浮，离心弃上清，用无血清RPMI1640培养液重悬，超声破膜，30 000r/min超速离心90min，取上清。浓缩透析，调整蛋白浓度为25mg/ml，经0.22μm滤膜滤过除菌，－80℃保存。

1.2.3 DC的培养[1]

无菌条件下采集的正常人抗凝外周全血，经淋巴细胞分离液梯度离心，获取单个核细胞，用含10%AB血清的RPMI1640悬浮细胞，调整细胞浓度至5×107/ml，加1ml至6孔板内培养箱中培养2h，吸掉上清，用培养液洗去非黏附细胞，获得贴壁细胞，每孔再加入3ml 含有rhIL?鄄4 （500U/ml）及rhGM?鄄CSF（500μg/ml）的10%AB血清的RPMI1640培养液，2~3d半量换液1次。

1.2.4 抗原负载DC及表型鉴定

将上述培养5d的DC 用含有rhIL?鄄4 （500U/ml）及rhGM?鄄CSF（500μg/ml）的10%AB血清的RPMI1640培养液调整细胞浓度为1×106/ml，向6孔板内加入2ml的细胞，每孔加入肿瘤细胞总蛋白1ml（25mg），于第8d收集悬浮细胞为抗原致敏的DC。对照组加入无血清RPMI1640培养液1ml，于第8d收集悬浮细胞为空白的DC。分别收集第1d、第5d及第8d抗原致敏的DC，用流式细胞仪检测DC表面分子HLA?鄄DR、CD83、CD86、CD14表达。

1.2.5 CIK的培养[2]

同前法从外周血中获取单个核细胞，用含10%AB血清的RPMI1640悬浮细胞，37℃、5%CO2培养箱中培养2h，取悬浮细胞，调整细胞数为1×106/ml，用含有IL?鄄2(250U/ml)、CD3 mAb (50μg/L)的10%AB血清的RPMI1640培养液培养，2~3d半量换液1次至第8d。试验组用将其分别与空白的DC及抗原致敏的DC 按10：1比例相混，用含有IL?鄄2(250U/ml)、CD3 mAb( 50μg/L)的10%AB血清的RPMI1640培养液在6孔板内培养。对照组仅用含有IL?鄄2(250U/ml)、CD3 mAb (50μg/L)的10%AB血清的RPMI1640培养液在6孔板内培养。5d后分别获取抗原致敏DC诱导CIK，空白的DC诱导CIK及CIK为效应细胞。

1.2.6 混合淋巴细胞反应（MLR）

试验组收集成熟经抗原致敏及空白的DC，用含有IL?鄄2(250U/ml)、CD3 mAb (50μg/L)10%AB血清的RPMI1640调整细胞数为1×106/ml。收集同时期培养的CTK用同样的培养液调整细胞数为1×107/ml。将100μlCIK分别与100μl经抗原致敏及空白的DC在96孔培养板中混合培养。对照组100μlCIK加入100μl含有IL?鄄2(250U/ml)、CD3 mAb 50μg/L10%AB血清的RPMI1640继续培养。72h后加入四甲基偶氮唑蓝（MTT）10μg，继续培养4h，离心弃去孔内上清，每孔加入150μl二甲基亚砜（DMSO）震荡10min，待结晶物充分溶解，用酶标仪在570nm处测OD值（A），每组设3个复孔，取均值按下式计算：

刺激指数SI=A实验孔/A对照孔×100％

1.2.7 细胞杀伤试验

用MTT比色法测定抗原致敏DC诱导CIK，空白的DC诱导CIK及CIK对SGC细胞的杀伤活性，效靶比为5：1、10：1、20：1。调整细胞至所需浓度，各取100μl的效靶细胞悬液加入96孔板中，于37℃、5%CO2培养箱中培养24h后，加入四甲基偶氮唑蓝（MTT）10μg，继续培养4h，离心弃上清，每孔加入150μl二甲基亚砜（DMSO）震荡10min，待结晶物充分溶解，用酶标仪在570nm处测OD值， 同时设空白对照、靶细胞对照、效应细胞对照。每孔设3个复孔，取其均值按下式计算：

CIK细胞毒性（％）＝[1－（A效+靶－A效）/A靶]×100%

1.3 统计学方法

采用SPSS10.0软件对数据进行析因分析及t检验。

2 结 果

2.1 DC形态学的观察

从外周血获得单个核细胞，培养2h，获得贴壁细胞，多为体积小、圆形的单个核细胞。5d时可见细胞伸展体积变大，形状不规则，部分细胞悬浮。经抗原致敏后第8d时可见大部分细胞悬浮，变大并伸出伪足，细胞内可见大量的颗粒，倒置相差显微镜下可见毛刺状突起，为典型DC形态。

2.2 抗原负载前后DC表型的变化

用流式细胞仪检测DC表面分子HLA?鄄DR的表达第1d为5.01％、第5d为28.21％、第8d为62.01％。CD83分别为1.03％、4.50％、15.57％。CD86分别为4.47％、25.75％、41.03％。CD14分别为13.02％、3.26％、0.55％。

2.3 混合淋巴细胞反应

显微镜下观察，两种细胞共培养过程中，可见DC细胞逐渐减少，72h后视野中已不存在DC。两试验组及对照组CIK细胞数均较72h前明显增多。混合细胞培养亦显示：抗原致敏的DC与空白的DC都具有很强的刺激CIK细胞增殖的能力，分别是细胞因子刺激能力的3.12倍和3.09倍，但两者之间差异无显著性意义（P>0.05）。

2.4 细胞杀伤试验

用MTT比色法测定抗原致敏DC诱导CIK（抗原?鄄DC?鄄CIK），空白的DC诱导CIK（空白?鄄DC?鄄CIK）及CIK对SGC细胞的杀伤活性（表1）。

析因分析结果显示：①不同因素诱导CIK对胃癌细胞SGC杀伤作用不同，抗原致敏DC诱导CIK对该肿瘤细胞杀伤作用最强（P＜0.01），提示抗原致敏DC诱导CIK对该肿瘤细胞有特异性的杀伤作用。②不同效靶比之间杀伤作用不同（P＜0.01），结果比较显示效靶比越高，杀伤作用越强。③CIK与效靶比之间有交互作用，其中抗原致敏DC诱导CIK在效靶比为20：1时杀伤作用较其余各组强。但空白的DC诱导CIK与CIK 两组之间分析结果显示两组杀伤作用差异有无显著性意义（P>0.05），提示空白的DC诱导CIK对SGC无特异性杀伤作用。结合混合淋巴细胞反应结果提示，抗原致敏DC诱导CIK可通过激活对该肿瘤有特异性杀伤作用的淋巴细胞及促进淋巴细胞增殖两方面可显著性提高CIK对肿瘤的细胞杀伤作用。

3 讨 论

DC在体外的致敏与其在体内发育过程相似，经历未成熟与成熟两个阶段。未成熟DC来源于外周血或骨髓中的单个核细胞，经IL?鄄4及GM?鄄CSF诱导形成[3]。本研究亦用此方法获得DC。体外诱导DC成熟有抗原负载、细胞因子和佐剂刺激等方法。本研究从人胃癌细胞系SGC经超声破膜获取含有多种肿瘤抗原的肿瘤总蛋白，用其致敏DC，显微镜下可观察到致敏的DC细胞呈典型成熟DC的形态。用流式细胞仪检测DC表面分子结果显示 ，采用SGC抗原负载的DC，代表DC成熟的表面分子HLA?鄄DR、CD83、CD86升高，代表单个核细胞表面分子CD14下降，说明经SGC肿瘤细胞抗原负载可诱导DC成熟。

肿瘤细胞总蛋白中包含有丰富的膜抗原、MHCⅠ类和Ⅱ类抗原表位、多种热休克蛋白分子等成分，经过DC的摄取、加工和呈递后，可激发针对多种肿瘤抗原簇的克隆[4]；可诱导针对该抗原的特异性细胞毒性T淋巴细胞，发挥有效的抗肿瘤免疫效应[5]。CIK细胞除了具有NK细胞非MHC限制的杀瘤作用，还具有T细胞的抗瘤作用。因此用抗原致敏的DC诱导CIK细胞，与未经抗原致敏的DC诱导CIK细胞及CIK细胞相比，对相同抗原靶细胞具有更强的杀伤作用。本研究中MTT试验的结果证实经抗原致敏的DC诱导CIK细胞的杀瘤作用较未经抗原致敏的DC诱导CIK细胞及CIK细胞杀瘤作用强。虞积仁等[6]也证实，抗原致敏的DC诱导CIK细胞仅对带有相同抗原的靶细胞有特异性杀伤。而空白DC诱导CIK细胞与细胞因子诱导CIK缺乏特异性，两者之间杀伤试验无明显差异。张宏文等[7]研究亦发现同样结果。

混合淋巴细胞反应结果显示DC与CIK混合培养72h后，视野中DC细胞消失与成熟DC在完成抗原呈递后凋亡有关[8]。空白的DC与抗原致敏的DC，两者均能明显促进CIK增殖，但两者之间差异无显著性意义，张嵩等[9]亦有类似的报道。说明成熟DC促进CIK增殖与有无抗原负载无关，可能与成熟DC高表达各种黏附分子与CIK表面的受体结合促进CIK细胞的增殖有关。

本研究通过对人肿瘤细胞系SGC提取肿瘤抗原致敏DC诱导CIK杀伤功能的试验研究，证实抗原致敏DC诱导CIK可通过诱导特异性CIK细胞及促进CIK细胞增殖两方面显著提高CIK细胞的杀瘤效应，为进一步的临床试验研究提供试验依据。

【参考文献】

[1] 郑秋红， 郑天荣， 卢林， 等. 人外周血树突细胞的分离与提纯[J].福建医科大学学报， 2000，34(2):115－118.

[2] 郑秋红， 郑天荣， 谢云青， 等. 树突状细胞对自体CIK细胞体外杀伤肺腺癌细胞影响的研究[J].肿瘤防治杂志， 2005，12(16):384-387.

[3] Morse ME， Zhou LJ， Tedder TF， et al. Generation of dendritc cells in vitro from peripheral blood mononuclear cells with granulocyte?鄄macrophage?鄄colony?鄄stimulation factor， interlekin?鄄4， and tumor necrosis factor?鄄alpha for use in cancer immunotherapy[J]. Ann Surg，1997，266(1):6-16.

[4] 古涛， 朱一蓓， 李敏， 等. 肿瘤细胞冻融裂解物上清对凋亡细胞负载的树突状细胞生物学特性的作用研究[J].中国病理生理杂志，2003，19(3):301-305.

[5] Vuillier F， Maloum K， Thomas EK， et al.Idiotype?鄄pulsed dendritic cells are able to induce antigen?鄄specific CTL?鄄mediated protective tumor immunity[J]. Br J Haematol， 2003，120(2):243-250.

[6] 虞积仁， 石永进， 岑溪南， 等. 细胞因子诱导杀伤细胞与抗原特异性细胞因子诱导杀伤细胞杀伤肿瘤效应比较的实验研究[J].北京大学学报(医学版)，2003，35(2):141-142.

[7] 张宏文， 彭晓， 张晓燕. 脐带血DCs对CIK细胞杀伤活性的影响研究[J]. 临床血液学杂志， 2002，15(1):25-28.

[8] McAfee JG， MacVittie TJ. The impact of recent advances in immunology and cancer therapy on nuclear medicine[J]. Semin Nucl Med，2001，31(4):342-349.

刺猬的拥抱范文第3篇

【摘要】 目的 探讨姜黄素对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK 细胞)杀伤胃癌细胞株SGC-7901作用的影响及其机制。方法 10名健康者外周血单个核细胞(PBMC)在体外经多种细胞因子诱导为CIK细胞;收集培养第5天的CIK细胞，给予不同浓度的姜黄素诱导， 37℃、5%CO2条件下继续培养72 h，LDH法检测CIK细胞对SGC-7901细胞的杀伤活性;FACS法检测CIK细胞表型CD3+CD8+、CD3+CD56+含量及穿孔素、颗粒酶B水平。结果 ①姜黄素诱导后，CIK细胞杀伤胃癌SGC-7901的活性明显提高，在10 μmol/L时杀伤活性显著高于对照组(P

【关键词】 姜黄素;CIK细胞;SGC7901胃癌细胞;杀伤活性;穿孔素;颗粒酶B

Abstract： Objective To investigate the effect and the underlying mechanism of the curcumin-induced cytotoxicity of CIK cells to gastric cancer cell line SGC-7901 in vitro. Methods The peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from 10 healthy volunteers were induced in vitro with different cytokines and transferred into CIK cells .On the fifth day， the CIK cells were collected and were induced with the addition of curcumin at different concentrations， followed by 72 hours of culture under the condition of 37℃ and 5% CO2. The antitumor cytotoxicity of CIK cells to cell line SGC-7901 was determined by LDH assay. The content of phenotypes CD3+CD8+ and CD3+CD56+ of CIK cells， the levels of perforin and granzyme B were analyzed by a fluorescence activated cell sorter (FACS). Results ①The anti-tumor cytotoxicity of CIK cells exposed to curcumin on SGC-7901 was markedly elevated and the cytotoxicity reached 62.32%±1.28% at a concentration of 10 μmol/L curcumin， with significant differences in contrast with the control group (37.45%±1.12%， P

Key words： curcumin; CIK cells; gastric cancer cell line SGC-7901; perforin; granzyme B

细胞因子诱导的杀伤(cytokine induced killer， CIK)细胞是将人外周血单个核细胞在体外经多种细胞因子共同诱导培养而获得的一群异质性细胞，与其他过继性免疫细胞相比，由于其具有增殖能力强、杀瘤活性高、杀瘤谱广、副作用小、对正常骨髓造血影响轻微等优点[1-2]而被广泛应用于肿瘤的过继性细胞免疫治疗[3]。姜黄素(curcumin) 是一种从中药姜黄根茎中提取出来的天然化合物，有研究表明，高浓度的姜黄素对树突状细胞(dendritic cell， DC)、γδ T有抑制作用[4-5]，但有关姜黄素在CIK细胞作用中的影响鲜见报道，为此，我们试用不同浓度的姜黄素在体外诱导人CIK细胞，观察姜黄素对CIK细胞杀伤活性及其穿孔素、颗粒酶B的影响，以探讨姜黄素对CIK细胞杀伤胃癌细胞株SGC-7901作用的影响及其机制。

1 材料和方法

1.1 材料 姜黄素(购自Sigma公司);人胃腺癌细胞株SGC-7901(购自上海细胞生物研究所);胰蛋白酶、RPMI 1640(购自Gibco公司);人AB血清(购自徐州市血站);胎牛血清和淋巴细胞分离液(购自中国科学院血液病研究所);IL-2(购自厦门特宝生物公司);FITC标记的鼠抗人CD56(购自BD公司);PE标记的 Perforin(穿孔素)、Gran B(颗粒酶 B)和PE标记的鼠抗人CD3、APC标记的鼠抗人CD8(均购自杭州联科生物);乳酸脱氢酶试剂盒(购自日本世诺临床诊断制品株式会社);FACS Caliber流式细胞仪(购自BD公司)，流式细胞仪分析软件为CellQuest，每个标本分析细胞数≥1×104/L。

1.2 方法

1.2.1 姜黄素诱导CIK细胞 抽取10名健康者外周血各10 ml，淋巴细胞分离液分离，收集单个核细胞，无菌生理盐水洗涤3次，将细胞按4×106/L悬浮于RPMI-1640培养基中，加入经抗CD3单抗包被的6孔细胞培养板，每孔6 ml，加入终含量为5×104U/ L rhIL-2和1×106/L rhIFN-γ，置37℃、5% CO2条件下培养，每2天半量换培养基1次，并调整细胞密度至4×106/L ，5天后收集CIK细胞并配成4×106/L的细胞悬液，分别加入不同浓度的姜黄素〔0(对照组)、 1.25、2.5、5、10、20 〕μmol/L，同时设无水乙醇组(无水乙醇含量为0.1%)。每组设5个复管，置37℃、5% CO2条件下继续培养72 h收集细胞用于实验。

1.2.2 姜黄素诱导的CIK细胞对SGC-7901杀伤活性的检测 按本室建立的方法[6]进行。将SGC-7901细胞株用RPMI-1640培养基培养至对数增殖期;收集细胞用Hank′s液洗2次，配成4×105/L;效应细胞(CIK)配成4×106/L，将效靶细胞数按10∶1比例混合，以1 500 r/min离心5 min，置37℃、5% CO2孵箱中孵育6 h后，轻轻混匀，再以1 500 r/min离心10 min。收集上清液，用全自动生化分析仪LD-P法测定LDH的活性(U/L)。

CIK细胞的杀伤活性(%)=(测定管LDH的U-自然释放管LDH的U)/(最大释放管LDH的U-自然释放管LDH的U)×100%

1.2.3 姜黄素对CIK细胞表型的影响 收集经姜黄素诱导72 h后的CIK细胞， PBS液洗涤2次，调整细胞浓度为4×106/L，加入离心管，每管100 μl，分别加入荧光标记的单克隆抗体CD3、CD8、CD56，每一抗体每孔5 μl， 各组均设5个复孔对照，4℃暗处孵育标记20 min，PBS液洗涤，然后用流式细胞仪检测细胞表型。

1.2.4 姜黄素对CIK细胞穿孔素和颗粒酶B水平的影响 收集经姜黄素诱导72 h后的CIK细胞，用PBS液洗涤2次，调整细胞浓度为4×106/L，加入离心管(100 μl/管)，分别加入荧光标记的穿孔素和颗粒酶B，每管加抗体5 μl，各组均设5个复孔对照。4℃暗处孵育20 min，PBS液洗涤，流式细胞仪检测细胞表型。

1.3 统计学处理 用SPSS 13.0 统计软件包进行数据分析，采用One-Way ANOVA进行比较，P

2 结 果

2.1 姜黄素诱导的CIK细胞对SGC-7901杀伤活性的变化 浓度为2.5～10 μmol/L姜黄素诱导的CIK细胞对SGC-7901细胞杀伤活性明显高于对照组(P

图1 姜黄素诱导的CIK细胞对胃癌SGC-7901的杀伤活性

与对照组比较：*P

2.3 姜黄素对CIK细胞穿孔素和颗粒酶B水平的影响 1.25～10 μmol/L姜黄素诱导的CIK细胞穿孔素和颗粒酶B水平均较对照组高，浓度在10 μmol/L时穿孔素和颗粒酶B水平显著高于对照组，两者比较有统计学意义(P

3 讨 论

现有研究证明，姜黄素具有抗炎、抗氧化、清除自由基及抗癌等药理作用[7-8]。Cipriani等[4]研究表明30 μmol/L以上浓度的姜黄素明显抑制异戊烯焦磷酸盐诱导的γδ T细胞的趋化因子释放、扩增和依赖其活性的细胞聚集，此过程和姜黄素抑制NF-κB和AP-1活性有关;并且高浓度的姜黄素能够呈时间和剂量依赖性地抑制γδT细胞杀伤活性，此过程通过细胞死亡途径，导致核凋亡和大规模DNA断裂。亦有Shirley等[5]研究表明浓度为20 μmol/L及30 μmol/L的姜黄素抑制树突状细胞对免疫刺激物的反应，通过阻止成熟标志物、细胞因子和趋化因子表达而促进未成熟CD4+T细胞增殖，以及阻止树突状细胞迁移和内吞功能。本实验研究发现浓度为20 μmol/L姜黄素作用于CIK细胞时其杀伤胃腺癌SGC-7901细胞活性明显减低，与上述结果一致。

CIK细胞是一类非主要组织相容性复合物(major histocompatibility complex，MHC)和非T细胞受体限制性的免疫活性细胞[9] ，表型以CD3+CD8+和CD3+CD56+为主。Mehta等[10]研究认为， CIK细胞通过释放穿孔素和颗粒酶而裂解靶细胞，提示细胞裂解为杀伤靶细胞的主要机制。穿孔素是存在于细胞毒性T淋巴细胞、自然杀伤(natural killer，NK)细胞和γδ T细胞胞质中的细胞毒颗粒，当这些细胞与靶细胞接触后可释放穿孔素，在靶细胞膜上形成多聚穿孔素管状通道，导致靶细胞溶解破坏。颗粒酶B是杀伤性T淋巴细胞和NK细胞颗粒(granule)中最重要的丝氨酸蛋白酶，通过Caspases依赖途径、直接入核途径及不依赖Caspases的胞质途径杀伤靶细胞。本实验研究显示，浓度2.5～10 μmol/L的姜黄素作用于CIK细胞后，其杀伤活性的增高与其表达的穿孔素和颗粒酶B水平呈正相关，且与CIK细胞的CD3+CD56+表型表达升高一致，考虑CIK细胞杀伤活性增强可能与CIK细胞群中的CD3+CD56+表达增高及其释放穿孔素和颗粒酶B水平升高有关。然而，姜黄素诱导后的CIK细胞CD3+CD8+表型下降机制尚不明确，有待进一步研究。

本实验研究表明，浓度为1.25 μmol/L的姜黄素对CIK细胞的杀伤活性影响不明显，浓度为2.5～10 μmol/L的姜黄素作用于CIK细胞后，其杀伤活性随姜黄素浓度的增加逐渐增强，但当药物浓度过高(达20 μmol/L)时反而会抑制CIK细胞的杀瘤作用。这与Sharma等[11]报道的低浓度姜黄素能增强单核巨噬细胞吞噬功能，高浓度则抑制其吞噬功能的结果类似。因此，姜黄素对CIK细胞作用的影响存在最适浓度现象，这一点在设计实验和临床应用时要加以注意。

参考文献

[1] 朱寿兴，朱建平，徐鸣，等. CIK 细胞体外实验研究及治疗肿瘤的临床疗效[J].江苏医药，2006，32(11):1093-1095.

[2] 梁红，王晓华，隋承光，等. 正常人和肿瘤患者CIK 细胞的体外增殖能力及抗肿瘤作用的对比分析[J]. 中国医科大学学报，2007，36(6): 706- 708.

[3] 邹征云，刘宝瑞，钱晓萍，等.从50 ml 外周血中高效扩增CIK方法的探讨[J]. 肿瘤防治杂志， 2005， 12(7):515-518.

[4] Cipriani B， Borsellino G， Knowles H， et al. Curcumin inhibits activation of Vγ9Vδ2 T cells by phosphoantigens and induces apoptosis involving apoptosis-inducing factor and large scale DNA fragmentation [J]. J Immunol， 2001，167(6):3454-3462.

[5] Shirley SA， Montpetit AJ， Lockey RF， et al. Curcumin prevents human dendritic cell response to immune stimulants [J]. Biochem Biophys Res Commun， 2008， 374(3): 431-436.

[6] 刘军权，韩慧敏，陈复兴.用乳酸脱氢酶试剂盒检测LAK细胞活性[J].临床检验杂志，1995，13(2): 83.

[7] Tennesen HH， Greenhill JV. Studies on curcumin and curcuminoids: curcumin as a reducing agent and as a radical scavenger [J]. Int J Pharmaceutics， 1992， 87(1): 79-87.

[8] Rao CV， Rivenson A， Simi B， et al. Chemoprevention of colon carcinogenesis by dietary curcumin， a naturally occurring plant phenolic compound [J]. Cancer Res， 1995， 55(2): 259-266.

[9] Schmidt- Wolf IG， Lefterova P， Mehta BA， et al. Phenotypic characterization and identification of effector cells involved in tumor cell recognition of cytokine-induced killer cells [J]. Exp Hematol， 1993， 21 (13):1673-1679.

刺猬的拥抱范文第4篇

（一）刺猬

叔本华说，人都是刺猬，即使在冰冷的冬天，也不能相互拥抱。因为

靠得近了，它们身上的刺会伤害到彼此；靠得远了，却又抵抗不住那凛冽的刺骨的寒风。于是它们不停地靠近、伤害、离开，又因为冷而寂寞靠近，就这样春夏秋冬周而复始。你知道的，我从来都不曾相信叔本华，从来都不相信的。他是个彻彻底底的悲观主义者，所以他一直都没有找到可以拥抱可以伤害的人，孤独到老。我想告诉你，即使寒风再凛冽两只

(

受难的

)

刺猬依然可以躲在单薄的

（

的

）

小树叶下面

(

简单的

)

依恋，

(

以最纯朴的感情

)

用幸福取暖。也许一年后春暖花开的时候，经历了一冬，冰雪消融，

它们

也磨合得差不多了。

一年后的绚丽纯美的时光，他们用字字句句在指间刻下幸福的痕迹，并且，

刺猬的拥抱范文第5篇

一条鱼静静地游过来，游到了刺猬的心中，揉碎了水草里的梦。

“为什么你总是那么忧郁呢？”鱼默默地问刺猬。

“我忧郁吗？”刺猬轻轻地笑了。

鱼温柔地注视着刺猬，默默地抚摸着刺猬的忧伤，轻轻地说：“让我来温暖你的心。”

上帝啊，鱼和刺猬相爱了！

上帝说，你见过鱼和刺猬的爱情吗？

刺猬说：“我要把身上的刺一根根拔掉，我不想在我们拥抱的时候刺痛你。”

鱼说：“不要啊，我怎么忍心看你那一滴滴流淌下来的鲜血？那血是从我心上淌出来的。”

刺猬说：“因为我爱你！爱是不需要理由的。”

鱼说：“可是，你拔掉了刺就不是你了。我只想要给你以快乐……”

刺猬说：“我宁愿为你一点点撕碎自己……”

刺猬在一点点拔自己身上的刺，每拔一下都是一阵揪心的疼，每一次都疼在鱼的心上。鱼渴望和刺猬做一次深情的相拥，它一次次地腾越而起，每一次的纵身是为了每一次的梦想，每一次的梦想是每一次跌碎的痛苦。

鱼对上帝说：“如何能让我有一双脚，我要走到爱人的身旁？”

上帝说：“孩子，请原谅我的无能为力，因为你本来就是没有脚的。”

鱼说：“难道我的爱错了？”

上帝说：“爱永远没有错。”

鱼说：“要如何做才能给我的爱人以幸福？”

上帝说：“请转身！”

鱼毅然游走了，在辽阔的水域下，鱼闪闪的鳞片渐渐消失在刺猬的眼睛里。

刺猬说：“上帝啊，鱼有眼泪吗？”

上帝说：“鱼的眼泪流在水里。”