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一、自评自改,改出精彩
我们应该把作文评价的主动权还给学生,让学生通过自改作文的实践活动,真正达到提高作文能力的目的。“文章千古事,得失寸心知”,只有培养学生的自改能力,才能使其在写作的路途中不断地超越自我。在每次习作中,我都要求学生先进行三步改。第一,用红笔画出自己满意的句子、词语。第二,认真修改病句、错别字。第三,感觉哪里写得不够具体,可以进行补充修改。第一点,学生容易完成,不管什么样的习作,一定有自己满意的地方,这样也增强了他们习作的自信心。学生在习作中经常添字漏字,写错别字,写完文章就应该多读几遍,边读边改,把文章改通顺一些,改得更清楚一些,更具体一些,文章也就相对更精彩一些了。当这三条成为孩子写完作文必做的事时,他们多多少少已经明白了修改的意义,掌握了修改的最基本的方法。
二、互评互改,取长补短
学生在自我修改的基础上,再与别人交换着修改。“三人行,必有我师焉”,作文评改是双边互动的过程,学生通过评阅他人的作文,不仅会发现他人作文中的不足,还可以学习他人的长处。平常我要求学生修改别人的习作时,也分三步走。第一,一定要用红笔画出他人习作中的好词佳句,再在旁边写出评语,说说这句话为什么写得好,这个词为什么用得好。对于别人习作中的优点,只是觉得好而写不出原因的,可以在旁边打个红星。孩子就是在别人的认可中一步步增强习作的兴趣的。第二,帮他改出病句、错别字,可以互读互听,在读的过程中、听的过程中,自然而然就发现问题所在了。第三,可以进行补充添加。小学生习作大体都是描写不够具体,话语讲不完整,在互评互改中,大家取长补短,你写好的句子我可以补充进我的习作,我用的好词你可以用进自己的习作。在互评互改中,我们还可以借用博客上的评论、跟帖等方式,自己去评别人的文章,同时自己的文章也需要别人的评论。有时,我规定,每篇文章都要有三个以上的评论、跟帖。孩子就开心地去找同伴,进行相互修改,评论、跟帖。
在指导学生修改习作时,应教给学生一些修改作文的实用的方法。比如简单明了的修改符号,还有一些相应的点评句式:“(我)你这个词写得真 ,写出了 。”“(我)你在这里用上了 修辞手法,生动地表现了 。”“这里,描写不够具体,还可以增加 ”等等。这样句式比较简单,学生容易接受。经常这样训练,提高了学生的修改能力,也提高了他们阅读评价的能力。阅读与习作在修改中取得双赢。
2018年福建省普通高校招生文史、理工类高职(专科)批常规志愿将于8月6日8时开始填报,8月8日18时截止;第一次征求志愿和第二次征求志愿将分别于8月14日、8月17日进行。拟填报志愿的考生应在规定的时间内,登录省教育考试院门户网站高考志愿填报系统填报志愿。
一、填报办法
高职(专科)批志愿实行网上填报。考生登录省教育考试院门户网站(网址:eeafj.cn),点击“数字服务大厅—高考高招—高考志愿填报系统”图标,输入本人的账号、密码等信息,并输入验证码,点击“登录”按钮后便可进入网上志愿填报系统。
二、填报时间
1.常规志愿:8月6日8时开始至8月8日18时止。
2.第一次征求志愿:8月14日8时开始至8月14日18时止。
3.第二次征求志愿:8月17日8时开始至8月17日18时止。
三、特别提醒
1.填报志愿截止时间一到,志愿填报系统将自动关闭,考生须在规定的时间内及时上网填报志愿。
【关键词】腹膜间皮细胞;胰蛋白酶;大网膜
腹腔粘连是腹部手术后常见的并发症,常引起肠梗阻、慢性腹痛,以及不孕、不育等,而且粘连很难通过再次手术加以改善[1]。近年来对腹腔粘连的形成机制有了较深入的研究,认为腹腔粘连的形成与多种因素有关,其中腹膜间皮细胞的完整性及功能正常与否是腹腔粘连形成的关键因素[2]。因此,建立人腹膜间皮细胞培养体系,为体外研究人腹膜间皮细胞生理功能及其在腹腔粘连防治中的作用提供了有效手段。
早在20世纪80年代初,Wu等[3]通过直接从患者腹水中获取腹膜间皮细胞的方法,成功地培养出人腹膜间皮细胞。此后Kern[4]和Stylianou[5]等分别采用胶原酶消化组织法和直接种植法,培养出人腹膜间皮细胞,Stylianou并完整地阐述了人腹膜间皮细胞的鉴定方法。虽然目前人腹膜间皮细胞培养方法很多,但由于培养人腹膜间皮细胞的条件苛刻且易受成纤维细胞污染等原因,要获得大量、高纯度的人腹膜间皮细胞仍为实验研究中的难题。我们综合文献方法并加以改进,建立了人腹膜间皮细胞体外培养方法。
1材料与方法
1.1取材
无菌取自江苏省中医院普外科、肛肠科腹部手术切除的大网膜。
1.2主要仪器设备
眼科剪、镊,培养皿,50mL培养瓶,吸管,10mL尖底离心管,CO2培养箱,超净台,离心机,倒置相差显微镜,100目不锈钢筛,0.22滤膜过滤器。
1.3主要试剂
1.3.1PBS液氯化钠8.0g,氯化钾0.2g,磷酸氢二钠1.56g,磷酸二氢钾0.2g溶于1000mL三蒸水中,过滤灭菌分装,室温保存。
1.3.21640培养基InvitrogenCorporation公司产品,按说明配制,并使其含有青链霉素各100U/mL,小牛血清20%。
1.3.3细胞消化液胰蛋白酶(国药集团化学试剂有限公司)2.5g,EDTA二钠盐0.16g溶于1000mLPBS液中,过滤除菌,分装于小瓶内,-20℃保存。
1.3.4免疫组化抗体波形蛋白抗体,第8因子抗体,CD45抗体均为福建迈新公司产品。
1.4腹膜间皮细胞的原代培养
无菌摘取腹部手术切除的大网膜,剪取血管脂肪相对少的网膜组织,大小约3cm×3cm,将剪取的网膜组织置于含500U/mL青霉素和500L/mL链霉素的无菌生理盐水中浸泡20min,然后用生理盐水流动冲洗5min,将漂洗后的网膜组织平铺于无菌培养皿内,再用PBS反复漂洗至没有油珠漂浮,同时剪除血管及脂肪,将洗净的网膜组织剪成1cm×1cm大小,加入0.2%胰蛋白酶-0.02%EDTA细胞消化液20mL,用吸管反复吹打均匀,装于50mL培养瓶内,放置于37℃,体积分数为5%CO2培养箱内消化25min,每5min振摇1次,最后5min保持静止。消化结束后将消化液用100目不锈钢筛过滤于培养皿内,加入等量含20%体积分数的胎牛血清的RPMI-1640完全培养液终止消化。用移液器分装于10mL尖底离心管,1000r/min,离心10min,弃上清,加入适量完全培养液溶解细胞沉淀,分装于50mL培养瓶,放置于37℃,5%CO2培养箱内培养。
1.5腹膜间皮细胞的传代培养
原代细胞培养24h后,镜下观察细胞贴壁情况,贴壁良好的以等体积的新鲜完全培养液替换瓶内全部陈旧培养液,贴壁情况差的以等体积的新鲜完全培养液替换瓶内一半的陈旧培养液,此后每3d全换液1次。约培养5~8d细胞生长融合,可以首次传代。当细胞生长融合成单层,PBS漂洗2次,每瓶加入完全消化液2mL,在37℃,5%CO2培养箱内消化15min。镜下观察细胞消化情况,细胞脱落变形后,加入4mL完全培养液终止消化。将细胞悬液分装于离心管内1000r/min,离心10min,弃上清,加入适量完全培养液溶解细胞沉淀,传代于6孔板(将盖玻片裁成4片,泡酸,洗净,烘干,在盛有多聚赖氨酸的塑料培养皿内浸泡5~10min,取出,在干燥箱内60℃烘干1h,高压灭菌。将灭菌后的盖玻片放置于6孔板内,每孔3片)内,加入适量完全培养液。继续在37℃,5%CO2,湿度95%的培养箱中静置培养,至细胞完全贴壁伸展。
1.6腹膜间皮细胞的鉴定
1.6.1免疫组化鉴定①吸去6孔板内培养液,PBS(pH7.2~7.4)洗2次,每次3min,将细胞爬片取出,用生理盐水洗2遍,随即放入10%中尔马林固定30min;蒸馏水洗4次,每次3min。②加入0.1%TritonX100(PBSpH7.4配制),室温10min,PBS洗3次。③抗原修复,根据不同一抗的要求进行(CD45无须修复,波形蛋白和第8因子用柠檬酸缓冲液高压加热修复。滴加即用型一抗、室温下孵育60minBPS洗3次每次5min,去除PBS。每张盖玻片滴加50LElivision试剂盒中的试剂A,室温下20min,PBS洗3次,每次3min。每张盖玻片滴加50LElivision试剂盒中的试剂B,室温下30min,BPS洗4次,每次5min)。④DAB显色,每张盖玻片滴加新鲜配置的DAB显色溶液,在显微镜下观察3~10min;自来水洗5min,苏木素复染,0.1%盐酸分化,自来水冲洗,PBS返蓝。⑤脱水,逐级脱水:过70%、80%、90%、95%酒精各1次,100%酒精2次,每次1min;透明,过二甲苯溶液3次,每次3min。⑥封片,将有细胞的一面向下,用中性树胶封片。自然通风干燥。普通光学显微镜观察,拍照。
1.6.2扫描电镜鉴定①细胞准备:同间皮细胞传代,取出细胞爬片浸入PBS中漂洗细胞表面;②固定:将细胞爬片放入青霉素小瓶中,加入4℃预冷的3%的戊二醛,4℃过夜。吸出固定液,用PBS浸洗2次,每次10min。再加入4℃预冷的1%的四氧化锇,在4℃固定1h。PBS浸洗2次,每次10min。③脱水:用30%、50%、70%、80%、90%、100%酒精逐级脱水,各10min。④置换:将样品放入醋酸异戊醋:丙酮=l:1的混合液中10min,然后放入醋酸异戊酯中2次,各10min;⑤临界点干燥:预冷临界点干燥室的样品室,使其温度降到0℃,将玻片放入样品篮,样品篮的上下两面事先铺好滤纸,在保证细胞被醋酸异戊醋浸润的情况下,将样品篮放入样品室。拧紧室盖,充入液态CO2,同时缓慢排出CO2气体,反复3次,使液态CO2置换出细胞中的醋酸异戊醋,加热样品室,使CO2达到临界状态。缓慢的排出CO2,待样品室压力降为零,取出样品。⑥离子溅射镀膜:从样品篮中取出玻片,用银胶将干燥样品粘到样品托上。
导电胶干燥后,将样品托放入离子溅射仪的真空罩内,抽真空。当真空度达0.1托后,加高压1000V,离子溅射镀膜。⑦电镜观察:启动扫描电镜,安装样品,观察细胞表面结构,拍照。
1.6.3透射电镜鉴定①消化间皮细胞,1000r/min,离心5min,3%戊二醛固定,PBS洗涤2次,每次20min;②1%锇酸固定30min,PBS浸洗2次,每次10min;③脱水:用30%、50%、70%、80%、90%、100%酒精逐级脱水,各10min;④100%丙酮固定10min;Epon812浸泡、包埋;⑤LKB-V型超薄切片机切片(70m);H-600透射电镜(日本)下观察、拍片。
2结果
刚从大网膜消化下来的间皮细胞在倒置显微镜下为葡萄串状,50%的间皮细胞大约24h左右贴壁,个别细胞伸展。72h所有贴壁细胞均伸展,呈多形性(梭形、椭圆形、多角形等),边缘不整,细胞呈现拉网状生长,与相邻的细胞相互连接。以后细胞拉网生长现象减少,生长融合呈多角形,大小较为一致,似铺路鹅卵石样外观。细胞经传代培养后,2~4代细胞的形态与生长方式与原代细胞基本无异。5代开始间皮细胞增殖明显缓慢。
2.1免疫组化鉴定
光镜下观察所培养细胞的波形蛋白染色为阳性,是间皮细胞的特征。波形蛋白抗原阳性,CD45、第8因子抗原阴性可排除成纤维细胞、血管内皮细胞和白细胞。
2.2超微结构
扫描电镜下细胞完全铺展,与周围对比不强烈。细胞呈椭圆形或多角形,胞核圆形,位于细胞中央、较小,有核处细胞隆起较厚。细胞表面大量密集的微绒毛,细胞周围高密度的绒毛在背景中形成高密度的晕圈。透射电镜检查:细胞表面存在大量多少不等的微绒毛,细胞浆内丰富的内质网和线粒体,未见Weibelpalade小体。
3讨论
间皮细胞培养中要注意以下几点:①正确确定首次换液时间,避免换液过早,首次换液越晚越好,最好第3天进行,动作轻柔,减少振荡。原代培养头3天尽量勿动培养液,以免干扰间皮细胞贴壁,换液越早丢失的间皮细胞数目越多;②胰蛋白酶消化后,消化液中的间皮细胞不要,因为最先消化下来的往往是活力不好的细胞。终止消化后用培养液吹打下来的细胞活力好,生长快;③注入培养瓶中的间皮细胞要具备一定细胞密度,不要太稀。生长良好的细胞可提供“化学信使”去促进其它细胞生长,因此细胞密集时它们彼此能提供和接受该“化学信使”越长越好;假若过稀,则可因缺乏该化学信使而停止生长、死亡。此外,腹膜供体的年龄越年轻越好。
虽然目前国内、外的文献已介绍了多种间皮细胞的培养方法,但这些培养方法均较为复杂且重复性不高,不能满足科学研究的需要。本实验所建立的体外人腹膜间皮细胞培养模型,操作简单,培养迅速,4~7d即可传代,可重复性强。
【参考文献】
〔1〕MillerG,BomanJ,ShrierI,etal.Naturalhistoryofpatientswithadhesivesmallbowelobstruction〔J〕.BrJSurg,2000,87:1240
〔2〕刘洪斌,李东华,郭世铎.腹腔粘连形成机制及治疗研究进展〔J〕.中国中西医结合外科杂志,2005,11(1):84-86
〔3〕WuYJ,ParkerLM,BinderNE,etal.Themesothelialkeratins:anewfamilyofcytoskeletalproteinsidentifiedinculturedmesothelialcellsandnonkeratinzingepithelia〔J〕.Cell,1982,31:693
【关键词】 腹泻/中医药疗法;健脾温肾;镇静安神;老年人
慢性腹泻是老年常见病,多发病,直接影响老年人的生活质量,严重者可造成营养不良、贫血、电解质紊乱,甚至危及生命。笔者采用健脾温肾镇静安神法治疗老年慢性腹泻30例,取得满意疗效,现报告如下。
1 临床资料
本组30例均为我院门诊患者,男14例,女16例;年龄60~80岁;病程6个月~12年。均符合《中医病症诊断疗效标准》:(1)大便稀薄或如水样,次数增多,可伴有腹胀腹痛等症。(2)慢性久泻起病缓慢,病程较长,反复发作,时轻时重。(3)饮食不当,受寒凉或情绪变化可诱发。
2 治疗方法
基本方:黄芪30 g,党参10 g,茯苓15 g,白术10 g,茯神10 g,山药15 g,柴胡6 g,升麻6 g,芦根10 g,芡实10 g,陈皮10 g,钩藤10 g,炒薏苡仁20 g,补骨脂10 g。加减:腹痛喜暖加吴茱萸10 g,食少纳呆加鸡内金5 g。每日1剂,水煎2次,早晚分2次服。15 d为1个疗程,连服2个疗程。
3 疗效标准与治疗结果
3.1 疗效标准 参照《中医病证诊断疗效标准》。治愈:大便正常,其他症状消失,临床检验正常;好转:大便次数明显减少,其他症状改善;未愈:症状未见改善。
3.2 治疗结果 服药2个疗程,30例中,治愈18例,好转9例,无效3例,总有效率90%。
4 讨论
现代医学认为,腹泻是消化系统疾病中的一种常见病,是由于胃肠道的分泌、消化、吸收及运动功能障碍,导致粪便稀薄,次数增加[13]。腹泻对老年人损害尤为严重,大量水分丧失,会使人体处于脱水状态,导致血容量减少,血液黏稠度增加,血流缓慢,容易形成血栓,并堵塞血管。腹泻时由于离子紊乱,可引起心律失常,对患有心血管疾病的老年人更为不利,由于老年人抵抗力弱,对药物的耐受性降低,抗生素治疗,疗效不稳定,且容易造成菌株紊乱。采用健脾温肾镇静安神法治疗老年慢性腹泻,既可以提高机体抵抗力,又可以除病祛邪,且不易复发,疗效肯定[45]。
【参考文献】
[1]杨崔领.辨证治疗慢性溃疡性结肠炎验案[J].吉林中医药,2004,24(1):4344.
[2]朱晓骏,宋郁珍.肠易激综合征的中医研究进展[J].吉林中医药,2004,24(1):54.
[3]常洪雁.慢性结肠炎直肠炎的治疗与护理[J].吉林中医药,2004,24(2):43.
华北行政委员会交来你院1952年法秘行字第316号呈及刘院长所面谈,为关于妇女离婚后带产问题提出的处理意见,经研究并报请中央人民政府最高人民法院核示后,兹分别答复如下:
(一)第一项意见:“此项问题的处理,应限于新婚姻法颁布以后的,新婚姻法颁布以前的不再处理。如为群众所提出者,可加以说服”。这对一般案件的处理是可以的,但在新婚姻法颁布以前的案件中,如有特殊情况,也应根据不同的具体案件,酌情保护妇女应带的财产,不应完全受时效的限制。
(二)第二项意见:“妇女应带的财产,应予保障,如在离婚时未判带财产或带的财产过少者,应根据婚姻法的规定予以重新处理。但须根据男(男方离婚前)女双方经济情况恰当的处理”。同意此项意见。