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在《基础教育课程改革纲要》中明确提出"要使学生具有初步的环境意识",新课标也强调,"增强对环境、资源的保护意识和法制意识,初步形成可持续发展的观念,逐步养成关心和爱护环境的行为习惯。因此,在地理教学实践中,应逐步培养学生的环保意识。
1.充分挖掘现行教材中能够进行环保意识培养的内容,通过课堂教学使学生获取环保知识
要讲清中学地理教材中有关自然资源的利用和保护的知识。初中地理教材中的世界气候,自然景观的地区差异,世界的自然资源和中国的气候、河流、湖泊,中国自然资源的合理利用和保护,及中国的区域地理差异等知识。教师讲授时,不仅要讲清楚自然资源的概念,而且要详细讲解有关自然资源的利用和保护的知识。在讲授黄河时,要说明黄河及流域概况的知识,同时要指出,黄河所流经的黄土高原在历史上是一片"草丰林茂,沃野千里的绿洲",但由于常年毁林开荒,植被遭到严重破坏,造成大量的水土流失和生态失调,导致泥沙淤积下游,形成地上"悬河",给广大民众带来忧患。同时还应着重介绍,解放以来黄河两岸的人民在党的领导下,坚持治理改造黄河,化害为利,趋利避害,使晋陕等沿河省区出现了田园似锦、棉麦丰收的喜人景象,生态面貌发生了巨大变化。这样既体现了爱国主义教育,又进行了具体生动的环境教育,寓环境保护教育于地理课的教学之中。
新的课程标准把环保、人口、可持续发展等,作为高中地理教学的重点,高中地理教材把人类对生活的地理环境、人类活动与地理环境的关系作为核心内容,使学生树立人与自然协调的可持续发展观念,培养学生关注和保护环境的意识。因此,通过讲解使学生认识到自然资源不是取之不尽,用之不竭的,环境对废弃物的容纳能力是有限的,对资源的无节制掠夺开采,对环境的任意污染与破坏,必然受到自然界的惩罚,通过破坏环境来侵犯他人的利益,危及子孙后代的生存,必将受到社会的谴责,从而明确人对自然的道德责任和义务,树立"保护环境光荣,破坏环境可耻"的新型社会主义荣辱观。
2.在课堂上,通过时事和历史事件让学生认识到环境污染的危害性
科学技术突飞猛进,人类从自然界提取的资源越来越多,排放的废弃物也与日俱增,资源消耗过大,生态破坏加剧,已使地球不堪重负,环境污染和生态破坏对人类生存和发展构成了严重威胁,在地理课堂上通过时事和历史事件问题,适时的渗透在地理教学中,使学生进一步了解环境污染对人类生存的影响,窥视环境问题的严重性。如: 2003年,在我国发生的非典疫情,它与生态环境的变化存在着内在的、必然的联系,环境的急剧恶化诱发水生物、野生动物和致病微生物的突变,而滥捕滥杀、食用野生动物的行为使致病微生物传播到人体,进而危害人类的身体健康。在地理课上通过时事和历史事件的渗透教学,使学生学到地理知识的同时,还接受到环境教育,通过对这些事件的了解研究,让学生学会用地理学知识分析、评价这些事件的形成机制、演变过程与对策。
3.尝试地理教育方式方法的改革,有效培养中学生的环保意识
3.1 通过设计争议性问题开展讨论,培养中学生的环保意识。世界上的事物是复杂的,许多事物的存在既对人类的发展有益,也可能对人类有潜在的危害。科学技术是把双刃剑(如农药的使用、氟利昂利用的兴衰、核能发电等),使学生认识到这点是非常重要的。环境问题的存在往往受多种因素的制约,在不同的地区,不同的时期有不同存在的形式;不同阶层的人对同一环境问题也会有不同的看法,因此,在地理教学中设计争议性问题,组织学生进行多方面的讨论,让他们通过内部矛盾的冲突,深入理解环境问题,提高自身的环保意识。如在讲高中地理 "新能源"一节时,设计"要不要发展核电"这一争议性问题,引导学生进行思考,组织讨论。核电站是全世界公众关注的环境问题焦点之一,有些学生认为核能是一种清洁、廉价、能量密集、地区适应性强、具有巨大发展前景的新能源,应积极发展核电站;另外一些学生则认为前苏联切尔诺贝利灾难性的核事故固然罕见,但人们不能忽视来自具有很高放射性的核废料的威胁,应削减或停止核电发展计划。学生看问题的角度不同,就会产生对核电不同的看法。通过激烈的争论,其意义远不止是让学生知道应该不应该发展核电站。
3.2 重视开放性教学,加强环境教育,培养学生的多方面才能。所谓开放性教学就是指环境教育中利用一些开放性教学材料,这些材料不限于常用的课本,教师不给出固 定格式的结论,而是由教师指导学生通过搜集、阅读文字资料,实地调查问题现状等学习活动,使学生自己得出恰当的结论。
3.3 充分利用各种实践活动,将环境知识转化为环保意识。环境意识的形成必须依赖于学生的实践,而且只有在他们的实践中才能表现出来。如果没有接触过协调环境关系有关的活动,那么热爱环境、保护环境只能是一句空话,所以,在地理教学中必须十分重视理论联系实际,加强环境教育。
(1)把地理知识与周围看得见、摸得着的环境紧密联系起来。如在学习选修五"自然灾害"这册书中,要求学生根据自身的感受,了解我们身边发生的自然灾害,特别是经常影响本地的旱涝,寒潮等灾害性天气,使学生们知道这些主要是由自然原因产生的环境问题,人类只有认识自然规律,趋利避害,按客观规律办事,才能收到事半功倍的效果。
(2)结合参观访问,增加感性知识,深化理性知识的学习。如在学习工业"三废"的危害及治理的内容后,带领学生到中牟县汽车产业园区考察,参观工厂的污水处理设备,并听厂领导的介绍。同学们对工业"三废 "的治理过程有了清晰的了解,不但获得环保的技能知识,而且在亲身的感受中潜移默化地提高了环保意识。
(3)结合春游,让学生在大自然中体会环境保护的必要性。如去年我班到中牟县雁鸣湖景区春游,我就紧紧抓住这个机会,引导学生在观察中思考讨论:"雁鸣湖"景区旅游业的现状、发展与环境保护的关系;建造雁鸣湖休闲度假村的实际意义,为什么政府要花这样多的资金造这个庞然大物等等。
环境污染、资源短缺、生态危机等已经成为世界性难题。造成环境污染的因素有很多, 其中化学污染对环境、人类健康和社会发展的危害越来越受到全社会的普遍关注。中学阶段是一个人成长和发展的关键时期,在中学化学教学中加强对学生环境保护意识的教育,对他们今后走向社会具有潜移默化的作用。因此在中学化学教学中渗透环保意识是每一个中学化学教师义不容辞的责任。化学与环境密切相关,化学中的环境保护素材十分丰富,在化学教学中开展环保教育,有着得天独厚的优势。那么,怎样在化学教学中渗透环保教育呢?
一、在传授化学知识的过程中渗透环保教育
把化学知识教学与环境保护教育有机结合起来,既能提高学生的环保意识,又能增强学生学习化学的兴趣。例如,学习“空气”时,让学生了解本来空气的成分是比较固定的,适合人类和动植物的生存,但近几百年来,工业污染改变了空气的组成,从而改变了我们的生态环境。在介绍煤时,让学生了解煤的组成,煤燃烧时会释放一氧化碳、二氧化碳、二氧化硫、二氧化氮等,其中一氧化碳是剧毒物质,二氧化碳会引起温室效应,二氧化硫、二氧化氮会使雨水变酸。在讲授水与氢时,让学生在认识水对于人类生活、工农业生产的重要性和水资源的有限性的基础上,知道工业废水、生活污水的任意排放会造成水体污染、水质恶化,以至给人类造成灾难。学习水的净化等知识时,向学生介绍硬水对人体健康、人们生活和工业生产的不利影响,使学生了解硬水软化的方法和基本原理,学会处理硬水。在二氧化碳的教学中,让学生了解二氧化碳循环对生态系统的作用,二氧化碳与温室效应的关系,一氧化碳对空气的污染,煤气中毒、吸烟危害健康与一氧化碳毒性的关系及一氧化碳中毒的预防。在介绍氮、磷、钾等化肥时,既介绍化肥对提高农作物产量的积极作用,又介绍其对农产品、土壤、水体造成的污染。……
二、在化学实验教学中渗透环保教育
化学实验教学是实施环境教育的重要途径。在化学实验教学中,教师可通过言传身教,引导和增强学生的环保意识,使学生养成良好的环保习惯。
1、以环保意识备好实验课。备有关实验课时,要设计好对学生进行环保教育的内容,以及有关实验的教学内容和方法,特别是在有毒气体的实验中,要做好毒气泄漏的预防、处理、吸收及停止实验的方法设计,实验中废弃物的处理、回收与再利用的方法设计等。
2、以身作则,规范实验操作。教师的行为是一种无声的语言,因此教师以身作则、规范实验操作对进行环保教育有重要的意义。在实验教学中,教师要言行一致,做到实验操作正确规范,尤其是涉及环境教育的实验。
3、改进实验,体验环保。
在不影响实验结果的前提下改进实验,尽量减少实验中有毒或有害物质对人的危害及对环境的污染,既是实验安全的要求,又有利于对学生进行环境保护教育。例如,可燃物燃烧条件的探究实验,可将现有仪器改装成能防毒气逸出的实验装置;又如,氨分子扩散的探究实验,可以将氨水改为醋酸,将酚酞改为紫色石蕊试液。 转贴于
4、开展微型实验,减少环境污染。开展微型实验是当前国际上化学实验教学改革的趋势。这种实验是用尽可能少的试剂来获得比较明显的反应结果和准确的化学信息,实验中反应物和产物的量都很少,产生的有害物质对环境造成的污染可降到最低程度。如在金属的化学性质探究实验中,改在试管中进行的实验为在点滴板上进行。
三、在丰富多彩的课外活动中开展环保教育
结合化学教学的课外活动既能培养学生理论联系实际的能力,又能相机开展环境教育。
1、组织学生参观化工厂。结合课堂知识,带学生去参观附近的化工厂,可引导学生用所学的知识去分析车间的生产流程,并提醒学生注意工厂对废水、废渣、废气的处理。
2、举办环保科技知识专题讲座。结合目前国内外形势和环境科学的热点问题,根据学生的知识基础,可定期给学生举办环境保护知识专题讲座,如“世界著名的公害事件”、“吸烟与健康”、“温室效应”、“酸雨的形成与危害”等,在开阔学生视野的同时使学生受到良好的环境教育。
3、指导学生课外阅读。利用课余时间,可指导学生阅读与环境知识有关的报纸、杂志和科普读物,搜集整理有关环境污染与保护的资料,并要求学生做读书笔记。另外,还可利用学校的黑板报宣传栏、广播室、手抄报等多种媒体,大力宣传环境知识,营造环境教育的良好氛围,使学生都参与到环保活动中来。
2006年初,华晨宝马在中国大陆的本地供应商数量为46家,本地采购额为8.7亿元,到2006年底,本地采购额已达20亿元。目前,本地供应商数量已经发展到超过60家。预计到2007年底,本地供应商数量将达到100家,本地采购额将增长80%,达到36亿元。
华晨宝马汽车有限公司总裁兼首席执行官吴佩德先生表示:“稳步推进本地化采购进程是华晨宝马的长期战略。这不仅仅是为了满足政府对于国产化率的要求,同时也为了提升我们企业产品的市场竞争力。中国是一个拥有巨大商机的市场,华晨宝马将继续遵循高档品牌战略,与供应商保持和扩大共赢的合作伙伴关系,在帮助中国的汽车零部件企业走向世界的同时,不断提高企业的自身实力,努力成为中国高档轿车市场上的领先企业。”
华晨宝马的供应商发展战略建立在三个基石上:宝马集团的全球供应商在中国的独资企业、合资企业和中资企业。不管是现有和潜在的合作伙伴,宝马汽车的供应商必须完全满足两个标准:宝马全球统一的质量标准和全面的竞争力。宝马集团生产材料采购高级副总裁Klaus Richter博士在向华晨宝马的供应商介绍宝马集团全球采购体系时表示,凡是向华晨宝马供货的供应商,都有机会进入到宝马集团全球的采购体系。因为宝马集团的全球采购系统是一个公开透明的平台。所有希望进入这个系统的供应商必须在产品质量上达到宝马全球统一的质量标准,而且要有全面的竞争力。例如,中国的戴卡轮毂制造有限公司马上就成功地进入宝马全球采购体系,为BMW 5系提供轮毂。
由于华晨宝马采用的是宝马集团全球统一的质量标准,所以,中国大陆的供应商如满足质量和竞争力两方面的要求,都将能有机会进入宝马集团全球采购系统。
丰田任命第一位常驻中国本部长
丰田汽车公司(以下简称丰田)于6月22日召开2007年股东大会及董事会议,通过公司重要决议并对公司部分董事成员进行改选任命。
一个女人哭天喊地求饶:“求求你别再打我了!”一个男人却满不在乎道:“你是我老婆,我想怎么打都可以!”女人一边抹泪,一边咬牙说:“你再打我,我就和你离婚!”男人却笑得更狂妄:“离婚?没那么容易,你敢提离婚,我就敢打得更严重!”
当不幸遇到这样一个男人,女人就该束手无策了吗?她希望能在离婚前,就申请到一份人身保护令―在判决离婚之前不再遭受暴力、不允许对方靠近,女当事人的权益能得到法律上的保障吗?
误嫁暴力丈夫,
伤心妻子逃离黑暗生活
因为闪婚,导致看错眼嫁错人,原本以为是幸福的开始,不料却掉进了深渊。
1983年,唐芳出生于江苏省无锡市,大学毕业找到了一份满意的工作。
2009年9月,经一位亲戚介绍,她认识了比自己大5岁的耿天。耿天大学毕业后开了一家网吧,生意还算不错。虽然谈不上相互有多喜欢,但他们觉得彼此年龄都不小了,又是熟人介绍,于是在家人的催促下,3个月后两人就举行了婚礼。
婚后,唐芳才发现丈夫很爱和一群哥们儿喝酒,经常流连在外,她心里难免有一些怨言。
一次,耿天聚会回来,依然满身酒气。唐芳吓坏了,就说了丈夫几句:“你喝了酒怎么还开车,万一出事怎么办?”没想到耿天非但不听劝,反而冲唐芳发火:“我的事你少管,你就这么巴不得我出事啊?”唐芳一听也来了气:“你整天在外面喝酒,家里什么事都不管!看看你交的都是什么朋友,居然让你酒驾!”
没想到这句话惹怒了耿天,他忽然冲过来狠狠打了唐芳一个耳光:“我朋友怎么了?你敢说我兄弟!”唐芳被打蒙了,长这么大,她还从来没被人打过。
耿天却不耐烦地一把扯过唐芳的头发,狠狠地说:“别在我面前哭哭啼啼的,你还真当自己是公主啊!”然后他一脚把唐芳踹倒在地,自己四仰八叉地往床上一躺,不一会儿就睡着了。
当晚,唐芳睡在了客厅的沙发上,以泪洗面。第二天一早,酒醒后的耿天端着早饭走到她的面前,支支吾吾地说:“小芳,我昨天晚上喝多了,我保证以后不会再这样,你原谅我好不好?”看着他像个做错事的孩子一样站在自己面前,唐芳的心又软了下来,她暗自祈祷:也许耿天只是喝多了才会对自己动手,他真的不是故意的。
然而,日子却并未像她期望的那般晴朗起来。
2010年11月,有人举报耿天在网吧里开设赌场,民警搜到几台赌博机。网吧被查封,耿天也被判处有期徒刑1年6个月,缓刑2年。耿天心烦意乱,每天更是靠喝酒麻醉自己。
唐芳几次劝说丈夫重新振作,找一份安稳的工作。然而耿天完全听不进去,对她大吼大骂,直至拳脚相加。喝酒之后的耿天更是毫无理智,经常顺手抄起身边的东西就朝唐芳砸过去,杯子、盘子、椅子,什么顺手用什么。唐芳经常被打得遍体鳞伤,但她依然心存侥幸,也许等耿天找到工作后就不会这样对她了。
2012年10月底,唐芳在忐忑不安中生下了女儿。新生命的降临带来了很大的喜悦,同时也增加了巨大的压力。唐芳愁得唉声叹气。
2012年底,迫于生计,耿天终于勉强找了一份销售的工作。
2013年7月底,耿天醉醺醺地回到家。唐芳皱紧了眉头:“你怎么又喝这么多酒。”耿天嘿嘿一笑:“我辞职了。”原来他因为表现不好挨了主管一顿骂,一怒之下辞职不干了。唐芳又气又急:“你好不容易才找到这份工作,怎么能说辞职就辞职?”耿天忽然抬起头,用发红的双眼瞪着她,目光有些可怕:“你是不是觉得我犯过错,有过污点,就和别人一样看不起我?”
看到丈夫的眼神,唐芳的心里“咯噔”一下,耿天每次喝醉酒要打她,都是这种眼神。她悄悄朝门的方向挪过去,没想到耿天一把拉住她,吼道:“你要去哪儿?”唐芳支支吾吾地说:“我去客厅倒杯水。”“撒谎,你就是看不起我!你和他们都一样,都看不起我!”看着已近疯癫的丈夫,唐芳吓坏了。她拼命挣扎,却被丈夫推到了墙角,劈头盖脸又是一顿暴打。
这次挨打,让唐芳彻底寒了心,对耿天改过自新不再抱幻想。耿天就像一枚失控的炸弹,随时都会爆发,她不能再把自己和孩子置身在这样危险的环境中。对这个家,她再无半点儿留恋。
“陪审团”与保护令,
双重保障让她不再畏惧丈夫
2013年7月31日,唐芳借口去超市买奶粉,偷偷来到江苏省无锡市崇安区人民法院。
在社区居民委员会举办的法制宣传活动中,唐芳知道该法院有一个“涉及家庭暴力婚姻案件合议庭”,专门审理家暴案件。决意离婚的唐芳找到了合议庭的法官周溧,求她帮忙。
唐芳卷起袖子让周溧看她的伤口,几乎是旧伤未好又添新伤。周溧十分同情,关切地问唐芳,是不是真想离婚?
唐芳决绝地说:“我当然想和他离,可我不敢啊!一旦他知道我离婚,他会打死我的!我真的被他打怕了,求求你帮帮我。”
周溧知道唐芳的顾虑是有道理的,她接触过许多处于家暴中的女性,一旦她们提出离婚,往往会受到丈夫更加凶狠的报复。
“周法官,能不能在我前发一份保护令给我?否则我不敢离婚,他打起人来太凶了!”唐芳提出了一个好的办法。但周法官却缓缓地摇了摇头。
看着唐芳的眼睛亮起来又黯淡下去,周法官一阵心痛,她决定好好研究一下相关法律,争取能帮助到唐芳。
最高人民法院2008年在《涉及家庭暴力婚姻案件审理指南》中首次提到“对被害人采取保护性措施,包括以裁定的形式采取民事强制措施,保护受害人的人身安全”,俗称人身保护令。
我国现行法律和司法解释中,并没有规定人身保护令是诉前还是诉后签发。在以前的司法实践中,从没有签发过诉前人身保护令。但从法理上来说,签发诉前人身保护令也是可行的。
周溧将唐芳的情况汇报给审判委员会,提出了“诉前人身保护裁定”的构想。
崇安区人民法院很重视这项提议,审判委员会全体委员一致认为,“诉前人身保护裁定”的构想很好,可以尝试施行。根据唐芳的具体情况,法院邀请了几位心理学、法学、医学、社会学等领域的专家,组建了一支“涉及家庭暴力婚姻案件专家委员会”,让他们参与到案件中来,在案件判决前从专业的角度给出意见。“专家委员会”有点类似于国外的陪审团,为法官判案提供民意和科学依据。
决议一通过,唐芳彻底抛开了顾虑,立即向法院递交了诉前人身保护令申请。法院迅速派法官走访了唐芳所在小区的部分住户以及唐芳、耿天的亲友。专家委员会也对唐芳遭受家暴的等级进行了评估,认为她遭受到严重家暴的情节属实,他们对唐芳案给出可以签发人身保护令的意见。
无锡市崇安区人民法院在48小时内作出裁定,签发了诉前人身保护令:禁止被申请人耿天殴打、威胁唐芳及其母亲;禁止耿天骚扰、跟踪唐芳,与女儿进行不受欢迎的接触;禁止耿天未经同意与唐芳进行不受欢迎的非正常接触。
此时,一向唯我独尊的耿天还蒙在鼓里,对妻子所做的毫不知情。
当唐芳回到家里时,耿天如往常一样,大声喝道:“出门这么久,你死哪儿去了?这都几点了还不回家做饭?”唐芳对他不理不睬,只顾低着头收拾东西。耿天的火气“腾”地冒了出来,走过去一把拽住了唐芳的手臂:“你聋了吗?我在跟你说话!”唐芳毫不畏惧地抬起头,平静地看着耿天:“你放开我,我已经向法院提出离婚诉讼了,以后我和你再也没关系了。”
耿天愣了几秒,顿时暴怒,扬手就要打她:“你胆子不小啊!想离婚,没门!”
然而,面对他的暴力行为一向默默忍受的唐芳,却第一次昂起了头。她一把推开耿天,淡淡地说:“我已向法院申请了人身保护令,我现在受法律保护,你再打我就是违法!就要被拘留、坐牢!”
耿天扬起的手停在了半空,再也不敢打下去。
看着曾经耀武扬威的丈夫现在束手无策,唐芳感到无比解气。这几年来压抑在心底的悲伤痛苦,此刻彻底释放。眼睁睁地看着唐芳收拾完东西出门,耿天窝火极了,一道人身保护令,竟能让唯唯诺诺的妻子有了反抗的勇气,他咽不下这口气。
心里烦闷的耿天又想出去喝酒,出门后却看见楼道里围着一圈人,不时指指点点,似乎还隐约听见有人提到自己的名字。等他靠近,大伙都四散开来。耿天凑过去一看,公示栏上竟然贴着唐芳的那张诉前人身保护令。
原来,“涉及家庭暴力婚姻案件专家委员会”中的妇联和公安等专业部门的工作人员为保障唐芳不再受到侵害,让小区的居委会公示了保护令的复印件,联合监督耿天的行为。
耿天恼羞成怒,他立即出门打车,想要到唐芳的娘家找她理论。然而在唐芳家的小区门口,他就被拦了下来,保安指着压在值班室办公桌上的保护令说:“我们已经收到了通知,唐芳也把你的照片给了我们,委托我们保护她的安全。你想进入小区可以,但不能去唐芳家。”耿天怒火冲天,却又无可奈何,只能悻悻地离开。
不服判决,丈夫提出上诉
由于不服气,耿天不愿接受诉前人身保护令,拒不签字。为此,法院工作者找耿天进行了专门谈话,“涉及家庭暴力婚姻案件专家委员会”的委员们也迅速展开工作,派出了崇安区妇联主席焦元弘和婚姻家庭指导师苏怡溪进行旁听。
谈话中,耿天承认了自己曾殴打唐芳,但他却认为这是小事,法院是小题大做:“我是打过她,但是哪家过日子没有过磕磕绊绊?夫妻间有矛盾很正常,我就不信哪家夫妻没有吵过嘴动过手。”
焦元弘严肃地对他说:“你的所作所为已经超出了一般夫妻吵架斗嘴的界限,构成了家暴。”耿天听后,沉默不语。苏怡溪认为,有暴力行为的人一般都有某方面的人格缺陷,她对耿天进行了专业的心理疏导,希望他能直面自己的错误并改正缺陷,尽量减小这些负面情绪对他人生的影响。
经过法庭的教育,耿天终于同意签收诉前人身安全保护裁定,并承诺在裁定的30天有效期内不会有暴力行为。
不久后,耿天收到了法院的传票,无锡市崇安区人民法院开庭审理唐芳离婚的案件。唐芳依法请求将保护令延长至6个月。
专家“陪审团”的成员经过商讨,一致赞同法院批准唐芳的请求,他们对此案给出了第二份意见:通过与耿天的谈话及走访调查,证实耿天有严重的暴力倾向,不适合照顾孩子。建议法院支持唐芳的离婚请求,并将女儿判给唐芳。
2013年9月12日,无锡市崇安区人民法院开庭审理了此案。最终判定唐芳与耿天离婚,女儿由唐芳抚养。考虑到耿天没有固定收入,因此判决他每月支付女儿抚养费350元,并根据耿天对唐芳家暴行为造成的伤害程度,要求他赔偿唐芳3万元精神损害赔偿金。
面对判决结果,耿天难以接受。曾经,他在唐芳面前是绝对的强者,所做的一切唐芳都不敢反抗。而如今,在受到法律保护的唐芳面前,他变成了一个“弱者”。
在法院门口,耿天拦住了唐芳,冷笑着说:“你现在得意了,你竟然真的敢提出离婚。”
从前的唐芳看耿天的眼神都是躲闪的、怯懦的,而现在,她可以坦然无畏地面对耿天:“的确,我曾经很怕你。但人身保护令给了我勇气。和你在一起的日子,我只觉得痛苦,以后我终于能带着孩子好好生活下去了。”
耿天咬牙切齿地说:“你想带走女儿,做梦!”
唐芳坚定地说:“法院已经把孩子判给我了,我会好好把她养大。你放心,我不会告诉她,爸爸是一个只会打人的酒鬼,不然她会觉得羞耻和自卑。”
唐芳的这句话激怒了耿天,他暴跳起来,大吼着掐唐芳的脖子:“你说什么?你敢再说一次!”
这场混乱很快引来周围人的注意,几名法院工作人员迅速赶来,将耿天拉开,严肃警告他:“唐芳现在受法律保护,你如果再敢违反人身保护令,对唐芳产生暴力行为,我们会追究你的法律责任!”
看着唐芳被护送出法院的大门,耿天恨得咬紧了牙。然而,他再也不能像从前一样,肆意在唐芳的身上发泄怒气。
法院判决离婚后,耿天成为了小区里的“名人”,邻居们在背后议论纷纷,耿天的父亲受不了儿子离婚的打击,脑溢血住进了医院。
耿天压抑了一肚子的怒火无处发泄,唐芳申请的保护令,让耿天依然无法接近她。
耿天认为离婚判决对自己不公平,内心不忿的他提出了上诉。
耿天请来了专业律师为自己辩护,除了不同意离婚之外,耿天还对人身保护令提出了他的质疑:“禁止我骚扰、跟踪唐芳,什么叫骚扰跟踪?我只要和她碰到一起就说我骚扰她,难道她走的路我就不能走了?还禁止我与女儿进行不受欢迎的接触,那什么叫不受欢迎?”
对耿天的质疑,周法官在接受采访时说:“法院对唐芳发出人身保护令,是因为经过调查,确认唐芳和女儿处于暴力威胁中。唐芳目前是女儿的法定监护人,人身保护令同样适用于女儿。但这种禁令是有时效性的,只是在一个阶段对弱者的一种保护,并没有剥夺耿天探视女儿的权利。”
【摘要】 【目的】 探讨不同温度和培养基在申克孢子丝菌酵母相转化中的作用。【方法】 将4株临床分离菌株分别接种于SDA、PDA、BHI、50 mg/kg羊血BHI及5 mg/kg GSBHI 5种培养基平皿上,每种培养基接种5个平皿,分别置于25 ℃、35 ℃、36 ℃、37 ℃及38 ℃含体积百分数为5%CO2的恒温箱中培养。观察菌落生长情况并计算酵母细胞转化率。【结果】 在38 ℃,平皿转化率为25%(只有1株菌发生了转化);在35 ℃和37 ℃时,平皿转化率分别是60%和85%;而在36 ℃时平皿转化率仅为45%。使用50 mg/kg羊血BHI和0.5%GSBHI培养基培养,65%培养皿上的菌株发生了酵母相转化,使用BHI培养基培养,45%培养皿上的菌株发生了酵母相转化,而使用SDA和PDA培养基培养,只有20%培养皿上的菌株发生了酵母相转化。37 ℃时,有3株菌在BHI、50 mg/kg羊血BHI和5 mg/kg GSBHI培养基上的酵母细胞转化率均达到90%,1株菌在SDA、PDA和BHI培养基上的转化率均低于10%。【结论】 温度是影响申克孢子丝菌酵母相转化的关键因素,培养基的营养成分亦是影响转化效果的重要因素。
【关键词】 申克孢子丝菌; 酵母相转化; 温度; 培养基
Abstract: 【Objective】 To investigate the effect of temperature and media on mycelium-to-yeast transformation of Sporothrix schenckii. 【Methods】 The clinical isolates 4 were inoculated on plates of media after reactivation. Each isolate was inoculated on plates of SDA, PDA, BHI, 50 mg/kg goat blood BHI and 5 mg/kg GSBHI, and 5 plates of each media were prepared because isolates of each meida were incubated at 25 ℃, 35 ℃, 36 ℃, 37 ℃, and 38 ℃. Growth of Sporothrix schenckii was observed and rates of transformation were calculated. 【Results】 At 38 ℃, the transformations rates were 25%(the only one Strain converted yeast). At 35 ℃ and 37 ℃, the transformations rates were 60% and 85%, respectively. At 36 ℃, the transformations rates were 45%. There were 13 of 20 plates converting yeast when 5% goat blood BHI and 0.5%GSBHI were used, 9 of 20 plates when BHI was used, 4 of 20 plates when SDA and PDA were used. At 37 ℃, transformation rates of 3 isolates reached 90% on medium of BHI, 50 mg/kg goat blood BHI和5 mg/kg GSBHI; However, the transformation rates of 1 isolate were less than 10% on SDA, PDA, and BHI. 【Conclusion】 Temperature is the key factor that affects mycelium-to-yeast transformation of Sporothrix schenckii, nourishments of media may also be necessary for transformation.
申克孢子丝菌属于双相型真菌,在自然界或室温培养为菌丝相,在体内或37 ℃培养为酵母相。申克孢子丝菌感染可导致孢子丝菌病,不仅可以引起皮肤组织的病变,还可侵犯内脏器官引起系统性病变,严重危害着人类的健康[1-2]。酵母相是申克孢子丝菌的致病相,申克孢子丝菌在体内从菌丝相到酵母相的转化是致病的一个关键步骤[3-4]。目前关于酵母相转化的研究多集中在基因水平[5-6],而对于与致病性同样紧密相关的生化特点研究较少。本文研究了不同温度和培养基在申克孢子丝菌酵母相转化中的作用。
1 材料与方法
1.1 实验菌株
菌株SUMS0382、SUMS0383、BMU02035和BMU00471经形态学和分子生物学鉴定为申克孢子丝菌。SUMS0382和SUMS0383分离自我科淋巴管型孢子丝菌病患者,BMU02035和BMU00471由北京大学真菌和真菌病研究中心惠赠,亦分离自孢子丝菌病患者。
1.2 培养基
沙堡弱琼脂(Sabouraud?蒺s agar, SDA)基、马铃薯葡萄糖琼脂(potato dextrose agar, PDA)基、脑心浸汁琼脂(brain heart infusion agar, BHI)基、含50 mg/kg去纤维蛋白羊血清的脑心浸汁琼脂基(brain heart infusion agar plus 50 mg/kg goat blood, 50 mg/kg羊血BHI)及含5 mg/kg葡萄糖脑心浸汁琼脂基(brain heart infusion agar plus 5 mg/kg Glucose, 5 mg/kg GSBHI),pH值均为7.0,购自广州市迪景微生物技术有限公司。
1.3 菌株活化
将实验菌株接种于 PDA 斜面培养基上,在含体积分数为5%的CO2 25 ℃恒温箱中培养,每隔7 d传代1次,连续传代2次,光镜下检查菌落形态,以保证菌株的纯度和生长活力。
1.4 酵母相转化
于超净工作台内,采用划线接种法将每株菌分别接种于SDA、PDA、BHI、50 mg/kg羊血BHI及5 mg/kg GSBHI 5种培养基上,每种培养基接种5个平皿,分别置于25、35、36、37及38 ℃含5%的体积分数为CO2恒温温箱中培养。观察菌落生长情况,每5 d传代1次,连续传代3次。
在所有平皿上的菌株传代3次生长至第5天时,用接种环挑取少量菌落,置于灭菌载玻片上,滴加乳酸酚棉兰或酚红染色后,置于光学显微镜下观察菌落形态。参照文献[7]计算每个平板上菌株的酵母细胞转化率,转化率 > 10%为酵母相转化成功。
1.5 统计学分析
利用精确概率法对所有菌株在不同温度和培养基下转化率的差异进行统计学分析,统计软件使用SPSS 16.0, P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 菌株活化
4 株申克孢子丝菌经活化后均生长良好,形成棕褐色有皱褶的典型菌落。
2.2 酵母相转化
2.2.1 申克孢子丝菌在不同温度的酵母相转化
在25 ℃的培养条件下,5种培养基上生长的菌株均表现为明显的丝状菌落,不能转化为酵母相。在38 ℃时,25%培养基平皿上的菌株发生了酵母相转化(为菌株BMU00471,其余菌株均不能生长)。35 ℃和37 ℃时分别有60%(12/20)和85%(17/20)培养基平皿上的菌株发生了酵母相转化。36 ℃时仅有45%(9/20)培养基平皿上的菌株发生了酵母相转化(表1)。菌株在各温度下的转化率的差异具有统计学意义(P < 0.001)。在光镜下计数不同温度时50 mg/kg羊血BHI培养基上生长的4株申克孢子丝菌酵母细胞的转化率,发现所有菌株在35 ℃和37 ℃的转化率均明显高于36 ℃和38 ℃,对于菌株BMU00471,其在35 ℃和37 ℃的转化率均可达到90%;38 ℃时所有菌株的转化率最低,菌株SUMS0382、SUMS0383、BMU02035均低于10%(图1)。不同温度下的酵母相菌落均在转种后的第2天开始出现,在第2 ~ 4天生长迅速,在第5天生长变得缓慢。在含5%去纤维蛋白羊血清的BHI培养基上,菌株BMU00471在35、36、37和38 ℃均可以转化为酵母相。在35 ℃和37 ℃时,酵母细胞生长良好,光镜下观察发现90%的菌丝可转化为酵母细胞;在36 ℃,酵母相菌株生长相对缓慢,光镜下仍可见到较多的菌丝片段和孢子;在38 ℃,菌株生长速度较36 ℃时快,但在光镜下发现转化的酵母细胞数量较36 ℃少(图2)。
2.2.2 申克孢子丝菌在不同培养基上的酵母相转化
在营养丰富的50 mg/kg羊血BHI和5 mg/kg GSBHI培养基平皿上,酵母相转化率均为65%,且生长最为旺盛;BHI培养基次之为45%;SDA和PDA培养基最少均为20%,且菌株在不同培养基上的转化率的差异具有统计学意义(P = 0.002,表2)。35 ℃时,在SDA和PDA培养基上菌株以菌丝相生长,而在BHI、50 mg/kg羊血BHI和5 mg/kg GSBHI培养基上则以酵母相生长。36 ℃时,在SDA和PDA培养基上菌株不能生长,在BHI、50 mg/kg羊血BHI和5 mg/kg GSBHI培养基上则以酵母相生长。37 ℃时,菌株SUMS0382、BMU02035和BMU00471在BHI、50 mg/kg羊血BHI和5 mg/kg GSBHI培养基上的酵母细胞转化率均达到90%;菌株SUMS0383在SDA、PDA和BHI培养基上的转化率均低于10%(图3)。不同培养基上的酵母相菌落均在转种后的第2天开始出现,在第2 ~ 4天生长迅速,在第5天生长变得缓慢。 在35 ℃时,菌株BMU00471在BHI、50 mg/kg羊血BHI及5 mg/kg GSBHI培养基上均可转化为酵母相,且生长良好,光镜下观察可见转化良好的呈“雪茄”样的酵母细胞(图4);而在SDA及PDA培养基上,菌株BMU00471呈现不典型的丝状菌落,并可产生棕素,光镜下可见大量的菌丝及“梅花”样孢子(图4)。
3 讨 论
本研究发现在36 ℃时4株申克孢子丝菌临床分离株均可以转化为酵母相,而在以往仅Lima等[8]报道1株申克孢子丝菌在动物体内传代以后才具备在36 ℃发生酵母相转化的能力。在我们的研究中,36 ℃时有45%培养基平皿上的申克孢子丝菌发生了酵母相转化,但其酵母细胞转化率明显低于35 ℃和37 ℃时的转化率。36 ℃时菌株转化数量及转化率却同时低于35 ℃和37 ℃,其内在机制在进一步研究中。
本研究发现,35 ℃和37 ℃是申克孢子丝菌酵母相转化的适宜温度,与以往的研究相符[7]。在35 ℃和37 ℃,无论是发生转化的菌株数量还是酵母细胞的转化率,均明显高于36 ℃和38 ℃。但35 ℃和37 ℃哪个更适合申克孢子丝菌的酵母相转化呢?我们的研究显示,在37 ℃而不是35 ℃,发生酵母相转化的菌株数量最多,酵母细胞转化率最高,与Dixon等[7]研究显示的35 ℃适合申克孢子丝菌环境分离株的酵母相转化,而37 ℃适合临床分离株的转化现象一致。也有学者发现分离自固定型孢子丝菌病的菌株只能在35 ℃发生酵母相转化,分离自淋巴管型孢子丝菌病的菌株无论在35 ℃还是37 ℃均可发生酵母相转化[9]。本研究中分离自皮肤淋巴管型孢子丝菌病患者的菌株SUMS0382和SUMS0383,既可在35 ℃也可在37 ℃发生酵母相转化。在38 ℃仅菌株BMU00471可以转化为酵母相,其余菌株不能生长。Ghosh等[10]的研究显示申克孢子丝菌在30 ~ 37 ℃生长良好,在40 ℃生长受到了抑制,并没有明确指出在38 ℃申克孢子丝菌是否能够生长和发生转化。有学者证明钙调蛋白激酶可以调控申克孢子丝菌从菌丝相到酵母相的转化[4]。我们推测温度在申克孢子丝菌酵母相转化过程中的作用可能与钙调蛋白激酶的活性有关。
本研究首次发现在临床常使用的PDA和SDA培养基上,申克孢子丝菌可以转化为酵母相,然而营养丰富的BHI、50 mg/kg羊血BHI和5 mg/kg GSBHI培养基上发生酵母相转化的申克孢子丝菌数量和酵母细胞的转化率明显高于PDA和SDA培养基,可见营养成分是影响申克孢子丝菌酵母相转化的重要条件。以往文献[10-12]报道申克孢子丝菌的酵母相转化使用的培养基有胱氨酸葡萄糖血琼脂基、BHI、含50 mg/kg去纤维蛋白羊血的BHI和胰蛋白酶大豆琼脂基,均可获得较好的转化率,我们利用含5 mg/kg葡萄糖的BHI培养基对申克孢子丝菌进行酵母相转化,其转化菌株的数量和酵母细胞转化率与含50 mg/kg去纤维羊血BHI培养基的一致,值得在临床推广。
研究显示不同培养基上的酵母相菌落均在转种后的第2天开始出现,在第2 ~ 4天生长迅速,在第5天生长变得缓慢,与Robert[13]在电镜下观察到的时间一致。但Hempel[14]将豚鼠的外周巨噬细胞加入培养基中,可将申克孢子丝菌酵母细胞的转化时间缩短至24 h。
总之,本研究通过探讨不同温度和培养基在申克孢子丝菌酵母相转化中的作用,明确了温度是影响申克孢子丝菌酵母相转化的关键因素,培养基的营养成分亦是影响转化效果的重要因素,从而进一步证实了申克孢子丝菌酵母相转化条件的多样性,为抑制申克孢子丝菌在体内的酵母相转化,阻断其致病机制提供了研究基础。
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