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等位时间:1个小时左右 (午餐) 1-1.5小时(晚餐)
1997年张雅青下岗之后,从婆婆那里借来了5000元钱开始创业。两年之后,张雅青开了一家小餐馆,这个小餐馆只主打一样菜,可就这一样菜,不但引来了无数同行的模仿,两次成为《舌尖上的中国》最有利的内容支持,也让张雅青的小餐馆变成了如今年销售超过几亿元的餐饮集团。而这道菜就是每年销售额达到2亿元、因一道菜的“爆款”进而令整个餐厅进入“爆店”状态、创造餐饮界“翻台”神话的旺顺阁鱼头泡饼。为了进一步了解旺顺阁鱼头泡饼的故事,我们特别采访了旺顺阁(北京)投资管理有限公司集团副总裁崔余健。
15年的镇店之宝
在旺顺阁有一道独具特色的主打美食――鱼头泡饼,这是旺顺阁坚持了15年的镇店之宝,也是吸引食客不断返店、排队品尝的主要原因。10多年前,旺顺阁的创始人张雅青从北京一家百货商场下了岗,开了一家杂货铺,两年就攒下了几十万元。可到了第三年,旁边超市开张冲击了自己的生意,于是她想到了开餐厅。一次在郊区张雅青吃到山东的侉炖鱼,觉得非常不错,她立即找到厨师郭金喜合作开餐厅主打这道菜,两人一拍即合。1999年,张雅青东拼西凑了100万元在现在的鸟巢附近开了第一家店,起名旺顺阁。然而开张几个月,侉炖鱼却卖得不温不火。一次很偶然的机会,店内一个食客用元鱼罩饼里的饼块蘸着红烧大鱼头里的汤汁尝试了一下,意外发现出奇地美味。后来这种吃法甚至在食客中自行传播开来,并传到了张雅青的耳朵里。她灵光闪现,就才有了火爆京城的鱼头泡饼。
鱼头泡饼何以“爆款”
正是有了旺顺阁鱼头泡饼的火爆,很多餐厅纷纷效仿。但不论哪家餐厅的鱼头泡饼其味道都无法与旺顺阁相比。其秘密之一即是鱼头的选择。旺顺阁的鱼头大部分来自于千岛湖水域以及东北大伙房水库、河南南湾水库、河南南洋鸭河水库、安徽响洪甸水库5个国家一级水体水库的野生鳙鱼。这些鱼头首先是个头大,至少4斤以上,还会有8斤、12斤及以上的鱼王。鱼头越大,胶质越厚,口感层次与质感就越丰富。像千岛湖的绿色有机大鱼头品质非常好,鱼主要靠吃水里的浮游生物为生,不需要投放饲料。这些鱼从捕捞到上餐桌,不超过24小时,极大地保证了鱼头的新鲜和美味。虽然鱼头越大越不容易入味,但旺顺阁有自己一套独特的加工工艺,通过炖制时间、火候的把控,再大的鱼头都是丝丝入味。熬制鱼头的密料配方由张雅青和郭金喜两位师傅经过长时间的研究而成。
秘密之二就在搭配的饼上,饼最重要的在于精选上好的面粉,其次就在于师傅的手法,和面、饧面、揉面都有讲究。精选优质高筋粉,从和面到烙饼都是由专门的师傅执行,烙饼的手法秉承老北京烙饼的方法,烹制出来的饼有咬劲,久泡不烂。硕大的野生鱼头经过大火40分钟的烹制,配上新烙好的薄饼,鱼肉入味,饼有嚼劲儿,两者搭配组合让很多食客流连忘返。
鱼头六步吃法与食客深度互动
鱼头泡饼改变了张雅青的命运,而她一手打造的旺顺阁也用一个原则再次印证了中国餐饮业健康发展的真理:品质决定未来,细节决定成败。旺顺阁的每一位员工都深刻地明白这样一个道理:餐饮的核心就是顾客的体验。一方面是菜品的体验,另一方面就是环境和服务的体验。旺顺阁对回头客的维护,最大的法宝就是不断提升顾客的用餐体验,带给顾客良好的用餐感受,从而促使顾客不断返店。旺顺阁将顾客从进店到排队等位,再到就餐的整个过程称作“顾客旅程”。在这场旅行中,旺顺阁只做一件事,那就是围绕大鱼头全方位打造愉悦的体验过程。比如在等位区放置“鱼头王”魔方,让顾客在等位的时候可以玩,拼好还有奖励。这既解决了顾客等位时的无聊,又不知不觉将“鱼头王”深深地印在顾客的脑海中。另外,如果顾客点了8斤以上的鱼头,还会附赠一个隆重的“鱼头王”上鱼仪式,即用顶轿子抬着大鱼头,前面敲锣开路,沿路的祝福送给在座的所有顾客,既讨巧又让人欢喜,让食客有宾至如归的感受。吃鱼前,服务员还会教大家旺顺阁独创的鱼头六步吃法:第一步是鱼头中最嫩的部分――鱼划水,俗称鱼里脊;第二步是胶质含量最为丰富的部分――鱼唇和鱼脸;第三步是美食家最推荐的部分――鱼眼;第四步是富含丰富“脑黄金”的部分――鱼脑;第五步是高蛋白、低脂肪的部分――鱼肉;第六步是鱼头最好的搭配――饼。通过教授鱼头的正确吃法从而和顾客产生互动,让顾客感受到企业的用心,别样的就餐体验也让顾客留下深刻的印象,促进“返店”。
围绕鱼头做足文章
在旺顺阁除了可以吃到最好味的鱼头泡饼之外,围绕鱼头餐厅还推出了12道必点菜式,像金蒜牛小排、炝炒圆白菜粉丝等,这些菜都是旺顺阁15年来点击率最高的人气菜品,味道和口感都特别适合与鱼头进行搭配。今年,为了适应时下年轻人的口味,经过多年的潜心研发,旺顺阁推出了创新性极强的麻辣鱼头。麻辣鱼头同样选取上述5个水库野生养殖的鳙鱼头,在制作过程中重新调制配料,加入麻辣味,一经推出即受到很多年轻食客的追捧。此外,旺顺阁又发明了发面饼泡鱼头,这种饼与传统烙饼比更容易吸附鱼头里的汤汁,夹起一块发面饼,只需在鱼汤中轻轻一蘸,鲜美的汤汁即通过均匀的“面孔”进入到面饼深处,入口汤汁丰腴、浓香。
为了保证每个鱼头的出品质量,旺顺阁一方面从原料上下足功夫,不仅选用最好的大鱼头,另外为了保证鱼头的新鲜口感,即便是葱、姜、蒜、大料、花椒等辅料都是选择最上等的;另一方面,花大力气解决鱼头出品的标准化问题,保证每家店的口味完全统一。在旺顺阁的配送中心,每个大鱼头经过严格的清洗、清理、宰杀后都要称好重量、编码、入袋,再搭配好料包送到店里。鱼头到店之后用专门的大锅现做,因为鱼头的重量与用料早已进行了标准化,还制定了严格的鱼头烹制流程、时间火候控制的方法,再加上每店都有烹制技艺精湛的鱼头师傅坐镇,故而保证了每店的出品。
壮大团队 良性发展
随着公司越来越大,旺顺阁的经营者深切的感受到,企业要发展必须让自己的团队强大起来。因此,老板张雅青会不惜重金为高管们花几万元、十几万元报各种培训课程,帮助大家开阔眼界,引进先进的管理方案。
好的出品必然要有好的环境做依托,为了保证食品卫生安全,旺顺阁从7年前就开始与“香港源全5S管理”(5S就是整理、存放、清洁、标准、修养)合作,从前厅、后厨到员工宿舍都严格管理。很多餐厅后厨的柜子与地面有很多的缝隙,厨师有时犯懒,掉在地上的东西踢到柜子下面藏污纳垢。旺顺阁后厨的柜子则基本与地面“无缝连接”。取消所有明沟,像过去一样等餐厅营业结束再用水冲地板搞卫生的情况被彻底杜绝。推出“清凉厨房”,保证厨房温度在23-25摄氏度之间。
每一位进入旺顺阁集团的员工都要进行严格的培训,岗前培训主要学习企业文化。到店有3个月的实习培训,有专门的师傅手把手的教授,有明确的培训手册,第一天会什么,第一周会什么,要求得非常详细,目标明确。经过考核,达到要求或者超额完成,将会加薪。还有很多绩效制度,比如得到客人表扬,做了令客人满意的事情,在工作中有惊喜表现的,会用积分制呈现。积分越高奖励越多。在有的企业,服务员翻台的积极性不高,因为总之是看一张台,这张台的客人走了,就可以休息了。但在旺顺阁,服务员翻台数量越多奖励越多,服务员看到客人自然极其亲切。
虽然严格要求员工,但旺顺阁高管们也很明白:好的服务是靠人“堆”出来的。当然并不是单纯的人多,而是人要搭配合理,按照标准的员工人数、人均产值比量配比。在旺顺阁散台区,一个服务员一般要看守4-5张台,这可能和很多餐厅的配比差不多。但还会设有专门的结账员,翻台的时候有楼杂人员负责整理,做好衔接。这样就不会现出服务员为了结账而忽视其他客人的情况。
借势《舌尖上的中国》加强营销
灾难性事件的新闻价值
灾难性新闻事件是指来自自然界的人类不可抗拒的力量或非人为因素而导致的重大事故或自然灾害,如地震、台风、火山爆发等,2008年5月12日的汶川大地震是典型的灾难性新闻事件。灾难性新闻事件包含重要的新闻价值及其背后所蕴涵的重大主题。
曾经获得1986年普利策新闻大奖和世界新闻摄影比赛大奖的《奥马伊拉的痛苦》,是灾难性新闻事件的优秀摄影作品。1985年11月13日,哥伦比亚鲁伊斯火山突然爆发,山上的积雪被融化,夹杂着泥石顺坡而下,几乎吞没了附近的阿麦罗镇,造成了毁灭性的灾难。美联社的法籍摄影记者富兰克・福尼尔在火山爆发后的第三天赶到现场采访,他在一个废墟的角落里发现了一个名叫奥马伊拉的12岁小姑娘被倒塌下来的两座房脊卡在中间不能自拔,救护人员一时也难以将她救出,她的脊椎已被砸伤,人被没颈的泥水浸泡着,福尼尔在用照相机摄下小姑娘那美丽而坚强的面庞的同时,不时地同她攀谈。因为他懂得,这样做会增强她生存的力量和信心,待救援人员赶到时,她在泥浆里已经浸泡60个小时了,她的心脏已十分衰弱,最后终于停止了跳动。这张最有意义的照片记录了小女孩被死神召唤去的瞬间:双手泡得肿胀,眼神暗淡,丧失了生命的光辉,小女孩在泥石流中苦苦挣扎60个小时,她抗争着、愤怒着。作者回忆说:“很难用语言来描述当人们眼睁睁地看着小姑娘死去时的内心感受!”
灾难是令人悲伤的,但我们从照片中看到了小女孩的顽强,那求生的眼神永远刻在了我们的脑海里。由此引发出读者对人生的哀怨伤惋,对不幸遭遇的痛彻询问,同时也激发人们珍惜生命,善待生活。灾难性事件的新闻价值就在于:通过对灾难程度和灾难给人们带来的危害程度如实的报道,表现人类是怎样与灾难进行抗争,从而战胜灾难的。
灾情就是命令
灾难性事件的突发性、偶发性、不可预料的特点,对采访拍摄造成了特殊困难,同时也向摄影记者提出了特殊的要求。汶川地震发生后,电视及网络的强势是足以让每一位手拿相机的记者感到力不从心的。新华社在地震发生10多分钟后向全世界发出了第一条快讯。中央电视台在地震发生28分钟后播出第一条新闻。网络和电视24小时全方位多角度向全世界进行了全面详尽的现场报道,这让平面媒体感到望尘莫及,对摄影记者无疑是一场严峻的挑战!灾情就是命令!《大河报》先后派出6名摄影记者赶赴灾区实地报道。
拍摄突发事件,尤其是拍摄突发灾难性新闻事件的照片是对记者素质与能力的最全面的检验。快速反应能力、机智、敏捷是完成突发事件拍摄的保证。纯粹记录式的照片已打动不了读者,人们渴望看到真实、生动,激励全国人民奋力抗争的画面,这就需要作品能够传递和表达灾区人民面对灾难不屈不挠、众志成城的民族精神。
按照常规进行采访已经是不可能的了,特殊时期就要用特殊手段。我们的记者有的变成了“军人”,有的变成了“消防战士”,还有的变成了“特警”,分别乘着军列、警车出发了……他们吃干粮,睡帐篷,在余震不断、通讯不畅、交通不便的艰难险境下,先后到达了北川、广元、都江堰、汉旺、什邡、映秀等地,冒着生命危险,拍摄了大量生动鲜活、感人至深的新闻照片,出色地完成了任务。
我们首先明确理性的报道思路:一幅优秀的摄影作品都有一个鲜明的主题,这次报道的主题是“众志成城抗震救灾”。任何灾难事故中,人的安危是最为重要的。温总理指出:人民生命高于一切!所以抗震救灾的核心任务是救人。正如《大河报》记者白周峰所说:对灾区的报道不应该是“惨”,需要表现出来的是中国人民战胜灾难的信念和勇气!他在都江堰拍摄救援人员搜救时的场景时,突出了救援官兵的急切心情和神态,着力表现齐心协力挽救生命的动人场面。《大河报》记者陈晓东跟随“铁军”身背几十斤重的照相器材,走了3个小时的水路,拍摄战士运送救援物质的场景。记者杜小伟赶赴灾区时,正是堰塞湖蓄水最多的日子,绵阳几乎成空城。他和同事各持一部对讲机,时刻保持联系,直到放水前夜才离开。孩子从废墟中重生,老人在残壁下救出,每一次按动快门都表达了人性关怀,一幅幅精彩的画面,记录了中国人的精神!著名战地摄影记者罗伯特・卡帕说:“如果你的照片不够好,那是因为你距离战火不够近。”记者深入一线,与灾区人民同生死共患难。记者许俊文在采访手记中这样写道:“余震来的时候,听到脚底下刺耳的轰鸣声,看到房顶上坠落的瓦砾,所有人都乱跑,我也害怕,可是我的职责就是记录下这可怕的瞬间,像军人一样冲在战场的最前沿!”
非常时期,特殊处理
突如其来的汶川大地震,不但让摄影记者得到了前所未有的锻炼和检验,同时对编辑也是一个新的挑战。版面要表达一种什么样的情绪,读者在注视着:不能一味地报道悲痛、哀伤和泪水,而是要用最快速的信息、最真实的画面,给人们带来感动和力量!后方编辑每天要收到前方记者传回的数量十分庞大的抗震救灾文字稿件和新闻图片,怎么办?编前会上,经值班总编和各版编辑统一思想:非常时期,特殊处理!编辑部门打破常规连续几天停掉其他版面,停掉一切广告,报头变黑,一版将前方传回的被埋地下124小时的幸存者获救照片由彩色变成黑白,头版与24版打通,中间编排摄影专版,用大版面彰显摄影魅力,增强视觉冲击力。用感人的瞬间直接穿入读者的心脑,让读者及时看到中国人民面对天灾,众志成城,举国倾力,战胜灾难的精彩画面。
延续近一个月的抗震救灾报道,从生命大营救到爱心奉献、重建家园,我们的报纸始终与灾区人民心相连。笔者看到国外媒体在评价中国抗震救灾报道时这样写道:面对历史上最严重的自然灾害之一,中国新闻媒体在整个报道过程中采取了过去从未有过的方式。美国《纽约时报》称:信息铺天盖地,高级官员和救援人员快速作出反应,这与中国以前对唐山大地震的报道方式形成鲜明对比。
灾难终将过去,生活仍将延续,我们的记者把瞬间凝固了下来,成为历史。这瞬间告诉人们:面对天灾,民痛国殇;面对天灾,众志成城;面对天灾,大爱无疆!我们不会忘记这段历史,更不会忘记在抗震救灾中献出宝贵生命的中华儿女!
[关键词] 葛根素;破骨细胞;自噬;Akt-mTOR通路
[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2015)05(c)-0020-04
[Abstract] Objective To investigate the signaling pathway of puerarin on osteoclasts through autophagy. Methods Osteoclasts were derived from bone marrow stem cells and divided into four groups based on the treated with different concentration of puerarin (0, 10, 50, 100 μg/L groups). Expression of LC3Ⅱ/Ⅰ, p62, Akt, p-Akt and p-s6 were analyzed by Western-Blot. Results ①Increased LC3Ⅱ/Ⅰ level (10, 50, 100 μg/L groups) and decreased p62 expression (10, 100 μg/L groups) were observed in puerarin-treated groups compared with normal group (P < 0.01 or P < 0.05). ②Puerarin inhibited the expression of p-Akt, Akt and p-s6 (P < 0.05). Conclusion Puerarin can promote the autophagy of osteoclasts and may regulate via Akt-mTOR signaling pathway.
[Key words] Puerarin; Osteoclasts; Autophagy; Akt-mTOR signal transduction pathway
葛根在最早的药学著作《神农本草经》中便有记载,因其能治疗“诸痹”等作用而成为治疗骨质疏松症的一味常用而有效的中药,它可增加骨密度和骨量,改善骨构造而达到治疗作用[1-2]。近年来研究显示,中药葛根在防治骨质疏松症的体内外实验方面都取得了良好的效果,而葛根素(puerarin,Pur)在葛根的提取物异黄酮类化合物中含量最高,是其特有的主要有效成分,因此Pur的作用机制研究成了研究葛根的热点领域[3]。Pur能够促进成骨细胞形成与分化[4],增加血清碱性磷酸酶(ALP)的表达[5],而且有文献提出,Pur还能对破骨细胞的活性产生一定的抑制作用[6]。在分子水平上,有文献指出,Pur能通过促进自噬作用来保护1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导的人神经母细胞瘤细胞损伤[7]。另外有研究提出,破骨细胞自噬水平的提高会对其活性及分化过程起负向调控作用[8],但其具体机制尚未明确。本研究通过观察不同浓度Pur组和不加入Pur的对照组对破骨细胞自噬的影响,探究其自噬的相关信号通路,旨在从分子水平上探讨Pur对破骨细胞自噬的作用机制。
1 材料与方法
1.1 实验动物
2月龄不分雌雄的昆明(KM)小鼠,无特定病原体(SPF)级,由广东省中医院实验动物中心提供。
1.2 主要试剂及仪器
葛根素(阿拉丁公司,批号:CAS3681-99-0);α-MEM培养基、胎牛血清和青链霉素(美国,Hyclone公司);BCA蛋白质定量测定试剂盒(美国,Thermo公司);微管相关蛋白1轻链3(LC3)、酸化核糖体蛋白(p-s6)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)和p62蛋白的单克隆抗体(美国,CST公司);HRP标记羊抗兔IgG(武汉博士德生物科技有限公司);电泳仪和湿转印仪(美国,Bio-Rad公司);BNA-311/(2323)CO2细胞培养箱(美国,Espec公司)。
1.3 细胞提取、培养及给药方法
用原代培养破骨细胞的方式,采用骨髓干细胞定向分化的方法。将2月龄的KM小鼠断颈处死后用75%医用乙醇消毒,在无菌条件下取出小鼠的股骨与胫骨,用2 mL注射器抽出骨髓液,过滤后,按1×106细胞/孔的密度接种于24孔培养板中。在初级培养液(含10%胎牛血清和10%青链霉素的α-MEM培养液)中加入巨噬细胞集落刺激因子(20 ng/ml),置于37℃恒温、5% CO2浓度的培养箱中培养。24 h后换成次级培养液(含10%胎牛血清、10%青链霉素、20 ng/ml的巨噬细胞集落刺激因子和50 ng/ml的核因子κB受体活化因子配体的α-MEM培养液),继续在上述培养箱中培养,每2天换一次新鲜的次级培养液,并依据细胞形态、抗酒石酸盐磷酸酶染色法等方法鉴定出已分化的破骨细胞。将培养出的破骨细胞随机分为4组:第1组为对照组,换液时不加入Pur;第2组为低剂量Pur组,按10 μg/L浓度加入Pur;第3组为中剂量的Pur组,按10 μg/L浓度加入Pur;第4组为高剂量的Pur组,按100 μg/L浓度加入Pur。继续培养7 d后裂解细胞提取相关蛋白。
1.4 蛋白质印迹法(Western-blot)检测相关蛋白的表达
采用Western-Blot检测不同浓度Pur组和对照组LC3Ⅱ/Ⅰ、p62、Akt、p-Akt和p-s6的蛋白表达。提取各组细胞总蛋白,先用BCA(2,2-联喹啉-4,4-二甲酸二钠)法进行蛋白定量测定。加入上样缓冲液,在95℃下变性10 min。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳,转膜,5%脱脂奶粉封闭2 h后,分别加入LC3、p62、Akt、p-Akt和p-s6单克隆抗体,在4℃环境下过夜,接着用TBST缓冲液洗膜3次,10 min/次,加入二抗,在室温下孵育2 h,再次用TBST缓冲液洗膜。将得到的膜与电化学发光(ECL)试剂充分反应后,曝光于X线胶片上,显影、定影、扫描后进行图像分析。应用Image-Pro Plus 6.0软件对各个特异性条带进行累计吸光度检测,最后以积分吸光度值(IOD)来表示。
1.5 统计学方法
采用SPSS 17.0统计软件进行数据分析,计量资料以均数±标准差(x±s)表示,采用One-Way ANOVA检验,以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 不同浓度Pur组和对照组破骨细胞自噬相关蛋白LC3Ⅰ、LC3Ⅱ和p62蛋白的Western-blot检测结果
与对照组比较,不同浓度Pur组LC3Ⅱ/Ⅰ比值均升高,且浓度越高,比值越大,差异有高度统计学意义(P < 0.01)。见图1~2。采用甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)作为实验操作的标准化内参,不同浓度Pur组和对照组相比,p62蛋白的消耗均增多,且10 μg/L与100 μg/L Pur组比对照组的p62/GAPDH比值小,差异有统计学意义(P = 0.019、0.036)。见图3~4。
2.2 不同浓度Pur组和对照组破骨细胞Akt-mTOR信号通路相关蛋白p-Akt、Akt和p-s6蛋白的Western-blot检测结果
不同浓度Pur组的p-Akt/Akt比值与对照组相比均降低,差异有统计学意义(P < 0.05或P < 0.01)。见图5~6。不同浓度Pur组的p-s6均受到明显抑制(P < 0.01);对p-s6蛋白进行Western-blot检测时,同样使用GAPDH作为实验操作的标准化内参,不同浓度Pur组的p-s6/GAPDH比值与对照组相比均较小,差异有统计学意义(P < 0.01)。见图7~8。
3 讨论
破骨细胞是一种广泛存在于骨组织的高度分化多核巨细胞,其细胞足体固定在骨质表面,能发挥骨吸收功能。破骨细胞和成骨细胞在正常人体的骨质中处于一种动态平衡状态,一旦出现失衡,将会导致相应的骨病,常见的是骨质疏松症。骨质疏松症是一种以骨量低下,骨微结构损坏,导致骨脆性增加,易发生骨折为特征的全身性骨病,为临床上常见的骨代谢病,主要由于破骨细胞的吸收增加和成骨细胞功能衰减导致的骨组织退行性变,因此治疗上主要从如何抑制骨吸收和促进骨生成方面考虑[9-12]。越来越多的文献表明,在骨组织及各类骨细胞发育成熟过程中,甚至在骨类疾病中发现自噬现象,其通过调节自噬来影响,甚至可以改变骨组织中成骨细胞、破骨细胞和骨细胞之间的平衡,从而改善骨类疾病的预后,这已成为当前研究的热点[13]。细胞自噬是一位比利时科学家在1963年的溶酶体国际会议上首次提出的,是细胞内主要的降解系统,通过将细胞质内大分子物质包裹并传递到溶酶体中进行降解,产生氨基酸和能量,维持细胞内外物质与能量平衡,这对细胞内环境的稳态和细胞生存至关重要[14],能在细胞质中形成双层膜囊泡,将坏死的细胞器(线粒体、内质网等)或长半衰期蛋白包裹,形成自噬小体,再将其运送至溶酶体,将小体内容物水解消化,再释放至细胞质内循环使用[15]。Pur能有效抑制破骨细胞的骨吸收功能[16],能够使破骨细胞的自噬作用加强,但其具体机制尚缺乏相关研究。
本研究通过观察Pur对破骨细胞自噬相关蛋白(LC3和p62蛋白)和Akt-mTOR信号通路相关蛋白(Akt、p-Akt和p-s6蛋白)表达的影响,证实Pur能有效促进破骨细胞内的自噬相关蛋白的表达,并发现Akt-mTOR信号通路对该自噬变化有重要作用。LC3是哺乳动物自噬相关基因8(ATG8)的同源物,当自噬激活时,LC3被剪切为LC3Ⅰ,然后被激活进而转化为LC3Ⅱ,而后者是自噬泡膜的重要组成部分,因此,LC3Ⅱ/Ⅰ在一定程度上能代表自噬的激活程度[17]。p62(SQSTM1)是自噬活性的标记蛋白,反映自噬泡的清除速率,该蛋白表达增高则提示自噬流受抑制[18]。Akt-mTOR通路是调节细胞代谢和凋亡的一种重要通路,而Akt蛋白在这条通路中起十分重要的作用[19]。Akt蛋白可以在多种酶和转录因子的作用下活化,从而发挥调节细胞的生理功能。Akt蛋白磷酸化后成为p-Akt蛋白,通过复杂的反应后可以阻止部分调控蛋白的负调控,进而激活蛋白翻译,加快细胞生长而发挥抗凋亡作用。有研究结果显示,p-Akt蛋白表达水平高,则凋亡细胞数少,p-Akt蛋白表达水平低,则凋亡细胞数多[20];所以Akt蛋白和p-Akt蛋白是Akt-mTOR通路的重要调节蛋白。p-s6蛋白是Akt-mTOR通路活化的效应蛋白,对p-s6蛋白的测量可以在很大程度上了解Akt-mTOR通路的激活情况。本研究中不同浓度Pur组较空白对照组均表现出LC3Ⅱ/Ⅰ比值增高,而且随着Pur浓度的增高,其比值也相应升高,差异有统计学意义,与此同时,10 μg/L和100 μg/L Pur组的p62蛋白与空白对照组比较,其消耗明显增加,因此认为,Pur有可能通过促进自噬表达的水平而抑制破骨细胞的活性。通过检测Pur对破骨细胞Akt-mTOR信号通路相关蛋白表达的影响发现,不同浓度Pur组与对照组相比,细胞的Akt蛋白和p-Akt蛋白的表达均有不同程度下降,而代表Akt-mTOR通路活化程度的p-s6蛋白表达减少,说明Pur对Akt-mTOR信号通路的相关蛋白具有抑制作用,这可能是Pur诱导自噬细胞激活的关键信号通路之一。
本实验结果从分子水平上说明Pur有诱导破骨细胞自噬的作用,而Akt-mTOR信号通路可能是Pur诱导破骨细胞自噬变化的机制之一,但Akt-mTOR信号通路是否为其有效的主要通路,仍需后续实验从不同角度验证其作用,另外其他相关信号通路是否也参与此过程,还有待进一步研究。
[参考文献]
[1] 王新祥,张允岭,吴坚,等.葛根对切除骨质疏松模型小鼠骨密度和骨构造的作用[J].中国组织工程研究与临床康复,2010,14(7):1262-1266.
[2] 孙艳,王海燕,陈立忠,等.绝经后骨质疏松症常用中药的研究进展[J].中国现代医生,2015,53(1):158-160.
[3] 孔蓓蓓,刘连起,王新祥.近十年葛根防治骨质疏松症的研究进展[J].环球中医药,2012,5(3):226-230.
[4] Wang C,Meng MX,Tang XL,et al. The proliferation,differentiation,and mineralization effects of puerarin on osteoblasts in vitro [J]. Chin J Nat Med,2014,12(6):436-442.
[5] Tiyasatkulkovit W,Charoenphandhu N,Wongdee K,et al. Upregulation of osteoblastic differentiation marker mRNA expression in osteoblast-like UMR106 cells by puerarin and phytoestrogens from Pueraria mirifica [J]. Phytomedicine,2012,19(13):1147-1155.
[6] 赖满香,任宏,唐省三.葛根素在共育体系中对破骨细胞活性的影响[J].中国中医药咨讯,2010,2(13):192-193.
[7] 王训翠,王秀,李庆林.伴侣自吞噬在MPP+损伤的SH-SY5Y细胞中的影响及葛根素的干预作用[J]. 中国中药杂志,2014,39(1):106-112.
[8] Cejka D,Hayer S,Niederreiter B,et al. Mammalian target of rapamycin signaling is crucial for joint destruction in experimental arthritis and is activated in osteoclasts from patients with rheumatoid arthritis [J]. Arthritis Rheum,2010, 62(8):2294-2302.
[9] 侯建明,蓝旭华,吴晖南,等.近5年国内外骨质疏松症诊疗指南比较[J].中华关节外科杂志:电子版,2012,6(3):472-478.
[10] 丁艳红.综合性护理在经皮椎体成形术治疗老年性骨质疏松性骨折中的应用[J].护理实践与研究,2015,12(3):41-43.
[11] 谢栋,陈大军,马国亮.中医学健康管理预防原发性骨质疏松症的研究[J].医药杂志,2014,26(6):85-88.
[12] 楼肃亮,赵志芳,李小娟.退行性脊柱侧凸和骨质疏松的关系探讨[J].医药杂志,2014,26(10):27-29.
[13] 杨戈,林达生,练克俭.自噬与骨组织细胞及骨类疾病[J].国际骨科学杂志,2014,35(3):181-183.
[14] Gustafsson AB,Gottlieb RA. Recycle or die:the role of autophagy in cardioprotection [J]. J Mol Cell Cardiol,2008, 44(4):654-661.
[15] Mizushima N,Levine B,Cuervo AM,et al. Autophagy fights disease through cellular self-digestion [J]. Nature,2008, 451(7182):1069-1075.
[16] 李斌斌,于世凤.葛根素调控骨代谢的体外实验研究[J].北京大学学报:医学版,2003,35(1):74-77.
[17] Klionsky DJ,Cuervo AM,Seglen PO. Methods for monitoring autophagy from yeast to human [J]. Autophagy,2007,3(3):181-206.
[18] Klionsky DJ,Abeliovich H,Agostinis P,et al. Guidelines for the use and interpretation of assays for monitoring autophagy in higher eukaryotes[J]. Autophagy,2008,4(2):151-175.
[19] Mullonkal CJ,Toledo-Pereyra LH. Akt in ischemia and reperfusion[J]. J Invest Surg,2007,20(3):195-203.
威廉姆-阿道尔夫·布格霍,就曾经是19世纪的“无价之宝”。他是19世纪上半叶法国学院派绘画最重要的人物,法国第一个“矫饰主义”画家,法兰西艺术院院士,荷兰美术院院士,欧洲三国荣誉爵士,布格霍囊括了一个欧洲画家能够获得的所有最高荣誉。19世纪时,布格霍不但风靡欧洲,美国的富豪也争相购买他的作品。
布格霍的作品高度完整、技法全面,擅长表现优美而感伤的古典题材。布格霍是当时官方沙龙展的权威评判,他对待新兴的画风立场保守、态度强硬,就是他,把莫奈等印象派画家赶出了官方的沙龙展。
20世纪20年代之后,布格霍的声誉与价格急剧下跌,因为越来越多的人接受了印象派的新审美,在接下来的几十年里,不少百科全书甚至故意“忽略”他的名字,因为人们反感他当年对印象派的封杀。
今天的人们已经不知道布格霍是谁,但是人人都知道布格霍最大的敌人——莫奈。2013年上半年全球艺术家作品成交额排行榜,莫奈名列第七位。今天轮到莫奈成为“无价之宝”了。
隐患一:
身边家政成立时,当时的行情是保洁30元一小时,2小时起步,身边家政将价格压到39元2小时起。用户直接付钱给小时工,身边家政一分钱不要,在促销期,每单还要返还客户10元。
互联网企业最初圈定客户时最普遍的打法就是烧钱让利,刨去高额的成本不说,细分市场虽然有机会,但也要看是否是大刚需、高频次的消费。真正有多少家庭愿意经常掏钱找保洁?在促销活动结束后,又有多少人会转化为长期用户?拼到最后拼的都是谁烧的钱更多。
隐患二:
互联网企业要想生存势必需要在盈利之前考虑好如何圈住用户,一旦用户累积到一定的量,就有了主动权,这就是互联网企业人人视之为宝藏的“流量入口”。在创立身边家政时,创始人郑磊希望能够从家政切入技能交易市场,他选择了技术含量较低的保洁入手。
然而,由于身边家政与保洁阿姨的合作是松散型的,没有成熟的可持续合作机制,当用户找到身边家政的阿姨,双方就会建立起联系,以“中介”身份出现的身边家政对于双方来说已经无足轻重。一旦这样的情形多次发生,身边家政就变成了第三者,何谈数据累计、用户沉淀呢?
隐患三:
身边家政通过自己招募的方式找到保洁阿姨,这部分人基本上都没有经过专业的家政培训,脑子里固有的概念通常会认为,保洁就是擦桌子拖地板,这样的服务意识必然不会有很好的用户体验。身边家政的愿景是希望自己能够建立起一个基于平台基础之上的技能交易市场,这样匆忙上马,提供技能人员缺乏专业性,身边家政对于保洁是否具有服务意识和能力也缺乏监督和奖惩措施,如此一来容易造成不好的口碑,受伤害的终究是身边家政自己。