前言:想要写出一篇令人眼前一亮的文章吗?我们特意为您整理了5篇鼓励学生的话范文,相信会为您的写作带来帮助,发现更多的写作思路和灵感。
1、倚势而凌人,势败而人凌,恃财而侮人,财散而人悔。循环之路,我争者,人必争,虽力争之,未必得;我让者,人必让,虽力让之,未必失。
2、不要因为众生的无知,而痛苦自己。
3、要成为的成功者,不一定智商高才可以获得成功机会,如果你情商高,懂得如何去发掘自己身边的资源,甚至利用有限的资源拓展新的天地,滚雪球似地积累自己的资源,那你也将走向成功。
4、闻谤不怒,虽谗言焰熏天,如举火焚空,终将自熄。闻谤而怒,虽巧辩,如蚕作茧,自取缠绵。
5、高能力不能和高绩效直接挂钩,能力的发挥也是在一定的机制、环境、工作内容与职责之内的,没有这些平台和环境,再高的能力也只能被尘封。
6、疲劳是最舒适的枕头,努力工作吧。
7、锻炼自己即刻行动的能力。充分利用对现时的认知力。不要沉浸在过去,也不要耽溺于未来,要着眼于今天。当然要有梦想、筹划和制订创造目标的时间。不过,这一切就绪后,一定要学会脚踏实地、注重眼前的行动。要把整个生命凝聚在此时此刻。
8、懂得珍惜把握每一个机会,就应该勤奋,勤奋并不需要有推动力,只要你能欣赏人生。你能欣赏日出日落。你懂得珍惜,你自然会勤奋,因为你不会也不希望错过生命送给你的每一个机会!只要你心存希望与信心。
9、多一份心力注意别人,就少一份心力反省自己。
10、大多数人希望自己的生活富有意义。但是生活不在未来。我们越是认为自己有充分的时间去做自己想做的事,就越会在这种沉醉中让人生中的绝妙机会悄然流逝。只有重视今天,自我激励的力量才会让你得到最好的成果!
11、避开折磨是生命的最佳选择,一旦躲避不开,就让折磨变作美丽人生的养分,此亦是生命的最佳选择。之所以说此亦是生命的最佳选择,乃是因为,人们在陷进折磨时,他面对的选择不止一个,比如说痛苦、焦灼、失恋、迷茫、束手无策或一蹶不振,而这些选择,就没有一个具有积极的性质,皆是对人生的消沉与颓废。比起这些选择,惟有选择让折磨变作美丽人生的养分,方才算是最佳。
12、人总是在遭遇一次重创之后,才会幡然醒悟,重新认识自己的坚强和坚忍。所以,无论你正在遭遇什么磨难,都不要一味抱怨上苍不公平,甚至从此一蹶不振。人生没有过不去的坎,只有过不去的人。
13、把握住自己的今天,那么明天一定会更美好。你改变不了环境,但可以改变自已。人生总会经历一些事情,比如事业的成败,爱情的喜忧,友情的得失,但至少,无论在任何时候,无论你做什么事情,你都要有勇气去面对和承受,这才是最重要的。
14、恒心铺就通天路,持久方可登顶峰!
15、当你在犹豫的时候,这个世界就很大;当你勇敢踏出第一步的时候,这个世界就很小。等到有一天你变成了你喜欢的自己的时候,谁还会质疑你的选择不靠谱呢?你已经变成更好的你了,一定会遇到更好的人的。你是谁,就会遇到谁。
16、在现代社会,拥有强健的身体已经不是最重要的,健康的心理越来越被提上日程,处理复杂的人际关系、承受挫折与痛苦、缓解压力与抑郁,这些都将成为工薪族乃至学生们常常面对的问题。为了防止英年早逝、过劳死,还是多注意一下身体和心理的健康投资吧。
17、今天是一个结束,又是一个开始。昨天的成功也好,失败也好,今天都可以重新开始,重新开拓自己的人生。昨天失败了,不要紧,今天忘了它,总结失败的教训,继续新的努力。即便昨天是成功的,今天依旧要重新开始,在成功的基础上继续努力,争取更辉煌的进步。
18、一时的挫折往往可以通过不屈的搏击,变成学问及见识
19、即使快乐的人生,也会有痛苦,有的人能直面挫折,化解痛苦;有的人却常常夸大挫折,放大痛苦。可见,面对挫折,我们可以有不同的选择。但是,给挫折一个微笑,或许是对它最致命的打击。
20、努力向上的开拓,才使弯曲的竹鞭化作了笔直的毛竹。
21、创造自我,如绘巨幅画一样,不要怕精工细笔。如果把自己当作一幅正在描绘中杰作,你就会乐于从细微处做改变。一件小事做得与众不同,也会令你兴奋不已。总之,无论你有多么小的变化,点点都于你很重要。
22、人不怕痛苦,只怕丢掉刚强,不怕磨难,只怕失去希望。面对种种磨难,我们不能逃避,也不要屈服,要把经历的每一次磨难看作是生命的一种尝试,当作人生的又一新课题,不断的攻克它,战胜它。我们就永远是生活的强者。
23、人比文凭更重要。很多成功的人在回头的时候都说自己太关注工作和事业了,最遗憾的是没有好好陪陪父母、爱人、孩子,往往还伤心落泪,何必呢,早意识到这些,多给生活一些空间和时间就可以了。我们没有必要活得那么累。
24、给挫折一个微笑,它能给你战胜挫折的意志。我们前进的脚步总是让挫折绊住。但是我们要做生活的主人,不要坐在绊脚石的面前唉声叹气而耗尽了自己,学会微笑着用有限的生命来超越无限的自己。
25、你曾经以为不可以放手的东西,只是生命瞬间的一块跳板。所有的哀伤、痛楚,所有不能放弃的事情,不过是生命里一个过渡,你跳过了,就可以变得更精采。
26、不要仰望高山的雄奇,即使你是一粒微尘,忘却自我渺小,依旧可以堆砌一个星球;不要羡慕苍松的挺拔,就算你是一株小草,忘却自我平凡,仍然可以装点一方土地;()不要向往大海的汹涌,纵使你是一滴雨露,忘却自我普通,还是可以滋润一片泥壤。
27、成功是一种快乐,成功也是我们梦寐以求的,只不过每一位追求成功的人都有可能会遇到失败,也害怕过失败。
28、道德是提升自己的明灯,不该是呵斥别人的鞭子。
29、把握每一个机会,希望与信心就会并存,心存希望就会让我们不再迷茫,就算没了希望也别绝望,死路往往也是一个出口。只要我们有信心。
30、不要像玻璃那样脆弱。有的人眼睛总盯着自己,所以长不高看不远;总是喜欢怨天尤人,也使别人无比厌烦。没有苦中苦,哪来甜中甜?不要像玻璃那样脆弱,而应像水晶一样透明,太阳一样辉煌,腊梅一样坚强。既然睁开眼睛享受风的清凉,就不要埋怨风中细小的沙粒。
31、只有脚踏实地的人,才能够说:路,就在我的脚下。
32、选择了就不后悔,渡过今天的艰难,迎来明天的辉煌
33、磨难是祸,也是福,它可以锻炼我们的意志。生命中充满坎坷曲折,人的价值才能充分体现出来。旅途上遇有艰险,人生才更有滋味。有了磨难才会懂得生活的意义,从而更热爱和珍惜生活。
34、活在人类世界,没有任何一个人可以是高枕无忧,没有哪一个人能够永远的一帆风顺,但是,遇到挫折没关系,应该打起精神,善待一切,安安静静的能够坦然的面对,你自身的坚强与否完全有可能就决定了你的最后的成败。
35、希望,只有和勤奋作伴,才能如虎添翼。
36、古今庸人,败于“惰”字;古今才人,败于“傲”字。
37、贫而好施,功倍于富。贵而好聚,恶倍于贫。
2、在我人生成长的历程中,许多的事都会令我很开心,快乐在我的生活中无处不在,每当我遨游在知识的海洋里,沉浸在书的字里行间中,这时就是我最最快乐的时光了。我如饥似渴地啃食着,我阅读,所以我快乐!
3、面对人生的磨难,请用你的毅力创造生命的奇迹吧!
4、书,给我一次快乐阅读旅程,让我成长,让我快乐,让我带着梦想飞翔。
5、小疑有小进,大疑有大进!
6、成长的路上,不缺乏鲜花,也少不了荆棘,充满了幸福,也一定有创伤。但不要只盯着不幸和痛苦,只要经过风雨的磨砺,我们才能焕发出生命的光彩和伟大,要知道,美丽的彩虹只会出现在雨后!
7、尽管你是一个强者,可是一定还有比你更强的人,所以不要在别人面前骄傲自满,自己夸耀自己。
8、成功,这是至高无尚;振奋与喜悦;勤劳与汗水的代名词,有多少人为它而不断奋斗,有多少人为它而不断成长,人只要努力就会成功!
9、行胜于言,超越自我,知识启迪智慧。
【关键词】 双丹口服液 环磷酰胺 碳酸钙维D 大鼠 骨矿物质 骨生物力学
Abstract:ObjectiveTo study osteoporosis of cyclophosphamide and investigate the preventive effects of Shuangdan oral liquid on rats.MethodsCyclophosphamide at the dose of 4.5 mg·kg-1·d-1 was given to the rats orally for 15 days while Shuangdan oral liquid and calcium and vitamin D3 were given to cyclophosphamide-treated rats orally. At the experiment, bone biomechanics analysis of the right femur were performed in fresh sections. Then the hydroxyproline, Ca, P, Mg of bone were tested.ResultsBiomechanics property and bone mineral on femur of rats decreased significantly.ConclusionShuangdan oral liquid can prevent osteopathologic change from cyclophosphamide-induced on rats.
Key words:Shuangdan oral liquid; Cyclophosphamide; Calcium and vitamin D3; Rats; Bone mineral; Bone biomechanics
双丹口服液记载于2005版《中国药典》,由丹参和牡丹皮两味中药组成,是著名的中药方剂。已有报道双丹口服液具有清除氧自由基,改善血流循环,增强免疫,以及抗炎、抗肿瘤等作用。其有效成分包括丹参素、丹参酮、丹皮酚、芍药苷等,本课题组曾报道丹参素能提高成骨细胞的活性,防治糖皮质激素大鼠所致的骨质疏松[1],还报道了环磷酰胺可导致大鼠和小鼠产生骨质疏松毒性[2,3],发现环磷酰胺有抑制成骨细胞活性而导致骨丢失的作用,对骨的影响皆类似于老年型骨质疏松的病理改变。本实验观察双丹口服液对环磷酰胺介导的骨质疏松大鼠股骨的影响,并与阳性药物碳酸钙维D进行比较。现报道如下。
1 材料与方法
1.1 药品与试剂
1.1.1 药品 丹参、牡丹皮等中药材购自本地药房,产地为四川。环磷酰胺:江苏恒瑞医药股份有限公司,批号:403501。碳酸钙维D片:美国安士制药公司,批号:5B16656,每片相当于钙300mg,VitD100单位。
1.1.2 试剂 丹参素标准品:中国药品生物制品检定所,批号110855-200304;甲醇(色谱纯,天津四友化学试剂公司);水为三蒸水;冰醋酸(分析纯,汕头陇西化工厂);羟脯氨酸试剂盒(碱水解法,南京建成生物技术有限公司)。
1.2 仪器 AE240电子天平(梅特勒-托利多仪器公司上海分公司生产),高效液相色谱仪:Agilent1100系列四元梯度泵、Agilent1100手动进样器, Agilent1100系列一极管阵列检测器, Agilent1100工作站( Agilent公司);超声波清洗器,858 Mini Bionix 型材料测试系统(MTS,USA);电感偶合等离子体发射光谱仪(ICP,美国TJA公司);UV-752紫外分光光度计(上海第三医学仪器厂)。
1.3 方法
1.3.1 药物制备双丹口服液的制备工艺:参照2005年版《中国药典》的方法提取,取丹参600 g,牡丹皮300 g,牡丹皮蒸馏,收集蒸馏液。药渣和丹参加水煎煮两次,第1次2 h,第2次1 h,合并煎液,滤过,滤液浓缩至相对密度1.15的清膏,加乙醇使含醇量达60%,冷藏24 h,滤过,滤液回收乙醇至相对密度1.15的清膏,加入牡丹皮蒸馏液,最后将提取液浓缩至每100 ml含生药191.7 g,密封消毒,4℃冰箱保存备用。
双丹口服液的质量控制:双丹口服液的指纹图谱用高效液相法检测,色谱柱:Agilient C18(250 mm×4.65 mm,5 μm);流动相:甲醇(A)-1%冰醋酸(B),程序梯度洗脱:10%A(5 min)-30%A(15min);流速:1ml/min;温度为室温;检测波长:280 nm。精密称取0.104,0.208,0.312,0.520,0.624,0.728 mg的丹参素钠标准品用三蒸水定容至5 ml,分别精密吸取上述对照品20 μl注入液相色谱仪,记录色谱图,以峰面积对丹参素溶液浓度(μg/ml)进行线性回归计算,得线性回归方程:Y=11 981X+11.492(r=0.999 9)。再根据指纹图谱中丹参素的峰面积,计算双丹口服液每毫升的丹参素含量。
1.3.2 动物与分组 3月龄大鼠40只,雌雄各半,体重(208±28)g,由广东医学院实验动物中心提供,SPF级,动物合格证号:2005A023。按体重对等原则随即分成4组,每组10只。正常对照组: 灌胃给予5 ml·kg-1·d-1生理盐水;环磷酰胺组: 灌胃给予环磷酰胺4.5 mg·kg-1·d-1;碳酸钙维D组:灌胃给予环磷酰胺4.5 mg·kg-1·d-1及碳酸钙维D 0.4 mg·kg-1·d-1;双丹预防组:灌胃给予环磷酰胺4.5 mg·kg-1·d-1及双丹口服液5 mg·kg-1·d-1。4组动物均自由饮水和进食标准饲料。实验共给药15 d,实验结束时,取右侧股骨用生理盐水纱布、锡纸包裹于-20℃保存,待骨生物力学检测及骨有机质和矿物含量检测。
1.3.3 骨生物力学检测[4] 检测时,将-20℃保存的股骨常温解冻,生理盐水复湿。用858 Mini Bionix型材料测试系统监测和分析大鼠右侧股骨的生物力学性能。将股骨置于流变仪上进行三点弯曲实验,加载速度为0.01 mm/s,跨距为15 mm。记录应力-应变曲线,从曲线上读取及计算弹性强度、最大强度、断裂强度、刚性系数、弯曲能量及断裂能量吸收等指标。
1.3.4 骨有机质和矿物含量检测 将生物力学检测后的骨材料80℃烘干至恒重,用AE240电子天平称重;然后,每份骨样本加6 mol/L HCl在108℃温度下消化16 h后,把消化液分成两份。一份稀释后用ICP测定骨Ca,P,微量元素的含量,与骨干重进行比较,用骨矿物元素量(mg)/骨干重(g)的比值来作为骨矿物质含量的指标,骨矿物元素量/骨干重的比值越大,说明骨矿物质在骨中所占的比例越大。另一份消化液过滤后调pH值至6,然后,经《中国药典》法测定羟脯氨酸吸光度,在标准曲线中读出其含量。由于骨有机质中骨胶原占90%以上,骨胶原中羟脯氨酸含量比较稳定,约占12.5%,因此,根据骨羟脯氨酸的含量可推算出骨有机质的相对含量。即骨有机质=骨羟脯氨酸/12.5%/90%。用骨有机质/骨干重的比值作为骨有机质含量的指标。其比值越大,说明骨有机质含量越高。
1.3.5 数据处理 参数值用(±s)表示,用SPSS12.0进行方差分析。用变化率表示各实验组大鼠相对参数的变化〔如:变化率A=(待比较组/A组-1)×100%〕。
2 结果
2.1 双丹口服液的制备及质量控制根据1.3.1项方法制备了供实验用的双丹口服液,用高效液相色谱仪检测得到的指纹图谱见图1,丹参素标准品的图谱见图2。经检测及计算,双丹口服液每毫升含丹参素2.431 09 mg。
图1 双丹口服液的高效液相指纹图谱(略)
图2 丹参素标准品的高效液相质量控制图谱(略)
2.2 双丹口服液对环磷酰胺大鼠股骨生物力学指标的影响 结果见表1。
表1 双丹口服液对环磷酰胺大鼠股骨生物力学的影响(略)
n=10;A、B C为变化率:A是与对照组比较;B是与环磷酰胺模型组比较;C是与碳酸钙维D组比较;*P
由表1可见,环磷酰胺组大鼠股骨的一系列生物力学性能均较正常大鼠呈下降趋势,其中最大强度、刚性系数的差别具有显著性,且斜型断裂面明显多于正常和药物组大鼠;提示环磷酰胺可使大鼠股骨的生物力学性能明显减弱,易产生粉碎性骨折。阳性药物碳酸钙维D组的生物力学性能指标除断裂吸收能量外,均较环磷酰胺组大鼠显著性增加,且与正常大鼠相当;提示碳酸钙维D可有效拮抗环磷酰胺造成的大鼠生物力学性能下降。双丹预防组生物力学性能指标的改变均同阳性药物一致,且数值与阳性药物相当,提示双丹口服液亦可有效拮抗环磷酰胺造成的大鼠生物力学性能下降,其作用效果与阳性药物相当。
2.3 双丹口服液对环磷酰胺大鼠股骨骨代谢生化指标的影响 结果见表2。
表2 双丹口服液对环磷酰胺大鼠股骨有机质和骨矿含量的影响(略)
n=10;A,B, C为变化率:A是与对照组比较,B是与环磷酰胺模型组比较;C是与碳酸钙维D组比较,*P
由表2可见,环磷酰胺使大鼠股骨骨有机质/骨干重以及钙、磷、镁三项骨矿物指数均较正常大鼠显著下降,且差别均有统计学意义(P
3 讨论
3.1 双丹口服液制备工艺稳定,质量可控双丹口服液的制备工艺是依据2005版《中国药典》所记载的双丹口服液的方法进行提取制备,该方法对丹参和牡丹皮分别采用针对其药材成分特点的提取步骤,有利于药材成分的有效提取。而本试验所使用的质量控制方法,其流动相采用了梯度洗脱,较药典的固定洗脱更有利于色谱峰的分离。且在标准品的制备上考虑到丹参素为水溶性成分,双丹口服液也为水相提取,因而改用三蒸水溶解。检验结果显示每毫升双丹口服液含丹参素2.431 09 mg,符合《中国药典》工艺的质量控制标准。但丹参素并不一定是双丹口服液中唯一对抗骨丢失的有效成分,故其与骨质疏松的谱效关系有待进一步地研究完善。
3.2 环磷酰胺可致大鼠股骨骨生物力学性能下降,双丹口服液有预防作用股骨是大鼠主要的承力组织,其骨干包围着厚而致密的骨密质,坚硬牢固,抗冲击力强。本实验采用三点弯曲法来研究股骨的材料和结构力学特性。结果显示,环磷酰胺可导致正常大鼠的一系列生物力学指标呈现下降趋势,其中表示抗骨能力的最大强度以及代表骨材料硬度的刚性系数分别下降14.8%,27.7%(P
补充钙与维生素D是各类骨质疏松的基础治疗,可有效促进骨形成和抑制骨吸收,从而提高骨骼结构性能,降低骨折风险的目的。本实验的结果也显示,碳酸钙维D除能显著对抗环磷酰胺导致的最大强度和刚性系数下降之外,还能使抗变形能力的弹性强度和弯曲能量,抗断裂能力的断裂强度以及代表骨材料可塑性的断裂应变等一系列力学指标呈现显著性上升,说明碳酸钙维D可有效对抗环磷酰胺所导致大鼠股骨的生物力学性能下降,减少骨折发生的可能,与其作为骨质疏松基础治疗药物的作用一致。
双丹预防组的上述性能指标改变均与阳性药物的影响一致,说明双丹口服液同碳酸钙维D一样具有对抗环磷酰胺大鼠股骨的生物力学性能下降的作用,并可有效降低骨折的发生。可能与双丹口服液基础药材的有效成分[5,6]能改善血流微循环,减轻化疗对骨髓的损伤及丹参抑制血管异位钙化,使钙沉积到骨骼[7],从而促进骨重建和骨矿化等作用有关。
3.3 双丹口服液对环磷酰胺致大鼠股骨和腰椎骨矿物质丢失的拮抗作用钙、磷等无机矿物质主要通过骨矿化作用储存沉积于骨骼中,而成骨细胞分泌Ⅰ型胶原相互交联形成间隙为0.5 nm的骨基质框架是骨矿化发生的特定环境。实验结果显示,环磷酰胺组大鼠股骨和腰椎骨的钙、磷、镁均明显丢失,提示环磷酰胺可使大鼠骨骼的骨矿物质丢失。碳酸钙维D组的骨有机质和骨矿物质均较环磷酰胺组明显增加,提示碳酸钙维D可有效拮抗环磷酰胺大鼠的骨丢失作用,其可能与维生素D可增加肠道对钙、磷的吸收利用,以及促进骨胶原的形成矿化作用有关。而双丹预防组对骨有机质和矿物质的影响与阳性药物一致,说明双丹口服液也可有效拮抗环磷酰胺所引起的骨丢失作用。其可能原因:环磷酰胺所致的高浓度超氧自由基是造成骨髓损伤的主要机制之一[8],自由基的大量沉积,势必将造成骨基质框架结构的破坏,使骨中矿物质沉积减少而导致骨钙、磷、镁的流失。双丹药材[6,9]的有效成分均具有明显清除氧自由基的作用,拮抗对成骨细胞的损伤,有效地对抗自由基大量沉积而造成的骨矿物在骨基质中的矿化沉积减少。
环磷酰胺致大鼠骨质疏松主要通过抑制骨形成[2],该模型的特点是骨矿物的丢失,骨质变得薄而易碎,锥体易压缩变形,骨折风险率显著增高,对骨的病理改变类似于老年性骨质疏松的特点。碳酸钙维D因其具有增强骨形成和降低骨吸收的作用,从而被临床广泛用于治疗各型骨质疏松的基础药物。而在本实验中双丹口服液表现出与碳酸钙维D相当的对抗环磷酰胺大鼠的骨丢失及骨生物力学性能下降的作用。提示双丹口服液可能成为临床抗骨质疏松的骨形成促进剂和用于治疗老年性骨质疏松的有效药物。
【参考文献】
Abstract:ObjectiveTo study osteoporosis of cyclophosphamide and investigate the preventive effects of Shuangdan oral liquid on rats.MethodsCyclophosphamide at the dose of 4.5 mg·kg-1·d-1 was given to the rats orally for 15 days while Shuangdan oral liquid and calcium and vitamin D3 were given to cyclophosphamide-treated rats orally. At the experiment, bone biomechanics analysis of the right femur were performed in fresh sections. Then the hydroxyproline, Ca, P, Mg of bone were tested.ResultsBiomechanics property and bone mineral on femur of rats decreased significantly.ConclusionShuangdan oral liquid can prevent osteopathologic change from cyclophosphamide-induced on rats.
Key words:Shuangdan oral liquid; Cyclophosphamide; Calcium and vitamin D3; Rats; Bone mineral; Bone biomechanics
双丹口服液记载于2005版《中国药典》,由丹参和牡丹皮两味中药组成,是著名的中药方剂。已有报道双丹口服液具有清除氧自由基,改善血流循环,增强免疫,以及抗炎、抗肿瘤等作用。其有效成分包括丹参素、丹参酮、丹皮酚、芍药苷等,本课题组曾报道丹参素能提高成骨细胞的活性,防治糖皮质激素大鼠所致的骨质疏松[1],还报道了环磷酰胺可导致大鼠和小鼠产生骨质疏松毒性[2,3],发现环磷酰胺有抑制成骨细胞活性而导致骨丢失的作用,对骨的影响皆类似于老年型骨质疏松的病理改变。本实验观察双丹口服液对环磷酰胺介导的骨质疏松大鼠股骨的影响,并与阳性药物碳酸钙维D进行比较。现报道如下。
1 材料与方法
1.1 药品与试剂
1.1.1 药品 丹参、牡丹皮等中药材购自本地药房,产地为四川。环磷酰胺:江苏恒瑞医药股份有限公司,批号:403501。碳酸钙维D片:美国安士制药公司,批号:5B16656,每片相当于钙300mg,VitD100单位。
1.1.2 试剂 丹参素标准品:中国药品生物制品检定所,批号110855-200304;甲醇(色谱纯,天津四友化学试剂公司);水为三蒸水;冰醋酸(分析纯,汕头陇西化工厂);羟脯氨酸试剂盒(碱水解法,南京建成生物技术有限公司)。
1.2 仪器 AE240电子天平(梅特勒-托利多仪器公司上海分公司生产),高效液相色谱仪:Agilent1100系列四元梯度泵、Agilent1100手动进样器, Agilent1100系列一极管阵列检测器, Agilent1100工作站( Agilent公司);超声波清洗器,858 Mini Bionix 型材料测试系统(MTS,USA);电感偶合等离子体发射光谱仪(ICP,美国TJA公司);UV-752紫外分光光度计(上海第三医学仪器厂)。
1.3 方法
1.3.1 药物制备双丹口服液的制备工艺:参照2005年版《中国药典》的方法提取,取丹参600 g,牡丹皮300 g,牡丹皮蒸馏,收集蒸馏液。药渣和丹参加水煎煮两次,第1次2 h,第2次1 h,合并煎液,滤过,滤液浓缩至相对密度1.15的清膏,加乙醇使含醇量达60%,冷藏24 h,滤过,滤液回收乙醇至相对密度1.15的清膏,加入牡丹皮蒸馏液,最后将提取液浓缩至每100 ml含生药191.7 g,密封消毒,4℃冰箱保存备用。
双丹口服液的质量控制:双丹口服液的指纹图谱用高效液相法检测,色谱柱:Agilient C18(250 mm×4.65 mm,5 μm);流动相:甲醇(A)-1%冰醋酸(B),程序梯度洗脱:10%A(5 min)-30%A(15min);流速:1ml/min;温度为室温;检测波长:280 nm。精密称取0.104,0.208,0.312,0.520,0.624,0.728 mg的丹参素钠标准品用三蒸水定容至5 ml,分别精密吸取上述对照品20 μl注入液相色谱仪,记录色谱图,以峰面积对丹参素溶液浓度(μg/ml)进行线性回归计算,得线性回归方程:Y=11 981X+11.492(r=0.999 9)。再根据指纹图谱中丹参素的峰面积,计算双丹口服液每毫升的丹参素含量。
1.3.2 动物与分组 3月龄大鼠40只,雌雄各半,体重(208±28)g,由广东医学院实验动物中心提供,SPF级,动物合格证号:2005A023。按体重对等原则随即分成4组,每组10只。正常对照组: 灌胃给予5 ml·kg-1·d-1生理盐水;环磷酰胺组: 灌胃给予环磷酰胺4.5 mg·kg-1·d-1;碳酸钙维D组:灌胃给予环磷酰胺4.5 mg·kg-1·d-1及碳酸钙维D 0.4 mg·kg-1·d-1;双丹预防组:灌胃给予环磷酰胺4.5 mg·kg-1·d-1及双丹口服液5 mg·kg-1·d-1。4组动物均自由饮水和进食标准饲料。实验共给药15 d,实验结束时,取右侧股骨用生理盐水纱布、锡纸包裹于-20℃保存,待骨生物力学检测及骨有机质和矿物含量检测。
1.3.3 骨生物力学检测[4] 检测时,将-20℃保存的股骨常温解冻,生理盐水复湿。用858 Mini Bionix型材料测试系统监测和分析大鼠右侧股骨的生物力学性能。将股骨置于流变仪上进行三点弯曲实验,加载速度为0.01 mm/s,跨距为15 mm。记录应力-应变曲线,从曲线上读取及计算弹性强度、最大强度、断裂强度、刚性系数、弯曲能量及断裂能量吸收等指标。
1.3.4 骨有机质和矿物含量检测 将生物力学检测后的骨材料80℃烘干至恒重,用AE240电子天平称重;然后,每份骨样本加6 mol/L HCl在108℃温度下消化16 h后,把消化液分成两份。一份稀释后用ICP测定骨Ca,P,微量元素的含量,与骨干重进行比较,用骨矿物元素量(mg)/骨干重(g)的比值来作为骨矿物质含量的指标,骨矿物元素量/骨干重的比值越大,说明骨矿物质在骨中所占的比例越大。另一份消化液过滤后调pH值至6,然后,经《中国药典》法测定羟脯氨酸吸光度,在标准曲线中读出其含量。由于骨有机质中骨胶原占90%以上,骨胶原中羟脯氨酸含量比较稳定,约占12.5%,因此,根据骨羟脯氨酸的含量可推算出骨有机质的相对含量。即骨有机质=骨羟脯氨酸/12.5%/90%。用骨有机质/骨干重的比值作为骨有机质含量的指标。其比值越大,说明骨有机质含量越高。
1.3.5 数据处理 参数值用(±s)表示,用SPSS12.0进行方差分析。用变化率表示各实验组大鼠相对参数的变化〔如:变化率A=(待比较组/A组-1)×100%〕。
2 结果
2.1 双丹口服液的制备及质量控制根据1.3.1项方法制备了供实验用的双丹口服液,用高效液相色谱仪检测得到的指纹图谱见图1,丹参素标准品的图谱见图2。经检测及计算,双丹口服液每毫升含丹参素2.431 09 mg。
图1 双丹口服液的高效液相指纹图谱(略)
图2 丹参素标准品的高效液相质量控制图谱(略)
2.2 双丹口服液对环磷酰胺大鼠股骨生物力学指标的影响 结果见表1。
表1 双丹口服液对环磷酰胺大鼠股骨生物力学的影响(略)
n=10;A、B C为变化率:A是与对照组比较;B是与环磷酰胺模型组比较;C是与碳酸钙维D组比较;*P
由表1可见,环磷酰胺组大鼠股骨的一系列生物力学性能均较正常大鼠呈下降趋势,其中最大强度、刚性系数的差别具有显著性,且斜型断裂面明显多于正常和药物组大鼠;提示环磷酰胺可使大鼠股骨的生物力学性能明显减弱,易产生粉碎性骨折。阳性药物碳酸钙维D组的生物力学性能指标除断裂吸收能量外,均较环磷酰胺组大鼠显著性增加,且与正常大鼠相当;提示碳酸钙维D可有效拮抗环磷酰胺造成的大鼠生物力学性能下降。双丹预防组生物力学性能指标的改变均同阳性药物一致,且数值与阳性药物相当,提示双丹口服液亦可有效拮抗环磷酰胺造成的大鼠生物力学性能下降,其作用效果与阳性药物相当。
2.3 双丹口服液对环磷酰胺大鼠股骨骨代谢生化指标的影响 结果见表2。
表2 双丹口服液对环磷酰胺大鼠股骨有机质和骨矿含量的影响(略)
n=10;A,B, C为变化率:A是与对照组比较,B是与环磷酰胺模型组比较;C是与碳酸钙维D组比较,*P
由表2可见,环磷酰胺使大鼠股骨骨有机质/骨干重以及钙、磷、镁三项骨矿物指数均较正常大鼠显著下降,且差别均有统计学意义(P
3 讨论
3.1 双丹口服液制备工艺稳定,质量可控双丹口服液的制备工艺是依据2005版《中国药典》所记载的双丹口服液的方法进行提取制备,该方法对丹参和牡丹皮分别采用针对其药材成分特点的提取步骤,有利于药材成分的有效提取。而本试验所使用的质量控制方法,其流动相采用了梯度洗脱,较药典的固定洗脱更有利于色谱峰的分离。且在标准品的制备上考虑到丹参素为水溶性成分,双丹口服液也为水相提取,因而改用三蒸水溶解。检验结果显示每毫升双丹口服液含丹参素2.431 09 mg,符合《中国药典》工艺的质量控制标准。但丹参素并不一定是双丹口服液中唯一对抗骨丢失的有效成分,故其与骨质疏松的谱效关系有待进一步地研究完善。
3.2 环磷酰胺可致大鼠股骨骨生物力学性能下降,双丹口服液有预防作用股骨是大鼠主要的承力组织,其骨干包围着厚而致密的骨密质,坚硬牢固,抗冲击力强。本实验采用三点弯曲法来研究股骨的材料和结构力学特性。结果显示,环磷酰胺可导致正常大鼠的一系列生物力学指标呈现下降趋势,其中表示抗骨能力的最大强度以及代表骨材料硬度的刚性系数分别下降14.8%,27.7%(P
补充钙与维生素D是各类骨质疏松的基础治疗,可有效促进骨形成和抑制骨吸收,从而提高骨骼结构性能,降低骨折风险的目的。本实验的结果也显示,碳酸钙维D除能显著对抗环磷酰胺导致的最大强度和刚性系数下降之外,还能使抗变形能力的弹性强度和弯曲能量,抗断裂能力的断裂强度以及代表骨材料可塑性的断裂应变等一系列力学指标呈现显著性上升,说明碳酸钙维D可有效对抗环磷酰胺所导致大鼠股骨的生物力学性能下降,减少骨折发生的可能,与其作为骨质疏松基础治疗药物的作用一致。
双丹预防组的上述性能指标改变均与阳性药物的影响一致,说明双丹口服液同碳酸钙维D一样具有对抗环磷酰胺大鼠股骨的生物力学性能下降的作用,并可有效降低骨折的发生。可能与双丹口服液基础药材的有效成分[5,6]能改善血流微循环,减轻化疗对骨髓的损伤及丹参抑制血管异位钙化,使钙沉积到骨骼[7],从而促进骨重建和骨矿化等作用有关。
3.3 双丹口服液对环磷酰胺致大鼠股骨和腰椎骨矿物质丢失的拮抗作用钙、磷等无机矿物质主要通过骨矿化作用储存沉积于骨骼中,而成骨细胞分泌Ⅰ型胶原相互交联形成间隙为0.5 nm的骨基质框架是骨矿化发生的特定环境。实验结果显示,环磷酰胺组大鼠股骨和腰椎骨的钙、磷、镁均明显丢失,提示环磷酰胺可使大鼠骨骼的骨矿物质丢失。碳酸钙维D组的骨有机质和骨矿物质均较环磷酰胺组明显增加,提示碳酸钙维D可有效拮抗环磷酰胺大鼠的骨丢失作用,其可能与维生素D可增加肠道对钙、磷的吸收利用,以及促进骨胶原的形成矿化作用有关。而双丹预防组对骨有机质和矿物质的影响与阳性药物一致,说明双丹口服液也可有效拮抗环磷酰胺所引起的骨丢失作用。其可能原因:环磷酰胺所致的高浓度超氧自由基是造成骨髓损伤的主要机制之一[8],自由基的大量沉积,势必将造成骨基质框架结构的破坏,使骨中矿物质沉积减少而导致骨钙、磷、镁的流失。双丹药材[6,9]的有效成分均具有明显清除氧自由基的作用,拮抗对成骨细胞的损伤,有效地对抗自由基大量沉积而造成的骨矿物在骨基质中的矿化沉积减少。
【关键词】 肝素锂抗凝血浆;常规生化检验;评估分析
DOI:10.14163/ki.11-5547/r.2015.03.061
随着全自动生化仪在大中型医院的广泛使用, 生化分析仪检测不再是制约检验报告能否及时发出的主要因素。传统检测中, 速度较慢的血清标本分离对检验报告的及时发出产生了严重的制约, 因此, 目前临床上多采用肝素锂抗血浆取代血清标本, 为快速汇报检验报告提供了便利[1]。传统检验方法存在标本血清有纤维蛋白丝遗留及分离过程中血液易发生破坏等缺点。为进一步探究肝素锂抗凝血浆用于常规生化检验的可行性, 本院对120例患者的血清及血浆进行常规生化检测, 现将结果报告如下。
1 资料与方法
1. 1 一般资料 抽取本院2012年8月~2014年8月收治的120例患者的血清及血浆作为标本, 其中男66例, 女54例;年龄13~72岁, 平均年龄(36.7±3.3)岁。采用的红色真空采血管(无添加剂)和绿色肝素锂抗凝管均由山东威高集团医用高分子制品有限公司生产, 设备为西门子ADVIA-2400生化分析仪, 采用的试剂、标准液、质控物质均为利得曼公司生产。
1. 2 方法 患者清晨空腹时采集静脉血, 红色真空采血管(无添加剂)和绿色肝素锂抗凝管分别采集5 ml, 摇晃均匀后使其充分抗凝。红色管待血液凝固后, 放置温度为37℃的恒温水箱中约20 min左右, 后进行离心分离, 对肝素锂抗凝管分离血浆, 两种方法离心时间均为10 min左右, 离心速度为3000 rpm, 离心结束后在相同条件下进行血清及血浆的测定, 检测项目包括总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白蛋白(ALB)、碱性磷酸酶(ALP)、肌酐(Cre)、氯离子(Cl-)、尿素氮(BUN)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、谷氨酰转肽酶(GGT)、总蛋白 (TP)、钙离子(Ca2+)、血糖(Glu)、乳酸脱氢酶(LDH)、α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDH)、钾离子(K+)、二氧化碳(CO2)、钠离子(Na+)等20项项目。
1. 3 统计学方法 采用SPSS18.0统计学软件对数据进行统计学分析。计量资料以均数±标准差( x-±s)表示, 采用t检验;计数资料采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。
2 结果
肝素锂抗凝血浆与血清生化检查结果中钾离子、血糖及LDH浓度的含量比较差异具有统计学意义(P<0.05), 其他检测项目的比较差异无统计学意义(P>0.05)。具体情况见表1。
3 讨论
国际临床化学协会推荐使用血清作为临床常规生化检验标本, 目前常规生化诊断的参考体系也源于血清, 冬季温度较低时, 血液不易完全凝固, 离心过程易对血液的有形成分进行破坏, 细胞内容物渗出至血清中, 导致检测结果不准确。肝素是含有硫酸基团的粘多糖, 具有极强的抗凝能力, 对细胞体积不产生任何影响, 且不易造成溶血。肝素抗凝血浆可避开血液凝固的过程, 立即离心, 有利于血液分离时间的缩短, 且使测定值更准确, 可有效缩短急诊患者等待检验结果的时间[2]。肝素与抗凝血酶结合, 可有效增强抗凝血酶的作用, 消灭活丝氨酸蛋白酶, 从而阻止凝血酶形成, 产生抗凝作用。因此, 使用肝素抗凝可有效避开血液凝固的过程, 有利于血浆快速分离, 且测定值更接近患者体内的真实情况, 在常用抗凝剂中, 肝素对酶及检测结果的影响最小。本组研究中, 血清及血浆各项检测指标基本一致, 差异无统计学意义(P>0.05), 但钾离子、血糖及LDH浓度的含量比较差异具有统计学意义(P<0.05)。
相关研究表明, 血浆及血清检测中, 钾离子、血糖及LDH浓度产生显著差异的主要原因在于, 血液在凝固过程中对血小板具有一定的破坏作用, 血小板中的钾离子释放至血液中, 导致细胞内外钾离子出现交换, 使得血清钾离子的浓度高于血浆钾离子浓度[3]。血清分离时间较长后, 因红细胞膜通透性作用及钾离子的浓度差, 导致部分红细胞中的钾离子渗出到细胞外, 血液标本在离心过程中少许红细胞受到破坏, 血浆中的纤维蛋白等物质的含量比血清中多, 使血浆相对被稀释[4]。血糖出现差异的原因在于, 血液在水溶、放置及分离过程中血细胞代谢尤其是红细胞无氧酵解可消耗血清标本中的部分血糖, 但是抗凝血浆对血浆进行立即离心分离, 血浆中血糖的分解及消耗较少, 因此, 肝素锂抗凝血浆中的血糖浓度会高于血清中血糖的浓度。LDH检测存在差异的原因可能是在凝固、离心过程中, 血细胞受到挤压出现变形, 血细胞中高浓度LDH不断向血清中释放, 导致血清中LDH浓度偏高[5]。
综上所述, 肝素锂抗凝血浆可显著提高生化检验的效率, 有利于抢救成功率的提高, 但是目前常规生化检查正常参考值的设定都源于静脉血清, 部分项目的检查结果会出现较大差异, 因此, 血浆无法直接代替血清检测。为方便临床医师参考, 可建立抗凝血浆的参考范围。
参考文献
[1] 方宏罡.探讨肝素抗凝血浆用于急诊生化检验的可行性.大家健康(学术版), 2014(3):58.
[2] 马鸿雁.肝素里抗凝血浆用于常规生化检验的评估.试验与检验医学, 2013, 31(1):36-38.
[3] 王好玉,赵振文.探讨肝素锂抗凝血用于门急诊临床生化检验的可行性.中国保健营养(下旬刊), 2012, 22(12):5455-5456.
[4] 贾艳芳.肝素锂抗凝血浆代替血清标本进行生化检验的可行性.中国保健营养(下旬刊), 2012, 22(1):440-441.
甲钴胺(mecobalamin)是一种周围神经障碍治疗药物,是维生素B12的甲基衍生物,临床主要用于治疗糖尿病神经障碍及多发性神经炎等周围神经疾病,也用于治疗因缺乏维生素B12引起的巨红细胞性贫血。与其他维生素B12相比,甲钴胺对神经组织具有更好的传递性,在体内通过甲基转换反应可促进神经细胞内的核酸-蛋白质-脂质代谢以及神经髓鞘的合成,修复被损害的神经组织,改善代谢障碍。此外甲钴胺还可以抑制神经组织传导的异常兴奋,促进正红血母细胞的成熟与分裂,促进血红素的合成, 改善贫血者的血象[1-3]。甲钴胺制剂的主药含量为每片500μg,给药后体内血药浓度极低( ng·L-1级),很难用一般的方法进行检测。本试验建立了甲钴胺血药浓度的化学发光微粒子免疫测定方法(chemiluminescentmicrop- article immunoassay,CMIA),并对甲钴胺胶囊的生物等效性进行研究。目前国内外尚未见有关于该方法测定甲钴胺人体内血药浓度的报道。
1 材料与方法
1·1 仪器 ARCHITECTTMi2000SR(ABBOTT LABORATO- RIES,USA);YKH-Ⅱ型液体快速混合器(江西医疗器械厂); KQ-50型超声清洗仪(上海超声波仪器厂);TGL-16C型高速台式离心机(上海安亭科学仪器厂)。
1·2 药品和试剂甲钴胺标准对照品(北京市福瑞康正医药技术研究所,纯度99·2%,批号: 030611); B12试剂盒(批号: 11001M300);B12Controls(批号: 10845M100);B12 MasterCalibrators(批号: 04444M100);预激发液(批号: 05454M100);激发液(批号: 06725M100);清洗液(08317M102),美国雅培制药有限公司生产。试验制剂:国产甲钴胺胶囊(500μg,福建华海药业有限公司,批号: 030301;参比制剂:弥可保[500 μg,卫材(苏州)制药有限公司,批号: 020173]。
1·3 受试者选择本试验经国家食品药品监督管理局批准,试验方案经北京大学第三医院伦理委员会批准。20名健康成年男性志愿者经全面体格检查,心电图、血压、血尿常规及肝肾功能等各项指标均正常;受试者年龄(22·7±1·4)岁,身高(1·72±0·06)m,体重 (63·6±5·9)kg。受试者均无吸烟、饮酒史,受试前两周内未服用过任何药物,各受试者均自愿参加试验并于试验前由本人签署知情同意书。
1·4 给药方法与样本采集本试验采用2制剂、2周期的随机交叉给药方案。入选受试者于每周期试验前1 d晚入住Ⅰ期病房,禁食过夜后于次日清晨,以200 mL温水送服单剂量1 500μg的甲钴胺试验或参比制剂。分别于服药前及服药后0·5, 1, 1·5, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 12, 24, 48及72 h各采取前臂静脉血4 mL,静置2 h后 4 000 r·min-1离心10 min,分离血清置-40℃冰箱保存待测。在整个试验过程中样品注意避光,以避免药物降解。试验期间受试者进统一饮食。给药后2 h进早餐、给药后4 h进午餐、给药后10 h进晚餐,给药后 2 h后可自由饮水。受试者在试验期间禁烟、酒;禁服含咖啡因、可可碱、茶碱的饮品;禁食含B12的动物性食品,如肉、蛋、牛奶;禁止剧烈运动。
1·5 甲钴胺血药浓度测定方法的建立
1·5·1 血清样品的处理 定量移取血清样品 300μL至反应杯,加入包被内源性因子的磁性微粒子进行结合;用清洗液清洗后,加入吖啶共轭物、预激发液和激发液进行免疫反应;将反应液用ARCHI- TECTTMi2000SR进行测定。
1·5·2 甲钴胺标准曲线的制备 吸取0, 100, 250, 500,1 000, 2 000 ng·L-16个质量浓度的标准液置样品杯中,按血清样品处理程序操作,于ARCHI- TECTTMi 2000SR分析仪中测定。ARCHITECTTMi 2000SR采用4-参数对数转换法(4PLC)及线性转换 (LT)技术建立标准曲线,标准曲线经B12Controls和 MasterCalibrators校准,通过程序处理判断标准曲线是否合格,若合格则存储该标准曲线,并以此对未知样品进行测定。
1·5·3 方法精密度和准确度 分别配制低、中、高 (200, 400, 800 ng·L-1)3种质量浓度的血清质控样品,按标准曲线方法分别于日内和日间处理测定, 并计算日内和日间相对标准偏差,评价方法精密度。 同法配制低、中、高3种质量浓度的血清样品,按标准曲线方法分别处理测定,计算其回收率,评价方法准确度。
1·5·4 样品稳定性试验 取口服甲钴胺制剂后采集的受试者血清样品于室温避光放置,按标准曲线方法分别于0, 2, 6, 9 h测定,考察样品的稳定性。 1·5·5 方法质量控制 在每批血清样品测定时建立新的标准曲线,并于每日测定样品时平行测定低、中、高(200, 400, 800 ng·L-1)3种质量浓度的质控样品,质控样品数大于被测定样品总数的5%。
1·6 数据处理将受试者口服单剂量1 500μg的甲钴胺试验或参比制剂后的血药浓度列表,计算血清中甲钴胺浓度增加值(ρ),并绘制平均血药浓度(ρ)-时间曲线。计算每1个受试者的有关药动学参数,并求出参数的平均值及标准差。相对生物利用度F 用各受试者的AUC0-t和AUC0-∞分别计算,并求其平均值和标准差。F0-t= [(AUC0-t)T/ (AUC0-t)R]×100%;F0-∞= [(AUC0-∞)T/ (AUC0-∞)R]×100%。用3P97软件对受试者血清中甲钴胺浓度增加值(ρ)-时间数据进行处理, 分析甲钴胺在人体内的药物动力学特征。将AUC和ρmax数据进行对数转换,然后进行方差分析及双单侧t检验处理,tmax用非参数检验进行统计分析,对甲钴胺试验制剂与参比制剂的生物等效性进行评价。
2 结 果
2·1 甲钴胺血药浓度测定标准曲线甲钴胺血药浓度测定后经B12Controls和Master Calibrators校准合格,符合测定要求,ARCHITECTTM i2000SR将试验制备的标准曲线自动存储,结果见表 1。本试验建立的标准曲线线性范围为100~2 000 ng·L-1。
2·2 方法精密度和准确度甲钴胺血药浓度测定方法的精密度和准确度结果见表2。结果表明,本试验建立的甲钴胺血药浓度化学发光微粒子免疫测定方法准确、可靠。
2·3 稳定性试验及质量控制甲钴胺血清样品室温避光放置时,在9h内测定结果的RSD为7·16%,结果表明,血清样品在本试验测定过程中稳定。本试验在测定过程中,于每日平行测定低、中、高浓度的质控样品,质控样品的测得值均在其真实值的±20%范围内。
2·4 血药浓度-时间曲线将测得的给药后血清中甲钴胺浓度减去给药前血清本底中的B12浓度,即得口服甲钴胺制剂后的血药浓度(ρ)。经研究,口服单剂量1 500μg的甲钴胺试验或参比制剂后平均血清药物浓度(ρ)-时间曲线见图1。
2·5 药动学隔室模型的拟合本试验采用简均数据法(na ve average data, NAD)将给药后每个时间点的各个个体的血药浓度数据进行平均作为主数据,然后用3P97软件进行隔室模型拟合,根据AIC值、r2和拟合优度等拟合结果进行判断。结果表明,甲钴胺口服给药后其血药浓度- 时间数据符合权重因子为1/ρ2的口服二室模型。
2·6 有关药动学参数根据血清中增加的甲钴胺的血药浓度(ρ)-时间曲线末端直线部分的试验点,以ln(ρ)对t进行回归,求得消除速率常数ke;ρmax、ρmax、tmax为试验的实测值;用梯形面积法计算样品的AUC0–t, AUC0–∞,AUC0–∞=AUC0–t+ρt/ke,有关的药动学参数见表3。
2·7 生物等效性评价单剂量口服试验和参比甲钴胺制剂后的 AUC0-t、AUC0–∞和ρmax经对数转换后进行方差分析,结果表明本试验中处方间和周期间均无显著性差异,个体间有显著性差异;再采用双单侧t检验法对试验制剂与参比制剂的生物等效性进行评价,结果见表4。采用SPSS软件对口服甲钴胺试验和参比制剂后的tmax进行Mann-Whitney秩和检验, 结果表明,两种制剂的tmax没有显著性差异。由统计分析结果可知,试验和参比甲钴胺制剂生物等效。