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一、“学前诊断”是“尝试——诊断——建构”课堂教学模式中的预备铃
何克抗曾经说过:“传统语文教学”的弊端在于把80%的工夫用在了不必教的地方。所以学前诊断对于实现高效课堂是非常必要的。古诗学习对于三年级学生而言,不陌生。但小学生思维以具体形象为主,古诗语言凝练,韵律和谐,这就使古诗教学成为语文教学的难点之一。要突破这一难点,针对古诗的文体特点,让学生回忆鉴赏古诗的一般方法。即:1.知诗人,解诗题。2.抓字眼,明诗意。3.读诗句,悟诗情。在学习《绝句》之前,学生已有一定学习古诗的基础,将《绝句》的教学同酿酒一样拓展,比较,赏析,形成积累的过程。教学《绝句》之前,我诊断出学生对于七言绝句一般的节奏的把握,只是读出画面和读出情感需要课堂生成。学生对一二两行的理解没有问题,三四两行需要诊断建构。我诊断出学生在尝试评价这首古诗值得借鉴的地方,“动静结合”可能领悟得出来,“颜色美”也比较浅显,但“对仗”需要教师指点。
二、“自主尝试”是“尝试——诊断——建构”课堂教学模式中的敲门砖
人从“牙牙学语”与人交流,到离开父母的怀抱“蹒跚学步”,都有明显的尝试过程。在整节课中,学生自始至终都在用已有的知识进行尝试。诗的意境是情趣与意象的融合,是诗人以独有的眼光捕捉的生活图景。小学课本所选的古诗语言精练,意境优美。在《绝句》教学中采用尝试教学手段,充分实现诗画映照,引导学生感知意境、明理悟情、品评文字,能够取得较好的教学效果。我引导学生尝试感知意境:在阅读全诗的过程中,指导学生通读全诗,初步尝试感知全诗。读出《绝句》这首诗的韵味,也是从尝试开始的,根据学生朗读水平,师生一起诊断,怎样才能读得更好,再进行二次尝试,直至读出自己理解的最高水平。第一步,要求学生借助工具书自学字词,进行旁批。然后由字到词、由词到句进行直译,了解诗的大意。这时抓住时代背景:“安史之乱”终于被平息,忧国忧民的杜甫听到这一消息,心境由沉闷变得开朗,诗人重返四川成都旧居,看到百姓又过上太平日子,看到草堂门前浣花溪边生机勃勃的春景,心情十分愉悦,情不自禁地写下这首脍炙人口的诗,因为没有事先拟好题目,就用绝句这种诗的体裁名称做了诗题。启发学生想象,在这样的历史背景下,就有了愉悦的意境。学生沉浸在自己的遐想中,初步尝试理解诗的意境。第二步,引导学生尝试明理悟情:学生了解诗的大意后,要抓住色彩浓厚、形象鲜明的诗句,在细读中尝试明理悟情,体会诗的意蕴。如诗的第三行“窗含西岭千秋雪”中的“千秋雪”,教师出示投影,展示覆盖着终年不化积雪的岷山,让学生通过观察,口头描述画面,领悟“千秋雪”所描绘的画面。第三步,引导学生借助预习初次尝试说出古诗的大意,感受画面,在不能表达通顺畅处诊断,引领其理解古诗诗意的方法,再次尝试感受画面,使其连续发展。这首古诗前两行“两只黄鹂鸣翠柳,一行白鹭上青天”,诗意浅显,完全可以放手让学生自己去尝试,但后两行则需要诊断后再尝试建构了。第四步,引导学生尝试品评文字:古诗语言凝炼,锤炼文字的工夫,在文学的长河中达到了登峰造极的程度。教学中要深入浅出地引导学生分析作者对语言运用的表达方式。韩愈曾经说过:“李杜文章在,光焰万丈长。”尝试着寻找这首诗好在哪里?对于“对仗”这种较深层的分析,教师应以指导为主,让学生在读的过程中尝试品评、咀嚼,不要求学生掌握,重在提高语言素养,培养他们的分析能力。
三、“积累建构”是“尝试——诊断——建构”课堂教学模式中的收获箱
新课程标准更注重学生的素质教育。素质教育的关键在于培养学生的创新能力与实践能力。因此,教师应创造性地开展教学,激发学生学习语文的兴趣,培养学生的创造能力。笔者在诗词教学过程中尝试创造性开展教学,教师和学生都收到良好的效果。
一、诗词入书法
纵观人类文明史,毫无疑问,汉字是世界上最具有艺术魅力的文字。书法艺术是陶冶学生高雅情趣的载体。潇洒漂亮的字具有艺术欣赏价值,是美的享受。由于电脑的普及,现在的好多学生已经不会好好写字了。作业本上的字可以用惨不忍睹来形容。适时在教学中穿插书法作品,让学生感受到汉字美,进而激起他们的创造美。笔者就经常利用多媒体或板报向学生展示诗词书作。可以选用教材中的作品,如杜甫的《春望》,李商隐的《无题》,李煜的《相风欢》等等。端庄的楷书、大气的隶书、流利的行书、狂放的草书都是书法中常用的书体,在向学生展示的时候,也要选用多种体例。诗词教学课中穿插书法比赛课,布置学生临摹书法作品,气氛非常活跃。
二、诗词入歌曲
大多数学生对音乐情有独钟,那么诗词与音乐之间是否也有着一定的联系?自古以来,诗歌就与歌曲有着千丝万缕的联系。文学与音乐本是同根生,古今中外的艺术史表明,音乐离不开文学,文学同时也离不开音乐。
歌曲具有强大的表情功能。欢快的歌曲能使人体会到欢乐愉悦;低沉舒缓的乐曲令人感到压抑沉痛;缠绵悱恻的恋曲又让人情不自禁、追忆绵绵。将音乐引入诗词教学课堂,可以使学生快速进入诗境。那么,我们何不在诗词教学中融入音乐呢?笔者是一位喜欢音乐的语文教师,在诗词教学中常常有意解读二者的联系,并尝试让音乐走进课堂。这大大开阔了学生语文学习的眼界,为学生学习语文找到了新的视点,带来了新的视角。
巧用音乐导入新课。一个成功的导语对于激发学生的学习兴趣往往很重要,可以起到先声夺人的效果。而音乐对人的感染最直接、最迅速、最深刻。
巧用音乐背诵诗词。要把诗词熟练地背诵下来并能够默写,确实不是一件容易的事,需要讲究方法和技巧。如果把诗词唱出来,就比单纯的背诵简单多了,并且不易忘记。
实际上,古典诗词很容易找到与之相通的歌曲或音乐,在选择音乐时要注意选取的音乐和诗词所表达的意境相一致。我们教育工作者要利用音乐为教学打开方便之门,让我们的教学艺术有一个更为广阔的空间。
三、诗词入剧本
关键词:护理管理学;彼得原理;比马龙效应;安泰效应;贝尔效应;布里丹毛驴效应;暗示效应
【中图分类号】G642
《护理管理学》是天津医科大学护理学院护理专业本科生的必修课程,本课程介绍管理学的发展和基本原理;管理学的计划、组织、人员管理、领导及控制五个基本职能,以及在护理业务技术和质量管理实践中的应用。以提高学生护理管理、教学、科研等方面的思维与技巧。课程内容以理论为主,与其他医学课程的病例教学相比,显得较为抽象、枯燥、乏味,学生兴趣不强。笔者在教学过程中发现,将心理学某些原理应用于护理管理学的教学中,既能够活跃课堂气氛,增加学生学习的兴趣,又可以帮助学生理解抽象的理论知识,将其内化并更好地运用。现列举护理管理中的领导几个实例加以论述。
1领导者的影响力
领导者重要的任务是“影响”个体或群体的行为。影响力来源主要有两个方面:一是来自职位的权力。二是来自个人的权力。
2管理者的领导艺术
一名成功的管理者,需要既能实现组织目标又能引导人群,既要有良好的工作业绩,又要展现正确的形象,还要运用好权力等。树立管理者威信,完善个人形象越来越成为重要的领导艺术之一。
3管理决策
随着客观环境的发展变化,决策在管理中的作用日益突出,内容日益丰富。决策理论成为西方管理理论中的一个重要组成部分。决策理论认为,管理工作的核心问题就是决策,决策贯穿于领导活动的全过程[1]。
4心理学原理
4.1安泰效应
安泰是古希腊神话中的大力神,他力大无穷,无往不胜。因为他只要靠在大地上,就能从大地母亲那里汲取无穷的力量。他的对手发现了这个秘密,便诱使他离开地面,在空中杀死了他。安泰效应告诉我们领导者要学会依靠大家、依靠集体。
4.2贝尔效应
英国学者贝尔天赋极高。有人估计过他毕业后若研究晶体和生物化学,定会赢得多次诺贝尔奖。但他却心甘情愿地走了另一条道路把一个个开拓性的课题提出来,指引别人登上了科学高峰,此举被称为贝尔效应[2]。
贝尔效应提示领导者具有伯乐精神、人梯精神、绿地精神,在人才培养中慧眼识才,放手用才,敢于提拔任用能力比自己强的人,积极为有才干的下属创造脱颖而出的机会。
4.3布里丹毛驴效应
布里丹是大学教授,养了一头小毛驴,他每天要向附近的农民买一堆草料来喂。这天,送草的农民出于对哲学家的景仰,额外多送了一堆草料放在旁边。毛驴站在两堆数量、质量和与它的距离完全相等的干草之间极为为难。它虽然享有充分的选择自由,但由于两堆干草价值相等,客观上无法分辨优劣,于是它左看看,右瞅瞅,始终无法分清究竟选择哪一堆好。于是,这头可怜的毛驴就这样站在原地,考虑数量、质量、颜色、新鲜度,犹犹豫豫,来来回回,在无所适从中活活地饿死了。那头毛驴最终之所以饿死,导致它们最后悲剧的原因就在于它们左右都不想放弃,不懂得如何决策。这种在决策过程中犹豫不定、迟疑不决的现象称之为“布里丹毛驴效应”。
护理管理者在工作中经常面临着种种抉择,人们都希望得到最佳的结果,常常在抉择之前反复权衡利弊,再三仔细斟酌,甚至犹豫不决,举棋不定。但是,在很多情况下,机会稍纵即逝,并没有留下足够的时间让我们去反复思考,反而要求我们当机立断,迅速决策。如果犹豫不决,就会两手空空,一无所获。当面临两难的困境时,护理管理者可以应用的解决办法包括:
4.3.1稳健决策:有一个流传很广的笑话说:齐国有个女孩,两个人同时来求婚。东家的儿子很丑但是家财万贯,西家的儿子相貌英俊但是很穷。那女孩的父母不能决定选谁,就去问他们的女儿想嫁给哪个。女孩不好意思说话,母亲就说,你想嫁哪个就露出哪边的胳臂。结果女孩露出两个胳臂。母亲奇怪地问她原因,女孩说:“我想在东家吃饭,西家住。”在东家吃饭在西家住,看上去是一个笑话,但却不失为了一种稳健的决策取向。在很多情况下,当一种趋势出现时,有些人一个劲地陷入哪个好哪个坏的争论之中,事实上没有这个必要,只要没有明确的二者择一的必要,就不必太早决策。
4.3.2独立思考:不能独立思考,总是人云亦云,缺乏主见的人,是不可能做出正确决策的。如果不能有效运用自己的独立思考能力,随时随地因为别人的观点而否定自己的计划,将会使自己的决策很容易出现失误。从前,有兄弟两个看见天空中一只大雁在飞,哥哥准备把它射下来。说:“等我们射下来就煮着吃,一定会很香的!”这时,他的弟弟抓住他的胳膊争执起来:“鹅煮着才会好吃,大雁要烤着才好吃,你真不懂吃。”哥哥已经把弓举起来,听到这里又把弓放下,为怎么吃这只大雁而犹豫起来。就在这时,有一位老农从旁边经过,于是他们就向老农请教。老农听了以后笑了笑说:“你们把雁分开,煮一半烤一半,自己一尝不就知道哪一种方法更好吃了?”哥哥大喜,拿起弓箭再回头要射大雁时,大雁早已无影无踪了,连一根雁毛都没有留下。
4.3.3决策纪律:利与弊往往是事情的一体两面,很难分割。有的人明明事先已经编制了能有效抵御风险的决策纪律,但是一旦现实中的风险牵涉到自己的切身利益时,往往就不容易下决心执行了。很多股民在处于有利状态时会因为赚多赚少的问题而犹豫不决,在处于不利状态时,虽然有事先制定好的止损计划和止损标准,可常常因为最终使自己被套牢。
4.3.4目标合理:不要总是试图获取最多利益。过高的目标不仅没有起到指示方向的作用,反而由于目标定得过高,带来一定心理压力,束缚决策水平的正常发挥。事实上多数环境中,如果没有良好的决策水平做支撑,一味地追求最高利益,势必将处处碰壁。而且,很多人不了解尽快停损的重要性,当情况开始恶化时,依然紧抱着飘渺的勾想,无法客观分析状况,以赌徒的心态,盲目坚守以致持续深陷,直至无法挽回的地步。这时平衡的心态往往更重要。
4.3.5审时度势:在不利环境中不能逆势而动。当不利环境造成损失时,很多人急于弥补损失。但是,环境的变化是不以人的意志为转移的。当环境变坏,机会稀少的时候,如果强行采取冒险和激进的决策,或频繁的增加操作次数,只会白白增加投资失误的概率。美国通用电气公司总裁杰克・韦尔奇把决策能力看成是“面对困难处境勇于作出果断决定的能力”,看成是“始终如一执行的能力。”因此,决策具有复合性,是一种合力,我们必须从自己的洞察力、分析能力、直觉能力、创新能力、行动能力和意志力等方面进行不断地训练,在不断地失败与成功之间,我们才能够不断地摆脱犹豫不决,进行相对理性的选择,才不会成为布里丹的驴子!
布里丹毛驴效应提示管理者在进行护理管理计划时要注意:把眼前的机会抓住了,把手头的事情办好了,就意味着胜利,意味着成功。与其在那里好高骛远设计,绞尽脑汁地编织出一个又一个方案,不如面对现实,抓住机会,竭尽全力,把眼前最重要的事情办好。
4.4暗示效应
暗示在本质上,是人的情感和观念,会不同程度地受到别人下意识的影响。人们会不自觉地接受自己喜欢、钦佩、信任和崇拜的人的影响和暗示。而这种暗示,正是让你梦想成真的基石之一。
语言暗示――积极的语言能使人产生积极的情绪,改变消极的心态,因而领导者可以有意识地用“你真聪明”“你一定行”等语言为下属打气,还可以让下属之间相互鼓励
动作暗示――在下属气馁的时候拍拍肩膀。
表情暗示――当下属在演讲或操作时,领导如果是微笑地注视着他们,那么对下属来说就是一种莫大的鼓励,他们能看到领导眼里的肯定和赞许。
自我暗示――领导还要教育下属学会自我暗示,有的护士每当遇上复杂病人就会有“惨了!惨了!”“好难啊!”等自我暗示,在工作上维持着焦虑状态,从而干扰正常水平发挥。这种思维习惯一旦形成就会严重阻碍操作的效果。所以领导要让护士学会积极的自我暗示,想着自己一定能一定做的到[3]。
5小结
《护理管理学》是国内很多本科护理学专业的必修课程,但是这种以抽象理论为主的课程不论是教师的教授还是学生的学习都存在着一定的困难。笔者在《护理管理学》的教学过程中添加了心理学理论以及一些心理学方面的启示性故事,让学生进行分组讨论和角色扮演,让学生运用理论知识,自己编排脚本,并在课上展示,使学生在学习过程中兴趣倍增,课堂气氛明显比以往活跃,学生参与性也更强,在此过程中学生对理论知识的理解更强,更加深入,解决问题的能力得到了锻炼,让理论授课增加了实践性,收到了良好的效果。
参考文献
[1]李继平.护理管理学[M].第2版.北京:人民卫生出版社,2008:82-143.
关键词:汉字;本位认识;规范美观 《义务教育语文课程标准》中提出:“语文课程应致力于学生语文素养的形成与发展。”从书写汉字角度来看,小学生应养成规范、正确、美观的书写习惯。但从目前全国小学生书写汉字情况来看,大多学生都无法做到规范美观的书写。难道是教师没有尽心尽力去教吗?
冷静下来,品味这个结果,也许这真也是我们教师教学造成的,我们求“正确、美观”,但没有想过,为什么要将汉字写“正确、美观”。汉字是一门极度深奥的学问,从文学、书法、音韵等角度审视汉字,从四大文明古国只有汉字独存的角度观察汉字,从现代社会汉字仍在构造新词这一角度亲近汉字……有专家甚至得出结论,中国人之所以文明世代相传,从远古至今虽然偶有动乱,但大多时候各地都以自觉的方式统一结为一大国,都是汉字的功劳。毋庸置疑,汉字是中华民族的骄傲,更是可以世代相传的珍宝。
学生对待汉字的态度,源自于教师对汉字的正确认识。首先应肯定的一点是,如果仅仅认为是一种工具,这显然是不够的。而我们对汉字本位的认识缺失,正是问题的一个重要症结。下面本人从识字兴趣入手,对古汉字的结构角度试作剖析。两千年前,先哲孔子说:“学之者不如好之者,好之者不如乐之者。”相信汉字本身固有的乐趣一定会吸引他们,而我们无非是引个路而已。现在试举几个例子,分享一下汉字带给我们的乐趣:
互,组词:互相,互动、交互……描绘的是竹节相互衔接的状态。古人在造这个字时,不仅想到互相的配合程度、亲密程度,还有相互的依存关系,以竹节为喻,令人拍案叫绝。试想一下,竹子的上一节与下一节进行着水分、养料的传输,其成长也彼此承接,休戚相关。用竹子的形象(中国国画中四大君子之一)写这个字,似乎更包含了人与人之间、物与物之间以诚相见、无所保留的意思。面对这个言简意赅却又弥漫着强烈文化意味的形象,令我们感受到了汉字的意趣,更感受到文化的熏陶。
取,组词:取水、争取、夺取、分文不取……这个字似乎在展示一场血腥的战争后,战胜者割下失败者的耳朵计数,向上级军官汇报战功的情形。这个字将我们带入了波澜壮阔的历史战争中,英雄们用计谋或者武力,攻城略地的景象……如果我们试举几个例子,创造性地讲解这个“取”字,无疑会给学生留下深刻的印象。
又如,幸字,组词:幸福、幸运、三生有幸……仔细玩味这个字,字的上方“夭”是一个头颈软的幼儿,而下方是一个头朝下的成年人,中间的一痕细线代表着什么呢?大胆地推测一下,这似乎是危险,是“生死悬于一线”。这个字所呈现的极有可能是这样一个情景:一个成年人在危险来临时将那个幼小的孩子推开……这一幕在现实中多么熟悉,在横逆来临时,做出了这样的选择――每个成年人都会这样吧!这样来看这个字,我们不禁为孩子的幸运逃脱而感到幸运,更为那个成年人的做法而感到鼓舞――人类的天性多么伟大!
还如,我们常用的对汉字的妙解:止戈为武,水之皮为波,说话未“兑”现则为“说说而已”,耳聪为聪、目明为明(聪明)……
再如,当今对书法的尊崇,流传至今的书法作品依然令人醉心审视古人的创造……
小小的方寸之间,历史在此再现,生命在此讴歌。汉字是我们先人无与伦比的发明,当我们学习汉字,玩味汉字时,心中自然会涌起对中华民族祖先的无比景仰,倍增我们身为中国人的自豪感。写好写规范汉字,是对古人的尊重,是每个中国人的必修课。
[关键字]绞股蓝总皂苷;长循环脂质体;β-谷甾醇;聚乙二醇
脂质体由于具有缓释、增效、减毒、靶向等优点,是中药传递系统中最受关注的热点[1-2]。近年来发展的长循环脂质体或隐形脂质体(long-circulating liposomes, stealth liposomes)[3]是通过将聚乙二醇-二硬脂酸磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE) 镶嵌在脂质体双层膜之间,PEG 的长链在脂质体表面形成空间位阻和亲水保护层,能阻止吞噬细胞对脂质体的的识别和摄取而极大地延长脂质体的血循环时间,便于药物进入病变组织,提高治疗指数和疗效[4-5],但由于磷脂价格较高,PEG修饰后价格更加昂贵,且DSPE,PEG均为大分子,与硅胶有很强的吸附性,合成后分离纯化相当困难,得率极低,大大限制了长循环脂质体在制剂领域中的应用[6]。
本课题组前期已论证了以不引发心血管疾病的植物甾醇替代胆固醇来稳定脂质体、构建脂质体的可行性[7],又论证了采用新型磷脂――鞘磷脂制备高稳定性的脂质体的可行性[8]。在本课题中,笔者避开用PEG对磷脂修饰制备长循环脂质体的常规思路,采用PEG对价格相对低廉的小分子甾醇进行修饰,得到聚乙二醇-β-谷甾醇(PEG-Sito),然后以PEG-Sito为长循环材料和近年来被发现具有显著的抑制肿瘤作用的绞股蓝总皂苷(gypenosides)为模型药,对用PEG-Sito制备绞股蓝总皂苷长循环脂质体的可行性进行了探讨,为中药长循环脂质体的开发提供一种新的思路,具有较大的理论及应用价值。
1 材料
Model RE-52A 型旋转蒸发仪(上海亚荣生物仪器公司);AVYⅢ-500 MHz核磁共振仪(美国bruker公司);360型傅立叶变换红外光谱仪(Wartars公司);SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司);HZQ-X280恒温振荡培养箱(太仓市华美生化仪器厂);BS210型电子天平;WFJ2000可见分光光度计;KBS-150型数控超声波细胞粉碎机(昆山市超声仪器有限公司);SCZL-A型数字智能控温磁力搅拌器(郑州长城科工贸有限公司);数显恒温水浴锅HH-2(国华电器有限公司);原子力显微镜AFM(Veeco公司);LGJ-10冷冻干燥仪(北京博医康实验仪器有限公司)。
绞股蓝总皂苷(陕西昂盛生物医药科技有限公司,批号20120119);鱼精蛋白(Sigma公司,批号P4672);绞股蓝皂苷对照品(阿拉丁,批号D100246);香草醛(上海晶纯实业有限公司,批号v100115);鞘磷脂(Sigma公司,批号E1028);β-谷甾醇(杭州大阳化工有限公司,质量分数97%);丁二酸酐(国家集团化学试剂有限公司);4-二甲氨基吡啶(DMAP)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)、磷钼酸均购于阿拉丁,其他试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 PEG-Sito的合成[9]
2.1.1 PEG-Sito的合成 路线具体合成路线见图1。
2.1.2 β-谷甾醇衍生物的制备[10] 将β-谷甾醇(Sito)(2.50 g,6.03 mmol),丁二酸酐(3.25 g,32.48 mmol),DMAP(0.40 g,8.19 mmol)溶于50 mL二氯甲烷中,在45 ℃下剧烈搅拌回流48 h。二氯甲烷溶液用1 mol・L-1(50 mL×3)盐酸溶液洗涤,Na2SO4干燥在旋转蒸发仪上旋干,得白色固体(suc-Sito)2.80 g,收率90.3%。β-谷甾醇衍生物(suc-Sito)经薄层色谱(TLC) 鉴定,Rf=0.7(氯仿-甲醇12∶1,5%磷钼酸显色) ;1H-NMR(500 MHz,CDCl3)δ:5.37(d,β-谷甾醇C6-H,1H),4.63(q,β-谷甾醇C3-H,1H),2.68(t,丁二酸CH2,2H),2.61(t,丁二酸CH2,2H), 2.31(d,β-谷甾醇C4-H,2H)。
2.1.3 PEG-Sito的制备[11] 将suc-Sito(2.2 g,4.27 mmol),PEG 2000(12.02 g,6.01 mmol),DMAP(0.49 g, 4.01 mmol),EDC(0.85 g,4.43 mmol)溶于50 mL二氯甲烷中,常温下搅拌48 h。二氯甲烷溶液用1 mol・L-1(100 mL×3)盐酸溶液洗涤,Na2SO4干燥,过滤,旋干。粗品经硅胶(300~400目)快速柱色谱,二氯甲烷-甲醇(60∶1)洗脱,减压浓缩收集液,得黄色固体3.06 g,收率28.7%。PEG-Sito(3)经薄层色谱(TLC)鉴定,Rf=0.4(二氯甲烷-甲醇30∶1,5%磷钼酸、碘蒸气显色);1H-NMR(500 MHz,CDCl3) δ: 5.37(d,C6-H,1H),4. 63(q,C3-H,1H),3.65(m,聚乙二醇-O-CH2 CH2-O-,约190H),2.66(m,丁二酸CH2-CH2,4H),2.31(d,β-谷甾醇C4-H,2H)。
2.2 乙醇注入法制备绞股蓝总皂苷长循环脂质体
称取绞股蓝总皂苷12 mg,鞘磷脂60 mg,PEG-Sito 60 mg于100 mL烧杯中,加入乙醇20 mL使之完全溶解。取pH为7.0的磷酸盐缓冲液20 mL,预热到45 ℃,搅拌下用针头匀速注入烧杯中,恒温搅拌2 h以除去乙醇,冰浴条件下探头超声10 min(超声时间2 s,间隔时间2 s,功率100 W),过0.45 μm微孔滤膜即得绞股蓝总皂苷长循环脂质体[12]。
2.3 绞股蓝总皂苷长循环脂质体测定方法的建立
2.3.1 对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的绞股蓝皂苷对照品50 mg加入蒸馏水定容于100 mL量瓶中作为贮备液。取贮备液适量,加水稀释成质量浓度为0.05,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5 g・L-1的对照品溶液。
2.3.2 测定波长的确定 绞股蓝皂苷对照品和空白脂质体用5%香草醛冰醋酸溶液与高氯酸(2∶8)样品显色,在400~1 100 nm处进行光谱扫描,结果显示对照品最大吸收波长为555 nm,且该处空白脂质体无干扰,故选择测定波长为555 nm。
2.3.3 线性关系考察 参照《中华人民共和国卫生部颁标准》绞股蓝总苷进行。取6支具塞试管,精密量取2.2.1项下不同浓度对照品溶液1 mL,分别置15 mL具塞试管中,精密加入新鲜配制的含5%香草醛冰醋酸溶液与高氯酸(2∶8)的混合液2 mL,摇匀,密塞,置60 ℃水浴中加热15 min,取出,立即放入冰水中冷却2 min,精密加入冰醋酸10 mL,摇匀,以试剂作空白,照分光光度法项下(《中国药典》2010年版一部附录ⅤA)试验,于(555±5) nm波长处测定吸收度。以吸光度(A)为纵坐标,质量浓度(C)为横坐标,进行线性回归,得回归方程A=0.713 9C+0.074 2,r=0.999 3,线性范围0.050 3~0.503 g・L-1。
2.3.4 精密度试验 精密吸取同一份对照品溶液1.0 mL,置15 mL具塞试管中,按2.3.3项下自“精密加入新鲜配制的含5%香草醛冰醋酸溶液与高氯酸(2∶8)的混合液2 mL”起操作,在同一条件下连续测定吸光度5次,RSD 1.6%,表明仪器精密度良好。
2.3.5 稳定性试验 精密吸取供试品溶液1 mL,置15 mL具塞试管中,分别在0,5,10,15,20 min按2.3.3项下自“精密加入新鲜配制的含5%香草醛冰醋酸溶液与高氯酸(2∶8)的混合液2 mL”起操作,测定吸光度,RSD 2.1%,说明供试品在20 min内显色稳定。
2.3.6 重复性试验 精密量取同一份样品5份,每份1 mL,按2.3.3项下自“精密加入新鲜配制的含5%香草醛冰醋酸溶液与高氯酸(2∶8)的混合液2 mL”起操作,在同一条件下分别测定吸光度,RSD 2.6%,表明重复性良好。
2.3.7 加样回收试验 精密称取空白脂质体冻干粉10 mg,精密称量,置10 mL量瓶中,分别精密加入2.5 g・L-1的绞股蓝皂苷对照品溶液1.0,3.0,5.0 mL,加水稀释至刻度。精密吸取2.0 mL置于离心管中,加0.5 mL鱼精蛋白(10 g・L-1),静置3 min,加入生理盐水3.0 mL,在室温条件下3 000 r・min-1离心30 min。精密量取上清液1.0 mL,按2.3.3项下自“精密加入新鲜配制的含5%香草醛冰醋酸溶液与高氯酸(2∶8)的混合液2 mL”起操作,在同一条件下分别测定吸光度,回收率为97.15%,RSD 2.1%。
2.3.8 绞股蓝总皂苷脂质体包封率的测定 吸取脂质体2.0 mL于10 mL锥形离心管中,添加鱼精蛋白(10 g・L-1)0.5 mL,搅匀,静置3 min,加入生理盐水3.0 mL,在室温条件下3 000 r・min-1离心30 min。取上清液1 mL,测定其皂苷量,即游离药物量(W游)。沉淀以10%曲拉通-X100(Triton-X100)3.0 mL溶解,并补充生理盐水至5.0 mL。取溶液1 mL,测定其皂苷量,即包封药物量(W包)。包封率= W包/( W包+ W游)×100%。该新型长循环脂质体的包封率为74.3%。
2.4 脂质体粒度分布及Zeta电位测定
采用动态光散射粒径仪检测平均粒径和Zeta 电位。激光束波长633 nm,入射与散射光束夹角173°,温度25 ℃。取脂质体溶液100 μL用水稀释至10 mL,摇匀平衡3 min后测定,结果见图2,3。绞股蓝总皂苷脂质体平均粒径为288.1 nm,多分散系数(PDI)为0.218,说明该脂质体粒径分布较均一。平均电位为-20.25 mV,表明该脂质体稳定性较好。
3 讨论
采用PEG对β-谷甾醇进行修饰,修饰后的PEG-Sito作为稳定剂而加入到脂质体中,一方面β-谷甾醇不引发心血管疾病,亲脂性的β-谷甾醇还可以起到稳定脂质体膜的作用。同时柔性分子PEG的存在还能阻止吞噬细胞对脂质体的的识别和摄取,大大延长脂质体的血循环时间。本课题探讨了用PEG修饰后的β-谷甾醇制备长循环脂质体的可行性。研究表明PEG修饰后的β-谷甾醇能与鞘磷脂形成脂质体。该新型脂质体改变了长循环脂质体对PEG修饰的磷脂材料的依赖,大幅降低了制备长循环脂质体的成本,是本文的独特之处。
甾醇在乙醇中微溶,是制约乙醇注入法在脂质体工业化领域中应用的瓶颈之一。本课题在对β-谷甾醇进行修饰时,由于亲水性材料PEG的引入,大大改善了β-谷甾醇在乙醇中的溶解度,工业上大规模采用乙醇注入法制备该长循环脂质体成为可能,也是本文的创新之处。
对比课题组以前对绞股蓝总皂苷脂质体的研究结果,该新型长循环脂质体的包封率较普通脂质体的包封率由(79.1±3.4)%变为(74.3±2.6)%,方差分析结果表明包封率无显著性差异,提示该长循环脂质体的内部结构与普通脂质体无异[13]。粒径则由普通脂质体的202.6 nm,增大为288.1 nm,这可能是由于PEG分子链在水中柔性舒展开来造成的粒径增大的缘故[14]。一般情况下,小于400 nm的纳米粒子在血液中具有被动靶向到肝、脾或肿瘤组织的性质[15],本课题组制备出的绞股蓝皂苷长循环脂质体粒径不到300 nm,因此该制剂具有被动靶向到肝和肿瘤的特性,可用于肝炎、脂肪肝和肝癌疾病的治疗。
研究表明Zeta电位能从一定程度上反映纳米分散体系的稳定性,Zeta 电位绝对值越高(>15 mV),粒子间的静电斥力越大,有高的稳定性[16-18]。该绞股蓝总皂苷长循环脂质体Zeta电位为-20.25 mV(电位绝对值>15 mV),而普通脂质体Zeta电位为-28.66 mV,表明长循环脂质体与普通脂质体一样具有较好的稳定性,但长循环脂质体的Zeta电位绝对值下降了8.41 mV,这可能是由于脂质体外层的PEG的电荷屏障效应造成的[19]。
AFM电子显微镜常用于各种脂质体的形貌研究[20]。本课题应用AFM对该新型绞股蓝总皂苷长循环脂质体进行了形貌观察,电镜下的长循环脂质体外形圆整、粒径均一,证明用PEG修饰后的β-谷甾醇制备长循环脂质体是切实可行的。
本课题研究了用PEG修饰β-谷甾醇的方法,探讨了用PEG-Sito与鞘磷脂制备绞股蓝皂苷长循环脂质体的可行性,并对该新型脂质体进行了表征。该长循环脂质体不仅不含胆固醇,而且针对小分子β-谷甾醇进行PEG修饰[21],合成中未采用价格昂贵的大分子磷脂为原料,分离纯化过程大大减化,大幅降低了长循环脂质体的材料成本,具有很好的市场前景。关于该甾醇修饰的长循环脂质体更深层次的研究,如该新型长循环脂质体在体内有无加速血液清除现象(accelerated blood clearance, ABC) [22]、与普通磷脂修饰的长循环脂质体在体内各组织的分布与滞留特性等问题,正处于进一步研究中。
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Preparation of novel gypenosides long-circulating liposomes consisted by
sphingomyelin and β-sitosterol modified by PEG
YU Fan*, YANG Jing-ming, LI Jin-juan
(College of Pharmacy, Yancheng Teachers University, Yancheng 224051, China)
[Abstract] Objective: To explore the feasibility of preparing novel gypenosides long-circulating liposomes with PEG grafted on β-sitosterol (PEG-Sito). Method: Succinicanhydride was adopted to connect β-sitosterol and PEG 2000. Sphingomyelin and PEG-Sito was used as material to prepare gypenosides long-circulating liposomes by using ethanol injection method. Encapsulation efficiency was determined by using protamine precipitation method. 1H-NMR was used to verify the synthesis of PEG-Sito, the novel gypenosides long-circulating liposomes were characterized by particle size, zeta potential and atomic force microscope. Result: The synthesis of PEG-Sito was verified by 1H-NMR. Encapsulation efficiency of long-circulating liposomes prepared by ethanol injection method was 74.3%, particle size was 288.1 nm,zeta potential was -20.25 mV, the morphology were round observed by AFM. Conclusion: The novel gypenosides long-circulating liposomes prepared with PEG-Sito was feasible, it had a high encapsulation efficiency and good morphology.