伤仲永练习

前言：想要写出一篇令人眼前一亮的文章吗？我们特意为您整理了5篇伤仲永练习范文，相信会为您的写作带来帮助，发现更多的写作思路和灵感。

伤仲永练习范文第1篇

在解析《八女投江》的舞蹈时，需要从心理学角度始终关注舞蹈演员的表情；这是由于表情可以反映舞蹈演员的战争时的状态。假如不能将舞蹈演员的肢体语言与表情融合起来看，那学员就极难从肢体语言中发现八女誓死抗战的英勇信仰以及百折不挠的英雄胸怀。单单从舞蹈动作的视角来看，在《八女投江》中，舞蹈演员对战争场面的描述毫不拖泥带水，从攻击和防御以及贴身搏击等动作可以看出战争态势的变更，而这些都能通过舞蹈演员的表情和肢体语言看出来。在赏析《八女投江》时，应利用心理学理论中的换位思维、场景替换等教学手段，让学员与台上的“女兵”进行角色的置换，让学生以自身的心理状况为切入点，去揣度“八女”的心理状态，透过学生的三观与“八女”的三观的悬殊落差去刺激学生的心理，让所有学员了解女兵的心理，并对其舍身成仁的举动充满敬仰之情，进而通过学生的自我心理暗示，用自身所拥有的舞蹈技巧在学习中去把握女兵在战争中的坚强和果敢的品质。在此前提下，老师应强调舞蹈中的细微末节，并引导学生加深对这部分细微末节中的舞蹈动作的印象。如此，学生不但能明了舞蹈中舞蹈演员们每个动作所包含的深意，也能完整地看到舞蹈的过程，领略《八女投江》的魅力，这对日后的表演助益甚大。

2、心理学在舞蹈排练课教学中的应用

在舞蹈赏析与排练课的进行过程中，在舞蹈赏析之后就轮到舞蹈排练“粉墨登场”了。而舞蹈排练的重要目标，就是透过舞蹈动作的排演让学生领略舞蹈的精髓；与此同时，在排演中传授给学生舞蹈表演中惯常运用的技巧也显得十分重要。笔者还是以《八女投江》为例进行说明。

2.1、表情改变

在排练课教学中，老师应想方设法使学生“身临其境”，创设真实感极强的课堂氛围。具象化地说，即老师应诱导学生“回到”战火纷飞的特殊年代，让其想象自己身处流弹乱飞、四面楚歌的战争场景中，之后老师应通过亲自演示和解说展现给学员：弯腰是为了躲子弹；亦步亦趋地退后是为了更清楚敌人的情况。在对表情的讲授中，老师应着重指出：战争是激烈的，女兵的表情是恐惧的，这是由于每位战士都是活生生的人，面对大势已去的战争局面不可能完全做到泰然处之，都会或多或少地露出恐惧的表情；与此同时，女兵的表情又是刚强和果敢的，这是由于女兵的心中有着舍身成仁的意念。在排练课教学中，老师应运用心理学中的表情图面让学生看到人类脸部表情的微小变化，进而诱导学生通过表情甚至微表情来呈现自己的心理状态。因为学员在接受表情辅导前有着一些表演的经验，因此其对表情的细微差别会尤其留意，排练的功效比老师单调的口头演示要好。

2.2、技术动作

在舞蹈排演时段，透过老师对女兵每一个肢体语言背后的心理状况的叙述和解读，学生就能以自身的视角为切入口，将自身的舞蹈技巧结合到舞蹈表演中去，用自身的特有风格去演绎舍生取义的女兵形象。然而对学员来讲，尽管其能从心理学的角度解读某些独立的舞蹈情景中舞蹈演员所要传达的精神以及深意，然而学员们毕竟没有真实体验过战争的严酷，他们对战争的了解显然是较为浅显的。在该类状况下，很多舞蹈技术动作的细节就很难被完整体现出来。例如：《八女投江》中有许多蹬踏敌人的动作，而在这部分动作中，“敌人”是被幻想出来的，它需要舞蹈演员独自用蹬踏的动作来展示战争的激烈。因此，该动作就需要经过锻炼才能做到位，这个细节是观众领略战争的残酷的关键。在表演这个场景时，老师在排练课中应先让学员做出蹬踏或踹蹬的动作，并将动作做出时女兵的心理状态融入动作中，让学生明白：实际上，观众对踹蹬动作的解读并非只着眼于踹蹬的力量，而更多的是透过观察演员的表情以及眼神去解读的。透过这种排练，学生才能明白怎样独立完成一个需要多人协调的动作。而融合了心理暗示的排练教学，就能使学生明白舞蹈艺术的价值并不是完全靠动作去呈现的，还有心理状态也十分关键，这对学员日后的表演有着相当大的帮助，也能使学生的舞蹈之路走得更为顺畅。

3、关于心理学与舞蹈

心理学理论能够协助学生在舞蹈表演中建立一个良好的心态，这种良好的心态即指生活在社会环境中的个人，在高层次神经功能正常的状况下，智力正常、情绪平稳、行为适当，具备协调能力以及适应环境的能力以及特点。良好的心态是保障舞蹈动作正常甚至超水平发挥的前提，是舞蹈演员以及舞蹈老师应兼备的基本素质。唯有优良的心态才能在压力之下淡定，并在舞台上收获成功与喜悦。因此，作为舞蹈人员或学员，需要在赏析和排练的过程中学习一些心理学理论，在舞蹈的职业生涯中遇到问题时才能泰然处之，并提升自己的舞蹈水平和抗压能力。

4、结束语

伤仲永练习范文第2篇

随着互联网在社会经济各行业的普及，网络信息更加碎片化、实时化、个人化的同时，人们对互联网信息的需求也急速上升。随着3Gr代的到来，移动互联网应用技术的进步，移动电子商务作为一种新型的电子商务方式，利用了移动互联网络的技术优点，促进生产销售的强劲而稳定的增长。在移动互联网基础之上所进行的移动电子商务是移动互联网为用户提供的一种重要的服务。

【关键词】移动互联网 移动电子商务 移动终端 移动支付

移动互联网是近年来发展的新鲜事物，移动互联网与电子商务相结合，产生大量的创新性应用与机会，有些应用甚至深刻地改变某些传统的行业。同时人们已经不再满足于个人电脑的连线上网，越来越多的人因为职业和生活的需要，希望随时随地收发电子邮件、查阅新闻、股市行情、订购各种急需商品，即实现移动互联，在移动互联网和移动通信的有关技术支持下，移动电子商务得以迅速发展。

1 移动互联网和移动电子商务概述

移动互联网是一种通过智能移动终端，采用移动无线通信方式获取业务和服务的新兴业态，包含终端、软件和应用三个层面。随着技术和产业的发展，未来，LTE（长期演进，4G通信技术标准之一）和近场通信移动支付的支撑技术等网络传输层关键技术也将被纳入移动互联网的范畴之内。

移动电子商务是由电子商务的概念衍生出来的。它是指利用依靠移动通信网和Internet，利用手机、PDA及掌上电脑等无线终端进行的B2B、B2C、C2C或O2O的电子商务。它将因特网、移动通信技术、短距离通信技术及其它信息处理技术完美地结合，使人们可以在任何时间、任何地点进行各种商贸活动金融活动和相关的综合服务活动等。

2 移动互联网和移动电子商务的发展现状

2.1 移动互联网的发展现状

在我国互联网的发展过程中，PC互联网已日趋饱和，移动互联网却呈现井喷式发展。由前瞻产业研究院的《中国移动互联网行业市场前瞻与投资战略规划分析报告前瞻》数据显示，截止到2013年底，中国手机网民超过5亿，占比达81%。随着宽带无线接入技术和移动终端技术的飞速发展，人们迫切希望能够随时随地乃至在移动过程中都能方便地从互联网获取信息和服务，移动互联网应运而生并迅猛发展。然而，移动互联网在移动终端、接入网络、应用服务、安全与隐私保护等方面还面临着一系列的挑战。

2.2 移动电子商务的发展状况

随着移动通信技术和计算机的发展，移动电子商务的发展已经经历了3代。目前主流的是新三代的移动商务系统，采用了多种先进的移动技术相结合的第三代移动访问和处理技术，使得系统的安全性和交互能力有了极大的提高。第三代移动商务系统同时融合了3G移动技术、智能移动终端、VPN、数据库同步、身份认证及Web service等多种移动通讯、信息处理和计算机网络的最新前沿技术，以专网和无线通讯技术为依托，为电子商务人员提供了一种安全、快速的现代化移动商务办公机制。

移动电子商务在当今社会已经被越来越多的人熟知并使用，它涵盖了金融、信息、娱乐、旅游和个人信息管理等领域。其主要应用领域包括网上银行业务、网上订票、网络购物、娱乐服务、网络比价、信息推送与分享等。

3 电子商务的移动互联核心技术

随着移动互联网的迅速发展，电子商务也进入了各种移动终端设备中。 因特网、移动通信技术和其他技术的完美结合创造了移动电子商务，它的创新发展都会进一步推动移动电子商务的发展。

3.1 移动定位技术

移动定位：是指服务商通过移动互联网向手机用户提供的以定位、导航服务为核心，并包括其他衍生服务的业务，是一种新兴的应用十分广泛的移动互联网技术新应用。

3.2 移动通信技术3G/4G

第三代移动通信技术，是指支持高速数据传输的蜂窝移动通讯技术。3G服务能够同时传送声音及数据信息，速率一般在几百kbps以上。移动电子商务还是依托于3G的发展，而相对于3G，4G能够以100Mbps的速度下载，比拨号上网快2000倍，上传的速度也能达到20Mbps，并能够满足几乎所有用户对于无线服务的要求，这对移动电子商务的发展也会带来诸多的机会。

3.3 近场通讯技术

近几年，“移动支付年已经来临”这一说法甚是流行，而推动移动电子商务发展的关键因素，就是近场通信（NFC）。近场通信是一种基于标准的通信技术，能够简化交易，精简数字内容的交换，通过接触方式接入电子设备。

3.4 IPV6协议

IPv6是目前正在引入并逐步开展普及互联网协议，它的提出是因为随着互联网的迅速发展，IPv4定义的有限空间将被耗尽，为扩大地址空间而产生的IPV6。由于其128位地址长度，几乎可以不受限制地提供地址。这为无线通信与视频识别（RFID）技术带来无限的发展空间，特别是对地面移动终端数量剧增，能为每个设备分配一个永久的全球IP地址，所以能解决全球范围内的网络和各种接入技术之间的移动性问题。根据 2012 年 3 月七部委联合下发的《下一代互联网“十二五”发展建议意见的通知》，我国在 2013 年底前逐步开展 IPv6 的小规模商用试点，形成商业模式和技术演进路线，为全面部署 IPv6 做准备。

4 基于移动互联网的电子商务应用

目前移动电子商务的表现形式包括远程电商和近场电商，移动电商中的“远程电商”是指传统电商通过PC端的购物方式自然转化为通过移动终端的购物方式。而“近场电商”是在“移动支付中的近场支付”与“O2O中的本地化服务”共同发展下衍生出来的一个便于理解的概念。它是指通过移动终端选择本地化服务的消费场所，最后可以通过近场支付进行消费。目前较主流的应用方式包括以下几点：

4.1 微信营销

微信是国内最大的移动应用软件，据统计，全国使用手机的用户远超于电脑PC用户，在使用时间、使用方便性来讲，移动用户要比PC客户端有更多优势，随着腾讯对QQ营销诸多的限制，微信营销以着使用用户多、腾讯限制低、操作简便、一对一传播、效果强、年龄层精准等诸多优势，让微信营销成为了现在最热门的营销方式。

4.1.1 微信与O2O电子商务

微信是未来移动互联网最成功的一款产品。通过建立私密社交打通每个人现实的社交网络，以朋友关系链构建的消费者群体营销价值十分巨大。陌生人社交也在不断渗透每个人的交友圈子，用人作为营销工具去传播，并最终形成人与人之间的闭环营销。而O2O实质就是带客到店。结合手机，到店就变得非常好办，O2O所需要做的就是找一个点进行切入，那么口碑营销、数据库营销、体验营销均可便捷实现。

4.1.2 O2O线上支付与线下商务的整合

微信的摇一摇功能可以依托微信的摇一摇、二维码扫描等功能，将用户导入到商家里面有针对性地开发出各种支付方式，实现O2O线上支付与线下商务的整合

微信摇一摇找出好友，直接在聊天窗口中向对方转账，无需对方的银行账号，摇一摇微信即可；去超市购物，不用排长队交费，定期推送专属的会员优惠 ，用微信拍下二维码，就能直接手机支付即拍即买；这些都将不再是纸上谈兵。 第三方支付公司财付通宣布，正式与微信合作搭建O2O支付平台，实现微信即时支付的功能。围绕“微生活”开通即时支付功能，实现一部手机走遍天下。

4.2 搜索引擎营销

根据用户使用搜索引擎的方式，利用用户检索信息的机会尽可能将营销信息传递给目标用户。

搜索引擎营销的主要模式与方法有：免费登录分类目录、搜索引擎优化、 付费登录分类目录、付费关键词广告、关键词竞价排名。

4.3 移动支付

随着通讯技术和信息技术的快速发展，手机已经成为我国最普遍的通讯工具。在此基础上，伴随着互联网、移动通信和计算机技术的快速发展和相互融合，凭借手机作为移动终端的支付应运而生。目前国内移动支付参与方由电信运营、商业银行及卡组织、支付宝等第三方服务的提供机构。

借助移动电子商务，用户能够通过其移动通信设备进行网上购物。随着智能手机的普及，移动电子商务通过移动通信设备进行手机购物，让顾客体会到购物更随意，更方便。

如今比较流行的手机购物软件如“掌店商城”等，它可以实现足不出户就能进行商品查询、商品检索预订、移动支付等活动，为客户提供装在口袋中的电子商店，让顾客尽享购物的便利。

4.4 移动票务

移动用户订购车船票、查询航班和定购机票以及定购演出票等，为用户提供随时随地的贴身票务服务。用户还可以进行票詹檠、票务预订、移动支付等活动，同时可以使用短消息系统实现票务信息的点播与发送、订票确认、及时提醒等功能。

4.5 移动银行

它能提供个人理财服务，实现账户信息查询、存款账户间转账、银行转账、证券买卖、个人实盘外汇买卖、代缴费、金融信息查询等功能。

5 结语

当今的社会是个飞速发展的社会，很多的移动互联技术从研发到试行，再到普及的周期越来越短，移动电子商务从新生事物到现在变成人们经济生产发展中的不可缺少的组成部分。这个过程都体现出移动互联网技术的开放性、前瞻性、重要性、可持续性，未来人们还继续开发出更多的移动技术、拓展移动互联网的应用形式来提升移动电子商务水平，让更多的人得到便利。反之移动电子商务的流行会促进技术向多学科、多层次、多平台、多体系发展，做到两者的有机结合，共同为社会发展，公司个人的商务来往提供技术条件和交易平台的保障。

参考文献

[1]关于印发下一代互联网“十二五”发展建设的意见的通知[Z].发改办高技〔2012〕705号.国家发展改革委办公厅，2012.

[2]移动电商市场在哪里[Z].亿邦电商社区，2013.

[3]郑诗锋.移动电子商务的技术支持及应用研究[J].武汉科技学院学报，VOL.17 NO.4，2004-8.

伤仲永练习范文第3篇

[关键词] 熵权法 灰色关联分析 供应商选择

一、引言

供应链合作伙伴关系（Supply Chain Partnership，SCP）是供应商与制造商为实现某个特定目标，在一定时期内共享信息、共担风险、共同获利的协议关系，因此，合作伙伴的选择是供应链合作关系的基础。供应商的选择过程是一个典型的多目标决策问题，在用灰色关联进行分析的过程中，灰色关联度的计算实际上是将各项指标等权划分，这样会因为没有考虑到各指标重要性差异和允许指标属性之间可以相互线性补偿，且被补偿的值不受任何限制而导致存在信息流失、误差大等缺陷，而采用主观赋权法又无法消除各因素权重的主观性。借助信息工程学中“熵”的概念，在多方案评定中能够对每个指标的重要程度尤其是对重要属性指标都加以考虑和保证，客观地揭示出各评价指标的重要性。因此，决策算法采用基于灰色关联度的灰色综合评价决策模型，运用信息熵来确定指标权重。

二、算法原理

灰色关联分析的基本思路是根据各比较数列构成的曲线与参考数列构成的曲线的几何相似程度来确定比较数列与参考数列之间的关联度，几何形状越接近，则关联度越大。

灰色关联分析把各项指标等权划分，无法给出各评价指标的重要性差异，而按照信息论观点，各个指标在指标体系中的作用，与指标的变异度有关，指标的变异度越大，它所携带和传递的决策信息越多，对方案的比较作用也越大。信息量的大小可用熵值来测度，熵值的减少意味着信息量的增加。熵值法根据各指标的信息载量的大小来确定指标权重。熵值法的最大优点是其计算得到的权重完全是依据属性矩阵所带的信息，没有任何主观判断，能够得出较为客观的综合评价结果。

1.指标规范化处理

设原始指标属性矩阵，则对效益型指标规范化处理，有：,;对成本型指标规范化处理，有。

2.各指标灰色关联系数的计算

设表示各属性值中的最优解，取组成的最优方案作为参考序列，以第i方案属性值作为比较序列，则xo与xi在第j项指标下的关联系数计算公式为:,式中，、分别为比较序列绝对差中的最小值和最大值，为比较序列的绝对差，为分辨系数，取值范围为，通常取。

3.熵值法计算权重的步骤

（1）设原始指标属性矩阵中为第i方案在第j指标下的指标属性值，则第i个方案对第j个指标属性的贡献度为:。

（2）对于此贡献度所包含的信息内容，可以用熵Ej来表示所有方案对第j个指标的贡献总量，计算公式为:,，其中取，,。

（3）定义第j个指标下各方案贡献度的差异系数，其计算公式为：，则当gi越大时，指标越重要。

（4）将其指标权重归一化就得到各评价指标的权重，其计算公式为:。

4.计算综合评价值

综合评价值的计算公式为:值越大说明方案i与最优方案的接近程度越高，因此可根据Di值的大小对各方案进行优劣决策分析。

三、算例分析

影响供应商选择的因素有很多，结合企业的实际，主要的评价指标有9个：产品合格率、产品价格、售后服务、地理位置、技术水平、供应能力、经济效益、交货情况、市场影响度。具体数据见表。

表 某企业选择供应商的指标评价相关数据

其中产品质量、技术水平、供应能力、经济效益、交货情况，市场影响度指标属于效益型指标；产品价格、售后服务、地理位置指标属于成本型指标。根据灰色关联系数的计算步骤对表1中数据进行规范化处理后得到的灰色关联系数矩阵为：

由表中数据，根据熵值法计算权重的步骤得到各指标的权重为：wj=[0.0085，0.0090，0.2411，0.2744，0.2440，0.0496，0.0992，0.0084，0.0657]。

用计算综合评价值公式计算得到各方案的综合评价值为：Di=[0.4834，0.4965，0.5123，0.6661，0.6008，0.6628]，得到最优方案为：D4>D6>D5>D3>D2>D1。

四、比较与结论

虽本文的计算结果与参考文献[3]中的结果(D6>D4>D5>D1>D2>D3)不完全一致，但文献[3]中采用的传统TOPSIS法没有考虑各评价指标权重的差异性，而本文采用的方法能够克服在方案评定中由于忽视各指标重要性差异，仅以指标与正、负理想指标之间偏离程度作为方案的判断依据而带来的信息流失、误差大等缺陷。参考文献[4]中采用的案例与参考文献[3]及本文中的案例一致，但对TOPSIS法进行了赋权改进，其计算结果与本文基本一致：最优供应商均为供应商4，次优供应商均为企业6，其余供应商优劣排序不同，其原因在于本文与参考文献[4]采用的方法不同，体现出不同方法的适用性和差异性。但本文所采用的方法概念清晰，计算简单方便，更适合于在具体实际工作中应用。

参考文献：

[1]孙元欣:供应链管理原理[M].上海:上海财经大学出版社，2003

[2]邓聚龙:灰理论基础[M].华中科技大学出版社，2002

伤仲永练习范文第4篇

[关键词] 解偶联蛋白2；PM2.5；H9C2；心肌细胞；线粒体；活性氧；ATP

[中图分类号] R730.2 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2015）01-40-05

[Abstract] Objective To investigate the effect of UCP2 during the injury procedure of PM2.5 on the rat myocardial cells H9C2. Methods Rat cardiomyocytes H9C2 cell lines were cultured， after 48 hours of given PM2.5 and （or） siRNA stimulus， creatine kinase （CK） and lactate dehydrogenase （LDH） were detected. The expession of UCP2 in transcription and translation levels was detected by RT-PCR and Western Blot respectively. Mitochondrial reactive oxygen species （ROS） and ATP enzyme activity were determinated by colorimetric detection. Results Compared with the PM2.5 group， CK and LDH were elevated （969±21 vs 747±29 U/mL，1071±59 vs 877±47 U/L）， ATP activity decreased （24.7±4.7 vs 40.2±4.9 U/mgprot）， intracellular ROS increased （90.2±6.2 vs 69.2±6.3 U/Well） in the PM2.5+siRNA group. And the differences were statistically significant （P

[Key words] UCP2； PM2.5； H9C2； Myocardial cells； Mitochondria； ROS； ATP

近年来，大气污染备受关注，其中颗粒物是城市大气污染的重要物质。根据粒径大小可将其分为空气动力学直径介于2.5～10μm粗颗粒物（PM10）和空气动力学直径小于2.5μm的细颗粒物（PM2.5）。PM2.5与人体健康关系最密切。PM2.5化学成分复杂，包括无机成分、有机成分、微量重金属元素、元素碳等，主要来自于人类活动如工业生产及交通运输工具尾气排放、工业生产及取暖的燃烧释放、吸烟的烟雾释放等[1]。

动物试验及临床流行病学调查显示，PM2.5与

人类心血管疾病有密切关系。PM2.5可促进心肌细胞变性和间质细胞增生，进而导致以心肌间质纤维化为主要表现的心肌重构[2-3]；可以通过氧化应激反应损伤血管黏膜，引起血管通透性及血液黏度增加，加速主动脉和冠状动脉粥样硬化和斑块破裂过程[4-5]；可以诱发心律失常、心肌缺血甚至心跳聚停等[6-7]。我们前期研究也表明，PM2.5可以导致H9C2心肌细胞线粒体损伤，导致活性氧（reactive oxygen species，ROS）产生过多，ATP合成减少，线粒体膜电位损害。解偶联蛋白（uncoupling proteins，UCPs）是线粒体内膜上能够通过转运H+降低线粒体膜电位蛋白家族，与细胞内的ATP及ROS有着密切的关系[8-9]。在5种同类物中，UCP2分布最广泛，体内和体外的研究发现，UCP2可以通过降低膜电位，减少ROS产生进而保护神经细胞组织[10]。

然而，UCP2在PM2.5导致的心肌细胞损伤过程中作用如何？目前研究甚少。本课题拟通过RNA干扰技术，沉默H9C2心肌细胞的UCP2表达，检测PM2.5毒染心肌细胞的ROS、ATP改变及心肌细胞损伤指标，初步探讨UCP2在PM2.5导致的心肌细胞损伤过程中的作用。

1 材料与方法

1.1 RNA干扰片段

由上海吉凯基因公司合成2条RNA干扰片段和1条阴性对照RNA干扰片段，分别为siRNA1，siRNA2和ncRNA。siRNA1序列为：上游，5’-GCA CUG UCG AAG CCU ACA A dTdT -3'；下游，5’-UUG UAG GCU UCG ACA GUG C dTdT -3’。siRNA2 序列为：上游，5’- CCU CAU GAC AGA CGA CCU C dTdT -3’；下游，5’- GAG GUC GUC UGU CAU GAG G dTdT -3’。ncRNA序列为：上游，5’- UUC UCC GAA CGU GUC ACG UTT -3’；下游，5’- ACG UGA CAC GUU CGG AGA ATT -3’。

1.2 siRNA转染步骤

（1）转染前1d，5×104H9C2细胞接种在24孔板上，0.5mL完全培养基，转染前细胞汇合达到70% ～ 80%；（2）在50μL无血清培养基加入2μL的siRNA，柔和混匀；（3）混匀lipofectamine试剂，用50μL无血清培养基稀释1μL的lipofectamine试剂，轻轻混匀，室温放置5min；（4）将稀释好的siRNA和lipofectamine试剂混合，轻柔混匀，室温放置20min，以便形成siRNA-ipofectamine复合物；（5）将100μL的siRNA-ipofectamine复合物加到含400μL完全培养基的细胞孔中，来回轻柔摇晃细胞培养板；（6）细胞在37℃，5%CO2培养箱中，培养24h，检测转染后UCP2的表达情况。用siRNA-CY3（广州瑞博公司）转染，通过荧光显微镜进行效率验证，计算转染效率。本实验转染效率达到80%左右，说明该转染步骤是可行的。

1.3 预实验筛选

UCP2基因有效的干扰片段：将H9C2细胞随机分成5组，即control组，lipo组，siRNA1组，siRNA2组，ncRNA组，分别给予同体积培养基、lipofectamine、siRNA1、siRNA2和ncRNA刺激，转染步骤同1.2；转染后48h检测UCP2转录水平表达，步骤同1.4。

1.4 RT-PCR检测UCP2基因表达

用TRIzol法提取H9C2细胞的总RNA，然后逆转录成cDNA，再以cDNA为模板进行扩增。根据读取的CT值对基因进行相对定量。RT-PCR反应体系为：forward/reverse引物各0.25?L，SYBP Green PCR master mix 5?L，cDNA模板4μL。PCR进行45个循环，条件为：95℃，5min，95℃，15s，60℃ 30s。UCP2引物为：5’- GGG CAC CTG TGG TGC TAC CTG-3’（sense），5’-ATG AGC TTT GCC TCC GTC CGC-3’（antisense）；看家基因18s-RNA引物为：5’-CCA TCC AAT CGG TAG TAG C -3’（sense），5’-GTA ATG GCG GGT CAT AAG-3’（antisense）。

1.5 Western Blot检测UCP2蛋白表达

用2×SDS裂解细胞，12000g/min 离心5min，提取总蛋白，然后用BCA法迅速进行蛋白浓度定量。提取的总蛋白，加入2×SDS蛋白上样缓冲液（按1∶1的比例），100℃煮沸5min，-20℃保存备用。配置10% SDS-PAGE分离胶，5%的浓缩胶，微量进样器吸取30?g样品缓慢加入样品孔中，用100V进行浓缩胶电泳20min，140V在分离胶中电泳40min。然后转膜、封闭，加入一抗（proteintech 公司，货号：11081-1-AP） 4℃过夜，PBST洗膜，加入二抗37℃反应1h，用化学发光法（ECL）显影。

1.6 PM2.5的采样及其配制

选取湛江市区汽车流量大、污染较重的地区为采样点。用PM2.5采样仪采集PM2.5，超声震荡，洗脱颗粒物，冷冻真空干燥成干粉，-20℃保存备用。配制：称取一定量PM2.5干粉，经紫外线照射后加入培养基溶液混匀，配制成终浓度为10，50，100μg/mL的溶液进行预实验。根据预实验结果，本实验选用50μg/mL作为细胞毒染剂量。

1.7 H9C2细胞处理及分组

H9C2细胞株购自中国科学院典型培养物保存委员会细胞库，用10%小牛血清培养液，在37℃培养箱静置培养；1～3d更换一次培养液。PBS轻柔冲洗，适量0.25%胰酶溶液消化等常规操作，进行传代及实验。当细胞生长至70%左右密度时，将细胞随机分成三组，分别为NC组，PM2.5组及PM2.5+siRNA组，每组3个样本。三组细胞分别给予常规的培养基，50μg/mL的PM2.5培养基，含PM2.5（50μg/mL）与siRNA（80nmol/L）的培养基刺激。48h后检测相关指标。

1.8 肌酸激酶（CK）和乳酸脱氢酶（LDH）、ROS、线粒体ATP酶活力检测

（1）H9C2细胞受刺激后48h，收集细胞培养基上清液，按照试剂盒说明采用比色法进行检测CK和LDH浓度。乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒（比色法），货号A020-1；肌酸激酶（CK）测定试剂盒（比色法），货号A032；试剂盒购自南京建成生物工程研究所。

（2）按照活性氧检测试剂盒进行操作，购自碧云天，货号S0033。简要步骤为：各组细胞经过处理后，按照试剂说明用1∶1000无血清培养液稀释DCFH-DA。去除细胞培养液，加入适当体积稀释好的DCFH-DA。37℃细胞培养箱内孵育20min，然后用无血清细胞培养液洗涤细胞3次。用荧光分光光度计检测[12]，激发波长488nm和535nm。

（3）ATP酶可分解ATP生成ADP及无机磷，测定无机磷的量可判断ATP酶活力的高低。按照试剂盒采用比色法检测ATP酶活力（购自南京建成生物工程研究所，试剂盒货号：A016-1）。

1.9 统计学处理

所有计量资料均以（）表示，并采用SPSS18.0统计软件进行统计分析。方差齐时，采用单因素方差分析进行统计，两组间比较采用LSD法分析，P

2 结果

2.1 干扰片段的筛选

control组，lipo组，ncRNA组，siRNA1组和siRNA2组间UCP2基因mRNA相对含量有显著差异（F=3244，P0.05）；与control组相比，siRNA1组，siRNA2组UCP2基因mRNA相对含量均显著下降（0.983±0.07 vs 0.556±0.11，0.369±0.12，P

2.2 各组UCP2基因转录水平和蛋白水平的表达

NC组，PM2.5组及PM2.5+siRNA组间UCP2基因mRNA相对含量及UCP2蛋白条带相对密度值均有显著差异（F1=899，F2=1057；两者P

2.3 各组H9C2细胞CK及LDH水平

CK和LDH是反映心肌细胞损伤的重要指标。本实验发现，CK和LDH水平在PM2.5+siRNA组最高，在PM2.5组其次，在NC组最低，两指标在三组间的差异显著，均有统计学意义（FCK=429，P

2.4 各组H9C2细胞ROS和细胞内ATP的水平

细胞ROS水平和ATP活性是反映线粒体功能的重要参数。本实验发现，PM2.5+siRNA组心肌细胞内ROS含量明显高于PM2.5组，PM2.5组的ROS明显高于NC组，三组两两之间差异均有统计学意义（FROS=86，P

3 讨论

近年来，环境污染越来越受到重视。PM2.5作为大气污染的重要物质，可作为载体吸附有毒重金属、酸性氧化物、有机污染物、细菌和病毒等多种组分，严重危害人体健康。多项流行病学调查研究显示PM2.5不但可增加高血压、冠心病、糖尿病患者的心血管疾病发病率和死亡率，亦可增高健康人群心血管疾病发病率和死亡率[11-12]。PM2.5可诱发、加重人体的心血管病变，这一认识被越来越多的学者所认同。本实验通过培养大鼠心肌细胞株，给予PM2.5刺激，发现CK和LDH明显升高，提示PM2.5可以导致心肌细胞损伤。这与国内外学者发现的PM2.5对心血管系统的毒性作用相一致[13-15]。

线粒体是重要的细胞器，是细胞生物氧化和能量合成的重要部位，细胞能量的80%来源于线粒体的呼吸功能。此外，线粒体也是ROS产生的重要部位。正常的线粒体功能，是维持细胞内充足ATP合成和低浓度的ROS的必备条件。线粒体的功能障碍，常常导致线粒体产生过多的ROS和ATP的生成不足或过多消耗，导致细胞或机体的过氧化损伤和能量缺乏。解偶联蛋白（UCPs）是线粒体上的质子转运蛋白，属于线粒体阴离子通道家族。UCPs基因有高度的保守性，有6个家族成员，在人仅表达UCP1-5。UCP2基因位于11号染色体，与UCP3紧密连锁，相隔仅6000bp。UCP2蛋白广泛表达于各种组织细胞，现在多数认为其是保护性因素[16-18]。在神经系统中的保护方面，UCP2可以通过解偶联作用，将H+转运入线粒体，降低膜电位，减少ROS产生，维持细胞内的ATP水平，达到保护细胞的作用[19-20]。

我们前期的实验发现，PM2.5可以通过损害心肌细胞的线粒体，破坏线粒体膜电位和线粒体的超微结果，导致线粒体ROS产生过多，ATP合成减少，进而损害细胞。然而，UCP2是否在PM2.5损害心肌细胞的线粒体的过程中起着保护作用，目前研究很少。RNA干扰是研究基因的流行技术。本实验通过设计UCP2基因的干扰片段，进行预实验，筛选出siRNA2作为干扰序列进行进一步研究。siRNA2导致了UCP2基因在转录和蛋白均出现低水平的表达，为探讨UCP2的在PM2.5毒性过程的作用提供了基础。

本实验发现，通过RNA干扰沉默UCP2的表达，会导致细胞内ROS产生增多和细胞内ATP含量的减少，后者更进一步导致细胞的损害，表现为CK和LDH的明显升高。PM2.5导致的UCP2过表达可能是细胞的代偿反应，抑制UCP2表达将促进细胞的进一步损害。这就间接地表明，UCP2可能是PM2.5导致心肌细胞损害过程中的保护因素。然而，本实验也存在明显不足：（1）仅仅采用了沉默基因方法，没有尝试过表达UCP2，再观察UCP2的作用；（2）指标检测方面没有将线粒体膜电位及线粒体肿胀度，线粒体生物修复功能等方面加以研究UCP2的作用。

综上所述，PM2.5可以导致心肌细胞损伤，代偿性引起UCP2表达增加；RAN干扰UCP2表达后，会导致细胞内ROS过度增多及ATP活性下降，从而加重细胞的损害；这一结果间接地表明，UCP2基因在PM2.5导致的心肌细胞损伤过程中可能起着保护作用。

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伤仲永练习范文第5篇

［关键词］ 工作流;工作流引擎;稽核系统［中图分类号］N99［文献标识码］A［文章编号］1005-6432（2009）01-0107-03

前 言

联通公司自从独立运营以来，市场营销政策灵活多变，联通公司建立了完善的质量监督机制和闭环的管理流程，业务稽核是质量管理体系的重要组成部分，是闭环业务流程中的关键业务环节。利用信息化技术手段加强业务稽核工作，改变完全依靠人工稽核的工作模式，提高纠错率，减少客户投诉。因此，基于工作流的联通电子商务业务稽核系统应需而生。

1 工作流技术

工作流是针对日常工作中具有固定程序的活动而提出的一个概念。其基本思想是通过将工作流分解成定义良好的任务、角色，按照一定的规则和过程来执行这些任务并对它们进行监控，达到提高办事效率、提高企事业管理水平和竞争力的目的。工作流技术是工作流管理系统WfMS(Workflow Management System)中的核心技术，也是办公自动化系统的关键技术，可监督、控制和协调业务过程。图1为基本概念之间的联系。

工作流模型由构成模型、组织模型、资源模型、工作流相关数据四部分组成。描述工作流的原语是Sequence、AND-Split、AND-Join、OR-Split、OR-Join和Ite-ration。存在四种路由关系:顺序、并发、条件、循环。指一个独立的处理实体，包括Actor、Group。角色是指在过程中对某项任务或相关任务集合具有访问权限和完成能力的处理实体。是扮演一个或多个角色的物理实体，角色表示责任的集合。两者的映射关系由授权完成。

2 工作流技术在联通电子商务业务稽核系统中的分析与设计

2.1 联通电子商务业务稽核管理系统简介

该系统为了及时纠正营业过程中发生的各种差错，联通公司建立了完善的质量监督机制和闭环的管理流程，业务稽核是质量管理体系的重要组成部分，是闭环业务流程中的关键业务环节。本系统结合工作流技术，将联通各营业部门基本业务如：接收交接单，稽核资料，传递，退回错误档案，归档等由计算机自动化处理替换传统的人工处理。

将工作流技术应用到联通电子商务业务稽核管理系统中，就生成了相应的工作流管理系统，该系统提供了以下三种功能:

建立阶段的功能：主要考虑工作流过程和相关活动的定义与建模功能；

运行阶段的控制功能：执行工作流过程，并完成每个过程中活动的调控功能；

运行阶段的人机交互功能：实现各种活动执行过程中用户与IT 应用工具之间的信息交互。

2.2 工作流程设计

根据联通电子商务业务稽核的实际工作过程，处理事务，及其相关联的对各个部门的职能行使过程和各个分部门的单项事务处理过程进行归纳、总结，忽略内部的、个别的、不常发生的管理活动，从中提炼出共有的，有代表性的活动，将其归纳为录入交接单、一级稽核、生成汇总表、接收一级稽核单据、二级稽核、移交档案室、接收档案移交、剔档、归档九个活动对象，这九个活动对象的处理过程中，都是针对交接单进行的，因此把交接单看做本系统的实例。同时系统把这九个对象，作为流程组成的基础类对象，由基础类对象可以派生出相应的对象实例，不同的实例之间的不同顺序的组合，形成了不同的工作流。

2.3 工作流引擎设计

工作流引擎是工作流管理系统的核心，它负责流程的向前，向后推动。伴随业务流程的激活，引擎自动解析流程的走向，配合系统内置的对象，进行管理工作。系统会自动显示当前工作的待处理内容，同时用户也可以机动的设置，便于特殊流程的处理。流程引擎的监控工具会监控企业的流程处理过程，便于事后分析流程绩效。流程引擎同时通过表单附件的形式管理非结构性数据。对业务流程的设计、执行、监控、分析、改进提供全面支持。帮助用户在业务过程中，全面记录过程流、协作流、信息流的内容，帮助用户依据流程运行的事实和结果，进行有效的流程分析，以优化过程流的环节、降低协作流的时滞、压缩资源流的成本，并实现流程的改进。工作流引擎是通过工作流模型、流程运行、流程监控的定义和维护而实现。

2.3.1 工作流模型

工作流模型是整个工作流系统设计的基础，模型描述能力的强弱决定了系统所支持应用范围以及系统的灵活度，工作流模型就是对业务过程的抽象表示。目前已有的建模方法主要有：基于活动网络的建模方法、基于Petri网的建模方法、基于语言行为理论的建模方法、基于活动与状态图的建模方法和基于扩展事务模型的建模方法等，本系统我们采用基于UML的活动图与状态图的建模方法。

在一个系统中，将应用逻辑中流程部分分离出来（称之为流程逻辑），为流程逻辑建立模型，定义成基本活动对象。各个活动对象的工作流程如图2所示。

2.3.2 流程运行

工作流引擎将分析当前的工作状态，工作流活动对象的定义，根据业务的交互逻辑形成不同的工作流进程，搭建不同的业务平台，即系统是以怎样的流程运行的。图2是系统整体活动对象的一般流程关系，如果一级稽核没有通过，或是二级稽核没通过那工作流引擎将如何工作，即系统是以怎样的流程运行的，图3是系统活动图，工作流引擎将按此流程运行模型调用相应算法，引起工作流的正确转向。

2.3.3 流程监控的定义和维护

流程监控是通过任务的启动和终止的条件实现的，在本系统之中为每一个基本活动对象或称任务都分配了一个相应的状态位，根据形成的不同的业务流程，也形成了不同的状态转换过程。一个活动只有当启动它的条件成立时，才会进行。

例如：一级稽核的状态字为2，当系统检测到状态字现为2时，才可以启动接受一级稽核活动，进而是二级稽核，同样在进行归档时要检测是否是已通过二级稽核的状态。

流程维护包括六方面:基本信息录入、待办事务处理、退回业务处理、收回业务处理、流程察看、办理人员处理。拟稿人进行基本信息的录入，选择处理人即此流程出现在处理人的待办事务列表中，办理人可以进行处理，处理的结果导致流程的分支有下一步、退回(至上一步)、收回(至拟稿人)。这里仅举“待办事务处理”模块的过程如图4 所示，其他类似。

3 结束语

基于工作流的联通电子商务业务稽核系统充分利用了工作流技术的特点，对于打造集成化、统一化、高效化的办公环境具有重要的意义。工作流技术虽已得到了较大的发展，然而仍存在许多的问题，其主要表现就是工作流技术及产品的庞杂，几乎每个管理软件和办公软件厂商都要接触工作流，也都会弄一套自己的工作流标准和底层架构，因此工作流技术有待我们进一步的研究和推进。

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