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关键词:肝炎病毒,乙型;基因;变异(遗传学)
乙型肝炎病毒(hepatitis b virus,hbv)的基因组由长度为3200个碱基对、部分双链的环状dna分子构成,含有4个部分重叠的开放读码框架(open reading frame,orf),即s orf、c orf、p orf和x orf。hbv的聚合酶(polymease,pol)/逆转录酶(reverse transcriptase,rt)缺乏纠错功能,允许复制错误发生。复制错误将导致多种不同的hbv准种的出现。
1 s orf变异
hbv dna的s orf包括前-s1区、前-s2区(两者合称前-s区)和s区,编码产物最基本的功能是构成hbv dane颗粒的包膜蛋白。目前的研究认为,s orf编码的大蛋白具有反式激活功能,与hbv的复制密切相关,而且血清大蛋白的检测对评估慢性乙型肝炎患者的病毒感染状况和隐匿性hbv感染患者的检出具有重要意义[1-2]。
前-s1区和前-s2区与p基因的空白区重叠,这两个区域都具有b细胞和t细胞的识别位点。一些前-s1区的变异可以导致被截断的大蛋白在胞浆内的积聚,这会抑制病毒的分泌并具有细胞毒效应。但是,gao等[3]研究发现,在有的肝癌患者体内,大蛋白完全缺失的hbv也可以成为优势种群,他们认为,是患者体内的野生型前-s蛋白修复了这种缺陷,即体内的野生株hbv帮助了这种缺陷病毒株,确保了其在体内的存活。前-s2区变异包括前-s2atg的缺失或错配,引起蛋白合成终止以及b细胞和t细胞表位的缺失或改变。前-s变异经常出现在应用干扰素治疗的患者中[4]。前-s区的缺失变异会影响大蛋白对小蛋白的比例,导致与肝病恶化相关的内质网压力过大,进而引发大蛋白或中蛋白与宿主染色体整合,增加了肝细胞癌变的可能[5]。mun等[6]研究发现,前-s区缺失的频率随肝脏疾病的临床严重程度逐渐增加,但前-s1和前-s2的缺失频率是有差别的,前-s1缺失在肝细胞癌患者中发生率最高,而前-s2缺失在肝硬化患者中发生率最高。
s区点变异可导致逃逸变异株的出现,变异通常发生在hbsag a抗原决定簇区域,目前报道较多的变异形式多为sg145r[7]。此外,基因分析表明,sp120a变异与hbsag血清抗体转换有关,这种变异降低了抗-hbs的结合作用,使hbsag的检测失败[8]。文献报道,有10个s基因变异与疫苗免疫逃逸相关,分别是sp120t、si/t126n/a、sq129h、sm133l、sk141e、sp142s、sd144a、sg145r、sf158y和sf161y[9],但这些变异的临床意义还有待进一步研究。
2 c orf与x orf变异
hbv dna的c orf包括前核心区和核心区,有各自的翻译起始密码子atg,分别编码前核心蛋白和核心蛋白。
前核心蛋白经过修饰最终形成可溶性抗原hbeag。核心启动子变异和前核心变异均会影响hbeag的表达。hbv dna的x orf编码hbx蛋白。hbx蛋白是一种多功能病毒蛋白,具反式激活作用。
在从hbeag-/抗-hbe+的患者体内分离到的病毒株中,a1762t和g1764a双重变异是最常见的bcp变异形式。
这种变异会引起hbx蛋白结构中两个氨基酸的变化进而影响hbx蛋白的活性以及改变病毒增强子的反转录作用[10],与肝细胞癌的发生关系密切[11]。fang等[12]通过3年的纵向病例分析得出,a1762t和g1764a双重变异与hbeag+患者体内较低的病毒载量有关,但对hbeag-患者体内的病毒载量没有影响。t1766/a1768变异与暴发性肝炎、肝硬化和肝细胞癌的发生有关联。ren等[13]的研究表明,慢加急性肝衰竭(无肝硬化基础)的患者与慢性乙型肝炎患者相比,a1762t/g1764a检出率显著增高。
前核心变异株则通过干扰前核心读码框架而完全终止hbeag的表达,有时还伴随着起始密码子错配变异和前核心区的框架移位变异。最常见的前核心变异是前核心区28位密码子(codon 28)由tgg变为tag(g1896a)。核心区发生变异会终止hbeag的表达,引起hbeag阴性肝炎。由于hbeag与hbcag有共同的抗原决定簇,缺少hbeag有可能使表达hbcag的肝细胞更容易受到免疫细胞的攻击,临床上表现为hbeag阴性肝炎病情容易出现反复,发生暴发性肝炎(肝衰竭)的几率增高。有研究发现,慢加急性肝衰竭患者的g1896a变异率显著高于慢性乙型肝炎患者[13]。
a1762t/g1764a和g1896a检测有助于区分临床上慢性乙型肝炎急性发作和急性乙型肝炎[14]。
与以上研究相反,有研究者认为,核心启动子变异和前核心变异不会引起肝脏功能失代偿,而是对肝脏功能失代偿起保护性的影响,hbv基因型与肝脏功能失代偿也没有明显的关系[15]。poustchi等[16]通过研究认为,在慢性乙型肝炎d基因型患者中,bcp a1762t和g1764a双重变异与肝脏疾病恶化相关,而g1757a变异却对宿主有一定的保护作用。
核心区编码基因相对保守,其编码的核心蛋白是宿主免疫反应攻击的主要靶抗原,它的变异可直接影响到宿主对hbv的免疫应答。有研究显示,核心区变异株(g87、v60)与野生株比较,前者可使宿主细胞内hla-ⅰmrna及其蛋白的表达水平降低[17]。sugiyama等[18]研究认为,核心区a2339g(codon147)变异在体外会增强hbv的复制;而且发生此变异的患有慢性乙型肝炎的儿童和没有此变异的患有慢性乙型肝炎的儿童相比,在血清hbeag抗体转换之前,前者的alt峰值较高。
3 p orf变异
从hbv dna p orf的n-末端到c-末端,共涉及4个功能区,即末端蛋白区、间隔区、pol/rt区、核糖核酸酶h区。rt区又包括7个功能亚区,从rt区上游第1个氨基酸起依次为a、b、c、d、e、f、g亚区。当前所有耐核苷(酸)类药物的基因变异位点都位于rt区。
拉米夫定为胞嘧啶左旋核苷类似物,其耐药变异位于rt区c亚区的ymdd基因序列,最常见的变异为rtm204i/v/s,而a亚区l80i变异以及b亚区rtv173l变异和rtl180m变异为其补偿突变,以维持病毒的复制力[19]。文献报道,拉米夫定也可诱导b亚区rta181t/s变异[20]。替比夫定为胸腺嘧啶左旋核苷类似物,与lam均为左旋核苷类药物,分子结构和作用目标位点相似,因此二者存在交叉耐药,常见变异为rtm204i。阿德福韦酯为无环腺苷类似物,rt区d亚区rtn236t变异与b亚区rta181v变异是adv的常见耐药变异形式。有文献将rta181t变异也归为阿德福韦耐药变异,但还尚存争论[20]。恩替卡韦为鸟嘌呤核苷类似物,其耐药特点是发生在拉米夫定耐药的背景上,耐药位点是在lam耐药位点基础上另加b亚区t184、s202和/或m250变异。
此外,在未应用过核苷(酸)类药物治疗的慢性乙型肝炎患者中,ymdd基因序列变异的发生率从1%-27%不等[21]。
因此,有必要在应用核苷(酸)类药物治疗前对患者进行hbv耐药变异检测[22]。
4小结
hbv是一种高变异的嗜肝dna病毒。hbv基因变异可以在宿主自身免疫应答、病毒复制适应性等内因的影响下发生,也可以发生于核苷(酸)类药物或疫苗接种等外因作用之后。hbv变异是影响其感染发生、发展和转归的重要因素。hbv基因变异常常引起病毒生物学特性的改变,在引发疾病的临床表现、诊断、预后和预防等方面带来很多新的问题。
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[关键词]陕北方言;语音;独特性
中图分类号:H17 文献标识码:A 文章编号:1006-0278(2015)01-187-01
汉语方言俗称地方话,只通行于一定的地域,它不是独立于民族语之外的另一种语言,而只是局部地区使用的语言。现代汉语各方言大都是经历了漫长的演变过程而逐渐形成的。方言虽然只是在一定的地域中通行,但本身却也有一种完整的系统。方言都具有语音结构系统、词汇结构系统和语法结构系统,能够满足本地区社会交际的需要。
一、陕北语音形成的环境
陕北在我国历史上是一个重要的地区。在周秦汉唐等朝代,陕北是周京沣镐、秦都咸阳、汉唐长安的屏障;秦皇汉武曾在此开直道、修长城北御匈奴,出现过灿烂的秦汉文化。就是在宋金元明等时期,陕北也是军事要冲、九边重镇。明代以后,由于天灾人祸,生态平衡遭到破坏,直接导致其形成历史上的文化封闭和交通封闭。
正因为这样一个封闭的、孤立的环境,恪守的传统和习俗反而不容易产生变异或消亡,许多其它地域早已失传的古老久远的人文事物就在陕北沉淀下来,得以在民间保存。陕北这块特殊的土地,是古代风俗文化的沉积层。陕北方言就是这些保存历史文化的活化石之一,它是一种口头承传的文物,是一种不同于其他可触可及的文物的形态。
二、陕北语音的独特性
陕北方言的属晋语,至今保留入声。共有24个声母,比普通话多了个声母,即有全浊声母V,Z和次浊声母n。其中,最为明显的特点之一便是没有前鼻音n,凡读由前鼻音n结尾的音节,都把韵尾n丢掉,并把音节中的主要元音鼻化。在读普通话an,ian,uan等鼻音韵母字时,均会丢失n韵尾,把主要的元音a变作ae,并鼻化,读作ae\iae\uae,陕北各县区都有后鼻音声母,把普通话以a,o,e起头的(er音节除外)都读作ng声母,使之后鼻音化。例如,把普通话音节ai,an,ang,en,ao,ou,e等分别读作ngai,ngan,ngang,ngen,ngao,ngou,nge。
陕北人居住在千沟万壑的黄土高原,彼此要交流,必须提高嗓音,隔沟高呼,这样,肺式发音远远传达不了信息,所以来自腹中强烈的气流冲出鼻腔,形成了陕北人鼻音重的特点。陕北人鼻音,其实就是把un读ong,把en读eng,把in读ing,所以只有把这三个韵母的字发音正确了,就肯定可以迅速才能摆脱鼻音的。陕北人不是不会发前鼻音un,en,in,而是平时生活中没有听过这样的音,所以一律读作ong,eng,ing,从而分不清前后鼻音。陕北民歌中“见个面面容易拉话话难”这一句歌词,很真实地反映了陕北人原生态发音形成的原因及当时人对于大自然无可奈何的感叹。王克明先生2007年出版了研究陕北方言的专著《听见古代》,搜集了3900多个词语,并尽量从古代典籍中找到出处,称“听陕北人说话,如同听古人言”。陕北方言虽然属于北方方言,但其保留了大量的文言词汇,并在千百年的口耳相传中沿袭了一套独特的语音系统。在语汇方面暂且不谈,在语音方面,最大不同在于入声,陕北方言中保留着古代语音中大量的入声字,譬如,“上街”读作“shang gai”,而不是“shang jie”“下去”读作“hage”,而不是读作“xiaqu”。
除以上对入声的发音保留外,陕北方言还保留了众多古音。瞎,陕北方言发为“哈”音。常有人讲“哈怂”的“哈”,疑即老陕“瞎”之误。“哈怂”指的老实没本事的怂货,在陕北方言里叫“瞎汉”,读若“哈汉”。这个“瞎汉”的叫法,早在中古时期就有了,如《五灯会元》里有“瞎汉,佛法说甚么蠢细?”就是个例子。这个叫法,一直流传到今日,由此倒溯,也可以约略知道至少宋时“瞎”字的发音了。瞎在古代从“H”声母,从宋“广韵”之后改从“x”母。可见陕北方言的读若“哈”,保留的是古音。
闲人的闲,陕北土音读若“寒”。平水韵中,闲字为删部,与关、还等韵。“七律・”中,把“闲”字和属于寒部的“难”寒”“丸“颜”等通押。若依今音读若“咸”,就不押韵了。平水韵为宋末人刘渊依唐韵所编,大体反应的是唐宋时人的音韵。因此陕北土话中的这个“闲”字,也至少保留了近古音。
2005年6月24日上午10:30,我局接到临海市杜桥中学、临海市第二人民医院报告,临海市杜桥中学有部分学生出现腹痛、腹泻等不适症状。根据临床表现、流行病学、卫生学调查、实验室检验,证实为一起由致病性大肠埃希菌引起的食物中毒。现将结果报告如下:
一、概况
该校设初中部和高中部,共有74个班级,4520名学生,除去高三、初三学生外,现有学生3170人,70%为住宿生,学校共有二个食堂(一楼食堂和二楼食堂),分别对外承包,平时学生就餐人数一楼为900人左右,二楼食堂700人左右,食堂用水由杜桥自来水厂提供。
二、流行病学调查
2005年6月23日起,杜桥中学学生出现以腹痛、腹泻为主要症状的病例逐渐增多,至6月24日7时左右达到高峰后,病例逐渐减少。根据该病例定义,确定为58名学生为本次食物中毒患者,首例病例,项卫芳,女,16岁发病时间为6月23日上午6:30,出现腹痛、腹泻、恶心症状,经过对症、抗感染治疗,均痊愈出院。
三、实验室检验
由于食堂已将剩余的食物处理,所以我们没有采集到剩余食物,而只采集了9名患病学生大便和28份食堂工作人员的大便,7份豆浆,2份管网水,1份食堂用色拉油,均作病原菌分离和鉴定。本次实验中所用试剂均由杭州微生物试剂厂提供。病原菌分离和鉴定按中华人民共和国卫生部颁布的《食品卫生微生物检验》(GB4789-94)及《卫生防疫细菌检验》方法进行检验,从9名学生的大便中检验出5份肠道致病性大肠埃希菌(EPEC)阳性,食堂从业人员2名亦检出肠道致病性埃希菌(EPEC)血清型O128K67型菌株。未检出霍乱弧菌、沙门菌、变形杆菌、志贺氏菌等致病性微生物。
四、分析
根据流行病学和卫生学调查,结合临床表现及实验室检查结果,证明本次中毒为一起致病性大肠埃希菌(EPEC)污染所致的食物中毒。曾有报道认为EPEC是婴幼儿腹泻的主要原因,婴幼儿是主要易感人群。本次食物中毒发病年龄为15--36岁。
综合分析以上临床表现、流行病学、卫生学调查及实验室检查结果,依据GB14938-94《食物中毒诊断标准及技术处理原则》,认为本次事件为一起由微生物污染引起的食物中毒事件,导致食物中毒发生的可能为该单位的从业人员卫生意识淡薄,生产工艺不合理,生产环境布局混乱,生熟食品混放,生熟菜刀、菜墩不分,交叉污染环节较多,上述原因致使食品在加工过程中受到污染,致病性大肠埃希菌(EPEC)大量繁殖造成本次食物中毒,应值得有关部门的高度重视。
五、预防类似食物中毒的关键控制点
关键词:丙型肝炎病毒;基因分型;进展研究在如今生活中,除了乙肝是常见肝病外,丙肝患者的比例越来愈高,究其原因主要是人们对于丙肝的感染途径不了解,未对丙肝给予足够的重视。其传播途径主要有:①输血及血制品,尤其是反复输血及使用血制品者,据统计,输血后肝炎70%以上是丙型肝炎。②不正规注射。③伤口未护理。④性接触。⑤母婴传播。在这几种传播途径中,①④⑤最易感染丙肝。在日常生活中,人们需要采取相关防范措施,以免感染丙肝。
1 HCV的结构
HCV的RNA大约有9500-10000bp组成,其5′非编码区有319-341bp,3′非编码区有27- 55bp。在5′非编码区下有一开放阅读框(ORF),其基因排列顺序为5'C-E1-E2-p7-NS2-NS3-NS4-NS5-3,能编码多聚蛋白前体(一长3014个的氨基酸)。经宿主细胞及自身蛋白酶作用可裂解成三种结构蛋白,其分别为核心蛋白、糖蛋白、非结构蛋白三种。HCV基因标记有很多种,如GP72,其基因标记为E2/NS1。其糖蛋白能产生抗HCV的中和作用。还有NS2、NS3、NS4等基因标记。
NS2和NS4的功能可能与细胞膜紧密结合在一起。NS3参与解旋HCV-RNA分子,具有螺旋酶活性,以辅助RNA复制,NS5参与HCV基因组复制,依赖于RNA的聚合酶活性。
2 HCV的分型及地理差异
目前HCV分型尚无统一的定论,这是因为在研究的过程中采取的技术及研究的位置不一致,因而出现了很多基因分型,这些基因分型没有同一的标准。综合各个国家的研究结果,大致上可分为6型,其亚型很多。而且HCV感染有很大的地域差异。比如欧洲国家主要是HCV-Ⅰ型感染,亚洲国家主要感染Ⅱ型。在我国,很多患者为Ⅱ型感染,其次为Ⅲ型感染,但是有些地区Ⅲ型感染率超过Ⅱ型感染率,从这里来看,丙肝感染并不是一成不变的,还跟地区有很大的关系。
3 HCV基因检测方法
关于HCV的检测方法有很多,主要有分子学方法和血清学方法两种,其中分子学方法占主要方面,其有:①直接测序法;②限制性片段长度多态性分析法;③特异性探针杂交法;④基因芯片;⑤遗传系统进化树分析方法;⑥型特异性引物PCR法;⑦荧光共振能量转移探针的解离曲线分析法;⑧引物特异的延伸分析法;⑨异源分子迁移率分析(HMA)法。而血清学方法有:①重组免疫印迹试验(RIBA)②酶免疫试验(EIA)。其中第②种已经被第一种取代。
4 HCV基因与疾病的关系
HCV基因与疾病的关系没有直接及明确的证据,但是目前普遍认为HCV与重型肝炎有关,与肝硬化、肝癌也有一定的关系,肝移植术后易复发的患者HCV感染率也很高。在这一层次上来讲,HCV基因可能在一定程度上促进了这些疾病的进展,可能在肝病的患者损伤肝细胞,从而导致患者肝功能持续下降,产生严重的后果。
5抗HCV药物及疫苗制备
5.1抗HCV药物标准治疗方案是聚乙二醇干扰素联合利巴韦林,聚乙二醇干扰素又称为长效干扰素。临床用药试验研究表明,使用长效干扰素对丙型肝炎患者的疗效明显比普通A-干扰素明显。在临床上,对于丙肝患者首选聚乙二醇干扰素。
5.2疫苗制备像很多疾病一样,丙肝的疫苗不容易研制[1~5]。这与HCV基因的高度变异性有关,HCV基因其复制依赖的酶缺乏校对功能,这样很容易产生免疫逃逸,而且其基因具有高度异源性,这为疫苗的研制带来了很大的困难。在世界上很多国家都在尝试使用一种新的方法来研制疫苗,可是结果并不理想,当一种疫苗研制出来后HCV基因已经产生变异,这种疫苗就失去了其临床价值,这样不仅花费了财力,还消耗了研究人员很多精力,结果并不理想。所以,如果相关部门不投入大量的财力是无法继续研究疫苗这项事业的。
6结论
对于丙型肝炎病毒基因分型的研究远远还没有结束[6~10],虽然其基因具有显著异源性和高度变异性,其检测方式既不简便也不经济,需要投入大量的人力物力财力对其分型有进一步的突破性研究,但是对丙型肝炎病毒基因分型的研究不能止步,对其疫苗的制备不能停止,因为研究HCV基因不仅有助于人们对丙型肝炎有更深入的认识,而且可以为丙型肝炎病毒基因有关的丙肝疾病疫苗的制备提供依据,本着对人类健康负责的态度,预防丙肝的爆发流行,我们要继续为丙肝基因的研究付出努力,为人类战胜丙肝迈出更重要的一步。
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【关键词】独立院校 学生满意度 竞争力
【中图分类号】G647 【文献标识码】A 【文章编号】1674-4810(2014)26-0060-01
一 独立院校概况
独立院校与大学的院系间存在着根本性的差别,它具有完全的民办性,也具备较强的独立性。其运作的经费来源较为特殊,并非由国家财政支持,而是由独立院校自身通过各种方法募集而来。
通过对相关数据进行分析可知,它对中国教育事业发挥的积极作用将会越来越大。当前,中国的独立院校数量已超过300所。2008年,教育部批准4所独立学院转为民办本科院校,之后的一年又有1所独立院校成功转型,由此可见,我国对独立院校的重视程度逐渐加深。
二 独立院校学生满意度的影响因素
学生的满意度与其对学校的期待存在一定的关联,当学校的现实情况能满足学生的期待,学生就会产生较高的满意度,反之,如果学校的真实条件与学生的期待出现较大的偏差,就会造成学生的满意度相对较低。
1.师资力量
通过对调查结果进行分析可知,师资力量对满意度的影响最为重要。一名具备较高素养的教师不但能使自身受到学生们的欢迎,也能使学生接受其所在院系。教师和学生间的互动也会对学生的满意度产生一定的影响。在课上,高素养的教师如果能和学生间保持有效沟通,就可以调动学生的积极性,使他们对课堂产生较为良好的观感。同时,如果教师也能在课外与学生间保持有效联系,就会使学生对教师的传统印象得到改观,在心灵上与教师拉近距离,对教师的满意度自然随之升高。
2.就业有效性
经过调查,有405名学生希望学校加强就业指导咨询服务,更好地帮助学生找到理想的职业,占有效调查人数的比重为29.5%,高等院校的学生毕业就业的有效性对学生的满意的影响程度显而易见。
3.学校的硬件设施建设
在调查结果中,有563名学生认为实验室设备、校园网和学校的运动场地和体育设施没有达到期望的水平,占有效调查人数的41.0%。随着生活水平的不断提高,越来越多的学生对学校的校园环境、设施提出了更高的要求。
三 提升独立院校学生满意度的策略
1.实现师生之间的良性互动
学校应对教师组织相关的培训,让教师了解与学生的相处之道。针对学生的实际特点制定具有针对性的培训内容。教师在接受培训的过程中,要在学习的同时与学生进行沟通,实现知行同步,如此师生之间便可以实现良性互动,提高学生对教师的满意度,进而提升对院校的满意度。
2.增强服务意识,完善学校的管理机制
全面推进学校的发展建设,为增强学校竞争力创造良好的条件。不断提高教学质量;在毕业季与正规企业进行合作,举办大型校园招聘活动,提高学生的就业质量;加强各项基础设施建设,从硬件方面提升学校的建设水准,提高教师的科研水平,提升学校的学术影响力;建立健全学生补助制度,加大对经济条件困难学生的补助。通过以上措施的实施,学校的整体实力会得到提升,学生的满意度必然随之提升。
3.明确培养目标,课程设置更加合理
结合学院培养应用型人才的办学理念,以培养学生岗位适应能力与就业竞争能力为目标,抓住机遇,开展专业建设和改革,加强学生动手能力的培养;课堂教学与实践相结合;加强校外实习基地建设,“校―企多元化合作”联合培养,“双师型”团队建设;鼓励大学生参与实践创新活动,在学院层面加大对实践环节的重视;应多开展一些与人文素质培养相结合、专业学习相关联的活动,培养学生具备立足社会的素养。
四 结束语
独立院校是促进我国教育事业发展的重要力量。学生的满意度会对独立院校的发展产生一定的影响,独立院校必须走出一条特色化办学之路,要紧紧围绕应用型创新人才培养提高办学影响力和成长发展力才能在日益激烈的生源竞争中占据有利地位。因此,针对学生的满意度进行研究对于独立本科院校的可持续发展会产生积极的作用。本文从教师和学生等角度对能影响学生满意度的因素进行分析,进而寻找相应的对策。
参考文献
[1]胡大白.论民办本科高校内涵发展必须解决的几个问题[J].黄河科技大学学报,2008(3):115~116