前言:想要写出一篇令人眼前一亮的文章吗?我们特意为您整理了5篇爱稻草范文,相信会为您的写作带来帮助,发现更多的写作思路和灵感。
[16岁的夏天]・・・・・・・・
我在晨报上看到一首诗,里面有这样一句:“年轻的爱不过是场流星雨。”觉得喜欢,就剪了夹在书里。虽然只看过一遍,但那句话始终记得。一个人的时候,走在街上,路过楼宇,任何小小的触动都可以让我吟诵起它。
写诗的那个人名字很怪,叫“秸稞”,我不明白好好的为什么要叫自己为一种只能烧火的草。我试图自己来诠释它,结果枉然。当这棵草越来越频繁地出现在报纸上,我觉得我总有一天会找到答案。
特意的,买了一个大大的笔记本,每一张都粘贴着秸稞的诗歌,旁边有我手绘的画。没人告诉我这样的迷恋是不是一种痴爱。当然,前提是我已经把它当做了秘密,珍藏在心底。即使最好的朋友,我都不敢去言说。
那一年,我的世界里除了书本,就只有秸稞。他像一棵出生在沃土的树,疯狂地生长和繁衍,以至于很多个夜晚,我都以为就要见到他了。
[18岁的秋天]・・・・・・・・
这个季节里最热的那一天,我接到了大学录取通知书,中文系的。直到离开家,父母还在批判着我的错误选择。天下最苦是文人,为什么一定要和自己过不去呢?我从不解释这个疑问,因为我不能和他们说,我爱上了一个没有见过面的人,爱上了他的文字,所以,一定要走一遍他走过的路。
喜欢秸稞已经5年了,我的收获是每年一个厚厚的粘贴本。收拾行李的时候,我先把它们拿了出来,仔细地检查一番,然后妥帖地放进行李箱最下面。
大学的课程轻松许多,很多同学都把过剩的精力投入到爱情中。我当然是没有那份心思的?我给自己了一个“靠近秸稞”的计划,第一步是给他常发稿子的报社投稿,借此和编辑混熟,要到他的联系方式。
1O月14日,我的文字首次变成铅字,距离秸稞是两篇豆腐块的距离。我想,我们近了。
[21岁的冬天】・・・・・・・・
实习的时候,我被分去省电台。据说,如果表现不太差是可以留用的。我喜欢倾诉类的,所以选择了“都市稻草人”。
主播是个50岁左右的男子,有长的发,浓的眉,喜欢穿单色的T恤和褪色的牛仔裤。当然,富有磁性的男中音才是他整个人的亮点。只一次,我就喜欢上了自己的文字读在他唇下的感觉,他能把所有的字都读活了,如同把灰姑娘变成了白雪公主。
一周以后,我们开始交流工作以外的话题。他翻着我的笔记说,你的笔锋不太像一个女孩子。我的笔锋当然不像女孩子,因为我一直试图靠近秸稞,我习惯了和他用近似的词和相同的语气。可这是我一个人的秘密,一直都是,我不打算和他说。
做节目的时候,我坐在他右边。每次听那些听众讲述和我类似的故事,我都会暗暗叹气。渐渐地,他察觉到了我的惆怅。不过,他没有问我更多,只是说,暗恋也是有所为有所不为的。我明白,他在告诉我,我的暗恋不可为。
[22岁的春天]・・・・・・・・
实习快要结束的时候,我请全组同仁吃饭,算是谢了大家对我的关照。给胖胖的台长倒酒时,被他端详半天:很舍不得你走啊。难得给他找到一个如此合适的搭档,你们两个都是天生的主持的料子,又都喜欢写点儿东西,连文风都特别像,多难得呀。
回到座位上,我悄悄问他:你也写东西?他笑笑,说是写点儿豆腐块,不成什么气候。那一瞬间,我把他想象成秸稞,我的神秘的秸稞。他帮我改稿子的样子,他读我文字的神情,还有他也收集晨报的习惯,我想到他即使不是秸稞,也是有关联的。
他送我回家,很长的一段路因为彼此的沉默而越发漫长。我一直斟酌着要不要试探他是否是秸稞,但总是勇气不足,有那么几次话都到了嘴边还是没有问出口。到了我的宿舍楼下,他停下来,说:很晚了,上去吧,再见。
简短的告别后,他转身就走。再也顾不上矜持与礼貌,我急急地追上他:你是秸稞?他看看我,点头。来不及掩饰,泪就先流了下来。我完全忘记了预想的寒暄和表达。我只说,秸稞,你怎么才出现啊,我等了你好久。
他把我拥在怀里,轻轻地拍我的肩,一遍遍地说,我知道我知道。他说他知道,他知道我在找他,他知道我在等着见他一面,他就一定知道我对他的感情。虽然他在最后一刻才告诉我他是秸稞,但是我不计较这个迟到的通知。
[22岁的夏天]・・・・・・・
我工作了,在省电台,做秸稞的搭档。是个如愿以偿的结果,我相信这是一个好的开始,就像我相信和他会有一个好的结局。
明显的,秸稞不这样认为。再见的时候,他的态度冷到了极点,我甚至怀疑几个月前的共事可否存在过。有别人在的时候,他还象征性地和我说几句工作的事;离开了人群,我们就只剩下沉默。
每天下午,等待上节目的空闲总因为这沉默而越发的森冷。我们对坐在桌子两端,用电脑隔开彼此没有表情的脸。秸稞和唐米的名字悬挂在同一个论坛里面,因为都还算半个职业,所以我们不发自己的卖字稿,只随意地灌灌水,写写字。他从来不回我的帖子,而我想回,却无处可回。他只跟别人的帖子,更多时候是潜水。
夏天,因为他而更加让我郁闷。我需要一个出口来释放掉心里的火山。思前想后,决定在论坛里写写自己的这场爱,我想他一定会来看的,尽管他一定不会回应我。
[22岁的夏天末]・・・・・・・
每天一贴的《稻草人的爱》已经在论坛里被跟到了第23页,我的爱成了全世界人眼里的固执和痴傻。那些好心人在给着我善意的鼓励和好心的劝解,一些年轻的男孩子甚至冲动地写着“唐米,如果你爱的是我,我就牢牢地抓住你的手”之类的感言,而他依然没有回复。
不是没有失落的,可我还是不能放弃。当全世界都以为这不过是一场读者对写者的暗恋的时候,只有我和他知道,这爱仅是一个思想转身的距离。我始终都在猜测和寻找他不接受我的原因,遗憾的是,答案早已溺死在他的沉默里。
有人告诉我,若想得到爱情,就要给男人足够的浪漫与吸引;若想得到婚姻,就要给男人可以幻想家庭的空间。我当然想和秸稞有场婚姻的缘,因此一直隐忍。
两个人的办公室让我布置得像个小家。白的窗纱,红的脚毯,永远翠绿的君子兰,流光异彩的观赏鱼。很多同事都喜欢到这里来看我的十字绣,偶尔还讨一两样成品去。唯有他,依然沉默。
22岁的夏天,就在他的沉默里闷热地过去了。
[22岁的秋天]・・・・・・・・
台长在一个周末对我说,从现在起你和他一起主持节目吧,男女搭配会更有生气些。
有了表达自己的机会,我开始打破沉默。我不赞成秸稞面对感情时的保守,所以,节目里他常常劝听众要从大局看感情,我则更多地让他们站在理性的角度看付出与收获的对
错和多少。渐渐地,有人打进电话来会直接地问:唐米,我希望你告诉我该怎么办?
短短一周,我的名字在同行里赫然跃起。台长在周会上给了我极大的肯定,一些用词让我觉得他表扬的并不是我,而是他的想象。我清楚这些获得里面,秸稞给了我很多默默的支持。正因为他在节目中的沉默,我才有了表现的机会。而那个时候,他本不该沉默的。
台长打来电话说,在一个饭店的包间里等我,谈谈节目的事。彼时,我正和秸稞在加班赶一期参加全国比赛的节目。我向他请假,清楚地交代了去向和去因。他接过我手里的稿子,继续忙碌,这态度便是他给我的批准。
胖胖的台长拍着我的肩允诺要好好培养我,我悄悄地挪远身体,不卑不亢地提醒他该受到提拔的人是秸稞。台长一脸不耐烦地挥挥手:现在你和他都是没有编制的,这节目拿出去,不论获奖与否,都会得到一个名额。你懂我的意思吗?
我懂,所以我答应台长会考虑。考虑不是为了结果,而是为了拖延时间。我相信我们合作的节目会得奖,有了这个砝码,秸稞以后的路会更顺一点儿。
[22岁的冬天]・・・・・・・・
我们赢了,结果被宣布的时候,秸稞第一次拥抱了我。很短的一瞬间,但是很紧。我多想这一刻就是我的一辈子,忘了从前,也不要以后。
庆功宴上,恭喜的话如雪漫飞,那些漾笑的脸一次次经过我,可每一张我都觉得很陌生。台长端了红酒过来,笑意盈盈地走向我。他每向前一步,我就后退一下,无路可退的时候,我本能地喊:秸稞救我。
眼前满是关切的眼睛,台长拉着我的手说,唐米,你这样的好同志我们是要重用的。他身后的人纷纷赞同着。我死了吗?我恍惚着问他们,也好像在问自己。你只是晕倒了。说这话的是秸稞。可我看不见他的脸,他被挡在人群之外。
名额下来了,只有一个。台长遗憾地对我们说这是没有办法的事,但不论谁得了编制,另一个也将继续留用。台长给我们3天时间来整理自己的述职报告,然后交领导小组讨论。秸稞说,不用麻烦了,名额给唐米吧。
第二天,秸稞没来;第三天,秸稞没来。我知道那个位置会空上一段时间,然后由别人来坐。试图在论坛里找他,24小时在线竟也遇不到他,一个人的消失是如此轻易。而我,喜欢了他6年,又共事1年,却把他从眼前弄丢了。
[24岁的春天]・・・・・・・・
晨起的时候,发现眼角又多了一条细小的纹。我想我老了,从外表到心灵。回想第一次读秸稞的时候,那个如花的女子竟生着一副陌生的面孔。
秸稞变了没有?他到底有没有喜欢过我?他为什么不接受我?他为什么要离开?都是一些不会有答案的问题,但我甘于猜想,乐此不疲。
有一次在街上,遇见一个和他貌像的男子,我便中了诅咒般地跟了5条街。后来的幻想里就多了一种假设,如果我和他不期而遇,我该说些什么,做些什么?我想我是会哭的,就像第一次知道他是谁的时候那样尽情地在他怀里哭。
然而,一切起于幻想,也止于幻想,浪漫重逢与邂逅一次也没有在现实里上演过。他甚至抽离了那些文字,让我每日翻阅着晨报却再也找不到可以看的东西。如此干净利落,真真是我喜欢的那个他。我在这个过程里发现自己还能喜欢上这种无声的折磨,痛,但充满了。
我想,我依然爱他。
[26岁的秋天]・・・・・・・・
出版社的编辑说,原定的出书计划现在有了变动,原因是我的书名与另一个人的有重叠。我的是《爱上一个稻草人》,而另一本是《一个稻草人的爱》,更让他们为难的是,我们的文风很接近,宣传上很难各具特色。
我向编辑要了那个作者的电话,那边的声音告诉我,秸稞出现了。几乎用了全身的力气才有勇气告诉他,我是唐米,我要见你。然后迅速挂断,不给他拒绝的机会。剧烈的喘息了一阵,才想起没有定好时间与地点,于是再拨过去,快速地讲完,快速地挂断。
他剪短了头发,也没有穿单色的T恤和褪色的牛仔裤。见了他,我根本就忘了世界上还有语言这码子事。倒是他温和了许多,笑着打趣我和当年没有区别。
然后,我们就谈当年,谈那些共同做过的节目,谈我曾经的幼稚,谈他昔日的沉默。终于,终于,我没能忍住地问了他:当年,你为什么不理我?他收了所有的笑容,平和地问我:你结婚了吗?我摇摇头。他点着头回答我:我以为我离开后你会结婚。
这是什么理由?我激动地回敬他:你也以为我和那个胖胖台长不干净吗?事实是你离开以后,我也离开了!他吃惊地抬起头,剑一样的目光穿向我……
[27岁的春天]・・・・・・・・
我结婚了。丈夫子新算是个商人,经营着一家不大不小的清吧。他的清吧是我25岁上最为惊喜的发现,每每思念秸稞到寂寞,我都到那里去坐一坐。虽然一坐就是5年,但我与子新并没有因此而相识相知,直到我与秸稞重逢的那个下午,他才缓缓地出现在秸稞离开之后,以递来一盒纸巾的姿势走进我的生活。
他沉默地看着我大把大把地抽取纸巾,胡乱地擦拭一脸泪水,耐心地等我不再哭泣,然后说:年轻的爱不过是一场流星雨,不必伤悲。我惊诧于这个男人能够说出秸稞的诗句,顾不得掩饰自己狼狈的哭相,愣愣地目测了他良久。
我去清吧的频率渐渐高了起来,虽然那里有着我与秸稞再度失离的记忆,但只要看见子新,我的伤悲就淡了许多。很多的瞬间,看着子新的脸,我会想起自己思念秸稞的这么多年时光。
没有谁追求谁的事情发生。情人节的晚上去子新的店里,他摆了我写的书在桌子上,他说书里有两句话印象最深,一句是“年轻的爱不过是一场流星雨”,另一句是“把心里的事写出来是对自己的一种交代,也是为了以后能再轻松地爱”。前一句是秸稞的话,后一句是我说给自己的,它们都写在醒目的位置。子新说,如果你觉得你已经可以轻松地去爱了,那就嫁给我吧。
我低下头,想了秸稞一秒钟,发现已经不太记得清楚他的样子,伤悲也不那么浓郁了。于是,我抬起头对子新说,好。
[29岁的冬天]・・・・・・・・
子新的清吧连锁已经开到第5家了,地段越选越好,生意也越来越火,可我还是喜欢呆在最初的清吧里。遇到人少的时候,我就坐在秸稞曾坐过的位置上读书。
书是子新向我求婚时拿来的那一本,我的第一本书――《爱上一个稻草人》,记录着我迷恋秸稞的全过程。每次读,都有不同的感受,起初常常被自己的痴情所感动,后来渐渐觉得这一切更像是发生在别人身上的故事。
再后来,我才知道子新能说出和秸稞一样的话只是一种巧合,那一句是很多人在爱情道路上走过时都会发出的一声叹息。而我爱上秸稞,也只是因为他在我懵懂于这个道理的时候先一步说了出来。换句话讲,秸稞只是我青春时期的一个崇拜,我爱上的是爱本身的感觉,而不是具体的那个人,而这一爱就是10年。
制作步骤:
1、把绿豆用石磨磨后泡在温水里,并去皮蒸出来放点盐压碎;
2、再放白糖做成馅;
3、把艾草洗净煮出来,并用凉水漂一漂,除水份后捣碎;
4、蒸糯米面后加艾草,并使之染成绿色;
5、把绿豆馅摘成绿豆大小,用手抓紧;
6、使之与艾草混在一起,拌匀、和好成光滑粉团,年糕的量要比绿豆馅多;
7、取几片鲜艾草叶洗净,铺在笼屉中;
实际上,减压是都市白领的永恒主题。如果说瑜珈、SPA是以一种温柔的方式释放身心,那么有氧搏击操就是让你在剧烈的运动中完成激情释放的过程。
有氧搏击操(kickboxing),最早是由一位黑人搏击世界冠军创造,但直到最近才在国内得到一定程度的发展。它的特点是是将拳击、空手道、跆拳道、功夫和一些舞蹈的动作混合在一起,并且配合着动感十足的背景音乐。极富爆发力的动作,让你在汗水中尽情发泄激情和青春。
由于搏击操更重视瞬间的爆发力、感官刺激,如果再加上动感音乐,所以曾经被称作“男人的舞蹈”。但不甘心示弱的女性似乎比男性更快地融入到这项“男人的舞蹈”中,不知道是不是受了韩流中清纯美丽的《我的野蛮女友》的启发。北京青鸟健身中心的健美操部主管黄靓,对此深有感触。他认为,练习有氧搏击操并不能只从流行时尚出发,而应出于健身的目的,当然,在练习时,还有很多问题都需要注意。
1、热身时间要足够,否则身体得不到足够的伸展。上课时腿部应每15~20分钟作一次伸展。
2、腹部、下颚收紧,两手握拳于脸前(防御姿势)保持呼吸,不屏气。
3、避免和专业运动员一样进行长时间的训练,应交替进行大运动量和低运动量的练习。
4、侧踢时不向前扭跨,否则会导致压力集中膝部,绷脚尖会扭伤膝盖,应向脚尖方扭跨以减轻膝盖的侧压力 。
5、膝盖不要僵直,以减轻缓冲。在转身时要抬起膝盖,否则会扭伤十字韧带。
6、击拳时要由肩部带动出拳,在完成击拳和踢腿动作前一直看着目标。
7、避免在拥挤的房间内进行后踢的动作。
8、避免肘、膝部用力过猛;避免进行闪躲或猛击动作时由于动作过大而脱臼,避免扭转动作。
9、若发生以下情况,可停止练习(腿部疲劳、人体局部出现痛状不适、眩晕、心率过快等)。
健美锻炼Q&A
Q:健美锻炼是否受年龄限制?
A:健美运动是不受年龄和性别限制的,男女老少均可参加。各人可根据自己的身体条件和体力强弱来确定练习的动作内容,选择锻炼器具和增减运动量。
Q:健美锻炼要多长时间才能见效?
A:见效的快慢因人而异。除了个人的身体条件不同以外,还与锻炼的程度和掌握动作的准确性有关系。所以有的人见效快,有的人则见效较慢。一般情况下,大多数人经过2个月的锻炼后,体力都会有明显的增长。
Q:健美锻炼时,肌肉酸痛是怎么回事?
A:刚开始锻炼的人,锻炼过后肌肉会感到酸痛,这是由于肌肉在运动时产生大量乳酸造成的,是正常的生理现象。
Q:某些已经比较粗壮的肌肉还要不要进行锻炼?
A:如果某些部位的肌肉已比较粗壮,对这部分肌肉可以少练,但不应完全停止锻炼。如果长期不锻炼,这部分肌肉的素质就会逐渐衰退,弹性和力量也会下降,对其它部位的健美有消极作用。
Q:经常进行健美锻炼会不会把肌肉练僵?
A:经常系统合理地进行健美锻炼,不仅不会把肌肉练僵,而且还能对身体产生良好的作用,使肌肉发达。然而,如果违背科学的锻炼规律,就会引起过度疲劳,机体创伤或有肌肉僵硬的感觉。因此,按要求去做,循序渐进,特别是锻炼后,必须做放松活动,使肌肉得到完全放松。
真是的、把我带走、还让我空着肚子回来~~
“咕噜噜…!!!”哎呦、肚子好饿哦
洁倪看我这副表情、就知道肯定有啥米事情了
“晓熙、你怎么了嘛??!!”她很自然的吧手搭在我的肩膀上!
“我。。我…肚子饿了####”
“晕”她用手拍了一下她自己的头、“好啦,我给你做饭去!”
“叮咚□□□叮咚□□□”
“我去开门”我好奇地走向门口
门一开,看见一个帅气的小伙子
许久、我才反应过来,自己已经像个花痴一样盯了他很久了
他那双纤细的手在我的眼前晃啊晃的
“哦。。对不起。。你找谁?”
“请问、顾洁倪在吗?”他终于露出了洁白的牙齿
“哦。她在,我帮你叫她~”我点点头。“洁倪、有人找你哦!!”
“啊、、来了啦!!!!!!”她从厨房里匆匆忙忙 的跑出来
“洁倪、走吧…………”那个男生笑了、好可爱哦~
“嗯,好的,你等下!”她把我一手拽到旁边
“喂、倪,实话说,他到底是谁?”
“好啦,我招——我男朋友”
“小样、啥时交男朋友了!”
“嘿嘿……”
“好啦,晚饭我自己搞定、去吧,祝你们玩得愉快哦~”
“谢谢大小姐的恩赐啊!!”她走向门口,“嗯,我们走吧~”
她很自然的挽起男生的手臂++++幸福啊0。0
他有着橘色温暖的笑容,穿着带着柠檬香味气的白色衬衣袖口总是那么干净。好看的唇角总是挂着暖和人心的微笑,像是三月的微风,温暖的即将把人给融化。
洁倪怎么能交到这么帅的男朋友呢!我暗暗心里想。
“想什么呢,小傻瓜!”不知谁敲了我一下头
当我反应过来、回头看时,失望落及——一人也没有
送走一对甜蜜的情侣、我又一个人躺在床上
第二天,上课时。手机突然响了,偷偷拿出来一看,是一个陌生的手机发来的短消息
打开一看——
晓熙、现在肯定没在专心听课吧~!
咦,谁啊?除了我认识的、还有我不认识的………………
啊,我想起来了。洁倪的男朋友@@@@@
“啊…………”我突然从座位上蹦起来
我旁边的彬吓了一跳,就连我的舍友---洁倪,都禁不起这一跳
“哦哦哦。。老师、对不起!”
“好好听课!”温柔又善良的老师放过了我
---下课---
“喂、刚刚干嘛这么大惊小怪啊”
“嘿嘿、你看看!”我拿出手机给倪看那条短信,“倪,肯定是你告诉他我的手机的吧!”
“是呀,给你们建起好的桥梁!”她坏笑,“我先去约会咯~”
“好啦,去吧。我亲爱的洁倪…………”
通过手机的短信,我慢慢了解 了那个男生:
姓名:钟凯齐
年龄:19
专长:钢琴、提琴
家世背景:有父有母,大少爷(不过看上去没有斯胁有架势)
性格:开朗大方
喜欢:听洁倪唱歌给他听
【关键词】 甘草 活性成分 人乳腺癌BCAP 37细胞
Comparative Study on the Anti-proliferation and Apoptosis-inducing Effects of Active Components from Four Glycyrrhiza Species on Human Breast Cancer BCAP-37 Cell
Abstract:ObjectiveTo select the optimal glycyrrhiza species for medicinal utilization by comparing the anti-proliferation and apoptosis-inducing effects of active components from four wild glycyrrhiza species in Xinjiang on human breast cancer BCAP37 cell. MethodsThe anti-proliferation effects of different samples on BCAP37 cell were measured by MTT assay. The cell apoptotic rate was detected by Hoechst 33258 stain.ResultsActive components of four Glycyrrhiza species inhibited the proliferation of BCAP37 cells and induced apoptosis significantly. What's more, there were significant interspecific and spatial variations in the anti-proliferation and apoptosis-inducing effects. ConclusionThe optimal Glycyrrhiza species for anticancer utilization is Glycyrrhiza alalensis L.
Key words:Glycyrrhiza; Active Component; Human breast cancer BCAP37 Cell
甘草是我国十分重要的中药材,素有“十方九草”的美誉。近年来,随着对甘草开发利用的不断深入,甘草被广泛用于药品、食品、保健品、化妆品等领域[1],甘草的市场需求量剧增。我国是世界上甘草出口大国,其中80%为野生甘草,仅有20%为栽培甘草。我国甘草储量锐减,由建国初期200~250万吨下降到50~70万吨[2]。现存的野生甘草资源已无法满足日益增长的市场需求,因此,人工栽培甘草势在必行,野生优质甘草品种的筛选显得尤为紧迫。甘草的品质高低最终要以其药效来衡量,前人仅以活性成分含量为指标对甘草品质进行的研究是片面的[3~7]。
甘草中最重要的两大类活性成分甘草酸类和甘草黄酮类化合物均具有抗炎、抗病毒及抗肿瘤之功效 [8,9],甘草的抗肿瘤活性尤其受到国内外学者的关注。乳腺癌是全球妇女最常见的恶性肿瘤。新近报告,美国女性乳腺癌的发病率已跃升为1/7,而在我国过去10年中,乳腺癌发病率也上升了27%,乳腺癌业已成为威胁妇女生命和健康的头号杀手[10]。因此,本文研究了新疆的胀果甘草Glycyrrhiza inflata Batal.,光果甘草G. glabra L.,阿拉尔甘草G. alalensis L.和黄甘草G. eurycarpa L.等4种野生甘草的甘草水提物和甘草总黄酮对人乳腺癌BCAP37细胞的增殖抑制作用,以期筛选出药效最佳的甘草栽培种类,为优质甘草的规模化人工种植奠定基础,为甘草抗癌新药物的研发提供科学依据。
1 器材
1.1 细胞株人乳腺癌BCAP37细胞株由中国科学院上海细胞生物学研究所细胞库提供。
1.2 实验样品各样品采样地点及样品名称见表1。所有样品经石河子大学李学禹先生鉴定为真品。表1 采样地点及样品名称(略)
1.3 试剂与仪器
1.3.1 试剂RPMI1640培养基,Gibco公司;小牛血清,杭州四季青生物工程材料有限公司;HEPES,华美生物工程公司;胰蛋白酶,上海蓝季科技发展有限公司;四噻唑蓝(MTT)、二甲基亚砜(DMSO), Sigma公司;顺铂(DDP),江苏豪森药业股份有限公司;Hoechst33258染色试剂盒,碧云天生物技术研究所。
1.3.2 仪器CO2 培养箱,美国(Forma);Metertech ∑960自动酶标仪;荧光显微镜,OlympusBX51;超净工作台,上海净化设备厂;血球记数板,上海医用光学仪器厂。
2 方法
2.1 实验样品采集与处理采集株龄一致(根茎粗细相等)的4种甘草的根茎材料,立即放入80 ℃烘箱中烘干至恒重,然后用药材粉碎机将其粉碎成粉末,过100目筛,备用。
2.2 甘草活性成分的制备
2.2.1 甘草水提物准确称取1.0 g甘草根茎干粉加10 ml蒸馏水于室温下放置48 h,12 000 r/min离心10 min,0.22 μm微孔滤膜过滤除菌,加样前用细胞培养液根据文献[11]将不同样品配制成含甘草酸为1 200 μg/ml的受试样品。
2.2.2 甘草总黄酮准确称取1.0 g甘草根茎粉末,用250 ml无水乙醇加5滴浓盐酸溶液为提取剂在索氏提取器中于95℃的水浴加热条件下提取6 h,浓缩至30 ml,0.22 μm微孔滤膜过滤除菌,加样前用细胞培养液根据文献[11]将不同样品配制成含总黄酮为50 μg/ml的受试样品。
2.3 细胞培养BCAP-37细胞用含10%灭活小牛血清的RPMI1640培养基,加入NaHCO3 2 g/L,谷氨酰胺0.24 g/L,Hepes 2.4 g/L,青霉素100 U/ml,链霉素100 mg/ml,置于37℃, 5% CO2孵箱中培养。实验用细胞均处于对数生长期,常规台酚蓝计数活细胞大于95%。
2.4 细胞增殖抑制实验(MTT法)将处于对数生长期的BCAP37细胞用胰蛋白酶消化后, 制成2.0×105个/ml的细胞悬液,然后以每孔100 μl接种到96孔板上, 在37℃,5% CO2孵箱中培养24 h后更换培养液,实验组加入不同的受试样品100 μl,终浓度分别为:甘草水提物中甘草酸浓度为600 μg/ml,甘草总黄酮25 μg/ml,每一样品均设8个平行孔,阳性对照组加入顺铂100 μl:终浓度50 μg/ml,空白对照组加入等体积的培养液。继续培养24 h,48 h及72 h后,每孔加入20 μl MTT溶液(浓度为5 mg/ml),轻振培养板,放回培养箱内再孵育4 h后,吸尽上清液,每孔中加二甲基亚砜150 μl,振荡器上振荡10 min, 用酶标仪检测各孔吸光度(OD值)测定波长λ=570 nm。抑制率计算公式为:抑制率(%)=〔(对照组OD值-实验组OD值)/对照组OD值〕×100%。
2.5 细胞凋亡率实验取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡20 min,0.9%NaCl溶液洗涤3次,再用细胞培养液洗涤1次。将盖玻片置于六孔板内,种入细胞,培养过夜,使约为50%~80%满。加入甘草水提物和甘草总黄酮,继续培养48 h,吸尽培养液,加入0.5 ml固定液,固定10 min。去固定液,用0.9%NaCl洗两次,3 min/次,吸尽液体,洗涤时用摇床。加入0.5 ml Hoechst33258染色液,染色5 min,也用摇床。用0.9%NaCl洗两次,3 min/次。滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上,盖上贴有细胞的盖玻片,尽量避免气泡。荧光显微镜下(Ex350nm,Em460nm)随机选取5个视野拍照后计数其凋亡细胞与正常细胞,凋亡率=〔凋亡细胞/(凋亡细胞+正常细胞)〕×100%。
2.6 统计学处理实验所得所有数据均经SPSS12.0 软件处理并对处理组间进行单因素方差分析,P
3 结果
甘草活性成分对BCAP37细胞的增殖抑制率(%)结果见表2。经Hoechst33258荧光染色,正常细胞核呈弥散均匀荧光,凋亡细胞的细胞核呈致密浓染或呈碎块状致密浓染(图1~3)。甘草活性成分诱导BCAP37细胞凋亡的实验结果见表3。表2 甘草活性成分对BCAP37细胞的增殖抑制率(略)表3 甘草活性成分诱导BCAP37细胞凋亡的作用(略)
4 讨论
4.1 甘草活性成分对BCAP37细胞具有良好的增殖抑制作用,且存在最佳处理时间细胞抑制率结果表明,与阳性对照顺铂处理组相比较,甘草活性成分处理48 h和处理72 h对BCAP37细胞都具有良好的抑制作用。阳性对照顺铂随着作用时间的增长抑制率显著升高,表现为明显的时效关系,而甘草活性成分对BCAP37细胞的抑制作用式样则不同,甘草水提物:与处理24 h相比,处理48 h的所有样品对细胞的抑制率显著升高,而当处理时间增长至72 h时,仅阿拉尔甘草的抑制率继续升高,53团光果甘草和阿拉尔市胀果甘草则与处理48 h无显著差异,其余三个样品的抑制作用均显著降低;甘草总黄酮:处理48 h的所有总黄酮样品对细胞的抑制率比处理24 h亦明显上升,而对细胞处理72 h,仅阿拉尔市胀果甘草和焉耆县黄甘草与处理48 h无显著变化,其余样品的抑制作用均显著降低。因此,甘草活性成分对BCAP37细胞的最佳抑制作用时间为48 h。
4.2 甘草活性成分对BCAP37细胞的抑制作用存在显著的种间与产地间差异由甘草水提物对细胞处理48 h的结果可得,阿拉尔市阿拉尔甘草的抑制率最高,其次为阿拉尔市光果甘草与阿拉尔市胀果甘草,焉耆县黄甘草、焉耆县胀果甘草与53团光果甘草最低;由甘草总黄酮对细胞处理48 h的结果可得,阿拉尔市光果甘草与阿拉尔市阿拉尔甘草的抑制作用最强,53团光果甘草与阿拉尔市胀果甘草次之,焉耆县胀果甘草与焉耆县黄甘草最弱。
不同产地的同种甘草对BCAP37细胞抑制作用均表现为,阿拉尔市光果甘草明显高于53团光果甘草,阿拉尔市胀果甘草显著高于焉耆县胀果甘草。
实验所有受试样品在活性成分浓度相同(甘草水提物中甘草酸浓度均为600 μg/ml,甘草总黄酮浓度均为25 μg/ml)的条件下对BCAP37细胞的增殖抑制与诱导其凋亡的作用存在显著的种间和产地间差异,这表明甘草的抗癌活性高低并不与甘草酸和甘草总黄酮的含量呈正相关,而很可能与其中抗癌活性较强的其他酸类化合物和某些黄酮单体有关。因此,前人仅以活性成分含量为指标进行的甘草品质研究是值得商榷的。
4.3 甘草活性成分能有效抑制BCAP37细胞的增殖与其诱导BCAP37细胞凋亡存在相关性与抑制细胞增殖的结果相比,不同样品的甘草活性成分诱导细胞凋亡的差异基本一致,甘草水提物中诱导BCAP37细胞凋亡作用最强的为阿拉尔市胀果甘草与阿拉尔市阿拉尔甘草,甘草总黄酮中诱导BCAP37细胞凋亡效果最佳的为阿拉尔市光果甘草与阿拉尔市阿拉尔甘草。因此,甘草活性成分诱导BCAP37细胞凋亡是其显著抑制BCAP37细胞增殖的重要途径。
4.4 阿拉尔甘草和黄甘草亦为很好的药用甘草资源据2000年版《中国药典》记载,只有胀果甘草、乌拉甘草和光果甘草等3种甘草被列为药用甘草[12]。本实验的研究结果表明,阿拉尔市阿拉尔甘草对BCAP37细胞的增殖抑制作用与诱导凋亡作用均最佳;虽然焉耆县黄甘草对BCAP37细胞的增殖抑制率最低,但是其水提物和总黄酮对BCAP37细胞的凋亡诱导作用均明显高于阳性对照顺铂处理组。因此,阿拉尔甘草和黄甘草同样具有良好的药用价值。
总之,4种甘草的活性成分甘草水提物与甘草总黄酮对人乳腺癌BCAP37细胞具有显著的增殖抑制与诱导凋亡的作用,且存在显著的种间与产地间差异。本研究的结果对于甘草资源的合理利用与甘草抗癌新药物的研发具有重要的理论意义和实际应用价值。建议用于规模化人工栽培的甘草物种当首选抗癌活性最佳的阿拉尔市阿拉尔甘草,其次为阿拉尔市光果甘草与阿拉尔市胀果甘草,同时要重视对焉耆县黄甘草的开发与利用;在甘草酸类与甘草黄酮类成分进行甘草抗癌新药物筛选时,应优先考虑甘草黄酮类成分。
【参考文献】
[1]解朝霞,陈庆先,解德俊,等.甘草的研究现状及展望[J].中国医药研究,2004,2(5):49.
[2]代永刚,王海岩,南喜平.我国甘草资源及其加工利用进展[J].吉林农业科学,2003,28(6):51.
[3]李 强,任 茜,王党平,等.甘草属药用植物的质量评价[J].国土与自然资源研究,1993,2:66.
[4]米慕真,张莅峡.不同品种不同产地甘草中甘草酸含量的考察[J].沈阳药科大学学报,1995,12(3):214.
[5]Liu Y H.Fu K Z.Content of main chemical components of Glycyrrhiza uralensis Fisch.in different soil environment[J].Chin J Veter Drug (中国兽药杂志),1996,30(4):26.
[6]Liu P Y.Hu H F.Yan Z.et a1.Colorimetric estimation of glycyrrhizin content in Glycyrrhiza inflata produced in four provinces[J].J Hebei Univ (河北大学学报),1998.18(4):369.
[7]Gu H Y.Gong L D.Yu J H.Measurement and comparison of glycyrrhizic acid contents in root of licorice (Glycyrrhiza uralensis Fisch.)from different cultivation areas [J].J forest Res(林业研究),2002,13(2):141.
[8]谢 彦,徐淑永,曾和平.甘草属植物中三萜类化合物研究概述[J].广州化工,2004,32(1):1.
[9]季宇彬,姜薇,范玉玲,尚明.甘草黄酮的研究进展[J].中草药,2004,35(9):附5.
[10]雷秋模.21世纪乳腺癌研究的方向及展望[J].现代诊断与治疗,2006,17(2):65.