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【关键词】新课改 中学英语 词汇教学
曾经英国有位语言学家说过:如果没有语法,人们将不知道如何表达事物,而如果没有词汇,人们将无法进行事物的表达。英语词汇教学的基础阶段便是初中时期,这也是培养学生语言交际和思维创造的最佳时期。英语教学质量的好坏主要取决于词汇教学的质量。当前,实际词汇教学中,使用死记硬背、机械训练的教学和学习方式,而且大多数人都认为在英语教学中,语法是最重要的,所以大家都集中精力攻克语法,导致对词汇学习的疏忽,从而教学质量与效果提不起来,初中生的英语水平也堪忧。因此,提高教师、学生以及家长对词汇知识的认知,并且加强英语词汇教学的工作刻不容缓。
一、相关理论研究及反思
文章主要采用问卷调查的方式充分了解初中学生对学习英语词汇最真实的想法,详细内容如下:
1.研究问题:对选取学生的个人基础信息、学习状况、学生英语词汇教学印象、家庭对英语词汇教学的重视度以及个人意见等方面进行分析调查,同时还设置了九个问题对学生学习英语词汇的几方面因素进行对比分析。
2.研究方式及工具:本文以新形势下的初中英语词汇教学的现状对学生、家长以及教师的重视度进行分析,采用问卷调查的方式让学生评价教师教授英语词汇课堂效果。问卷内容主要包括:学生基本信息、学生学习状况、学生英语词汇课堂印象、家庭对词汇教学的重视度、个人意见。调查对象主要是七年级―九年级的学生150名,问卷有效率为120例。
3.受试。
1)研究对象。选取某市初中学校七年级―九年级的学生150人作为研究对象。七年级是学生由小学过渡到初中的一个适应阶段,学生在刚刚步入初中时期时教师对学生英语词汇教学相当重视。九年级与七年级学生相比,不管是在认知程度还是思维程度上都已经渐渐稳定。因此,参与到本次研究的受试者中,在认知程度上由生疏到成熟。
2)研究结果。参与研究的学生年龄基本在15-16岁的范围内,男生70例,女生80例,其中七年级学生占总数的25%,九年级占75%;研究对象所在班级的人数基本保持在60人左右,学校多采取大班授课机制。
二、结果与分析
1.内部因素。第一个问题:针对学生是否对英语词汇学习感兴趣进行调查,其中不到一半的学生一般感兴趣,百分之三十左右学生感兴趣,百分之十五左右的学生一点没兴趣,只有百分之十的学生非常感兴趣。问题二: “你同意掌握充足的词汇量是提高英语成绩的保证吗?”66%同意,16% 非常同意,只有 18% 不同意或不清楚。以上数据表明学习内部因素对英语词汇学习有极大影响,对英语单词感兴趣,自然而然会通过各种各样的来源总结学习词汇的方法。
2.外部因素。
(1)家庭因素。第三个问题是:学生家长是否重视英语词汇的学习?一半的学生回答说重视,其中百分之三十左右的学生觉得一般,只有不到百分之二十的学生认为自己父母非常重视或者一点不重视。其实家长对孩子英语词汇学习的重视程度直接关系着孩子学习的水平。第四个问题是:学生在学习英语词汇过程中家长是否给予辅导?其中有百分之三的学生回答是不一定,百分之九十左右的学生认为很少或者几乎没有,而只有百分之十左右的学生认为可以。由上述数据显示,父母是否对其词汇学习给予关注,孩子很在意,但是由于部分家庭是农民家庭,其父母受教育程度相对较低,以及家庭琐事缺少对孩子学习的帮助。
(2)课堂因素。第七个问题是:学生认为教师在英语词汇教学课堂中通常采用哪种方式进行教学。调查结果如下:
通过对文中数据观察可以看出,初中英语词汇教学中教师多采用单词表和语境教学模式进行教学,很少甚至从不采用其他方式教学,在教学模式上还有一定的局限性。
3.个人建议。第五个问题是:学生认为教师在教授英语词汇时采用全新的教学模式能否帮助你成功记忆词汇?其中有百分之八十五的学生认为能够帮助自己成功记住词汇,而百分之十五的学生认为不能或者不确定。第六个问题是:学生认为在词汇教学中需要对哪些方面进行整改?其中,百分之五十的学生认为教师应转变词汇教学模式,不断创新和探索,其他百分之五十左右的学生认为应该在学习过程中多利用游戏形式进行学习。
三、结语
综上所述,词汇教学是学习语言的基础,占据着非常重要的位置。英语教师应该在教学过程中不断创新和完善教学模式,在新形势背景下更加重视英语词汇教学的趣味性和多样性,积极创设一定的语境,适应学生的要求,激发学生的兴趣,刺激学生的思维,从而养成良好积极的学习词汇的习惯,为语言知识的正确、恰当使用打下结实的基础。
一、引用经典,文采飞扬
在文章开始引用经典,可以使起点高远。文章开头妙引诗词名句,往往能引起读者的情感共鸣,增加文章的文采。如柯蓝的《飞红滴翠记黄山》开头:“说起黄山,人们很容易想起徐霞客对黄山的赞誉:‘五岳归来不看山,黄山归来不看岳。’”作者开篇不凡,引用徐霞客名言,不仅能提携全文,凸显主旨,于娓娓道来中切入正题,而且给全文定下了诗意的审美基调,可谓引人入胜,令人赞叹。
也可以插文中,使作文诗意盎然。写作时,如果在文中精心穿插几个名句,定能使文章诗意盎然。如:“《千家诗》中很大部分诗歌歌咏祖国风物,按春夏秋冬时序编排,打开书往下念,四季风光就活生生地展现在眼前:‘万紫千红总是春’,‘春城无处不飞花’;‘绿树荫浓夏日长’,‘五月榴花照眼明’;‘青女素娥俱耐冷,月中霜里斗婵娟’;‘梅雪争春未肯降,骚人搁笔费评章’……”(于漪《往事依依》)巧妙引用大量的诗词名句,描绘了春花秋月、夏云冬雪的自然特征,表现出读书对作者的影响,即抒发了对四季的热爱,更为文章增添了诗情画意,显示了于漪老师丰富的阅读积累。
还可以用有哲理的诗文充当论据,支撑观点。议论文引用古诗名句充当事理论据,支撑中心论点,可以增强文章的说服力。如:“人生活在社会中,总要与人相处,与外界发生各种联系,因此,建立和谐的人际关系十分重要。要建立和谐的人际关系,最重要的是要豁达大度,善于容纳与自己志趣、风格不同的人。古人说:‘海纳百川,有容乃大;壁立千仞,无欲则刚。’”(郭安凤《多一些宽容》)文段所引用的林则徐的自题联,从个人胸襟的角度证明中心论点,充分论证“多一些宽容对于人生的重要作用”这一观点,富有文采和说服力。
另外,将经典诗文置于结尾处,可以到达深化主题的作用。以诗文名句来结尾,可以使之成为点睛之笔,深化文章的主题,自然贴切,可以获得水到渠成,水融的效果。如:“‘喷云吹雾花无数,一条锦绣游人路’,是的,是一条花巷,一条花街,上天下地都是花,可谓花天花地。可是,这些说法都不行,都不足以说出花的动态,‘四厢花影怒如潮’‘四山花影下如潮’,还是‘花潮’好。”(李广田《花潮》)结尾引用龚自珍名言,表现了作者对海棠花胜景的逐步加深的感受,并提升审美愉悦的完整过程。
经典诗词名句,内涵丰富,意旨深远,是人类智慧的结晶。巧妙引用经典诗词名句,可以使语言显得厚重,警策,含蓄,具有丰富的哲理意蕴。
二、仿写诗文,妙趣横生
诗歌有“文学之母”、“语言的钻石”之美誉。在语文教学中拓展语文的应用范围,加强语文的应用性,正是我们所倡导的“大语文”的观念。如何拓展与应用,以使诗词名句与学生生活结合起来?仿拟是一种重要的方法。仿拟是根据表达的需要,有意识地在格式上仿照现成的或者已为人们所熟知的语言材料(本体),通过联想类比等方式,临时创造出新的诗词句段(仿体)。鲁迅曾仿拟《黄鹤楼》诗:“阔人已骑文化去,此地空余文化城。文化一去不复返,古城千载冷清清。”仿拟可以锻炼学生的想象力,训练学生思维的严密性和流畅性,提高学生语言应用和表达能力,鼓励学生自觉灵活地迁移到作文实践中。
首先,可以仿语句。仿照已有的句式、语气、修辞等,临时创作新的结构相同的句子或段落。例如,正可谓“起座而喧哗者,一家欢也;喜上眉梢,欣欣然其间者,老妈笑也。”作者巧妙地仿拟欧阳修在《醉翁亭记》中写“太守醉”的语句,新颖别致,妙趣横生,寥寥几笔勾勒出一幅“家庭温馨图”。
其次也可以仿诗文。依据原作的语言形式,改变原作的内容,重新谋篇立意,创作出体式相同、风格迥异的新诗文。古诗古词古文,都可仿拟。繁重的学业压得学生喘不过气来,于是,有学生写道:“是昨亦考,今亦考,明日复亦考,然则何时能乐耶?其必曰:考试自得其乐。”
苏霍姆林斯基指出:“我一千次地确信,没有一条富有诗意的感情和美的清泉,就不可能有学生的全面智力的发展。”(《教育的艺术》)我们正可以借诗歌美文的仿拟来濡染心灵、陶冶性情、培养文学纯正趣味、提高学生的文学综合素养。
三、创新运用,美不胜收
对古典诗词进行创造性再运用,王国维可谓成功者。晏殊《蝶恋花》中“昨夜西风凋碧树,独上高楼,望尽天涯路”;柳永《凤栖梧》中“衣带渐宽终不悔,为伊消得人憔悴”;辛弃疾《青玉案》中“众里寻他千百度,蓦然回首,那人却在灯火阑珊处”;原词作者要表达的无非是缠绵情思或高洁志行。然而,王国维在《人间词话》中巧妙地将三句话分别从原词中提取,结合自身感受构成一套令人耳目一新的组合。这可算是古典诗词创造性再运用的典范,令人击掌叫绝。这种极富创造性的组合,使诗词的生命之光照射得更远。
让古典诗词之花在新词中绽放,可以提高学生的审美能力,可以培养学生的创造性思维。下面是学生的几篇的写作品:
虞美人・初三
老师拖堂何时了,作业知多少?近来老师常发疯,作业如山写到月当空。近视眼镜应犹在,只是度数改。问君能有几多愁?恰是江水东流无止休。(《哦,初三》)
如梦令・劝学
尝记考试结束,惶惶不敢归宿,错题多无数,伤心绝望无助,痛苦,痛苦,都是懒惰所误。(《珍惜所拥有的青春》)
山坡羊・死人调惹祸
喇叭,唢呐,曲儿小,腔儿大,呜里哇啦乱如麻。男生听了切齿,女生听了咬牙。眼见得吹错了这题,吹差了那道,只吹得满纸红叉叉。(《都是“死人调”惹的祸》)
水调歌头・快乐几时有
快乐几时有,掷笔问青天,不知灌篮高手,何时能相见。我欲弃学而逃,又恐老爸翻脸,心惊胆亦寒。书包太沉重,何似在童年?
上面这些学生所填古诗词,虽然含有戏谑成分,但对陶冶学生的性情,提高学生的心智,充实精神生活,培养审美能力还是其积极意义的。
各个国家都为此作出了贡献,也在其中体现出各自的文化潮流。
2007年1月5日,美国方言学会宣布“Pluto”(冥王星)一词当选2006年度最流行词汇。这不是个新词儿,国际天文学联合会大会去年投票决定将冥王星列入矮行星,而不再是行星。这一降级引发了全美人民对冥王星的深深同情,一个行将被抛弃的专有名词变成了美国人的口头语――“Youare plutoed”,你被降级了;“Ameri canDollors are plutoed”,美元在贬值。这是词语自身的生命力。
差不多同时公布的Google2006年十大最流行搜索词汇中,vide。和World Cup分列前两位,每个词的搜索点击量都超过十亿次,为Google带来3000万美元利润。这是词语的生产力。
而词语本身更重要的命名、定义与阐释功能则在一些新词上得到体现,一个生于婴儿潮一代的中年人无论如何也理解不了什么是Netroots(网根族),什么是Hiki Komori(家里蹲),什么是“Mouse Potato”(鼠标土豆)。同样,你能指望现在的年轻人理解什么是Highbrow(自以为文化修养很高的人,有人翻译作“高眉”,诞生于1903年)吗?
美国flog+dooce
这两词都与博客相关,“flog”释义为“促销商品的假冒博客”,“dooce”则意味着某个人因为自己的博客而被单位开除。
个人博客是今年网络新宠,“flog”这个词由fake(假冒)与blog结合而成,看似一般博客,实际上却是公司作为行销商品的博客。这事儿中国也有,某博客门户网站就尽干这事,拉拢人写博客,整公司整公司地端,有些公司还把公司博客当成营销手段,员工分批定期维护,这样的博客,想好看都难。
2002年,美国一个叫阿姆斯特朗的人在其个人网页dooce.com上因为描述自己的工作和同事而被炒了鱿鱼一一她也由此为美国英语创造了一个新词dooce。2004年10月,一个空姐因为在自己的博客上粘贴了她身着航空制服站在一架飞机上的照片而被开除。而2006年最大的dooce事件则发生于号称“华盛顿宝贝”的国会山参议员助手杰西卡・卡特勒,她的性博客风靡一时,人称美国“木子美”。
英国 prav+broadloid
Pray,the proud realiser of added value,骄傲的附加值实现者,伦敦新的潮流术语,有如下症状:特别愿意买便宜货,并且四处炫耀这些东西到底有多便宜;相信东西贵不一定就更好;对名牌嗤之以鼻。这些人大多生活富足,却仍为买到了便宜货而自豪。总之喜欢便宜货,再有钱也喜欢买罪受,和前几年的“no Logo”族有一脉相承之处,听上去很,但这群人对抗的就是前几年流行过的Chav文化,那才真叫呢。
Chav指那些没受过多少教育、没文化并且有或者不道德行为倾向的人。英国的小报给他们归纳了以下特征:通常是工人阶级出身;身着名牌运动服、头戴棒球帽;身上戴满了金饰物(男的必戴大金戒指、女的必戴大金耳圈);手机从不离手,且越新潮越好、越耀眼越好;音乐,男的必听Rap,女的必选R&B;开的车即使再旧也必然喷刷一新、颜色抢眼,驾车时车窗必然摇下、音乐震耳欲聋;总露出一副对生活满不在乎、对外界漠不关心的神情。代表人物是贝克汉姆夫妇。
2006年7月,英国Teletext Holidays公司所作的一项调查显示,70%的人都说自己是Prav,只有6%的人勇于承认自己是Chav。
broadloid,来自于broad-sheet(大报)与tab]old(八卦小报)。受新媒体冲击,大报的日子越来越不好过,许多老牌大报也只好把版面缩小,不仅看上去如同小报,办报风格也朝八卦路线上走。还有一个新词是“infortainment”(信息娱乐化),由信息(information)和娱乐(entertainment)两个词汇连缀而成――基于信息的娱乐,或者叫信息娱乐。
2003年至2006年,英国传统三大报《独立报》、《泰晤士报》和《卫报》相继“瘦身”。余风所及,美国纽约时报公司也于2006年7月18日宣布,王牌产品《纽约时报》将于2008年开始改版,将版面宽度从54英寸变窄为48英寸,页面也将同时收窄1.5英寸。
全民小报化,全民八卦化。
中国coolie,ganbu还是ganbei?
【摘要】 目的:用体外自然实验体系对纳米级 Fe3O4 磁流体和抗癌药物长春新碱(VCR)体外对系统血液免疫功能的影 响进行分子水平的探讨。方法:采用免疫荧光标记流式细胞仪分析方法,检测血细胞表面相关免疫分子的变化情况。结果:使用纳米级 Fe3O4 磁流体和抗癌药物 VCR 以后,自然实验组 CD4 细胞阳性率(38.87±6.37)% 较自然对照组(35.52±6.76)%明显增高(P < 0.01),自然实验组白细胞 CD55 阳性细胞平均荧光强度(68.79±8.98)% 较自然对照组(74.78±18.60)%明显降低(P < 0.05)。与自然对照组相比 CD4 分子均表现出一定程度的上调,CD8 分子均表现出一定程度的下调。结论:VCR(0.2 g/mL)和纳米级 Fe3O4 磁流体对血细胞的免疫功能都没有不良影响,甚至磁流体还可以提高血液免疫反应中白细胞的免疫功能,为红细胞包载磁流体和抗癌药物治疗肿瘤提供实验依据,为抗癌药红细胞载体靶向抗肿瘤免疫提供新的治疗途径。
【关键词】 红细胞;磁流体;长春新碱;靶向;CD4;CD8;CD55;CD59
〔Abstract〕
Objective
To research the molecular level effects of Fe3O4 nano-magnetic ferrofluid and anticancer drug vincristine (VCR) on systemic hematogenic immunologic function by means of natural experimental system in vitro.
Methods
The expression of correlated moleculars on the surface of blood cells were detected and compared using flow cytometry assay.
Results
The level of CD4 on T cells (38.87±6.37)% in natural experimental group was significantly increased than that of natural control group (35.52±6.76)% (P < 0.01), while the mean fluorescence intensity of CD55 in natural experimental group (68.79±8.98)% was much lower than that of natural control group (74.78±18.60)% (P < 0.05). Compared to natural control group, the expression
of CD4 was up-regulated in some degree while CD8 was down-regulated in experimental group.
Conclusion VCR (0.2 g/mL) and Fe3O4 nano-magnetic ferrofluid have no harmful effects to hematogenic immunologic function. Magnatic ferrofluid can even elevate the function of leucocytes. The results can supply experimental foundation for erythrocytes to capsulate both magnetic ferrofluid and anticancer drug, and also can provide treatment pathway for anticancer drug erythrocyte carrier targeting antitum or immunity.
〔Key Words〕
Erythrocytes; Magnetic ferrofluid; Vincristine; Targeting; CD4; CD8; CD55; CD59
纳米级 Fe3O4 磁流体(magnetic ferrofluid, MF)是目前国内外靶向给药和医用高分子材料研究领域的热门方向之一。磁流体因具有独特的性质(流动性、磁响应性、靶向可控性)而应用广泛,与现代科学技术相结合使用则更加显示其优越性。长春新碱(VCR)是临床常用的抗肿瘤药物,抗肿瘤谱广。有关研究资料已经证明,红细胞作为 VCR 载体可减少用药量和提高疗效[1],但其靶向性差,还有待于深入研究。我们设想用红细胞双载 VCR 和磁流体,借助于外加磁场以解决 VCR 红细胞载体的靶向问题。此前首先要弄清磁流体对机体生理功能的影响,特别是对免疫功能是否有负面影响。我们想利用现代系统免疫学理论与方法[2]研究磁流体和 VCR 联合应用对系统血液免疫功能是否有正负影响,目前尚未见到这种报道,现将有关资料报道如下。
1
材料与方法
1.1
材料
酸性枸橼酸钠葡萄糖溶液(acid citrate dextrose, ACD)抗凝的健康成人新鲜全血由中国上海血站提供,其中男 2 例,女 9 例,中位年龄 30 岁。鼠抗人 CD55-FITC、CD59-PE、CD3/4、CD3/8 等直接法荧光单克隆抗体购自美国 BD 公司。注射用硫酸长春新碱粉针剂(国药准字 H44021772,批号 0609V1)购自深圳万乐药业有限公司,以 0.9% 生理盐水配制成浓度为 0.2 g/mL 待用。纳米级 Fe3O4 磁流体〔含超顺磁性氧化铁(SPIO)氨基硅烷 Fe3O4 纳米颗粒,直径 8~12 nm〕由上海交通大学纳米科学与技术工程中心惠赠,样品使用前均以超声波处理 10~15 min,使 Fe3O4 粒子分布更均匀。流式细胞仪(BD FACS Calibur, USA),分析软件为 Cell Quest。
1.2
方法
1.2.1
预备实验:血浆及全血细胞悬液的制备
新鲜采集的健康成人 ACD 抗凝全血 4~5 mL,室温下 2 500 r/min,离心 5 min,吸取上层血浆至另一试管备用。将上述全血细胞用 0.9% 生理盐水(NS)洗涤并 2 500 r/min,离心 5 min 2 次,用 NS 恢复原体积,混匀即为全血细胞悬液。
1.2.2
正式实验:自然反应实验体系的设计
每管加入 0.3 mL 血浆和 0.2 mL 全血细胞悬液,除自然对照组加入 0.2 mL NS 以外,自然实验组分别加入0.1 mL VCR、0.1 mL MF 或 0.1 mL NS。即:
试管 1:0.3 mL 血浆 + 0.2 mL 全血细胞悬液 + 0.1 mL VCR + 0.1 mL MF(自然体系实验 1 组)。
试管 2:0.3 mL 血浆 + 0.2 mL 全血细胞悬液 + 0.1 mL MF + 0.1mL NS(自然体系实验 2 组)。
试管 3:0.3 mL 血浆 + 0.2 mL 全血细胞悬液 + 0.1 mL VCR + 0.1 mL NS(自然体系实验 3 组)。
试管 4:0.3 mL 血浆 + 0.2 mL 全血细胞悬液 + 0.2 mL Ns(自然体系对照组)。
将上述试管混匀后置于 37℃水浴箱中温育 1 h,加盖防止水蒸气进入。中间轻轻摇匀 2 次,使反应充分进行;取出后 2 500 r/min,离心 5 min;小心取出上清液,将沉淀物用 2 mL PBS 重悬,2 500 r/min,离心 5 min,弃上清,加入 200
L PBS 使其体积为 200
L。
1.2.3
流式细胞仪检测血细胞表面相关免疫分子
红细胞表面分子 CD55、CD59 检测:取待测样品 1 L、PBS 缓冲液 50 L、 CD55-FITC、CD59-PE 单抗 4 L,充分混匀,室温避光 20 min;再加入2 mL PBS 液,1 000 r/min,离心 5 min,弃上清,加入 400 L PBS,立即上流式细胞仪检测。
白细胞表面分子 CD55、CD59、CD4、CD8 检测:取待测样品 50
L,每管加入红细胞裂解液 1 mL,室温避光反应 10 min,1 000 r/min,离心 5 min,弃上清,加入 CD55-FITC、CD59-PE 抗体各 4 L,CD3/4、CD3/8 抗体各 3 L,充分混匀后室温避光 20 min;抗体结合后,再加入 2 mL PBS 液,1 000 r/min,离心 5 min,弃上清,加入 400 L PBS,立即上流式细胞仪检测。
1.3
统计学处理
实验数据以 x±s 表示,统计学处理采用 t 检验。
2
结
果
2.1
磁流体(MF)对系统血液免疫功能的影响
自然体系实验 2 组白细胞CD55 阳性细胞平均荧光强度低于自然体系对照组(P < 0.05)。与自然体系对照组相比,自然体系实验 2 组 CD4 分子、红细胞 CD59 分子、白细胞 CD59 分子表现出一定程度的上调,CD8 分子、红细胞 CD55 分子表现出一定程度的下调,但差异无统计学意义。其指标结果详见表 1。
2.2
长春新碱(VCR)对系统血液免疫功能的影响
与自然体系对照组相比,自然体系实验 3 组CD4、CD8、白细胞 CD59 分子表现出一定程度的上调,红细胞和白细胞 CD55 分子表现出一定程度的下调,但差异无统计学意义。其指标结果详见表 1。
2.3
磁流体(MF)和长春新碱(VCR)混合物对系统血液免疫功能的影响
与自然体系实验 3 组相比,自然体系实验 1 组CD4 分子、红细胞 CD59 分子、白细胞 CD59 分子、白细胞 CD55 分子表现出一定程度的上调,但差异无统计学意义。其指标结果详见表 1。
与自然体系对照组相比,自然体系实验 1 组 CD4 细胞阳性率明显高于自然体系对照组(P < 0.01)。其中红细胞 Cd59 分子、白细胞 CD59 分子均表现出一定程度的上调,但差异无统计学意义。其指标结果详见表 1。
转贴于
2.4
各组内指标之间的相关性
自然体系实验 1 组中 RCD55 与 RCD59、WCD55 与 WCD59 显著正相关(P 值分别为 P < 0.01、P < 0.01),RCD55 与WCD59、RCD59 与 WCD59、CD4 与 WCD55、CD4 与 WCD59 成正相关,但相关性无统计学意义。其指标结果详见表 2。
自然体系实验 2 组中 RCD55 与 RCD59、RCD55 与 WCD59、RCD59 与 WCD59、CD4 与 WCD59 显著正相关(P 值分别为 P < 0.01、P < 0.01、P < 0.05、P < 0.05),WCD55 与 WCD59、CD4 与 WCD55 成正相关,但相关性无统计学意义。其指标结果详见表 2。
自然体系实验 3 组中 CD4 与 WCD55、CD4 与 WCD59、WCD55 与 WCD59 显著正相关(P 值分别为 P < 0.05、P < 0.01、P < 0.01),RCD55 与 RCD59、RCD59 与 WCD59 成正相关,RCD55 与 WCD59 成负相关,但相关性无统计学意义。其指标结果详见表 2。
自然体系对照组中 RCD55 与 RCD59、RCD59 与 WCD59、CD4 与 WCD59 显著正相关(P 值分别为 P < 0.05、P < 0.05、P < 0.05),WCD55 与 WCD59 成正相关,CD4 与 WCD55、RCD55 与 WCD59 成负相关,但相关性无统计学意义。其指标结果详见表 2。
3
讨
论
自 1981 年 Siegel 提出“红细胞免疫系统”全新概念以来,人们开始认识到红细胞不仅在运输 O2、CO2 和清除循环免疫复合物等方面发挥功能,而且在机体天然免疫屏障方面也具有重要作用。红细胞表达多种免疫相关分子,较为重要的有 CD55、CD59 等。CD59 又称为保护素、同种限制因子-20,它通过与 C7、C8 或 C9 的结合而阻止膜攻击复合物(MAC)的组装,防止 MAC 对同种或自身细胞的溶解破坏,保护宿主细胞免受补体介导的损伤。CD55 即衰变加速因子(DAF),其分子基础和化学构成与 CD59 相似,可竞争性与 C3b 结合,阻止C3、C5 转化酶的装配,并加速已形成的 C3、C5 转化酶衰变,从而抑制补体攻击单位的活化。
机体免疫过程中,T 淋巴细胞发挥着重要作用。研究表明,使用纳米级 Fe3O4 磁流体和抗癌药物 VCR 以后,与自然对照组相比 CD4 和 CD8 分子分别表现出一定程度的上调和下调,说明无论是 VCR (一定剂量范围内),还是纳米级 Fe3O4 磁流体对白细胞的免疫功能都没有不良影响,甚至一定程度上还可以提高白细胞的免疫功能。由于 T 淋巴细胞的分型和功能有着密切相关性,使用磁流体和 VCR 以后对于 CD4+ CD25+ 和 CD4+ CD25- T 淋巴细胞、CD8+ CD28+ 和 CD8+ CD28- T 淋巴细胞的影响有待于进一步深化研究。
我们的研究发现,使用了 VCR 以后,CD4、CD8、白细胞 CD59 分子表现出一定程度的上调,红细胞和白细胞 CD55 分子表现出一定程度的下调。众所周知,常规剂量抗癌药能明显破坏细胞的免疫功能,然而有资料表明低剂量化疗药却可以提高细胞免疫功能[3],这与我们的研究(VCR 0.2 g/mL,明显低于临床常规剂量)一致,但差异无统计学意义,分析可能由于实验例数太少所致。
我们的研究表明使用了 MF 以后 CD4 与 WCD59 显著正相关(P < 0.05),CD4 与 WCD55 成正相关,使用了 VCR 以后 CD4 与 WCD55、CD4 与 WCD59 显著正相关(P 值分别为 P < 0.05、P < 0.01),共同使用 VCR 和 MF 以后 CD4 与 WCD55、CD4 与WCD59 成正相关,与自然体系对照组 CD4 与WCD59 显著正相关(P < 0.05)类似。有报道指出,CD55 可以分别刺激 CD4、CD8 表达[4]。CD4+ 或CD8+ T 细胞生长至少部分依靠 Cd59 分子,但是CD8+ T 细胞比 CD4+ T 细胞敏感[5];CD59 表达下降与 CD8+ T 细胞关系密切,而非 CD4+ T 细胞[6]。后者报道与我们的实验有些不符,但具体机制还有待于进一步研究。从以上分析,我们可以认为纳米级 Fe3O4 磁流体和抗癌药物 VCR 合用对血细胞的免疫活性有上调作用。
Fe3O4 磁流体在生命科学领域里的应用越来越广泛,如可作为生物医药领域中磁共振成像的造影剂[7],与抗体结合用于生物分离[8],与外部磁场结合用于监测肿瘤化疗效果[9]等,尤其在肿瘤治疗领域以及磁流体热疗[10]等,都为肿瘤的治疗带来了新的契机和希望, 同时也使其生物安全性受到人们的重视。通过本实验,我们认为医用纳米级 Fe3O4 磁流体对系统血液免疫功能有良好的上调作用,可用于靶向治疗,体现了医学界所追求的高效低毒甚至无毒的目标。
红细胞可用作多种抗癌制剂的载体[11]。VCR 是临床常用的抗肿瘤药物,抗肿瘤谱广,作用于细胞周期的 M 期,主要用于治疗急性淋巴性白血病、霍奇金病和恶性淋巴瘤。本文采用的 VCR 剂量在红细胞的载药剂量范围内,用量微小,对血液免疫功能有上调作用,可避免临床 VCR 常规用量的免疫抑制作用。我们认为 VCR 载体红细胞的制备技术和生物学特性研究[1]现已经比较成熟。如果将药物载体红细胞技术与磁性药物传输系统的研究结合起来,既可以改善药物载体红细胞靶向性单一的不足,又可以有效解决磁性药物载体在安全性、生产成本和载药量等方面的缺陷,从而使红细胞成为良好的靶向给药载体,改变肿瘤化疗策略,扩大红细胞输血治疗的临床应用。通过体外自然体系实验的研究,仿真磁流体和 VCR 在体内对血液免疫功能的影响,为红细胞包载磁流体和抗癌药物治疗肿瘤提供实验依据,为靶向抗肿瘤免疫提供新的治疗研究思路和方法。
【参考文献】
〔1〕 吴江, 钱宝华, 王卓, 等. 长春新碱载体红细胞制备及其生物学特性研究〔J〕. 第二军医大学学报, 2005, 26(5): 551-554
〔2〕 郭峰, 查占山, 花美仙, 等. 癌抗原激活红细胞调控白细胞CXCR4分子表达与意义〔J〕. 肿瘤学杂志, 2006, 12(5): 400-402
〔3〕Lu W. Effect of dosage of anticancer agents during transcatheter arterial chemoembolization on T cell subsets in patients with hepatocellular carcinoma〔J〕. Di Yi Jun Yi Da Xue Xue Bao, 2002, 22(6):524-6
〔4〕 Durrant LG, Spendlove I, Buckley DJ, et al. 105AD7 cancer vaccine stimulates anti-tumour helper and cytotoxic T cell responses in HLA-A1,3,24 and HLA-DR 1,3,7 colorectal cancer patients〔J〕. Cancer Int, 2000, 85: 87-93
〔5〕 Bosque A. Human CD8+ T cell blasts are more sensitive than CD4+ T cell blasts to regulation by APO2L/TRAIL〔J〕. European Journal of Immunology, 2005, 35(6): 1812-1821
〔6〕 Tsunoda S. Diminished expression of CD59 on activated CD8+ T cells undergoing apoptosis in systemic lupus erythematosus and Sjogren's syndrome〔J〕. Scandinavian Journal of Immunology, 2000, 51(3):293-299
〔7〕 Liu Ji. In-vitro investigation of blood embolization in cancer treatment using magnetortheological fluids〔J〕. Journal of Magnetism & Magnetic Materials, 2001, 225:209
〔8〕Kondo AK. Preparation of thermo-sensitive magnetic microspheres and their application to bioprocesses〔J〕. Colloids and Surfaces, A:Physiochemical and Engineering Aspects, 1999, 153:435
〔9〕 Rheinlander T. Magnetic fractionation of magnetic fluids 〔J〕. Journal of Magnetic materials, 2000, 219:219
【摘要】 目的 观察双心室起搏对病态窦房结综合征(sick sinus syndrome, SSS)患者的急性血液动力学变化及心脏绝对不应期电刺激对心功能的影响,通过计算机仿真研究,探讨绝对不应期电刺激的离子流作用机制。 方法 对10例SSS患者经冠状静脉左室后外侧支和右心室心尖部进行双心室起搏,通过漂浮导管观察起搏前后5min的血流动力学和心电图变化的指标。应用计算机仿真技术,观察心脏绝对不应期电刺激前后钙浓度的变化。 结果 双心室起搏时,心脏每分输出量(cardiac output, CO)、心脏排血指数(cardiac index, CI)分别增加16.2%、16.8%,肺毛细血管嵌压(pulmonary capillary wedge pressure, PCWP)下降,跨室壁复极离散度(transmural dispersion of repolarization, TDR)变小,绝对不应期电刺激使仿真的心室肌细胞在绝对不应期正向波刺激,可明显增加Ca2+内流。 结论 双心室起搏可增加心肌收缩功能,减小跨室壁复极离散度。心脏绝对不应期电刺激可触发电压依赖性钙通道开放,使心肌钙浓度增加,增强衰竭心室肌细胞的收缩功能。
【关键词】 双心室起搏;绝对不应期电刺激;心脏再同步治疗; 钙浓度;计算机仿真
ABSTRACT: Objective To observe the acute homodynamic changes of biventricular pacing (BivP) in patients with sick sinus syndrome (SSS) and investigate the Ca2+ changes during absolute refractory period electrical stimulation (ARPES) by applying computer simulation. Methods The hemodynamic parameters and ECG changes were measured in ten SSS patients five minutes before and after BivP connecting RVA and LVB. The extent of contraction and Ca2+ transient (CaT) changes during ARPES were recorded through computer simulation. Results During BivP cardiac output per minute and cardiac index increased by 16.2% and 16.8%, respectively. In contrast, pulmonary capillary wedge pressure and transmural dispersion of repolarization decreased. The inward calcium current was increased by applying repolarization stimulation during ARPES. Conclusion Appropriate biventricular pacing may strengthen contractility and decrease transmural dispersion of repolarization. ARPES can trigger voltagedependent calcium channel to open, thus increasing inward calcium current and contractility of myocytes in failure ventricles.
KEY WORDS: biventricular pacing; absolute refractory period electrical stimulation; cardiac synchronization therapy; calcium concentration; computer simulation
慢性心力衰竭(chronic heart failure, CHF)位居心血管疾病死亡病因之首,虽心脏再同步治疗(cardiac resynchronization therapy, CRT)采用双心室起搏(biventricular pacing, BivP)使左右心室的再同步性改善,QRS变窄[1],但仍有20%~30%患者心功能改善与QRS波的变窄无相关性[23]。
研究表明[49],心脏绝对不应期的电刺激(absolute refractory period electrical stimulation , ARPES)可以触发细胞膜上的电压依赖性钙通道(IcaL)开放,使钙浓度增加,产生钙瞬变(CaT),增加心肌的收缩功能。因此,BivP改善心功能可能也与ARPES有关。我们观察BivP对病态窦房结综合征(sick sinus syndrome, SSS)患者的急性血流动力学变化,并通过ARPES对心功能及心室肌细胞钙离子流的计算机仿真研究,探讨绝对不应期电刺激的离子流机制。
1 对象与方法
1.1 BivP急性血液动力学变化的测定 选择心功能正常且QRS正常、需要植入心脏起搏器的SSS患者10例,平均窦性心率(46.8±19.6 )次/min,年龄(54.1±6.8)岁,男7例,女3例;其中3例在临时起搏器保护下进行。患者在知情同意书上鉴字后,用自制Y形转换器,分别连接经冠状静脉的电极。以70次/min的同一起搏频率,分别行右心室心尖部(right ventricle apex, RVA)、右室流出道(right ventricle outflow tract, RVOT)、左室后外侧基底部(left ventricle base, LVB)、右室双部位(RVA+RVOT)和BivP (RVA+LVB,其中LVB设为S1刺激,RVA为S2刺激),S1与S2的间期约10ms,采用正向波刺激法,其刺激脉宽为0.5ms,脉冲为2.5mV。用SwanGanz漂浮导管热稀释法测定起搏后5min的心脏每分输出量(cardiac output, CO)、心脏排血指数(cardiac index, CI)、肺动脉压(pulmanary artery pressure, PAP)和肺毛细血管嵌压(pulmanary capillary wedge pressure, PCWP);同步记录12导心电图,测定QRS离散度(QRS dispersion, QRSd)、QT离散度(QT dispersion, QTd)和跨室壁复极离散度(transmural dispersion of repolarization, TDR),即T波顶点至T波终点间期(TpTe)[10] 。
1.2 LR91模型的仿真算法 LR91模型 (1991年发表的模型 )是基于用 HodgkinHuxley公式对心室动作电位进行数值重建形成的[11]。LR91动作电位模型实现了6种跨膜电流,并且考虑了细胞膜内Ca2 +浓度的改变。膜电位 (V) 的变化率用公式表示:dV/dt= -(1/C) (Iion+ Ist)。其中C=1μA/cm2 是膜电容。 Ist(μA/cm2 )为 单位面积上的刺激电流强度,Iion(μA/cm2) 为六种跨膜离子电流的总和,Iion=INa+ ISi+ IK + IK1 + IKP+ Ib;快速内向Na+电流 INa=GNam3·h·j (V- ENa );L型 Ca2+电流 ISi=G Na·f (V-ESi);时间依赖型延迟整流 K+电流 IK =GKx·x1 (V- EK );时间非依赖型 K+电流 IK1 =GK1 K1∞·(V-EK1);平台期 K+电流 IKp = 0.0183Kp(V-EKP );总的背景电流 Ib=0.03921(V+59.87)。m、h、j、d、f和x为门控因子 ,d和f分别为 L型 Ca2+电流的激活和失活门控因子。
通过在绝对不应期加不同方式的刺激研究细胞膜内Ca2+浓度的变化情况。首先通过改变绝对不应期刺激的波形(脉冲=2.5mV,宽度=0.5ms,其计算机仿真的数据与SSS 患者相同)寻找哪种波形的刺激可引起细胞膜内Ca2+浓度的增加(图1),然后调节绝对不应期刺激的位置,寻找最佳的刺激时间点。图1 3种绝对不应期电刺激波形
心肌细胞兴奋过程中细胞膜内 Ca2+ 浓度越高,心肌细胞的收缩能力越强。为研究绝对不应期刺激对细胞膜内Ca2+浓度的影响,我们采用Ca2+浓度的时间积分[12]来判断哪种绝对不应期刺激方式效果最好。Area表示Ca2+浓度曲线与时间轴之间的面积。
1.3 统计学分析 用Pclamp8.1和Origin6.1软件进行资料测量和统计分析。结果以均值±标准差表示。采用方差分析,以P
2 结
果
2.1 BivP的急性血液动力学变化 RVA、RVOT、LVB、RVBi和BivP等 5种起搏方式的CO、CI依次增加,后4种方式起搏较RVA起搏CO分别增加5.1%、7.3%、12.6%和16.2%;CI则分别增加6.3%、8.0%、13.9%和16.8%(表1)。其中BivP时CO和CI分别增加16.2%和16.8%;PCWP下降20%左右,且QRSd、QTd、TDR均显著缩小,表明 BivP 对心功能正常QRS正常的患者也可增加心肌收缩功能,减小跨室壁离散度。 表1 不同部位起搏对CO、CI、PWP和QRSd、QTd、TDR的影响
2.2 绝对不应期刺激波形对细胞膜内Ca2+浓度的影响 在绝对不应期加不同方式的电刺激对动作电位和细胞膜内的Ca2+浓度将产生不同的影响。从图2可以看出 ,在绝对不应期加正向波刺激时可以使细胞膜内Ca2+浓度的峰值增大 ,Ca2+浓度曲线与时间轴之间的面积增大;在绝对不应期加负向波刺激时,细胞膜内Ca2+浓度的峰值减小,Ca2+浓度曲线与时间轴之间的面积减小;在绝对不应期加双向波刺激时,Ca2+浓度曲线与时间轴之间的面积与不加绝对不应期刺激接近。可见,要想通过在绝对不应期加电刺激的方法提高心肌组织的收缩力,所加刺激必须为正向波刺激方式。故Ca2+浓度与刺激波形有关。
2.3 绝对不应期刺激位置对细胞膜内Ca2+浓度的影响 对处于静息状态的心室肌细胞,加除极化刺激引起细胞兴奋,产生动作电位,延时20ms后,加正向波刺激(脉冲=2.5mV,宽度= 0.5ms),用Ca2+浓度曲线与时间轴之间的面积(area, mMs)来分析绝对不应期刺激位置对细胞膜内Ca2+浓度的影响。结果显示,动作电位0相后160ms左右加正向波刺激可使Ca2+浓度曲线与时间轴之间的面积最大;当在动作电位0相后180ms加正向波刺激时,由于进入相对不应期,正向波刺激使心肌细胞很快复极,Ca2+浓度曲线与时间轴之间的面积显著减小。故Ca2+浓度与0相后的时间有关(表2)。表2 正向波刺激位置与细胞膜内Ca2+浓度的关系
3 讨
论
目前认为CRT治疗CHF的机制是心房和或心室再同步化[1]。许多研究表明CRT治疗对不同病因的心衰患者多数可获益[34];反之大约有20%~30%的心衰患者CRT治疗后并无改善[2]。提示其治疗机制和预测疗效除心室再同步化以外,可能还在其他机制参与(如心房也存在再同步化问题)。本课题组的既往研究也有同样看法[7]。
绝对不应期指心肌细胞除极后对电刺激绝不再发生应激反应的时间间期,相当于动作电位2位相或ST段。因此,ARPES不会引起心室夺获,但是可引起离子流的变化。 因为IcaL是电压依赖性通道电流,只要有微小的电压变化(-50mV左右)就可以引起IcaL再次开放,,并触发瑞兰道受体从肌浆网释放储存的钙,产生钙瞬变。
ARPES可增强衰弱心肌的收缩力,当心室肌细胞受到电信号的刺激时(如膜电位上升至-50mV左右),细胞膜上的IcaL开放,细胞外的钙电流快速流入细胞内,并且触发肌浆网上的瑞兰道受体开放,使细胞内游离钙浓度([Ca2+])由10-7瞬时升高为10-5,引起肌钙蛋白产生一次收缩运动。收缩完成后细胞内游离钙再由胞浆内转入肌浆网和转出细胞外,使[Ca2+]再由10-5瞬时下降为10-7,完成一次心动过程[1012]。[Ca2+]的瞬时变化称为CaT。
本研究结果表明,BivP能明显改善心功能和室内传导正常的SSS患者的急性血液动力学变化,提示BivP可能通过ARPES来提高心脏的收缩功能。本研究室已研究证明[810],同一部位S1S2先后刺激,S2进入S1的绝对不应期,或S1S2从两个不同部位同步或先后刺激,S1和S2也可以进入对方的绝对不应期,不引起有效的心肌除极,但可引起离子流变化。因此我们推测:BivP时一个电信号必然进入另一个电信号的绝对不应期,可以触发IcaL开放,使钙浓度增加,产生 CaT,增加心肌的收缩功能,故BivP起搏可能也与ARPES有关。
我们应用计算机仿真研究来说明正常心室肌细胞的绝对不应期电刺激改变细胞膜内Ca2+ 浓度的机理,也证明ARPES可引起Ca2+内流加大和胞膜内Ca2+浓度增加。正向波刺激虽然导致Ca2 +通道的激活因子d减小,但正向波刺激使细胞膜内电位变负,增强了Ca2+内流的电驱动力,总的结果使Ca2+内向电流增加。负向波刺激虽然有使Ca2+ 通道激活因子d增加,但由于在绝对不应期能开放的Ca2+通道都已经基本开放,因此在绝对不应期加负向波刺激不会使Ca2+通道激活因子d增加,又因为负向波刺激使细胞膜内电位变正,减弱了Ca2+内流的电驱动力,其结果使Ca2+内向电流减小。在心肌兴奋的绝对不应期给予电刺激,虽然不会引发兴奋,但可通过电机械偶联机制增强心肌收缩力,改善心脏功能。这些结果为应用研究指明了方向。本实验还存在一定的局限性,由于采用的心室肌细胞模型较为简单,进一步研究应采用人类心力衰竭的计算机仿真模型。另外需建立心肌细胞以及组织的电机械模型,将刺激与心肌收缩有效的连接起来,进一步研究绝对不应期刺激与心肌收缩力的关系,以及多部位同步刺激的结果。
目前认为心电图的QRS波的宽度不一定能预测BivPCRT的治疗效果,而QRS波的宽度的缩短率对预测疗效可能更有价值,利用组织多普勒、实时多普勒和三维超声心动图等观察心室的不同步或不协调运动,特别是室间隔左室侧壁延长时间>60ms更有价值。推测ARPES能触发IcaL通道开放和产生CaT,而BivP是一个电信号必然进入另一个电信号的绝对不应期,同样能触发IcaL开放和产生CaT。 本文通过临床及计算机仿真技术进一步说明了IcaL的开放导致Ca2+浓度的变化即CaT,可能是BivP除了心室再同步化以外的另一个重要的离子流机制。
参考文献
[1]HUNT SA. American college of cardiology, American Heart Association Task Force on Practice Guidelines (Writing Committee to Update the 2001 Guidelines for the Evaluation and Management of Heart Failure) [J]. J Am Coll Cardiol, 2005, 46(6):e182.
[2]JARCHO JA. Resynchronizing ventricular contraction in heart failure [J]. N Engl J Med, 2005, 352(15):15941599.
[3]CLELAND JG, DAUBERT JC, ERDMANN E, et al. The effect of cardiac resynchronization on morbidity and mortality in heart failure [J]. N Engl J Med, 2005, 352(15):15391548.
[4]BERS DM. Cardiac excitationcontraction coupling [J]. Nature, 2002, 415(6):198205.
[5]BURKHOFF D, FELZEN B, SHIMIZU J, et al. Electric currents applied during the refractory period can modulate cardiac contractility in vitro and in vivo [J]. Heart Fail Rev, 2001, 6(1):2734.
[6]PAPPONE C, VICEDOMINI G, SALVATI A, et al. Electrical modulation of cardiac contractility: Clinical aspects in congestive heart failure [J]. Heart Fail Rev, 2001, 6(1):5560.
[7]ZHU CZ, CUI CC, ZHANG QF, et al. A comparative study of acute hemodynamic effects of multisite cardiac pacing in patients with cardiac function NYHA classⅠtoⅡ without bundle branch block [J]. South China J Cardiol, 2001, 2(1):101105.
[8]张海柱,崔长琮,赵晓静,等. 绝对不应期电刺激对正常兔在体心脏心功能的影响 [J]. 中华心律失常学杂志, 2004, 8(1):7071.
[9]赵晓静,崔长琮,张海柱,等. 绝对不应期电刺激对正常豚鼠心室肌细胞舒缩及钙瞬变的影响 [J]. 中国心脏起搏与心电生理杂志, 2003, 17(2):294296.
[10]王东琦,姚青海,崔长琮,等. 心电图心室复极波的细胞离子流机制与临床 [J]. 中华心律失常学杂志, 2005, 9(6):478482.