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资料与方法
选取我科2004年6月~2006年6月间诊断为冠状动脉粥样硬化性心脏病的(平均年龄59±18岁)病人200例,所有病人均无严重的心力衰竭、脑和肾脏疾病,无家族性血脂异常史,近3个月来未服用调脂药物。在入院后1周内经Judkins法行冠状动脉造影术。按照造影结果分为对照组:冠状动脉无粥样硬化,120例(男65例,女55例)。病例组:冠状动脉至少有1支主要血管腔狭窄>50%,80例(男43例,女37例)。
方法 病人入院后取空腹12小时肘静脉血,离心取血清待测,所有指标均用日立7170全自动生化分析仪测定。总胆固醇、甘油三酯用酶法,载脂蛋白A。与载脂蛋白B100、ApoA1/ApoB100及脂蛋白α测定采用透射免疫比浊法,高密度脂蛋白、低密度脂蛋白用直接法。
统计学方法 数据以均数±标准差表示,组间比较用t检验,所有数据均用SPSS10.0软件包进行统计学分析。P<0.05为差异有统计学意义。
结果
通过冠状动脉造影证实为冠心病患者的各生化检测指标与对照组比较差异有显著性,见表1。
各生化指标对冠心病患者有着不同的预测价值和有效率,见表2。
讨论
脂蛋白是血脂的存在形式,血浆脂质代谢异常实质上是构成脂蛋白的蛋白质部分一载脂蛋白的代谢异常。本研究结果显示ApoA1在冠心病组明显低于对照组(p<0.01)。也可以认为ApoA1是人体免患冠心病的保护性因子。
ApoB100主要存在于CM、极低密度脂蛋白及LDL,占LDL蛋白总量的95%以上,LDL中的载脂蛋白主要为ApoB100,其脂蛋白颗粒与细胞膜上的LDL受体结合,进入细胞后,可抑制胆固醇合成限速酶的作用,从而使胆固醇含量升高。本研究显示ApoB100在冠心病组明显高于对照组(P<0.01),与冠心病的发病率呈正相关。ApoA1/ApoB100与对照组比较差异也有显著性(P<0.01)。
LP(α)通过抑制组织型纤溶酶原激活剂的激活等机制干扰纤溶系统,促进动脉粥样硬化和血栓形成。本文研究发现冠心病病人血清LP(α)72%超过了300 mg/L,均值为452.6 mg/L,较对照组明显升高(P<0.01)。
原因一:饮食原因造成载脂蛋白b偏高,体内摄入脂肪含量过高,而有不能及时的代谢,造成载脂蛋白b偏高,此种情况往往会使载脂蛋白B与载脂蛋白A均偏高。
原因二:肝功能异常,肝功异常导致低密度脂蛋白胆固醇代谢受阻,作为其主要的结构蛋白的载脂蛋白b也会相应升高。
原因三:高血压、心血管疾病患者一般会出现载脂蛋白b偏高的现象,常见于老年人。
(来源:文章屋网 )
【关键词】 转基因鼠;hapoe基因;甘油三酯;胆固醇
【摘要】 目的 探讨载脂蛋白e基因在转基因鼠体内的表达及其在血脂代谢中的作用。方法 显微注射法建立hapoe转基因鼠,southern杂交对阳性小鼠基因组鉴定。elisa测定血清载脂蛋白e含量。酶法分别测定小鼠血清甘油三酯(tg)和血清胆固醇(tc)。结果 转基因鼠血清载脂蛋白e含量分别为:tg4鼠(2.06±0.22) mg/l,tg7鼠(1.89±0.33) mg/l。血清tg水平转基因鼠〔12月龄:tg4(2.89±0.31)mmol/l,tg7(1.99±0.45)mmol/l〕与对照组鼠〔12月龄:(2.05±0.12)mmol/l〕比较有显著性差异(p<0.05),血清tc水平转基因鼠〔12月龄:tg4(3.02±0.14)mmol/l〕与对照组鼠〔12月龄:(2.11±0.01)mmol/l〕比较也表现出显著性差异(p<0.01)。结论 hapoe基因异常表达影响到了小鼠的血脂代谢。
【关键词】 转基因鼠;hapoe基因;甘油三酯;胆固醇
【abstract】 objective to establish transgenic mice and investigate the role of hapoe gene in lipoprotein metabolism. methods the human apoe transgenic mice were generated via microinjection. southern blot hybridization was used to identify the expression of the gene. the human apoe level was measured in the serum of hapoe transgenic mice with elisa methods. the serum triglyceride and cholesterol were also elevated with the enzymatic methods. results the human apoe gene could be expressed in the first generation of transgenic mice. the apoe levels of transgenic mice〔tg4(2.06±0.22) mg/l,tg7(1.89±0.33) mg/l〕 were significant. the serum triglyceride level were high in transgenic mice〔12 month age groups: tg4(2.89±0.31)mmol/l,tg7(1.99±0.45)mmol/l〕 than that in the respective control mice〔12月龄:(2.05±0.12)mmol/l〕(all p<0.05).and serum cholesterol level in the 12 month transgenic mice 〔tg4(3.02±0.14)mmol/l〕 were higher than that in control mice (2.11±0.01)mmol/l(p<0.01). conclusions the overexpression of apoe gene impairs the lipoprotein metabolism.
【key words】 mice transgenic; hapoe gene; triglyceride; cholesterol
遗传基因的异常是血脂代谢的基础〔1〕。载脂蛋白e(apoe)是血浆脂蛋白的组成成分之一,与受体蛋白结合,调节机体血脂代谢〔2〕,apoe基因的异常表达将造成血脂代谢紊乱,并与动脉粥样硬化、高胆固醇(tc)血症、高甘油三酯(tg)血症等密切相关〔3〕。因此建立转基因鼠并利用转基因鼠从整体水平上研究apoe基因在机体内的作用,对探讨血脂代谢及相关疾病的发病机制具有十分重要的意义。
1 材料与方法
1.1 实验动物
显微注射方法获得hapoe4、hapoe7转基因鼠,用于繁殖后代,建立转基因鼠系〔4〕。
1.2 方法
1.2.1 转基因鼠建立与分析
制备显微注射用dna片段及建立鼠系按已报道的文献操作〔4〕,即将显微注射用dna片段纯化,注射到受精卵的雄性原核中,共获得73只小鼠,提取4周龄小鼠基因组dna,pcr初筛,southern杂交印证,杂交信号经molecular dynamics扫描分析,再将首建鼠与正常c57bl/6j杂交繁育,建立转基因鼠系。
1.2.2 目的基因表达
为诱导增强hapoe基因的表达,在f1代小鼠饮用水中加入20 mmol/l znso4,2 w后,鼠尾静脉取血,测定apoe蛋白水平。操作按试剂盒说明进行。
1.2.3 血清tc和tg水平
参与实验的3月龄、12月龄小鼠,均禁食、禁水过夜,鼠尾取血,甘油磷酸化酶(gpo)和tc氧化酶(chodpap)法分别测定血清tg和tc水平,操作按试剂盒说明进行。
1.3 统计学处理
应用spss13.0统计软件进行处理,数据以x±s表示,采用t检验。
2 结 果
2.1 转基因鼠鉴定及鼠系建立
以人apoe基因组dna/ecorⅰ2.0 kb片段为探针,得到4只apoe4鼠和2只apoe7鼠,之后将转基因鼠分别与正常c57bl/6j鼠杂交繁育,f1代杂合子被用于进一步的实验。见图1。1~4为转基因鼠; a:apoe4探针杂交;b:apoe7探针杂交图1 southern杂交结果分析
2.2 f1代仔鼠基因表达
测定结果显示:zn诱导2 w后tg4鼠、tg7鼠的基因表达水平〔tg4鼠(3.01±0.10) mg/l,tg7鼠(2.31±0.15) mg/l〕与诱导前比较〔tg4鼠(2.06±0.22) mg/l,tg7鼠(1.89±0.33) mg/l〕均有显著性差异(p<0.05)。
2.3 血清tg和tc水平
与对照组鼠比较,转基因鼠血清tc和tg水平均有显著差异(p<0.05,p<0.01)。见表1。表1 血清tc和tg水平
3 讨 论
elisa结果显示,转基因鼠诱导后的aope水平较诱导前明显提高,表明hapoe基因在小鼠体内表达良好,并且zn诱导增强了启动子的活性。随后的血清tg和tc水平显示,在常规饮食结构情况下,hapoe基因的异常表达引起了转基因鼠血脂代谢的变化,进一步说明hapoe基因组dna表达了具有生物学功能的物质。
apoe的受体结合区域主要涉及126191位氨基酸,该区域内碱性氨基酸残基在与受体结合中具有重要的作用,当该区域为碱性氨基酸时,apoe受体结合活性明显增高,其结果是血清tg水平降低,tc水平增高〔5〕,而apoe4基因的158位上的氨基酸是精氨酸(arg),因而apoe4与受体结合的活性应增高。但本结果显示血清tg和tc水平均明显高于对照组。有关血清tg水平与apoe等位基因间的关系众多研究结果不乏矛盾之处,有待于进一步的探讨。
apoe7基因为一突变基因(glu244,245lys244,245),与脂代谢紊乱,特别是高tg血症有关〔6〕,且临床迹象表明约5%以上的动脉粥样硬化的高脂血症患者携带有apoe7基因。实验显示apoe7转基因鼠血清tg水平明显高于对照组鼠(p<0.05)。有关apoe7异构蛋白在体内的作用机制还不十分清楚,有待于进一步的研究。
【参考文献】
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3 davignon j,gregg re,sing cf.apolipoprotein e polymorphism and atherosclerosis〔j〕.arteriosclerosis,1998;8(1):121.
4 qi zh,ru k,sun mz,et al.the gene expression of pme in mouse nih/3t3 cell and construction of the hapoe transgenic mice〔j〕.chin j briochem mol biol,1997;13(1):248.
高脂血症(Hyrpidemia,HLP)主要表现为脂质代谢紊乱,是导致动脉粥样硬化的危险因素之一。载脂蛋白(Apoiipoprotein, Apo)作为浆脂蛋白的主要组成成分,对调节血脂代谢起重要作用。笔者采用降脂汤治疗高脂血症,取得较好的疗效。笔者主要通过分析降脂汤对高脂血症患者载脂蛋白及血脂的影响,探讨其对高脂血症的作用机理。
1 资料与方法
1.1 病例选择
全部病例均来源于武汉总医院的门诊或住院患者,均符合《中药新药临床研究指导原则》[1]中高脂血症的诊断标准。将60例病例随机分成2组。治疗组30例,男性20例,女性10例,平均年龄49.69岁;对照组30例,男性15例,女性15例,平均年龄52.23岁。在整个实验过程中无病例脱落,2组患者在人口学资料、一般生命体征、病情等基线方面比较,经统计学分析处理差异无显著性意义(P>0.05),具有可比性。
1.2 治疗方法
治疗组:予五味降脂汤方(五味子、芦根、党参、麦冬、金银花等),每日1剂,加水煎取300 mL,每次l00 mL,每日3次;对照组:口服脂必妥片(成都地奥制药厂产品),每次3片,每日3次。2组均以4周为1个疗程。
1.3 检测指标及方法
血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)应用酶法,试剂盒为北京中生生物工程高技术公司产品;高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)应用比浊法,药盒为德国利德曼公司产品,用全自动生化分析仪测定;载脂蛋白ApoAI、ApoBl00应用免疫比浊法测定,试剂盒为德国宝灵曼公司产品。
1.4 统计学方法
观察结果计量资料以x±s表示,计数资料以百分率表示,组内比较采用配对T 检验,组间比较采用成组T 检验,全部资料以SPSS11.0软件进行统计分析。
2 结果
2组TC、TG、LDL-C水平在用药4周后,均较治疗前明显降低(P
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3 讨论
高脂血症主要是指血清TC或TG水平过高或血清HDL-C水平过低,可导致动脉内皮细胞损伤,通透性增强,加速LDL-C在血管内皮下沉积,促进动脉硬化(AS)的形成[2]。因此,调节脂质代谢是防治AS的首要措施。血浆载脂蛋白是一类能与血浆脂质结合的蛋白质,为构成血浆蛋白的主要成分,载脂蛋白在结合与转运脂质、维系和稳定脂蛋白的结构、参与脂蛋白受体的识别及调节脂蛋白代谢关键酶活性等方面起着十分重要的作用[3]。HDL-C的主要载脂蛋白质是ApoAl,而ApoAl是卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)的活化剂,该酶能使胆固醇转化成胆固醇酯,促进胆固醇的运输以及调节HDL-C的代谢,而HDL-C能清除周围组织中的胆固醇,还能抑制动脉壁平滑肌细胞摄取LDL-C,从而防止胆固醇在细胞内过多堆积,因此,ApoA也被称为动脉粥样硬化的保护因子[4],其浓度与冠心病的发生率呈负相关。ApoB主要存在于低密度脂蛋白(LDL-C)和极低密度脂蛋白(VLDL)中,其中ApoB100占LDL的95%以上[5],与TG的转运有关,是动脉粥样硬化的重要危险因子[6],血清载脂蛋白ApoB100的水平与冠心病的发生率呈正相关。
从本观察看出,2组均能显著改善血脂水平,有效地影响载脂蛋白的表达,五味降脂汤的降脂效果与阳性对照药脂必妥片相比并无显著差异,且临床运用的不良反应小。五味降脂汤方中五味子味甘酸、性温,具有补益五脏、滋肾益肺、敛阴止汗等功效;党参性平、味甘,入脾、肺经,具补中益气功效:麦冬滋阴生津:芦根、金银花性寒,味甘,具有清热解毒生津之功。本方治疗高脂血症是通过补气养阴,从而达到辅助正气,调节阴阳平衡,调理人体内环境的目的,并辅以清热解毒的药物,祛除体内热毒,标本兼治。相比以往开发的中药降脂药而言,五味降脂汤主要是从补气养阴着手,起到“扶正”的作用,实现“正 气存内,邪不可干”或“扶正祛邪”的目的,不同于以往单纯从祛痰化浊的途径治疗高脂血症,这也正是降脂汤的创新之处。
参考文献
[1] 中华人民共和国卫生部.中药新药临床研究指导原则[S].1993.123.
[2] 宋小鸽,唐照亮,侯正明,等.茶多酚对大鼠高脂血症的预防作用[J].中医研究,1998,11(1):19.
[3] Mahley RW,Innerarity TL,Rell SC,et al.Plasma 1ipoproteins:ap01ipoprotein structure and function[J].J Lipid Res,1984, 15(12):1277.
[4] 毕其华,叶雄伟,于小妹,等.高脂血症患者血清载脂蛋白水平比较分析[J].心脑血管病防治,2003,3(6):37-40.
【关键词】 甲状腺功能亢进;血脂;载脂蛋白;临床意义
甲状腺激素(TH)起着调节机体的糖、蛋白质、脂肪的代谢作用, 分泌的部位为甲状腺, 能够促进组织的生长和分化[1]。GD患者的甲状腺激素明显增高, 血脂和载脂蛋白的水平也随之发生着相应的变化。为进一步分析探讨GD患者治疗前后血脂和载脂蛋白变化及其临床意义, 选取本院门诊和住院部确诊为GD的患者46例作为研究对象, 对其血脂和载脂蛋白进行检测, 具体分析报告如下。
1 资料与方法
1. 1 一般资料 选取2012年12月~2013年12月本院确诊为GD的患者46例作为实验组研究对象, 其中男21例, 女25例, 年龄21~54岁, 平均年龄(36.35±10.35)岁, 所有患者病程3~20个月, 均符合GD的诊断标准。同时选取46例正常人作为对照组研究对象, 其中男19例, 女27例, 年龄20~51岁, 平均年龄(35.35±9.26)岁。所有研究对象均无肝肾疾病、高血压、糖尿病、高脂血症等疾病, 3个月内没服用过影响血脂和蛋白质代谢的药物, 两组患者在年龄、饮食习惯方面比较差异均无统计学意义(P>0.05), 具有可比性。
1. 2 方法 在实验组患者治疗前, 所有研究对象均空腹12 h以上, 在次日清晨时抽取空腹静脉血2 ml, 之后进行分离血清, 采用生化分析仪(东芝 TB2002型全自动生化分析仪, 试剂均由利得曼公司提供)测定所有受试者的TC、TG、载脂蛋白APOA1和APOB、HDL-C的结果。其中, TC的测定方法为酶法, 载脂蛋白的测定方法为免疫透射比浊法, TG测定的方法为GPO-PAP法, HDL-C采用选择遮蔽法。46例GD的患者需要经过4~12周的正规的治疗, 治疗时使用他巴唑或丙基硫氧嘧啶, 甲状腺功能恢复正常后再进行血脂和载脂蛋白的复查。
1. 3 观察指标 观察比较两组受试者TC、TG、载脂蛋白APOA1和APOB、HDL-C的检测结果。
1. 4 统计学方法 采用SPSS17.0软件分析和统计数据。计量资料以均数±标准差( x-±s)表示, 采用t检验;计数资料采用χ2检验。P
2 结果
实验组患者治疗前TC、APOB、HDL-C都明显低于对照组受试者的TC、APOB、HDL-C值, 差异具有统计学意义(P
3 讨论
许多生理和病理上的因素都可对血脂的代谢产生影响, 当人体血脂和载脂蛋白的代谢异常时, 可能导致心、脑血管等疾病, 对人们的健康造成了很大的影响, 其中甲状腺激素的变化是重要的因素之一[2]。甲状腺激素能够促进和调节机体的物质代谢和能量的代谢, 直接或者间接的对血脂蛋白的变化产生影响, 当甲状腺激素分泌正常时, 对脂肪、糖和蛋白质的作用大于分解作用, 使血脂能够维持在正常的水平[3]。甲状腺功能亢进的患者体内的甲状腺激素含量升高, 血脂和载脂蛋白的含量也随之变化, 在治疗甲状腺功能亢进的过程中有着一定的辅助的作用。通过实验可知, 实验组患者治疗前TC、APOB、HDL-C都明显低于对照组受试者的TC、APOB、HDL-C值, 差异有统计学意义(P
综上所述, 甲状腺激素的增加能够对血脂蛋白的变化产生影响, GD的患者血脂和载脂蛋白的含量明显的降低, 所以动态的观察血脂和载脂蛋白含量的变化可以作为判断GD的有效指标, 对甲状腺激素与脂蛋白、载脂蛋白等之间关系的研究有着很大的帮助, 对病情的观察和临床的治疗都具有重要的意义。
参考文献
[1] 张久富.甲状腺功能亢进患者的血脂和载脂蛋白的变化及临床意义.中国医药导报, 2010, 7(5):43-44.
[2] 刘亚隽.甲状腺激素亢进患者血脂变化的临床意义.临床和实验医学杂志, 2010, 9(22):1092-1093.
[3] 朱永华, 姜庆波,史伟峰.甲状腺功能亢进患者甲状腺激素与血脂各指标变化关系分析.临床和实验医学杂志, 2012, 11(19):1539-1540.