前言:想要写出一篇令人眼前一亮的文章吗?我们特意为您整理了5篇人生随想范文,相信会为您的写作带来帮助,发现更多的写作思路和灵感。
如果我们总是试想着我们面前有一面镜子,我们会知道泪怎样的流过脸庞,发怎样的沾染风霜。只要你经历的,无论是什么,没有人可以从记忆中抹去。说遗忘了,不过是为了安慰自己的自欺欺人的说法而已。岁月如刻刀毫不留情的把那些深深浅浅的痕留在我们心中,快乐我们会欣然接爱,痛苦我们也是无处逃遁,哭喊也好,挣扎也罢,留在心上的你永远都无法抹去。
其实也许许多时侯,我们不过是迷了路,看不清方向而已。于是在某些特定的环境下会发生某些让我们始料不及的事。我们大可不必去在意,生活中有坎坷也有阳光。如果只想着痛,停留在原地,或者退回去,那我们的影子就会慢慢倾斜,未来的路会越来越迷惘。得和失不过是一念之间。又何必在意这表层的得到和失去呢!你没看到,许多人因为这些表面的得到的过多、过厚而忘乎所以,失去了自己。而那些失去的人,却依然能够谨小慎微的固守着他们做人纯良的本性而行之。 前进一步固然会是春风得意,但稍有不慎,却也会醉失本性。退一步也许会是凄凉冷淡,却总能冷静的总结过去、积蓄力量等待着东山再起而直达顶峰时机。
就算从此平淡一生,那又如何呢!没有大起也就无大落,亦无大喜无大悲矣,平平淡淡总是真。相信我们的眼睛看到的,相信我们耳朵听到的,感受我们心里所想的,跟随我们的意愿选择我们的路吧!别想着什么大作为。还是老老实实的估人、踏踏实实的做事吧!让那些流动在我们身边各种各样欲望的潮,永不会因我们而做停留,风就会真的把我们带到我们应该到达的地方,那一定是一方快乐的静土。
从高中起何穗就喜欢看Victoria’s Secret (维多利亚的秘密),但她从没想过多年后她能站在这个国际大舞台上,而且成为继刘雯以来史上第二位登上Victoria’s Secret的中国模特。短短的两年,何穗从众多中国模特中脱颖而出,是上升最快的超模,直至2013年2月,在国际权威模特网站Models排名第13位!
尽管已经跻身国际,何穗的英文并不流利,她简单、直白地说“模特不需要交流,只要和她们打招呼,问些简单的问题就好了,她们不会和你聊人生聊梦想。”此次BQ特别邀请何穗为我们演绎青蛇白蛇两种不同的美!
考大学,继而毕业之后拥有一份稳定收入的工作,这些是所有父母心中所期望的。但是计划赶不上变化,并不是所有的孩子都像父母所期待的一样。何穗就是一个很好的例子,从17岁开始便成为一名模特,从此开始了她模特之路。
何穗,温州人,继承了父母良好的基因从小就比别的孩子个头突出,别的孩子在想如何长高的时候,她却想怎么才能变得矮一点,“小时候有增高药,我特别希望有变矮的药,我问哥哥有没有办法,哥哥说,等到老了的时候会自然收缩”。何穗回忆着小时候的事情,脸上时不时露出俏皮可爱的一面。
早产儿的何穗从小身体就不是特别好,为此父母特别担心,在她小的时候便被送去学习游泳,只为锻炼身体,而她没想到学习游泳竟然使她的身高增长了十公分,“在小的时候,我爸妈带我测骨龄,医生说我能长到168cm,但是游泳能拉长身体,我没想到会多长10公分,我一直认为女孩子的黄金身高是在168cm-172cm。”
何穗从来没有意识到自己适合做模特,而做模特这件事在何穗看来就是命中注定的。原本就想报名参加模特培训的,结果还没有开始培训就被拉去参加比赛,而比着比着,就进入了总决赛,直至最后拿了第十二届中国模特之星大赛冠军。“总决赛的前一天我爸问我要不要选择这个职业,我说“拿了冠军就做模特。”其实说的是反话,我怎么可能拿冠军,意思就是不做。结果拿了冠军,之后就入了这一行。”
在比赛之前何穗对于模特这个职业了解得并不多,模特并不是想做就可能做的,首先硬件条件就要达标,并不是像大部分人泛泛地认为个头高、瘦就能做模特。事实上并非如此,比例、肩宽、气质非常重要,达到了这些硬件条件,就算达到模特的标准了。在何穗看来模特就是设计师的工具,学习不学习不重要,重要的在于本身的条件及经验积累。
所有的模特都想走向国际舞台,而令每个女子心动的舞台便是Victoria’s Secret (维多利亚的秘密) ,它似乎有着无穷的魔力,对于何穗来说能站上这个舞台心里只剩下激动。2011年何穗成为继刘雯以来第二位登上Victoria’s Secret 的中国模特。何穗曾在微博上发一条消息说:“有人问过我,说他们为什么选我,其实我真不知道,他们不会告诉你。我起初还以为这个面试只是形式,没想到真选上了。如果让我自己感觉,大概是因为皮肤比较白,而且Victoria’s Secret 的秀要微笑,而我笑起来有两个酒窝吧。”
不仅仅是在Victoria’s Secret 的舞台,在2011年的四大时装周上,何穗也是大放光彩,成为时尚大牌Ralph Lauren和VivienneTam的开场模特,而那次,她在时装周上一共走了17场秀。
如今她已经用自己的实力在国际时尚舞台站稳脚跟,在国际权威模特网站Models排名第13位,成为炙手可热的“中国脸”。穿梭在国际舞台的她,少不了参加各种时尚盛会,而英文是她薄弱的地方,她俏皮地说“模特不需要交流,只要和她们打招呼,问些简单的问题就好了,她们不会和你聊人生聊梦想。”
通常能够自嘲的女孩都是内心极其强大,并且总被幸运光顾的。何穗大概就属这一类。她虽说,自己不介意没有人和她聊人生聊梦想,但是她作为一个成功的模特一路走来的人生,却是一直与梦想有关。
Q = 《北京青年》周刊A = 何穗
得之我幸,失之我命
Q:都说模特是吃青春饭,最初决定做模特父母支持吗?
A:到现在他们都不支持我,在他们眼中模特就是花瓶,就是吃青春饭。我父母特别希望我和其他同龄人一样正常地考大学将来找份稳定的工作。其实我自己心里面也是这么想的,但我发现从小到大我定的目标后来都会事与愿违。
Q:模特吸引你的地方是什么?
A:无论是广告也好,挣钱也好,名利也好,总会有个事情让你兴奋,然后推着你不停地去做,你进步的时候,大家都会接受你,用你,这个时候你就会不停地往前走,这是相互的结果,不是说我一个人往前爬就会收获到很好的成绩,肯定也有很多机会推着我走,我是那种你不推我我不走的人。
Q:在时装周面试的时候是怎样的一种心情?
A:我没有抱很大的希望,得之我幸,失之我命。其实从第一天面试开始,我就期待赶紧结束。这个过程真的是很辛苦,有一些人只是不愿意说出来而已,那一年我觉得自己快要死了,一天下来累的要死,第二天睁眼又活过来了,然后又死一次又活过来,那时候初生牛犊不怕虎,有一股劲儿,但现在不会了。
Q:2011年如果要重新过一遍,你会吗?
A:再让我过一遍我会疯掉的,那时一直在忙,我一个星期没有睡过床,一直在飞,纽约工作完就赶飞机飞伦敦。我曾经20天飞了100个小时。完全没有自己的时间,也没有说YES或者NO的权利,因为是新人嘛。
Q:第一次参加时装周紧张吗?
A:一点也不紧张,我就是抱着旅游的心态去的,国际的舞台上有那么多条件比我好的,我没抱非常大的希望,就是想为自己的模特生涯画上圆满的句号,也算参加过国际时装周,这样自己就没有遗憾了。
Q:能够站在Victoria’s Secret 的T台上,当时特别开心吧?
A:特别开心,当接到面试通知时,我真的很惊讶,当然也非常惊喜,我没有想到可以去走这样一场梦寐以求的秀。其实初高中时我就很爱看每年Victoria’s Secret 的,很激动,真没想到自己能走上这个T台。
Q:第二次走Victoria’s Secret和第一次有什么不同的感觉?
A:第二次走Victoria’s Secret我非常紧张,因为时装周的时候脚崴了,医生说三个月不能动,自从扭伤之后,后面所有面试上的秀都推掉了,所以第二次走Victoria’s Secret我很怕,我怕摔倒,脚崴了之后右脚踝是没有知觉的,我第一次觉得特别可怕的事情是你的身体没有知觉会比疼痛更可怕,疼痛你还能控制,但是没有知觉是很害怕的一件事。
Q:这是你第一次在时装周上崴脚?
A:是的,我记得当时那场秀我走了有十几分钟,在回去的时候,快结束这次走秀的时候我的脚崴了。其实崴脚对于模特来说正常,做模特没有崴过脚就不算完整。
Q:这些都是别人看不到的辛苦。
A:无所谓啊,有时候没有必要让所有人都知道自己做了什么,自己知道就好了。
我是“无欲”的
Q:最初对国外的生活适应吗?
A: 我去纽约的时候正好是冬天,又赶上下雪,天气特别冷,人生地不熟,英语也不好。当时恰恰国内过春节,这是我第一次没在家过春节,背井离乡的感觉真的很不好受。
Q:现在英文怎么样?
A:不好,尽量装休息不要聊天(笑)。
Q:英语不好,怎么和别人交流呢?
A:模特不需要交流,只要和她们打招呼,问些简单的问题就好了,她们不会和你聊人生聊梦想什么的。
Q:在模特职业生涯中给自己定最高点了吗?
A:我不定,不想做就不做了。我觉得我是“无欲”的,不爱争也不爱抢, 做事从来不为达到目的,而是有工作就认真完成,快乐最重要,也没什么得失心。
Q:那么有没有想过以后不做模特会做什么?
A:会做和模特没有关系的事情吧,但是具体做什么没有计划,我特别不爱做计划,我做的计划从来没有实现过。比如说之前我打算参加完比赛回去上学,可我没有回去上学继续做模特了。四大时装周我打算做一季就不再做模特了,但现在还在做模特。所以我觉得把自己身边的事情做好了,机会就会随之而来。
Q:有些模特会对设计感兴趣,就发展成第二职业,你有没有这方面的打算?
A:你觉得靠谱吗?我是天秤座的,有时候会比较悲观,会先往坏处想。中国有这么多的设计师,你半路出家做设计师干吗,做一个品牌要花多少钱,这么砸钱的事情还不一定做得很好,吗要做。
Q:你去过那么多城市,哪个城市给你的印象最好?
A:说实在的我都是去工作,只要是去工作这个城市对你是没有感情的,比如我去上海那么多次没有一次是玩的,工作的心情和玩的心情完全是不一样的。
Q:你平时穿着喜欢什么风格?
A:看心情啊,有时候会比较女人,有时候比较帅气,有时候喜欢精致点的,没有哪个女孩子喜欢一成不变吧,都会尝试各种风格打扮自己,爱美之心人皆有之。
Q:现在会尝试哪种风格?
A:中性风,之前都太女人了,现在就喜欢穿松垮一点的。
皮肤白是遗传了妈妈
Q:你的皮肤很不错,这也是别人经常夸你的一点吧?
A:经常会有人说,“皮肤好好啊!好美啊!”我的皮肤白是遗传了妈妈,天生的。其实我没有觉得自己有多漂亮,所以别人说我“漂亮,美”,我会尴尬、不好意思,因为我实在不知道是真的还是假的。
Q:在秀前会做哪些身体护理吗?
A:对于我的话,要做喷雾美黑。有一次整体造型上需要我美黑,先做了一次后大家觉得还是太白;又做了第二次,美容师看了看说好了很多,但是我自己觉得还是很白;因为我从小到大一直都很白,但又特别羡慕古铜色的皮肤,觉得古铜色很性感,但是美黑两次之后的效果和我期待的古铜色皮肤还是很有差距的,拍出来的照片也很白,最后连刘雯都在质疑我到底美黑了没有。
Q:在美白防晒方面有没有心得?
A:我用资生堂的防晒霜,用了有6年,在这款产品没有进中国之前我就开始用了,效果真的很好,我也会推荐给我的好友,很多人听我这么说会觉得我有做广告的嫌疑,但是它效果真的很好。我直到现在都还在用。
2001年冬天,一个阴雨绵绵的日子,这天是在四川合江县榕山镇读初三的杜宣梅的16岁生日。杜宣梅在日记里写道:“任何人都希望自己有个美好的未来,有个美好的人生,可是,一个手掌脚掌都没有的女孩,会有什么样的未来?”或许是上苍要赐她生日礼物吧,这一天她收到了一封陌生人的来信:“杜宣梅同学:我叫顾三军,是绵阳市恒通机械制造公司员工。今天在报纸上看到你的成长故事,心里非常敬佩,你给了我极大的鼓舞,希望我们能成为朋友!”
1984年,杜宣梅出生于四川泸州合江县榕山镇塘湾村一个农民家庭。两岁那年,她患了一种怪病,手腕关节、脚踝关节突然脱落,只剩下皮筋相连。因没钱医治,母亲含泪用剪刀将她的双手手掌和双脚脚掌剪下。从此,杜宣梅变成了“无掌”女孩,像一只折断了翅膀的小鸟。
从4岁开始,杜宣梅在母亲的帮助下,忍住剧痛用残存的脚腕练习站立、行走,用光秃秃的手腕练习吃饭、穿衣……3年苦练,杜宣梅终于能用两根柱子一样的腿脚摇摇晃晃地走路,能用光秃秃的手腕吃饭、洗脸;8岁那年,她居然用双“手”夹着笔写出自己的名字。父母欣喜之余,送她到村上的小学上学。
杜宣梅的鞋是母亲亲手做的,桶形,用两根布条紧紧地缠在小腿上。从家到学校是1公里的山路,不管刮风下雨,坚强的杜宣梅从不要父母接送。
1998年秋天,14岁的杜宣梅小学毕业考上了镇中学。开学第一天,两个同学对她的小声议论,触痛了她的神经,使她陷入自卑与绝望之中。此后,她3次退学,都被母亲“押”回学校。母亲没有多少文化,也不知道怎么开导女儿,只是对女儿说:“你干不了农活,只有读书,今后才有出路!”望着母亲企盼而忧虑的目光,杜宣梅含泪坚持下来。
2001年9月,杜宣梅上了初三,心里一片灰暗。成绩平平的她,不知初中毕业后,自己将何去何从。正当她困惑时,收到了顾三军的来信,信虽然很短,但对她却是一种鼓励,她想不到自己居然能得到别人的赞美。她当晚就回信:“我有什么好敬佩的,我无手无脚,过了今天不知明天会是什么样……”
顾三军1979年出生在四川绵阳市盐亭县巨龙镇,2001年7月从成都职业技术学院毕业,进入恒通机械制造公司工作。他了解杜宣梅的情况后,觉得杜宣梅太不容易了,希望能为她做点什么。接到杜宣梅的回信,他从信中感受到杜宣梅对生活对人生缺乏希望,不由得有一种隐隐的担心,便连夜给杜宣梅写信:“在我心目中,你就像安徒生笔下的美人鱼,虽然没有手和脚,但善良、纯洁又美丽,充满新生的渴望。其实上苍是公平的,关了这道门,一定会打开那扇窗,只要不放弃对生活的向往,定能创造美好生活……让我们一起为美好人生努力吧!”
顾三军的信像一束阳光照亮了杜宣梅灰暗的心,点燃了她的梦想之灯。之后,两人经常互通书信。随着交往的深入,顾三军成了杜宣梅最信任的朋友,杜宣梅跟他无话不谈,而顾三军就像大哥哥一样开导她、鼓励她。4年里,他们互通了160多封信。
在顾三军的不断鼓励下,杜宣梅读完了高中。2005年,杜宣梅参加高考,因心理压力太大,只考了479分,被江西景德镇高等专科学校英语教育专业录取。杜宣梅感到很失落,她在给顾三军的信中写道:“顾大哥,我真没用,我完了,一切都完了!”
执著男儿千里追爱,爱情花开庐山之巅
2005年8月16日,顾三军收到杜宣梅的信后,辗转难眠。第二天一大早,他请了一个星期的假,坐上了从绵阳开往泸州的客车。经过两天的周折,8月18日傍晚,他终于找到了榕山镇塘湾村杜宣梅的家。
杜宣梅虽然没有手掌、脚掌,但长得标致清丽,由于历经磨砺,她身上有一种特别的气质。第一次见面,顾三军的心里萌生了一种别样的情愫。在杜宣梅家的两天里,顾三军一边帮杜宣梅做家务,一边陪她聊天,开导她树立对生活的信心。杜宣梅被他说动了,表示不再为只考上专科而苦恼,要好好读完大学。
得知杜宣梅上大学还差一些学费,顾三军临别前,将身上仅有的2000元钱塞给了杜宣梅:“算是我借你的,等你大学毕业找到工作再还我。我从小就想当老师,可是这个愿望我已经无法实现了,你帮我实现好吗?”杜宣梅望着顾三军那含情脉脉的目光,羞红着脸点点头。
2005年9月,杜宣梅跨进江西景德镇高等专科学校。不到半月,她就收到了顾三军的3封信。杜宣梅担心这样下去会陷进情感的漩涡,而自己又承受不起这份沉重,于是回信:“顾大哥,以后没事就别再写信了,我学习很忙,没时间回。”其实,杜宣梅心里也渴望爱情,但因为手脚残疾,她始终张不开爱情的翅膀。尽管杜宣梅不领情,但顾三军还是一如既往地给她写信。杜宣梅只是偶尔只言片语地给他回上一封。一段时间后,杜宣梅干脆断绝了与顾三军的书信往来。
大二刚开学的一个下午,顾三军怀抱着火红的玫瑰突然出现在杜宣梅面前:“宣梅,别再拒绝我,让我陪伴你一辈子!”杜宣梅真想一头扑进顾三军的怀里,但是她最终还是理智地控制了自己。她接过顾三军手中的玫瑰说:“我没手没脚,不管跟了谁都是一种拖累,我不想拖累别人。”
虽然杜宣梅没有答应他的求爱,但顾三军并没有泄气,他在景德镇一家贸易公司找了份工作,一到周末,他就带着小礼物到学校找杜宣梅,陪她看电影、逛街……他相信,总有一天会敲开杜宣梅的心窗。一天傍晚,顾三军陪杜宣梅在校园散步,闲聊中得知杜宣梅几年前就想去登庐山,可是她行走不便,这心愿一直未了。
2007年3月的一个周末,阳光明媚,在顾三军鼓励下,杜宣梅和同寝室的3位姐妹来到庐山脚下。顾三军背着杜宣梅,沿着陡峭的山路艰难地往上攀越。看着满头大汗的顾三军,同学们想上前帮忙,被他婉言谢绝:“不用了,把这个机会给我吧!”
登上庐山顶端,北眺一泻千里的长江,南望烟波浩渺的鄱阳湖,杜宣梅关闭已久的心窗,蓦然被打开。她情不自禁地扑进顾三军的怀里,顾三军惊喜不已,拥着她深情相吻……
有爱相伴风雨兼程,“美人鱼”迎来美丽人生
庐山之行后,杜宣梅渐渐变得自信、阳光起来,她的脸上常挂着幸福的笑容。
杜宣梅知道,在信息时代,计算机将成为工作生活必不可少的工具。望着同学们熟练地操作电脑,杜宣梅担心自己如果不会电脑,将来不能适应工作需要,于是每天放学后她就到学校附近的网吧练习电脑操作。但是她没有手掌,无法使用键盘和鼠标,练习了几天就退缩了。顾三军安慰她:“电脑的键盘和鼠标本来是为有手指的人设计的,而你没有手指,学会电脑操作肯定是一个挑战,你只有付出比别人多十倍、百倍甚至上千倍的努力,才能够学会。”
顾三军找到一家电脑培训中心,给杜宣梅报名参加短期夜班电脑培训。每天晚上,他陪杜宣梅来到电脑培训中心练习电脑操作。在顾三军的帮助下,杜宣梅用两只残腕相互配合,反复训练了五六天,总算能勉强使用鼠标。接下来,杜宣梅用残腕凸起的部位练习敲击键盘。可是,残腕毕竟不是手指,击轻了按不下键,击重了几个键又同时按下……她将键盘扔到一边,气馁地说:“不练了!不练了!”顾三军一边给杜宣梅捏肩揉背,一边激励她:“这点困难就把你吓倒了,今后还怎样当老师呀!”杜宣梅长长地叹了口气,又拾起键盘,重新练习。3个月培训结束时,杜宣梅居然能用残腕熟练敲击任意键,每分钟能打40多个字,顺利通过了结业测试。
2008年7月,杜宣梅以优异成绩大学毕业,顾三军陪她回到四川合江县寻找工作。可是,因为她手脚残疾,屡屡被拒之门外。8月下旬,合江县榕山镇明德小学公开招考教师,刚报名两天,就有了上百人报名。在顾三军的鼓励下,杜宣梅鼓起勇气报了名。笔试时,杜宣梅凭着扎实的知识功底考了第一名;试讲时,她精心设计了教案,又制作了幻灯片配合教学,教学生动活泼,深得评委的好评。结果,她从众多的竞争对手中脱颖而出,被聘为明德小学教师。
2008年9月1日,杜宣梅捧着教科书,走上明德小学五(2)班讲台。第一堂课,杜宣梅没有讲课,她平静地对学生说:“在我两岁的时候,我失去了手掌和脚掌。有很多年,我非常自卑,直到遇到一个人,他把我形容为安徒生童话里的美人鱼,一下子照亮了我的生命。我从此张开隐形的翅膀,努力地飞,努力飞得更高……”聆听着她娓娓的讲述,孩子们深深感动了,纷纷鼓掌……
关键词 受信者熟悉度 伴随情绪 人际信任
1 引言
大学生个人生活范围比以往有了进一步扩大,除了接受学校和家庭的主导教育之外,还要接触并适应社会,进行社会交往并形成自己的社会关系。在人际交往中,大学生对人性的态度往往以人际信任程度表现出来。有研究表明,大学生在人际信任量表及其分量表上的平均得分均低于理论水平,而差异则达到了显著性水平;大学生的社会信任度极低,表现在团队协作精神缺乏、人际交往中自我封闭、很难与他人沟通、我行我素、独来独往等。然而,个人如果缺乏起码的信任感,对一切事物都有所怀疑,做事难免就会谨慎过度,久而久之便很容易使自己陷入焦虑不安之中,形成心理亚健康,对自己的身心健康造成危害,甚至会导致严重的心理疾病。因此,对影响大学生人际信任的影响因素的研究就变得意义重大。
以往有关人际信任影响因素的研究,无论是理论性还是实证性的,在很大程度上都忽视了情绪状态这个因素在信任判断中的作用。然而,事实上很多重要的信任决策都是在丰富的情感背景中做出的。一方面,信任判断本身就是在丰富的情感背景中做出的;另外,进行信任判断之前已有的情绪,即伴随情绪(incidental emotion)总是会影响到个体的另一个不相关的决定或判断。同时,有研究发现对受信者的熟悉程度对其作信任判断时存在显著的影响。因此,本研究试图从实证的角度探究对受信者的熟悉度在伴随情绪对大学生人际信任产生影响的过程中的作用。以期对提高大学生的人际信任度、完善人际交往模式、提高心理健康程度、增强社会适应能力等工作提供参考。
2 研究方法及过程
本实验假设对受信任者的熟悉程度会影响伴随情绪和人际信任两者间的关系。实验目的之一,证明在陌生的的受信任者与熟悉的受信任者两种不同条件下情绪对人际信任的影响是不同的。第二,证明愤怒、感恩和中性的情绪状态会对人际信任有不同的影响作用。
2.1被试
在陕西三所高校抽取181名在校生作为被试。总共有175名被试完成了在实验情境中的调查。其中男生73人、女生108人、平均年龄19岁(SD=1.10)。另外,有6个无效调查。实验中将被试随机的大概平均分派到12种情境中(每一种情境中被试的数量在14到17个之间)。每一次调查安排2到20个被试在同时进行。
2.2实验设计
本实验是一个2(熟悉度)×2(顺序)×3(情绪)的实验设计,根据设计将被试随机的分配到十二个状态中。本实验使用了两种熟悉度条件(陌生人、熟人)、三种不同的情绪条件(愤怒、感恩、中性)、两种顺序条件,一个顺序条件是情绪诱发前选择,即让被试在情绪诱发之前选择受信任者;另一个顺序条件是情绪诱发后选择,即让被试在完成情绪诱发之后选择受信任者。也就是让被试在不同伴随情绪状态下对不同熟悉程度的对象进行信任判断。这种处理可以使我们从伴随情绪对信任判断的影响中发现对受信者的熟悉程度的影响作用。
2.3实验材料
(1)内容为包括多个人物的生活场景照片,用多媒体呈现;(2)情绪诱发问卷:第一页中要求列出令被试愤怒或感恩的三到五件事,第二页要求被试对令他最愤怒或最感恩的一件事进行详细描述;(3)信任问卷,采用大学生态度信任量表,本量表改编自Johnson-George和Swap(1982)的特定人际信任量表,改编的主要目的是使问卷的内容符合大学生的实际生活。本研究所采用的信任量表包括10个项目,每项都采取7点评分,等级范围从1(完全同意)到7(完全不同意)。这些项目包括的问题,比如:指定的这个人有多大可能会兑现承诺,送给你他答应过的礼物;在多大程度上相信他会偿还从你这儿借走的100元钱。量表里的其它一些项目还测量了信任的意图,例如,被试会在多大程度上信任指定的受信任人,让他帮忙把一个重要的邮件拿去邮寄。这个信任量表的各项目之间是密切相关,该问卷的alpha=0.86。用于在调查的最后一个阶段收集人口统计信息,包括年龄、性别以及关于被试与受信任者之间关系的详细情况的调查表。
2.4实验过程
首先要求被试完成直接书写任务,以诱绪。本实验包括两个被试间的情绪条件,这个设计用来诱发愤怒和感恩两种情绪。在情绪诱发完成之后,用多媒体向被试呈现实验材料中提到的人物照片,要求被试在照片的人物中自己指定一位,随后要求被试将选定的人物作为自己的受信任者。接下来,要求被试针对指定的受信任者完成信任问卷,也就是让被试在伴随情绪状态下完成对一个陌生人的信任判断。
其次是进行启动操作,先让被试完成启动任务,就是回想一段他本人曾经感受到某种情绪(因某个人感到非常的愤怒或非常感激)的事件,以此完成情绪诱发。之后的操作跟直接书写任务中的一致,先呈现照片,再指定受信任者,最后完成信任问卷。在中性情绪条件下,要求被试详细描述刚刚离开的那个教室,细致到其他人都能根据描述完整的把它画出来,如此要求的目的在于保持在各种条件下的任务用时和性质是一致的。
在被试完成了以上调查之后,要求被试回答他们认为的这两项研究的意图是什么;并且询问他们是否认识照片中的人物。
2.5结果分析
首先检验顺序条件和人口统计变量对大学生人际信任的影响。结果发现两者对信任判断均没有显著性的作用。因此在随后的分析中从顺序条件中分离出了数据。因为有3个陌生受信任者组的被试认识他的信任目标,因此我们在结论中没有采用他们的数据。
在方差分析中,用信任作为因变量,情绪状态和熟悉状态作为自变量,结果发现伴随情绪(F(2,163)=10.53,p﹤0.001)对信任目标的熟悉度(F(1,163)=99.61,p﹤0.001)的主要效应,发现伴随情绪和对信任目标的熟悉度之间存在相互作用(F(2,163)=10.18,p﹤0.001)。因为情绪和信任度之间的相互作用是显著的,因此可以深入到两种熟悉程度条件下来分析数据,并分别检验每一种熟悉状态对情绪的影响力的作用。从试验结果可以发现在陌生人关系状态下(F(2,82)=18.46,p﹤0.001)情绪条件对大学生的信任评价有显著的影响,但是在熟悉的关系状态下(F(2,87)=0.36,n.s.)情绪条件对信任评价没有显著的影响,这一点支持了本实验最初的假设。本文在图1描述了各种条件下的信任分数的均值。尽管对熟悉的受信任者的高的平均信任分数可能会表现出天花板效应,但是对于愤怒和感恩的反应区分是基本一致的。
在陌生关系条件下,实验结果表现被试在愤怒状态下的信任判断比在感恩状态下(均数分别是4.43和5.76,t(55)=6.02,p﹤0.001)的信任判断及中性状态下(均数分别是4.43和5.05,t(54)=2.76,p﹤0.01)的信任判断要显著的低。此外,实验结果还表明被试在感恩条件下表现出的信任判断要比在中性条件下(t(55)=3.26,p﹤0.01)表现出的的信任判断要显著的高。
3 结论
本实验在情绪条件对人际信任的影响上确定了一个重要的区分条件,当受信任者是陌生人,伴随的的愤怒会降低信任评价而伴随的的感恩会增加信任评价。然而,当受信任者是熟人,伴随的的情绪将不会对信任评价产生影响。这一发现也支持了本研究关于情绪状态作为信任关系的重要信息的界定。当相关的信息是有限的,个体在对一个陌生的人进行可信度判断时,结果可能取决于个体当时的情绪状态。然而,当相关信息不是有限的,也就是说在一个平常的情境下对一个熟悉的受信任者进行可信任度的判断时,便不会取决于个体的情绪状态;取而代之,个体可能会采取原先形成的信任判断进行评价。尽管在本实验发现情绪对熟悉的受信任者的信任判断没有影响,但非常有可能的是,在特定的情境下或在一种积极效价和消极效价混合的体验下,情绪也可能影响信任者对熟悉的受信任者的信任判断。
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【摘要】 目的:探索人基质细胞衍生因子1(SDF1)对间充质干细胞(MSC)增殖的影响. 方法:采用经典的全骨髓贴壁法培养MSC, 通过成骨、成脂肪等多向诱导分化以及流式细胞仪分析其表面标记(CD133,CD34,CD90,CD105)等鉴定MSC特征;以P3MSC为实验材料,采用H3TdR参入法分析SDF1对MSC增殖的影响. 以50 nmol/L渥曼青霉素,10 mmol/L LY294002,50 mmol/L PD98059,0.1g/L AMD3100等分别处理P3MSC, 观察SDF1影响MSC增殖的信号机制. 结果:培养的MSC呈现出CXCR4,CD90和CD105强阳性,具有成骨、成脂肪等多向分化能力;含有100 mg/L SDF1的20 mL/L促进了MSC增殖,而含有100 mg/L SDF1的150 mL/L FBS抑制了MSC增殖. SDF1抑制MSC增殖的效应与其使MSC停滞在G1/S期有关. 促分裂原活化蛋白激酶P38MAPK阻断剂SB203580和CXCR4阻断剂AMD3100取消了SDF1抑制MSC增殖的效应,而细胞外信号调节激酶阻断剂PD98059加强了SDF1抑制MSC增殖的效应. 结论:SDF1/CXCR4介导的抑制MSC增殖的效应与促分裂原活化蛋白激酶和细胞外信号调节激酶等信号分子有关.
【关键词】 人基质细胞源衍生因子1; 间充质干细胞;增殖;促分裂原活化蛋白激酶
【Abstract】 AIM: To explore the effect of stromal cellderived factor1 alpha (SDF-1α) on mesenchymal stem cell (MSC) proliferation. METHODS: MSC culture was performed with the classical whole bone marrow adhering method; MSC was identified through multidifferentiation and surface marker assay (CXCR4, CD133, CD34, CD90,CD105); After MSCs were treated with 100 mg/L SDF1a, 50 nmol/L wortmannin, 10 mmol/L LY294002, 50 mmol/L PD98059 and 0.1 g/L AMD3100 inhibitors, the proliferation rates were measured by [3H]thymidine incorporation assay. RESULTS: Cultured MSCs had the ability of multidifferentiation and highly expressed CXCR4, CD105 and CD90. 20 mL/L FBS including 100 mg/L SDF1a promoted MSC proliferation, however exposure of MSCs to 150 mL/L FBS including 100 mg/L SDF1a could induce marked inhibition of MSC proliferation through the arrest in the G1/S checkpoint. And its inhibitory effect on MSC proliferation was partly reversed by p38 mitogenactivated protein kinase (MAPK) inhibitor SB203580 and CXCR4 inhibitor AMD3100. However its inhibition effect on MSC proliferation was obviously enhanced by extracellular signalregulated kinase (ERK1/2) inhibitor PD98059.CONCLUSION: The effect of SDF1a on MSC proliferation is related to ERK1/2 and p38 MAPK.
【Keywords】 hSDF1α; mesenchymal stem cell; proliferation; MAPK
0 引言
骨髓来源的间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell, MSC)在一定条件下可以分化为心肌、成骨、软骨、脂肪、胰岛、肌腱等多种类型的细胞[1]. 在心肌内、静脉内、冠脉内等不同途径移植MSC或粒系集落刺激因子动员骨髓发现其可以迁移到心肌梗死部位,通过参与血管新生、心肌再生等改善修复受损的心脏[1]. 有研究[2]发现,SDF1/CXCR4轴不仅调控造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)的迁移,而且也影响HSC的增殖和分化. 新近研究发现MSC表达CXCR4[3],显示SDF1/CXCR4轴可介导MSC的迁移[4]. 但是就SDF1/CXCR4轴是否影响MSC的增殖分化,目前仍不清楚. 我们利用H3TdR参入法检测SDF1α对MSC增殖的影响,并初步探索SDF1α影响MSC增殖的信号机制.
1 材料和方法
1.1 材料 SPF级WISTAR大鼠3只,体质量(230±20) g. 动物在屏障系统环境下,用专用饲料和灭菌水分笼饲养. 动物合格证号为SCXK(鄂)2003005,实验动物使用许可证号为SYXK(鄂)2004021(均由湖北省实验动物中心提供). DMEM培养基(美国Gibcol公司);胎牛血清(fetal bovine serum,FBS,杭州四季青生物工程有限公司);胰酶(美国Sangon公司);CO2细胞培养箱(美国科学仪器公司);倒置荧光显微镜(日本Nikon公司);恒低温切片机(德国Leica公司);图像分析系统(美国Media Cybernetics公司);hSDF1α(美国upstate公司);CD105, CD90, CD133和CD34(美国eBioscience公司);地塞米松、β磷酸甘油、维生素C、胰岛素、4,6联脒2苯基吲哚(4,6diamidino2phenylindolediacetate,DAPI)、SDF1特异性受体CXCR4阻断剂AMD3100, 0.1 g/L(美国Sigma公司);hSDF1a(美国Upstate公司);磷酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3kinase, PI3K)阻断剂, 渥曼青霉素(50 nmol,美国Alexis biochemicals公司);丝裂原活化蛋白激酶(mitogenactivated protein kinase, MAPK)阻断剂PD98059(50 mmol,美国eBioscience公司).
1.2 方法
1.2.1 MSC的培养[1] 采用全骨髓法. 给予大鼠腹腔注射肝素5000 U,15 min后断颈处死, 收集双侧胫股骨中全骨髓. 按1×109细胞/L接种于75 cm2培养瓶,24 h后换液,去除未贴壁的细胞. 以后3~4 d 完全换液1次,12~14 d 后细胞密度达80%~90%,用2.5 g/L的胰酶消化后1∶3传代, 记为P1代MSC(P1MSC). 随后按上述方法传代培养. 培养的P3MSC中加入终浓度为50 mg/L的DAPI温育1 h,荧光显微镜下观察其DAPI标记的效率为100%[1]. 消化收集P3代的MSC(P3MSC),制成1×109/L细胞悬液,以备迁移实验. 细胞培养条件:含150 mL/L的FBS以及1×105/L青霉素、100 mg/L链霉素和0.25 mg/L两性霉素B的DMEM培养基,37℃ 50 mL/L CO2饱和湿度.
1.2.2 MSC的鉴定
1.2.2.1 成骨诱导 P3MSC培养至90%融合后6孔板加入成骨诱导液(150 mL/L FBSDMEM,含地塞米松4×10-6 g/L, β磷酸甘油1 g/L, 维生素C 0.5 g/L),每72 h换液,诱导2 wk. Von Kossas染色鉴定矿化结节.
1.2.2.2 成脂肪诱导 P3MSC培养至90%融合后6孔加入成脂肪诱导液(10 mg/L胰岛素), 每72 h换液. 苏丹Ⅲ染色鉴定脂肪细胞.
1.2.2.3 流式细胞术鉴定MSC表面标记特征 用1 mL注射器将MSC(密度为1010/L)吹打混匀后,取600 μL(至少含有2×106个细胞),等分为4份,分别加入4个Eppendorf管中. a管为标准对照,加入4 μL大鼠IgG1FITC及4 μL大鼠IgG1PE mAB(荧光二抗);b管加入4 μL CD34FITC和4 μL CD133PE mAB(一抗);c管加入4 μL CD90 mAb(一抗);d管加入4 μL CD105 mAB(一抗),4℃下避光孵育40 min,洗涤液1000 r/min离心5 min,用PBS洗1~2 次. 在c, d管中加入8 μL大鼠IgG1FITC(荧光二抗),4℃下避光孵育20 min. 洗涤液洗2次. 加入固定液1 mL,上流式细胞仪(Beckman Coulter)检测表面标志,应用Cotfit软件分析结果.
1.2.2.4 免疫组化鉴定MSC表面标记特 于24孔板中培养P3MSC至90%融合后,PBS洗3次,40 g/L多聚甲醛固定15 min. 羊血清封闭2 h,加小鼠抗大鼠CD105,小鼠抗大鼠CD90和兔抗大鼠CXCR4等一抗4℃孵育过夜. PBS洗3次,分别加羊抗小鼠和羊抗兔绿色荧光二抗室温孵育2 h. PBS洗3次,PBS甘油(50%∶50%,封片). 荧光显微镜下观察成像分析.
1.2.3 H3TdR参入法分析MSC增殖 取24孔培养板,向每孔内加入2.5×104 P3MSC培养(150 mL/L FBS)24 h,20 mL/L FBS培养24 h. 随后分别给予不同处理即:150 mL/L FBS+100 mg/L SDF1,20 mL/L FBS+100 mg/L SDF1和150 mL/L FBS. 分别浓度为3.7×1010 Bq/L (1×103 uCi/L)的3HTdR 0.1 mL,混匀后分别培养0.5, 1, 12, 24和48 h. PBS漂洗细胞3次,甲醛固定10 min. 于4℃ 50 mL/L三氯醋酸漂洗3次. 每孔加入0.5 mL 0.3 mol/L NaOH 60℃水浴处理30 min,冷却至室温. 收集上述裂解液移入闪烁瓶中,加入5 mL闪烁液,用液体闪烁计数器计数每分钟的闪烁次数(cpm), 测定DPM值,反映细胞DNA合成速率. 每组重复3次. 在上述基础上,分别给予P3MSC不同处理即:PI3K抑制剂渥曼青霉素、ERK1/2阻断剂PD98059(50 mmol/L), p38MAPK阻断剂SB230580(30 mmol/L)和CXCR4阻断剂AMD3100(0.1 g/L). 其它按上述方法执行.
1.2.4 细胞周期的测定 取24孔培养板,向每孔内加入2.5×104 P3MSC培养(150 mL/L FBS)24 h,20 mL/L培养24 h. 随后分别给予不同处理即:150 mL/L FBS+100 mg/L SDF1,20 mL/L FBS+100 mg/L SDF1和150 mL/L FBS. 分别于处理后培养0.5, 1, 12, 24和48 h胰酶消化收集细胞,制成单细胞悬液. 700 mL/L乙醇固定细胞过夜,5 g/L的RNA酶常温消化细胞15 min. 25 mg/L的PI染料4℃避光处理细胞15 min. 随后流式细胞仪检测分析细胞周期,记录静止期与DNA合成前期(G0/G1)细胞比例.
2 结果
2.1 MSC的培养 由于造血干细胞不贴壁生长, 经过数次换液, 悬浮的造血干细胞逐渐被清除, 贴壁MSC呈匀一梭形成纤维细胞样形态. 呈集落生长,增殖迅速. 原代MSC潜伏期约2~4 d,对数生长期3~5 d,此后进入平台期. 传代MSC潜伏期较短,约1~2 d, 对数生长约3~4 d,可连续传4~6代. 一般原代细胞4~5 d可传代,传代细胞2~3 d可再次传代.
2.2 MSC的鉴定 MSC具有成骨成脂肪等多向分化潜能(图1). 流式分析表明MSC低表达CD34(1.5%), CD133(1.8%);高表达CD90(96.0%), CD105(97.0%). 免疫组化分析结果显示,MSC可高表达CD90, CD105和高表达SDF1受体CXCR4(图2).
A: MSCs诱导分化为脂肪细胞 ×200; B: MSCs诱导分化骨细胞 ×100.
图1 MSCs成骨成脂肪诱导分化(略)
A: MSC表达CXCR4; B: MSC表达CD105; C: MSC表达CD90.
图2 MSC表面特征免疫组化检测结果 SP ×200(略)
2.3 SDF1对MSC增殖的影响 在SDF1α处理后不同时间点,100 mg/L SDF1对MSC增殖的影响与血清浓度密切有关,其中含100 mg/L SDF1的20 mL/L FBS促进MSC增殖,而含100 mg/L hSDF1的150 mL/L FBS抑制MSC增殖(图3).
A: MSC表达CXCR4; B: MSC表达CD105. aP
图3 SDF1对MSC增殖的影响(略)
2.4 SDF1影响MSC增殖的信号机制 在不同阻断剂处理后不同时间点,PI3K阻断剂渥曼青霉素和LY294002, ERK1/2阻断剂PD98059加强了SDF1对MSC增殖的抑制作用,而SDF1特异性受体CXCR4阻断剂AMD3100, p38MAPK阻断剂SB230580部分取消了SDF1对MSC增殖的抑制作用(图4).
aP
图4 SDF1影响MSC增殖的信号机制(略)
2.5 SDF1对MSC细胞周期的影响 100 mg/L SDF1处理MSC后不同时间点,G0/G1期的MSC明显增多, 且呈现出时间依赖的关系(图5).
3 讨论
近年来,许多学者研究SDF1/CXCR4轴介导HSC动员迁移的信号分子机制发现:利用PI3KAKT途径抑制剂Ly290042或渥漫青霉素等时可明显抑制HSC的迁移 [5-9]. 同时从SDF1/CXCR4轴对HSC增殖分化的研究认识到,SDF1对HSC的幸存能力、增殖的调节主要与PI3KAKT, ERK1/2等信号转导通路有关[6-7]. SDF1/CXCR4轴介导MSC迁移的机制与HSC非常相似.
aP
图5 SDF1对MSC细胞周期的影响(略)
本研究选用具有多向分化潜能的MSC作为实验材料,并采用最新的鉴定MSC的标准[10]. 同时利用免疫细胞化学的方法进一步确认MSC表达SDF1受体CXCR4. 采用H3TdR参入法分析SDF1对MSC增殖的影响. 研究结果发现2% FBS和SDF1处理后促进了MSC的增殖,15% FBS和SDF1处理后抑制了MSC的增殖. 前者与Kortesidis等[11]报道的一致,后者存在差异,主要与MSC培养体系不同有关. 其原因在于: ① 实验体系不同. 即Kortesidis等采用的是无血清的多种细胞因子组合诱导MSC增殖的培养体系,而我们为有血清的培养体系;② 评价增殖的方法不同. 即Kortesidis等[11]采用的是MSC克隆形成法(CFUF)评价,而我们采用的是H3TdR参入法分析MSC增殖;③ 实验材料不同. 即Kortesidis等[11]采用的人MSC,而我们采用的是大鼠MSC. 这些结果一方面提示血清中复杂的成分在MSC增殖过程发挥着重要作用,另一方面提示当加入外源性诱导因子如SDF1后,与血清中的诱导因子交互作用而导致MSC增殖呈现出不同的效应.
在此基础上,我们进一步分析SDF1对MSC增殖影响的信号机制发现:CXCR4阻断剂阻断SDF1/CXCR4对MSC的作用后,其抑制增殖的效应几乎被取消,表明SDF1具有抑制MSC增殖的作用,并且这种作用与其受体CXCR4有关. 已知SDF1与其受体CXCR4结合后,将激活CXCR4偶联的G蛋白下游信号分子. 本研究还发现ERK1/2途径阻断后进一步加剧了MSC增殖的抑制,而p38MAPK途径阻断后反而使SDF1/CXCR4介导的MSC增殖抑制缓解甚至导致MSC表现为增殖加强. 同时检测细胞周期发现SDF1处理的MSC更多的处于G0/G1期,进一步说明SDF1具有抑制MSC增殖的作用. 这些与研究报道的SDF1/CXCR4通过ERK1/2途径促进HSC增殖的作用相反[6]. 提示SDF1/CXCR4介导的增殖反应与其作用的细胞类型有关.
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