胰蛋白酶

前言：想要写出一篇令人眼前一亮的文章吗？我们特意为您整理了5篇胰蛋白酶范文，相信会为您的写作带来帮助，发现更多的写作思路和灵感。

胰蛋白酶范文第1篇

Induction of secretion of interleukin8 from lung epithelial cells by trypsin

【Abstract】　AIM: To investigate the actions of trypsin on the secretion of interleukin8 (IL8) from human lung epithelial cells. METHODS: A549 cells were cultured in a 12well culture plate. The challenge was performed by adding various concentrations of trypsin or trypsin inhibitor into each well， respectively. After 2 h， 8 h or 16 h， the reactions were terminated by removing the supernatant from each well. A sandwich ELISA was used to determine the levels of IL8 in supernatants. RESULTS: Following 16 h incubation， trypsin induced the secretion of IL8 in a concentration dependent manner. As low as 1 μg/L trypsin was able to induce IL8 release from epithelial cells and the maximum of accumulated release of IL8 was observed with 3 μg/L trypsin， which was 5fold more than the baseline release. However， when trypsin concentration increased over 3 μg/L， the extent of increased secretion of IL8 decreased. Soybean trypsin inhibitor (SBTI) and α1antitrypsin (α1AT) inhibited trypsin induced secretion of IL8. The time course showed that the actions of trypsin initiated at 2 h and reached their peak at 16 h. CONCLUSION: Trypsin is a potent secretogogue of IL8 release from cultured human lung epithelial cells， indicating that it is likely to be involved in the pathophysiological process of airway inflammation.

【Keywords】 trypsin；epithelial cells; interleukin8; lung

【摘要】 目的： 探讨胰蛋白酶对人上皮细胞白细胞介素8（IL8）分泌的影响. 方法： 人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内，并分别用不同浓度的胰蛋白酶和/或胰蛋白酶抑制剂进行刺激. 刺激时间为2 h、8 h和16 h. 用ELISA方法检测上清液中的IL8水平. 结果： 经过16 h的培养，胰蛋白酶可引起浓度相关性IL8释放，胰蛋白酶在浓度1 μg/L时就可引起IL8的释放量增加，3 μg/L时诱导IL8的释放量达高峰，为基础分泌量的5倍，但随着胰蛋白酶浓度的增加，IL8的释放量反而下降. 胰蛋白酶抑制剂可以抑制胰蛋白酶诱导IL8释放的作用. 时间相关曲线表明，胰蛋白酶从2 h起即可引起IL8释放，16 h达高峰. 结论： 胰蛋白酶可促进人肺上皮细胞分泌IL8，表明它能积极参与呼吸道的炎症过程.

【关键词】 胰蛋白酶；上皮细胞；白细胞介素8；肺

0引言

蛋白酶激活受体（protease activated receptor， PAR）属G蛋白耦联受体家族中的亚类，目前有PAR14 4个成员组成，PAR2可在人呼吸道上皮细胞和多种呼吸道肿瘤上皮细胞系表面表达［1-5］. 胰蛋白酶主要由胰腺分泌，在体内主要参与肠道消化功能. 最近研究表明，胰蛋白酶还是PAR2的激动剂，胰蛋白酶在人PAR2的R34?S35LIGKV处切断受体的N末端暴露系锁配体SLIGKV，从而激活PAR2参与肺部炎症［6］，而PAR2的缺乏可以降低气道炎症反应［7］. 因此，我们利用人肺癌上皮细胞系A549细胞探讨胰蛋白酶对上皮细胞IL8分泌的影响.

1材料和方法

1.1材料

胰蛋白酶、大豆胰蛋白酶抑制剂(SBTI)、α1抗胰蛋白酶(α1AT)、青、链霉素均购于Sigma公司，DMEM 培养液、胎牛血清（FBS）、胰蛋白酶EDTA消化液均购自Gibco公司.

1.2方法

1.2.1细胞培养人肺癌上皮细胞系A549细胞（购自中国科学院上海细胞研究所）接种于50 mL培养瓶内，用DMEM完全培养液（含100 g/L FBS， 10×104 U/L青霉素和100 mg/L链霉素），于37℃，50 mL/L CO2培养箱中培养.

1.2.2上皮细胞激发实验待细胞铺满瓶底后，用2.5 g/L胰蛋白酶EDTA消化液消化，将获得的细胞分种于12孔培养板各孔内，用1 mL完全培养液培养至细胞相互融合后，换无血清培养液培养16 h. 然后向每孔的细胞内加入不同浓度的胰蛋白酶和/或胰蛋白酶抑制剂进行激发实验. 胰蛋白酶抑制剂和胰蛋白酶加入细胞前在冰上孵育30 min，细胞培养2， 8和16 h后收集上清液，离心后于-80℃冻存. 全部实验为双样，每组实验均重复5次.

1.2.3细胞上清IL8水平检测用人IL8 ELISA检测试剂盒（Biosource）， 检测细胞上清液中的IL8水平，并用酶标仪 (Molecular Devices公司) 于450 nm波长处测定吸光度（A）.

统计学处理： 数据以x±s表示，采用SPSS(11.0版)软件进行单因素方差分析，组间方差不齐时采用非参数秩和检验. P

2结果

2.1胰蛋白酶对肺上皮细胞系IL8释放的影响经过16 h的培养，胰蛋白酶可引起浓度相关性IL8释放增加， 胰蛋白酶1 μg/L时就可引起IL8释放量增加， 3 μg/L时达高峰，为基础分泌量的5倍，但随着胰蛋白酶浓度的再增加， IL8的释放量反而下降 （Fig 1）. 时间关系曲线显示，胰蛋白酶引起A549细胞分泌IL8从2 h起就有所增加，16 h增加最显著（Fig 2）.

2.2胰蛋白酶抑制剂对胰蛋白酶诱导释放IL8的抑制作用胰蛋白酶抑制剂和胰蛋白酶与A549细胞共同培养16 h后结果显示：SBTI在浓度为10和30 mg/L时可分别抑制胰蛋白酶诱导的A549细胞释放IL8的作用（Fig 3）. α1AT在浓度为10 mg/L也能抑制胰蛋白酶引起的IL8释放（Fig 4）.

3讨论

研究表明，PAR2激活能介导气管平滑肌的收缩、促进炎症性细胞的游走和血管的通透性增加，介

n=5. bP

导嗜酸性粒细胞的浸润［8］，调节血管舒张与收缩，调节消化道和皮肤的功能等［9］. 呼吸道上皮细胞PAR2的激活还可导致基质金属蛋白酶（MMP9）［10］、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GMCSF）［1，2］、酸性粒细胞趋化因子［4］、前列腺素E2（PGE2）、白细胞介素（IL）6等［4］细胞因子的释放，提示PAR2可能参与气道的炎症和重塑. 激活PAR2的蛋白酶主要有胰蛋白酶、肥大细胞类胰蛋白酶及凝血因子Ⅶa， Xa［11］.

我们的研究表明，胰蛋白酶对呼吸道上皮细胞IL8的分泌有显著促进作用，表明胰蛋白酶能通过激活PAR积极参与呼吸道的炎症过程，间接证明了PAR在哮喘和慢性阻塞性肺疾病的发病过程中起着一定的作用. 胰蛋白酶可引起肺上皮细胞高达5倍的IL8释放，表明它对IL8的释放促进作用是高效的. IL8的释放量高达1.7 μg/L，达到了IL8发挥其生理和病理生理功能的浓度. 胰蛋白酶抑制剂SBTI对胰蛋白酶诱导IL8释放的抑制作用，表明胰蛋白酶的作用是通过其水解活性实现的，也表明胰蛋白酶抑制剂可能有抗炎作用. α1抗胰蛋白酶对胰蛋白酶诱导的IL8释放也具有抑制作用，它作为机体内源性的胰蛋白酶抑制剂可能在呼吸道的抗炎反应机制中起一定作用.

从时间关系曲线上看，胰蛋白酶对IL8分泌的刺激作用是一个比较缓慢的过程，这可能表明分泌出的IL8是由上皮细胞新合成的，而不是原有贮存的IL8的单纯释放.

我们发现，A549细胞系可同时表达PAR14四种受体［12］，而胰蛋白酶既可酶切PAR2又可酶切PAR4从而激活受体，因此，胰蛋白酶引起的肺上皮细胞IL8的释放，是单纯由PAR2或PAR4介导还是PAR2与PAR4同时参与，值得进一步探讨.

【参考文献】

［1］ Vliagoftis H， Befus D， Hollenberg MD， et al. Airway epithelial cells release eosinophil survivalpromoting factors (GMCSF) after stimulation of proteinaseactivated receptor 2 ［J］. J Allergy Clin Immunol， 2001;107(4):679-685.

［2］ Sun G， Stacey MA， Schmidt M， et al. Interaction of mite allergens Der p3 and Der p9 with proteaseactivated receptor2 expressed by lung epithelial cells ［J］. J Immunol， 2001;167(2):1014-1021.

［3］ Asokananthan N， Graham PT， Fink J， et al. Activation of proteaseactivated receptor (PAR)1， PAR2， and PAR4 stimulates IL6， IL8， and prostaglandin E2 release from human respiratory epithelial cells ［J］. J Immunol， 2002; 168(7):3577-3585.

［4］ Cocks TM， Fong B， Chow JM， et al. A protective role for proteaseactivated receptors in the airways ［J］. Nature， 1999; 398 (6723):156-160.

［5］ Miotto D， Hollenberg MD， Bunnett NW， et al. Expression of protease activated receptor2 (PAR2) in central airways of smokers and nonsmokers ［J］. Thorax， 2002; 57(2):146-151.

［6］ Vergnolle N， Wallace JL， Bunnett NW， et al. Proteaseactivated receptors in inflammation， neuronal signaling and pain ［J］. Trends Pharmacol Sci， 2001; 22 (3):146-152.

［7］ Lindner JR， Kahn ML， Coughlin SR， et al. Delayed onset of inflammation in proteinaseactivated receptor2deficient mice ［J］. J Immunol， 2000; 165(11):6504-6510.

［8］ Schmidlin F， Amadesi S， Vidil R， et al. Expression and function of proteinaseactivated receptor 2 in human bronchial smooth muscle ［J］. Am J Respir Crit Care Med， 2001;164(7):1276-1281.

［9］ Macfarlane SR， Seatter MJ， Kanke T， et al. Proteinaseactivated receptors ［J］. Pharmacol Rev， 2001; 53(2):245-282.

［10］ Vliagoftis H， Schwingshackl A， Milne CD， et al. Proteinaseactivated receptor2mediated matrix metalloproteinase9 release from airway epithelial cells ［J］. J Allergy Clin Immunol， 2000; 106 (3):537-545.

胰蛋白酶范文第2篇

关键词：重组人Ⅱ型胰蛋白酶；牛胰蛋白酶：性质；应用

中图分类号：Q55.9　文献标识码：A　文章编号：1672-979X(2010)11-0384-05

盐胰蛋白酶原为胰蛋白酶的前体，在胰脏合成。在Ca2+存在条件下，胰蛋白酶原可通过肠激酶或胰蛋白酶的自身激活，断开肽链N端6位赖氨酸和7位异亮氨酸残基之间的肽键，失去一段6肽，分子构象变为有活性的胰蛋白酶。胰蛋白酶可激活酶原，成为有活性的酶。商品化胰蛋白酶主要来源于猪或牛的胰腺。

人胰蛋白酶有I型和II型2种类型，根据等电点不同，又分为阳离子型和阴离子型。我们用基因工程方法得到了重组人阴离子型胰蛋白酶原(II型胰蛋白酶)，激活后得到高活性的人源胰蛋白酶。由于胰蛋白酶在溶液中稳定性较差，容易发生自降解，使酶活性下降。本实验研究了重组人II型胰蛋白酶的稳定性及部分性质，并初步研究了酶解激活羧肽酶B酶原及在细胞消化中的应用。

1　材料

1.1　试剂

牛胰蛋白酶(Sigma)；重组人Ⅱ型胰蛋白酶-(本实验室制备)；苯甲酸-L-精氨酸乙酯(BAEE，Sigma)：其余试剂为进口或国产分析纯。

1.2　仪器

T6紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器公司)：FE20型pH计(梅特勒，托利多仪器公司)；EV265双向电泳仪(PS265-230V，Hoefer)

2　方法

2.1　Jm值的测定

以BAEE为底物，测定重组人II型胰蛋白酶和牛胰蛋白酶的米氏常数Km。底物BAEE的浓度范围为0.005-0.25mmol／L，用双倒数作图法，以底物浓度的倒数值为横坐标，反应速率即活性的倒数值为纵坐标做图，与x轴交点的负倒数即为Km。

2.2　重组人lI型胰蛋白酶的最适温度及最适pH

取3mL底物分别置于4，15，20，25，30，40，55，65，75℃保温1h，加入等量的重组人II型胰蛋白酶，测定酶活性。底物用不同pn的20 mmol／L乙酸钠一乙酸，Tris-HCl及GIy-NaOH缓冲液配制。测定重组人II型胰蛋白酶活性，确定最适pH。

2.3　重组人ll型胰蛋白酶与牛胰蛋白酶热稳定性和pH稳定性

将重组人Ⅱ型胰蛋白酶与牛胰蛋白酶分别配制成0.5 mg／mL溶液，分别于-20，4，15，37，50℃保温，测定不同保温时间的活性，计算失活百分比。

将重组人Ⅱ型胰蛋白酶1mL分别加入不同pH的缓冲液中，配成200 U／mL(0.3 mg／mL)溶液。缓冲液分别用50 mmol／L乙酸钠-乙酸，Tris-HCl和Gly-NaOH，pH

2.4　金属离子及化学试剂对重组人Il型胰蛋白酶与牛胰蛋白酶活性的影响

向重组人Ⅱ型胰蛋白酶液(活性860 U／mL)分别加入不同金属离子(Zn2+，Mg2+，Ba2+，Mn2+，Ca2+，Fe2+，Cu2+)1 mmol／L，4℃保温1h后测活性。重组人II型胰蛋白酶液(活性750 U／mE)分别按1％的量加入EDTA(乙二胺四乙酸)，PMSF(苯甲基磺酰氟)，DTT(二巯基苏糖醇)，SDS(十二烷基硫酸钠)，Triton x，100，4℃保温1 h后测活性。另取牛胰蛋白酶粉末按上述方法配成相同活性溶液。

取重组人II型胰蛋白酶分别加入不同浓度(0.5，1mol／L)氯化钠溶液及尿素(1.2 mol／L)溶液配制成活性为1200 U／mL溶液。4℃放置24h后测活性。另取牛胰蛋白酶粉末配成相同活性溶液，同法操作。

2.5　重组人II型胰蛋白酶酶解羧肽酶B动力学研究

取牛胰蛋白酶和实验室制取的重组人II型胰蛋白酶，按蛋白浓度比1:50将等量的2种酶加入羧肽酶B复性液(0.5mg／mL)中。间隔一定时间测羧肽酶B活’性，并留取样品检测SDS-PAGE。

2.6　重组人ll型胰蛋白酶消化细胞的初步研究

细胞消化液组成：胰酶0.5 mg／mL，EDTA 0.04 g／mE溶于PBS液中，并用盐酸调为pH 7.4。所用溶液均经高温灭菌，或者经0.22岫1滤膜过滤。

A组为牛胰蛋白酶组，AI：800 U／mL牛胰蛋白酶酶液200μL，EDTA 0.04g／nL；A2：800 U／mL牛胰蛋白酶酶液100μL，EDTA0.04g／mL。

B组为重组人胰蛋白酶组，B1：800U／mL重组人II型胰蛋白酶酶液200uL，EDTA 0.04g／mL；B2：800U／mL重组人1I型胰蛋白酶酶液100μL，EDTA0.04g／mL；B3：400U／mL重组人II型胰蛋白酶酶液200uL，EDTA 0.04g／mL。

c组为专用细胞消化液200μL，活性800 U／mL，EDTA0.04g,／mL。

将传代的鼠T3细胞传代于6孔板，加入细胞培养液培养。待细胞贴壁生长后，向6孔板分别加入上述6种试液。显微镜下观察细胞形态变化，待细胞完全脱离培养瓶时拍照并记录时间。比较细胞形态变化和完全消化所需时间。

3　结果

3.1　重组人Il型胰蛋白酶和牛胰蛋白酶Km值的测定

结果见图1。由图1A计算可知，重组人II型胰蛋白酶的Km值为12.7μmogL，Vmax为212.76μmol／min。由图1B计算可知，牛胰蛋白酶Km。值为40μmol／L，Vmax为588.23μmol／min。表现出重组人胰蛋白酶对BAEE有更高的亲和力。

3.2　最适温度及最适pH的确定

不同的测定温度测得的吸光度在5min内的变化见图2。测活温度低于30℃，吸光度变化均匀。高于30℃，5min内的吸收度随时间呈下降趋势，即酶在高于30℃条件下易失活。所以，30℃为测定重组人II型胰蛋白酶活性的最适温度。通常情况下，我们仍选择25℃的标准条件为测活温度。

pH对测定活性有很大的影响，pH7.6时酶活性最高，所以pH 7.6为胰酶测活的最适pH。见图3。

3.3　重组人II型胰蛋白酶与牛胰蛋白酶的热稳定性及pH稳定性

重组人Ⅱ型胰蛋白酶酶液置于不同温度下，活性随着时间的变化见图4A。由图4A可见，温度越低，酶活性损失越小，温度高于50℃，酶活性很快-丧失。但是，酶置于20℃的条件下，活性丧失相当快。这可能是冻融过程中蛋白构象发生变化所致。所以重组人II型胰蛋白酶的最适保存温度为4℃。牛胰蛋白酶酶液置于不同温度下，活性随着时间的变化见图4B。牛胰蛋白酶随着温度升高活性丧失很快，-20℃条件下酶液最稳定。相同时间内，牛胰蛋白酶活性丧失的速度比重组人Ⅱ型胰蛋白酶快。

重组人II型胰蛋白酶及牛胰蛋白酶在不同pH条件下活性变化见图5。由图5可见，2种酶的变化趋势基本相同。pH过低或过高都使2种酶活性降低，重组人Ⅱ型胰蛋白酶pH8～9时活性最稳定。牛胰蛋白酶对pH的耐受性要强，pH 7～10时牛胰蛋白酶活性只有较小的损失。

3.4　金属离子及试剂对胰蛋白酶活性的影响

各种试剂对酶活性的影响见表1。牛胰蛋白酶活性随着EDTA浓度上升丧失增多，1mmol／L EDTA就能使重组人II型胰蛋白酶活性丧失80％。EDTA使酶活性丧失是因酶液中钙离子被EDTA螯合，表明重组人II型胰蛋白酶活性中心的钙离子对酶活性的发挥有至关重要的作用。二者不同可能与牛胰蛋白酶含ca2+有关。PMSF对酶活性有抑制作用，因为PMSF是丝氨酸蛋白酶抑制剂，这也表明胰蛋白酶是丝氨酸蛋白酶，活性被抑制。DTT对2种酶的活性也有很大的影响，尤其是对重组人II型胰蛋白酶。1％SDS和0.1％Triton-X100能使酶活性彻底丧失，使蛋白质发生变性。高浓度的NaCl(如0.5mol／L和lmol／L)和低浓度的Urea(如l mol／L和2 moFL)对重组人II型胰蛋白酶活性没有影响。表1不同试剂对牛胰蛋白酶及重组人胰蛋白酶活性的

3.5　重组人11型胰蛋白酶及牛胰蛋白酶用于羧肽酶原B的酶解激活

用重组人Ⅱ型胰蛋白酶酶解的羧肽酶B的最终比活性是用牛胰蛋白酶酶解样品的1.5倍。由图6可见，重组人离子型胰蛋白酶酶解羧肽酶原B在速率上优于牛胰蛋白酶。由图7可见，羧肽酶原B在加入胰蛋白酶后，逐步酶解为羧肽酶B。所以，我们通过基因工程方法制备的重组人胰蛋白酶在某些方面已经达到甚至超过了市场同类产品。

3.6　重组人Il型胰蛋白酶消化细胞初步研究结果

各组样品完全消化细胞所用时间见表2。由表2可见，在活性相同时，重组人II型胰蛋白酶完全消化细胞所用的时间较短，几乎与市场上消化细胞专用消化液所用时间相同。

细胞消化效果见图8。经过胰蛋白酶消化作用后，原来贴壁生长的T3细胞从培养瓶壁上脱离，细胞形态从扁平状变成球状，T3细胞之间出现空隙。细胞生长状态良好。

4　讨论

胰蛋白酶原具有自身活化和自身降解的特性，在真核系统中表达，很难得到完整的胰蛋白酶原，并且其活化为有活性的胰蛋白酶会对宿主细胞造成一定的毒性。因此，在毕赤氏酵母中天然牛胰蛋白酶没有成功表达 。

胰蛋白酶范文第3篇

【关键词】 急性胰腺炎 尿胰蛋白酶原-2 血淀粉酶 诊断 临床分析

【中图分类号】 R657.5+1 【文献标识码】 A 【文章编号】 1671-8801（2014）03-0004-01

急性胰腺炎是一种常见的消化系统疾病，极易发展成急性重症胰腺炎，往往起病急、病情较重、进展快，严重的话会病变转化为坏死性胰腺炎，从而引发败血症、呼吸衰竭等并发症，致死率极高，对患者生理及心理有严重的影响，因此早期的诊断与及时的治疗非常重要。目前血淀粉酶检测是临床诊断急性胰腺炎的常用指标，但是其特异性及敏感性偏低，常常发生诊断错误。根据相关报道急性胰腺炎患者中的尿胰蛋白酶原-2含量会明显升高，可以帮助快速筛选诊断。现在对80例急性胰腺炎患者进行尿胰蛋白酶原-2以及血淀粉酶活性测定，对比其敏感性和特异性，具体分析如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2010年3月-2O11年3月在我院急诊科就诊的80例急性胰腺炎患者，其中男性患者45例，女性患者35例，患者年龄在27岁-70岁之间，平均年龄为50岁左右，所有患者均在不同程度上表现出恶心、呕吐以及持续性上腹痛的症状，经相关的辅助检查确诊为急性胰腺炎的有42例和38例其他急腹症患者，其中重症急性胰腺炎患者有25例，轻症急性胰腺炎患者15例；12例急性胃肠炎，8例急性胆囊炎，6例急性阑尾炎，6例胆结石，6例肠梗阻。现按照患者的病情分为急性胰腺炎组和其他急腹症组，两组患者在性别、年龄以及身体状况等基本资料等方面没有明显的差异，具有统计学意义（P>0.05）。

1.2 方法

所有患者的血、尿标本均应该在急诊室内采集，先抽取5ml的空腹静脉血，从发病后第3天开始每隔2天进行采集，每次采集应该在2h内完成。应用免疫层析法检测尿胰蛋白酶原-2，试剂由芬兰OY Media Biochemical公司提供。试纸条有结合在蓝色的乳胶粒上和结合在膜上的两种尿胰蛋白酶原-2抗体；血淀粉酶是采用酶动力学法来判定，仪器是日立7180生化分析仪，试剂由中生北控生物公司提供。

1.3 诊断标准

根据中华医学会外科分会推荐的诊断标准诊断急性胰腺炎患者。尿胰蛋白酶原-2检测，如果试纸上同时出现2条蓝色线，浓度>50 ug/L时判为阳性，只出现1条蓝色线（参照线）判为阴性。血淀粉酶检测血清AMS的参考上限为100 U/L。

1.4 统计学处理

选用软件SPSS10.0对观察的数据进行统计学处理，使用t 对计量数据进行检验，χ2对计数资料进行检验，P

2 结果

42例急性胰腺炎组的尿胰蛋白酶原-2中有39例阳性，测阳性率为92.9%，血淀粉酶中有32例阳性，测阳性率为84.2%。其他急腹症组的尿胰蛋白酶原-2的测阳性率为4.8%，只有2例阳性；血淀粉酶的阳性率为26.3%，阳性10例。尿胰蛋白酶原-2的敏感性和特异性分别为92.1%、91.2%，而血淀粉酶的敏感性和特异性分别为81.2%、77.5%，急性胰腺炎组的尿胰蛋白酶原-2及血淀粉酶检测阳性率均明显高于其他急腹症组，尿胰蛋白酶原-2的敏感性和特异性均明显优于血淀粉酶，差异具有统计学意义（P

2 讨论

急性胰腺炎是临床上常见的急腹症之一，对患者的正常生活带来很大的困扰，由于该病起病比较急，进展快，早期诊断对于急性胰腺炎的治疗非常重要，目前临床上比较常用的是血淀粉酶的测定，但是胆石症、急性胃肠炎、急性胆囊炎、急性阑尾炎以及肠梗阻患者的血淀粉酶含量也会上升，因此其敏感性和特异性远远不足以应对临床的需求，近年来尿胰蛋白酶原-2凭借其较强的特异性和敏感性在临床诊断急性胰腺炎中得到广泛应用，并且筛选、诊断的准确率和很高。

胰蛋白酶原主要有胰蛋白酶原-1和胰蛋白酶原-2两种类型，主要是由胰腺生成的，其中胰蛋白酶原-2是其主要形式之一，胰蛋白酶原-2的作用机制是：一般机体在正常的情况下由于受到胰腺腺泡内胰蛋白酶的抑制在进入十二指肠前是不会被激活的，但是一旦患者的机体防御功能受到袭击，特别是急性胰腺炎病情发作时胰蛋白酶原就很容易被激活，因为肾小管很难对尿胰蛋白酶原-2进行重吸收过程从而导致血清中的胰蛋白酶原-2浓度明显增高。

本文主要分析探讨尿胰蛋白酶原-2以及血淀粉酶对急性胰腺炎诊断的特异性以及敏感性，研究尿胰蛋白酶原-2的临床诊断价值，结果表明尿胰蛋白酶原-2诊断准确率高，操作简单，是一种很好的筛选、诊断急性胰腺炎的方法，值得在临床上广泛应用和推广。

参考文献

[1]左雪梅，孙晨光.临床实验室诊断急性胰腺炎的方法评价[J].上海医学检查杂志，2010，18（5）：293-95.

[2]，征祝伦.尿胰蛋白酶原-2在急性胰腺炎诊断中的应用[J].重庆医学，2011，31（5）：408-410.

[3]中华医学会外科学会胰腺学组.急性胰腺炎的临床诊断及分级标准（1996年第2次方案）[J].中华外科杂志，1997，35（12）：773-775.

胰蛋白酶范文第4篇

[关键词] 胰腺癌；血清胰蛋白酶原-2；CA199；CA50；CA242

[中图分类号] R735.9 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）11（a）-0054-04

胰腺癌是一种起病隐匿、进展速度快、预后极差的消化系恶性肿瘤，5年生存率在所有恶性肿瘤中最低，在美国仅为6%左右，即使已行早期根治性手术切除的患者5年生存率也只有24%，但因其起病隐匿，53%的患者发现时已有远处转移，5年生存率仅为0～2%[1]。在胰腺癌早期诊断方法中，肿瘤标志物检测方法简便、费用低廉，已被广泛应用于临床。目前比较普遍应用于胰腺癌诊断的血清学肿瘤标志物有CA199、CA50、CA242等。胰蛋白酶原-2，丝氨酸蛋白酶，绝大部分由胰腺腺泡分泌，以酶原的形式分泌到胰液中，Hedstr？m等[2]的研究提示，胰蛋白酶原-2可能与胰腺癌相关，本研究采用ELISA法定量检测胰腺癌、正常对照者血清中胰蛋白酶原-2、CA199、CA50、CA242含量，应用ROC曲线探讨其在检测胰腺癌中的应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2009年12月～2011年6月总医院、2011年6月～2012年2月北京市石景山医院就诊内、外科未经治疗的胰腺癌住院患者25例为胰腺癌组，其中男14例，女11例，平均年龄（66.36±12.98）岁，入组前均未行手术及放化疗治疗，均由术后病理或影像学资料+长期随访证实。随机选取同期于总医院及石景山医院体检中心进行健康体检的35例为健康对照组，其中男20例，女15例，平均年龄（43.54±11.28）岁，均无明显上消化道症状及胰腺疾病病史；并排除其他肿瘤患者及孕妇、酗酒者、药瘾者。本研究获得上述两家医院伦理委员会伦理审查批准。

1.2 标本采集与检测

留取清晨空腹静脉全血4 ml，标本经1000×g离心后去上层血清分装至Eppendorf（EP）管冻存于-70℃，检测前1天将冻存标本于4℃冷藏室解冻，检测前取出放置室温（20℃）1 h，应用标准ELISA操作流程（双抗体夹心法）检测，采用全自动多功能酶标仪及相应检测统计软件进行分析，胰蛋白酶原-2及CA199、CA242、CA50检测试剂盒由北京永瀚星港生物技术有限公司惠赠，酶标仪为全自动多功能酶标仪（OLY- MPUS5421全自动生化分析仪）。

1.3 统计学处理

应用SPSS 16.0统计学软件处理数据，绘制受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic curve，ROC曲线），找出最佳截断点（ROC曲线上最左上方的点，此时灵敏度及特异度均较高，或根据文献设定的临界值选取临界点），因数据呈非正态分布，采用中位数、四分位数间距描述各组结果。

2 结果

各肿瘤标志物ROC曲线如图1。

图1 各肿瘤标志物ROC曲线

胰蛋白酶原-2：AUC=0.988，P

2.1 血清胰蛋白酶原-2鉴别正常人和胰腺癌的灵敏度和特异度

以点SEN 0.960（1-SPE 0.086）为最佳临界点，其对应的临界值为1.85 ng/ml，ROC曲线下面积为0.988（P

表1 两组血清胰蛋白酶原-2含量的检测值（ng/ml）

M：中位数；QL-QU：四分位数间距；Min-Max：最小值-最大值

2.2 CA199鉴别正常人和胰腺癌的灵敏度和特异度

当前通常以37 U/ml作为胰腺癌诊断临界值，本试验选取最接近点SEN 0.88（1-SPE 0.171），相应临界值为37.20 U/ml，ROC曲线下面积为0.906（P

表2 两组血清CA199含量的检测值（U/ml）

M：中位数；QL-QU：四分位数间距；Min-Max：最小值-最大值

2.3 CA50鉴别正常人和胰腺癌的灵敏度和特异度

当前通常以20 U/ml作为胰腺癌诊断临界值，本试验选取最接近点SEN 0.72（1-SPE 0.200），相应临界值为19.68 U/ml，ROC曲线下面积为0.833（P

表3 两组血清CA50含量的检测值（U/ml）

M：中位数；QL-QU：四分位数间距；Min-Max：最小值-最大值

2.4 CA242鉴别正常人和胰腺癌的灵敏度和特异度

当前通常以20 U/ml作为胰腺癌诊断临界值，本试验选取最接近点SEN 0.68（1-SPE 0.143），相应临界值为20.45 U/ml，ROC曲线下面积为0.834（P

表4 两组血清CA242含量的检测值（U/ml）

M：中位数；QL-QU：四分位数间距；Min-Max：最小值-最大值

3 讨论

胰腺癌是预后极差的恶性肿瘤，近年我国胰腺癌发病率明显上升，且多数胰腺癌确诊时已属中晚期，失去了最佳治疗时机，预后差[3]。Pelaez-Luna等[4]回顾性分析45例胰腺癌患者114次CT扫描（胰腺癌诊断时或诊断前），发现在临床诊断胰腺癌前6个月做CT扫描，部分未检测到病变，部分为可切除性病变，但有临床症状患者几乎均属于不可切除性胰腺癌，提示在胰腺癌临床诊断前，仅有6个月的时间窗，此时病灶多数可切除。但多数无症状者，一般不会就诊，故“因症就诊”者是不太可能检测到真正意义上的早期可治愈的胰腺癌的，必须对无症状者进行筛查才有可能发现早期胰腺癌[5]。肿瘤标志物是指在肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞所产生或分泌并释放到血液、细胞及体液中，反映肿瘤存在和生长的一类物质，已被广泛应用于临床，在肿瘤的诊断和预后判断中发挥了巨大作用。糖类抗原CA199是一种非特异性的肿瘤相关抗原，在胰腺癌患者血清中升高最为显著[6]，是当前国内外应用最广泛的胰腺癌肿瘤标志物[7]。CA50是一种缺少岩藻糖残基碳水化合物的糖蛋白，其构型与CA199有相似的抗原决定簇，Lewis抗原阳性或阴性的人种均能检测出，故认为CA50对肿瘤的识别谱较CA199更为广泛[8]。CA242主要存在于胰腺和结肠恶性肿瘤细胞中，是不同于CA199和CA50的唾液酸化糖酯类抗原，它的单克隆抗体与Lewis-a血型物质及唾液酸化的半乳糖苷均不发生反应，在胰腺癌中有较高的特异度、灵敏度。胰蛋白酶原-2，绝大部分以胰腺腺泡酶原的形式分泌到胰液中，并在肠内被肠激酶激活。近年来发现，胰蛋白酶原-2在一些肿瘤细胞中呈高表达[9-12]。本试验胰腺癌组胰蛋白酶原-2含量明显高于正常组，提示血清胰蛋白酶原-2与胰腺癌关系密切。本文采用ROC曲线对胰蛋白酶原-2、CA199、CA50、CA242在诊断胰腺癌中进行分析，结果显示，胰蛋白酶原-2鉴别胰腺癌与正常人曲线下面积为0.988，以1.85 ng/ml为临界点，灵敏度为96%，特异度为91.4%。CA199鉴别胰腺癌与正常人曲线下面积为0.906，以37.2 U/ml为临界点，灵敏度为88%，特异度为82.9%。CA50鉴别胰腺癌与正常人曲线下面积为0.833，以19.68 U/ml为临界点，灵敏度为72%，特异度为80%。CA724鉴别胰腺癌与正常人曲线下面积为0.834 U/ml，以20.45 U/ml为临界点，灵敏度为68%，特异度为85.7%。

本试验中可见4种标志物ROC曲线下面积，胰蛋白酶原-2最高，其次为C199，CA242和CA50接近，均>0.5，提示以上肿瘤标志物用于诊断胰腺癌均有一定的临床意义。据文献报道及临床试验观察，提示各自有其局限性：CA50无器官特异度，多种肿瘤中均可增高，尤其是胃肠癌，在肝胆疾病患者，尤其是黄疸中也升高[7]，因此单独测定CA50对胰腺癌的诊断意义较小。Kawa等[13]认为，CA242比CA199和CA50更特异，在胰腺炎、慢性肝炎和肝硬化等良性疾病中也很少升高，并且不受肝实质损害、胆汁淤积的影响，但也有文献报道CA242、CA50的灵敏度和特异度均不优于CA199[14]。尽管CA199是目前对胰腺癌灵敏度最好的标志物[7]，但在Lewisa阴性基因人群中无法表达，因此此血清型的肿瘤患者表现为CA199阴性。此外，急慢性胰腺炎、胆囊炎、胆管阻塞、肝炎、肝硬化等疾病中，CA199也有不同程度的升高，且在分化差的肿瘤中表达也较低[15-16]。目前鲜有关于胰蛋白酶原-2与胰腺肿瘤大小、病情严重程度、病理分期相关性，及是否能预测胰腺癌预后、评价治疗效果的研究报道，且有文献报道[17]胰蛋白酶原-2在急性胰腺炎患者血清中呈现高表达，因此，胰蛋白酶原-2也非胰腺癌绝对理想指标。目前尚未发现单一理想诊断胰腺癌的肿瘤标志物，近年倾向于将灵敏度、特异度较高的肿瘤标志物联合检测。

[参考文献]

[1] Siegel R，Ma J，Zou Z，et al.Cancer statistics[J].CA Cancer J Clin，2014，64（1）：9-29.

[2] Hedstr？m J，Kemppainen E，Andersen J，et al.A comparison of serum trypsinogen-2 and trypsin-2-alpha1-antitrypsin complex with lipase and amylase in the diagnosis and assessment of severity in the early phase of acute pancreatitis[J].Am J Gastroenterol，2001，96（2）：424-430.

[3] Long H，Li Q，Wang Y，et al.Effective combination gene therapy using Ceacam6 -shRNA and the fusion suicide gene yCDgly TK for pancreatic carcinoma in vitro[J].Exp Ther Med，2013，5（1）：155-161.

[4] Pelaez-Luna M，Takahashi N，Fletcher JG，et al.Resectability of presymptomatic pancreatic cancer and its relationship to onset of diabetes：a retrospective review of CT scans and fasting glucose values prior to diagnosis[J].Am J Gastroenterol，2007，102（10）：2157-2163.

[5] 李兆申.胰腺癌早期诊断研究现状及展望[J].临床肝胆疾病杂志，2010，5（26）：451-458.

[6] Banfi G，Bravi S，Ardemagni A，et al.CA199，CA242 and CEA in the diagnosis and follow-up of pancreatic cancer[J].Int J Biol Markers，2006，11（2）：77-81.

[7] Szajda SD，Waszkiewicz N，Chojnowska S，et al.Carbohydrate markers of pancreatic cancer[J].Biochem Soc Trans， 2011，39（1）：340-343.

[8] 赖建平，孔令山，邬爱珍，等.CA50、CA199、CEA联检在胰腺疾病诊断中的价值[J].放射免疫学杂志，2004，17（3）：168-169.

[9] Miyata S，Miyagi Y，Miyagi E，et al.Stimulation of cellular growth and adhesion to fibronectin and vitronectin in culture and tumorigenicity in nude mice by overexpression of trypsinogen in human gastric cancer cells[J].Clin Exp Metastases，1998，16（7）：613-622.

[10] Miyata S，Koshikawa N.Expression of trypsin in human cancer cell lines and cancer tissues and its tight binding to soluble form of Alzheimer amyloid precursor protein in culture[J].J Biochem，1999，125（6）：1067-1076.

[11] Hirahara F，Miyagi Y.Trypsinogen expression in human ovarian carcinomas[J].Int J Cancer，1995，63（2）：176-181.

[12] Kawano N，Osawa H，Ito T，et al.Expression of gelatinase A，tissue inhibitor of metalloproteinases-2，matrilysin，and trypsin（ogen） in lung neoplasms：an immunohistochemical study[J].Hum Pathol，1997，28（5）：613-622.

[13] Kawa S，Tomoo M，Hasebe O，et parative study of CA242 and CA199 for the diagnosis of pancreatic cancer[J].Br J Cancer，1994，70（3）：481-486.

[14] Goonetilleke KS，Siriwardena AK.Systematic review of carbohy-drateantigen（CA199）as a biochemical marker in the diagnosis of pancreatic cancer[J].Eur J Surg Oncol，2007，33（3）：266-270.

[15] 王继恒，高革，李浩然，等.血清CA199水平在胆总管结石中的临床意义[J].胃肠病学和肝病学杂志，2010， 19（7）：659-660.

[16] 陈达，樊艳华.CA199在胰腺癌中的应用价值及局限性[J].临床肝胆病杂志，2013，29（3）：239-241.

胰蛋白酶范文第5篇

通信作者：祝益民，Email： cszhuyimin@163.com 

【摘要】目的通过测定重症患儿粪弹性蛋白酶-1（FE-1），探讨FE-1与胰酶、脓毒症及疾病严重程度之间的关系。方法分析2013年7月至2014年3月湖南省儿童医院PICU收治的402例重症患儿，入住PICU 24 h内留取成形大便标本，根据FE-1质量分数分组：>200 μg/g为胰腺外分泌功能正常组（A组，n=300），（100～200）μg/g为轻中度胰腺外分泌功能不全组（B组，n=52），<100 μg/g为重度胰腺外分泌功能不全组（C组，n=50）。分析各组与胰酶变化、脓毒症及其严重程度，及其与休克、器官功能障碍个数、PCIS评分、SOFA评分、APACHE Ⅱ评分之间的关系。计数资料采用χ2检验。计量资料非正态分布或方差不齐，以中位数和四分位数[M（P25，P75）]表示，行非参数检验，有统计学意义时行多个样本两两比较的秩和检验。相关性采用Spearman相关分析。结果（1）A、B两组间血脂肪酶升高差异有统计学意义（P<0.01）。（2）非脓毒症患儿288例，脓毒症114例，两组FE-1水平差异具有统计学意义（P<0.05）。脓毒症患儿分为一般脓毒症组、严重脓毒症组、脓毒性休克组，与非脓毒症组四组间FE-1差异具有统计学意义（P<0.01）。（3）A、B、C三组患儿在脓毒症与非脓毒症所占比例分别为65.79% vs.78.13%，15.79% vs.11.80%， 18.42% vs.10.07%，B、C组在脓毒症中所占比例高于非脓毒症且逐渐升高。（4）FE-1质量分数的总体趋势随脓毒症严重程度而降低，非脓毒症组与一般脓毒症组，严重脓毒症组与脓毒性休克组两两比较差异无统计学意义（P>0.05），其余组两两比较差异均具有统计学意义（P<0.01）。（5）三组间休克、器官功能障碍个数、MODS≥3个、PCIS评分、SOFA评分、APS评分比较差异均有统计学意义（P<0.05）。随着FE-1质量分数降低，器官功能障碍个数、SOFA评分、APS评分呈升高趋势（rs1 =-0.194，P=0.000;rs2=-0.348，P=0.000;rs3 =-0.176，P=0.000），PCIS评分呈下降趋势（rs4= 0.185，P=0.000）。结论胰腺外分泌功能受损与脓毒症存在相关性，这种胰腺功能障碍在轻症脓毒症患者可能并不显著，但随脓毒症严重程度加重或病情严重程度加重其发生率逐渐升高。 

【关键词】粪弹性蛋白酶-1;胰腺外分泌功能;脓毒症;重症;儿童 

Clinical study of the fecal elastase-1 levels in critically ill children 

Wu Qiong*，Lu Xiulan，Zhu Yiming，Qiu Jun.*Emergency Center，The Pediatric Academy of University of South China;Hunan Children''s Hospital，Changsha 410007，China 

Corresponding author：Zhu Yiming，Email： cszhuyimin@163.com 

【Abstract】ObjectiveTo determine the fecal elastase-1 （FE-1） in critically ill children in order to investigate the relationships between FE-1 and trypsin， sepsis as well as the severity of the disease.MethodsTotally 402 critically ill children admitted in pediatric intensive care unit （PICU） of Hunan Children’s Hospital from July 2013 to March 2014 were studied. The formed stool of patients was collected during the first 24 h after admission. Subjects were divided to 3 groups according to FE-1 concentration： >200 μg/g for normal pancreatic exocrine function （group A， n=300）， 100-200 μg/g for mild to moderate exocrine pancreatic insufficiency （group B， n=52）， <100 μg/g for severe pancreatic exocrine insufficiency （group C， n=50）. The analyses of the relationships between FE-1 and pancreatic enzymes， sepsis severity， shock， the number of organ dysfunction， PCIS （pediatric critically ill score）， SOFA score， and APACHE Ⅱ score were carried out. Chi-squared test was used for data statistics. The median and four percentile interval were used for the measurement data of abnormal distribution or non-neat variance， the rank sum test of each two of multiple samples compared each other was used for non-parametric test， only when it was statistically significant， and the Spearman method of correlation analysis was used for correlation analysis.Results（1） There was significant difference in serum lipase between group A and group B （P<0.01）. （2） There was statistical difference in FE-1 level between sepsis group and non-sepsis group （P<0.05）. Children with sepsis were divided into three groups according to the severity of sepsis： mild sepsis group， severe sepsis group and septic shock group. There were significant difference in FE-1 level among different severities of sepsis groups and as well as non-sepsis group （P<0.01）. （3） The proportions of FE-1 in septic children of A， B and C groups in comparison with those in non-septic children of three groups were 65.79% vs.78.13%， 15.79% vs.11.80%， 18.42% vs.10.07%， respectively. The proportions of FE-1 in septic children of B and C groups escalated were higher than those in children without sepsis. （4） The general trend in FE-1 concentrations varied along with the severity of sepsis. There were no significant differences in FE-1 concentration between non-sepsis group and mild sepsis group， and between severe sepsis group and septic shock group， but other paired comparisons between the four groups had statistical significant （P<0.01）. （5） Along with FE-1 level decreased， the number of organ dysfunction， SOFA score， APS score （This is a part of APACHE Ⅱscore and other part， CPS， is excluded） increased and PCIS score decreased （rs1=-0.194， P=0.000; rs2=-0.348， P=0.000; rs3=-0.176， P=0.000; rs4=0.185， P=0.000）. ConclusionsPancreatic exocrine function damage is associated with sepsis， the pancreatic dysfunction in patients with mild sepsis may not be significant， but its incidence increases gradually with the development of sepsis or with the deterioration of the disease.　【Key words】Fecal elastase-1;Pancreatic exocrine function;Sepsis;Critically ill;Children 

国内外学者已通过临床研究、病理检查、动物实验。分别从器官系统、细胞组织、基因水平证实脓毒症与胰腺外分泌功能受损密切相关^[1-4]。胰腺作为远程器官积极参与了脓毒症的急性期炎症反应，脓毒症可继发胰腺损害，出现胰腺腺泡细胞损伤而导致胰腺外分泌功能障碍。Hardt等^[5]通过荟萃分析亦指出，危重症继发的胰腺损伤胰腺形态学改变往往轻微，仅5%～35%有胰腺影像学改变，而56%存在胰腺外分泌功能障碍。本研究通过测定重症患儿粪弹性蛋白酶-1（fecal elastase-1，FE-1）间接评估其胰腺外分泌功能，并分析其与胰酶、脓毒症及疾病严重程度之间的关系。 

1资料与方法 

1.1一般资料 

以2013年7月至2014年3月入住湖南省儿童医院儿科重症监护病（PICU）的402例重症患儿为研究对象，入选标准：①年龄>28 d;②小儿危重病例评分分值≤90，或者小儿危重病例评分分值>90但符合美国危重医学会和美国儿科学会制定的PICU入出院初步指南标准。 

分组根据FE-1质量分数分组：>200 μg/g为胰腺外分泌功能正常组（A组），100～200 μg/g为轻中度胰腺外分泌功能不全组（B组）;<100 μg/g为重度胰腺外分泌功能不全组（C组）^[6]。 

1.2研究方法 

入院24 h内对所有患儿进行小儿危重病例评分（PCIS），急性生理学和慢性健康评分（APACHEⅡ，取APS分值，年龄评分和CPS分值不计）、全身性感染相关性器官功能衰竭评分（SOFA） 。收集入住PICU后第1次成形大便以测FE-1值。 

1.3FE-1检测方法 

粪便储存于-80 ℃冰箱，检测前置于室温。FE-1的质量分数检测试剂盒购自德国ScheBo.Tech公司。检测原理为双抗夹心的酶联免疫法（ELISA）。粪便于实验前1 d提取过夜，使其充分溶解于提取液。次日将粪便提取液稀释，分别加入96 孔酶标板，同时进行标准曲线和质控的测定。依照试剂盒检测步骤进行实验，最后于405 nm 波长读取吸光度值。绘制标准曲线，计算FE-1质量分数（μg/g）。FE-1质量分数正常值为>200 μg/g。所有样本由一名实验人员进行检验。 

1.4统计学方法 

采用spss 18.0统计软件包处理数据。采用描述性分析，计数资料采用χ2检验。计量资料为非正态分布或方差不齐时，以中位数和四分位距M（P25，P75）表示，行非参数检验中的 Wilcoxon 秩和检验，Mann-Whitney法（U检验）或Kruscal-Wallis法（H检验），有统计学意义时行多个样本两两比较的秩和检验。双变量不符合正态分布时采用Spearman相关分析。以P<0.05为差异具有统计学意义。 

2结果 

2.1危重患儿一般资料 

402例危重患儿中，男性264例（65.67%），女性138例（34.33%）。年龄1个月至13岁8个月，中位数1岁（4个月至2岁）。其中0～1岁203例（50.50%），1～3岁107例（26.62%），4～6岁57例（14.18%），7岁以上35例（8.71%）。根据FE-1质量分数分组，A组（>200 μg/g）300例（74.63%），B组（100～200 μg/g）52例（12.94%），C组（<100 μg/g）50例（12.44%）。三组年龄、性别差异均无统计学意义（χ2=3.386，10.233，P>0.05）。 

2.2FE-1水平与胰酶的关系 

三组间血淀粉酶≥正常值、血淀粉酶≥正常值2倍、血淀粉酶≥正常值3倍、尿淀粉酶≥正常值比较差异均无统计学意义（P>0.05），而血脂肪酶升高在三组间差异有统计学意义（P<0.01），进一步行三组间两两比较可知，A、B两组间差异有统计学意义（P<0.01），见表1。 

2.3FE-1与脓毒症的关系 

402例重症儿童中非脓毒症患儿288例（71.64%），脓毒症患儿114例（28.36%），两组FE-1水平差异具有统计学意义（P<0.05），见表2。进一步将脓毒症患者按严重程度分为一般脓毒症组86例（21.39%），严重脓毒症组16例（3.98%），脓毒性休克组12例（2.99%），随脓毒症程度加重，A组比例下降，B、C组比例上升，严重脓毒症组、脓毒性休克组尤为明显，四组间FE-1水平差异具有统计学意义（P<0.01），见表3。 

3讨论 

粪弹性蛋白酶-1全部经胰腺腺泡分泌，生理情况下胰液中的质量浓度约170～360 μg/mL，约占所有胰酶的6%^[7]。FE-1具高度稳定性，在肠道排泄过程中主要与胆盐结合而不被降解，粪便中的浓度是胰液中的5～6倍^[8]，故FE-1与胰液中的弹性蛋白酶有很好的相关性，这是其与糜蛋白酶等其他胰酶的显著不同点。此外，室温下能保持稳定长达1周^[7]。Walkowiak等^[9]比较了检测胰腺外分泌功能的直接试验和各种间接试验法，指出FE-1试验无痛苦、用时和花费少，且在间接测试中灵敏度及特异度最高，是最好的胰腺外分泌功能测定方法。Wali等^[10]亦指出，FE-1是适用于儿童的最简单最可行的间接评估胰腺外分泌功能的方法。目前国内外公认标准：FE-1正常值>200 μg/g，100～200 μg/g提示轻中度胰腺外分泌功能不全;100 μg/g以下提示重度胰腺外分泌功能不全。这在2周龄以上的儿童均适用^[11]。

胰腺是人体第二大消化腺体，胰腺腺泡分泌胰液，参与胰腺外分泌功能，腺泡损伤可导致胰腺外分泌功能障碍，胰酶分泌减少。Hardt等^[5]的荟萃分析指出危重症继发的胰腺损伤约56%存在胰腺外分泌功能障碍。目前国内外均无胰腺损伤的金标准，反映胰腺外分泌功能的指标血淀粉酶、血脂肪酶、尿淀粉酶常用于分析胰腺损伤。本研究中，血淀粉酶变化在不同水平FE-1组间差异无统计学意义，考虑与以下因素有关：血淀粉酶特异性较差、高峰出现时间短且在严重病例常常不升反降。Vaccaro等^[12]通过对大鼠腹腔灌注内毒素而直接损伤胰腺腺泡细胞，观察到电镜下许多的空泡变性及严重的核改变，胰腺炎相关蛋白-1（PAP-1）呈现高表达，而淀粉酶mRNA水平表达下降。Tribl等^[4]通过建立铜绿假单胞菌肺炎引起的脓毒症大鼠模型，亦发现淀粉酶和胰蛋白酶mRNA水平下调，并推测这可能有助于保护腺泡细胞避免酶过量造成的损害，可能是腺泡细胞分泌功能障碍的部分自适应变化^[13]。尿淀粉酶与FE-1水平间亦未见有明显相关性，考虑与尿液稀释或浓缩的影响有关，故其用于胰腺损伤诊断的价值低。而血脂肪酶的改变在三组间差异有统计学意义，考虑与脂肪酶高峰持续时间长且特异性相对较高有关。进一步的组间两两比较可知，FE-1正常组与FE-1轻度下降组间差异有统计学意义（P<0.01），而FE-1下降明显时差异无统计学意义（P>0.05），推测可能与严重胰腺外分泌功能不全时胰酶的分泌下降明显有关。但由于本研究未做进一步追踪复查，FE-1与胰酶的关系还有待进一步探讨。 

本研究证实，胰腺外分泌功能受损与脓毒症密切相关。FE-1正常组患儿非脓毒症所占比例（78.12%）高于脓毒症（65.79%），而FE-1下降组患儿脓毒症所占比例均高于非脓毒症且随胰腺外分泌功能障碍程度加重而呈升高趋势（分别为15.79% vs.11.81%，18.42% vs.10.06%）。同时，FE-1水平的总体趋势随脓毒症严重程度而逐渐降低，非脓毒症组与严重脓毒症组、脓毒性休克组两两比较有显著差异，脓毒症组与严重脓毒症、脓毒性休克组两两比较有显著差异，均说明胰腺外分泌功能不全随脓毒症程度加重发生率升高。而非脓毒症组与一般脓毒症组之间比较差异无统计学意义，提示这种胰腺功能障碍在一般脓毒症患者可能并不显著。Tribl 等^[4]研究证实，胰腺作为远程器官积极参与了脓毒症的急性炎症反应过程。胰腺腺泡直接受损导致的坏死或自身的凋亡可能是胰腺外分泌功能不全的重要因素。研究常用脓毒症动物模型多是通过对大鼠腹腔灌注内毒素而直接损伤胰腺腺泡细胞建立。Kovacs等^[14]通过胰腺组织病理学观察发现，部分因严重脓毒症或脓毒性休克死亡患者有脂肪组织出血和急性出血性胰腺坏死。Grulke 等^[15]电镜下观察到胰腺损伤时胰腺外分泌腺有轻微或严重空泡性退化、线粒体隆起、颗粒酶原及内质网肿胀。 

研究显示，出现MODS、休克时严重外分泌功能不全的发生率明显升高。随多器官功能衰竭和休克的出现血流量重新分配，胰腺血流量显著减少，胰腺对缺血敏感且耐受差，这可能是胰腺外分泌功能障碍的另一关键因素。Hiltebrand等^[16]对严重脓毒性休克猪模型测定各脏器的血流量发现，血液灌注在胰腺下降最明显（56%）。病理学亦证实休克导致了胰腺外分泌功能损伤，Grulke等^[15]在对休克马胰腺损伤的观察中发现，电镜下胰腺外分泌腺有轻微或严重空泡性退化、线粒体隆起、颗粒酶原及内质网膨胀。Tribl 等^[13]对脓毒症、脓毒性休克患者以促胰液素—缩胆囊素试验直接检测胰腺外分泌功能的研究显示，与健康对照组相比，脓毒症患者淀粉酶、糜蛋白酶、胰蛋白酶和十二指肠液碳酸氢盐的分泌均受损，胰蛋白酶含量在脓毒症与脓毒性休克患者之间有明显差异（P<0.05）。进一步证实胰腺外分泌功能障碍与脓毒症相关，且在出现脓毒性休克时更严重。 

同时，相关性分析显示，随着FE-1水平的下降，器官功能障碍个数、SOFA评分、APS评分呈升高趋势，PCIS评分呈下降趋势，提示胰腺外分泌功能不全的发生发展与器官功能障碍的增多及病情的加重存在一定相关性，以上结果与Tribl等^[13]的研究基本一致。FE-1水平越低可能提示病情越重;反之，病情越严重，胰腺外分泌功能不全发生率越高。   本文由wWw.DyLw.NeT提供，第一论 文 网专业教育教学论文和以及服务，欢迎光临dYlw.nET

综上，胰腺外分泌功能受损与脓毒症存在相关性，这种胰腺功能障碍在轻症脓毒症患者可能并不显著，但随脓毒症严重程度加重或病情严重程度加重其发生率逐渐升高。 

参考文献 

[1]肖政辉， 卢秀兰， 刘萍萍， 等. 重症患儿高淀粉酶血症相关因素分析[J]. 中华急诊医学杂志， 2014， 23（6）： 1094-1098. 

[2] 胡限， 祝益民， 陈卫坚，等.脓毒症与非脓毒症死亡患儿胰腺功能的病理特征分析[J].中华急诊医学杂志，2014，23（2）：157-162.