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七夕表达爱

前言:想要写出一篇令人眼前一亮的文章吗?我们特意为您整理了5篇七夕表达爱范文,相信会为您的写作带来帮助,发现更多的写作思路和灵感。

七夕表达爱范文第1篇

2、心儿为你而沉醉,此生独爱你的美;心儿为你而高飞,尝尽爱情好滋味;心儿为你而劳累,不愿让你太疲惫;心儿

3、七夕节快到了,是每对恋人期盼了一年的日子,也是感情萌芽和释放的绝好日子。很多蠢蠢欲动的心会在这天表白

4、这一生遇上你是我最大的幸福,我的宝贝,你好吗?我想,我除了很想你,还是想你,我很爱很爱你!!!这特别的

5、雨滴会变成咖啡,种子会开出玫瑰,旅行是一种约会,不是没人陪,只怪咖啡喝不醉,雨一碰就碎,只有你依然完

6、悠悠银河人尽望,牛郎织女情满膛。千里鹊桥来相会,葡萄架下诉忠肠。我劝天下有情人,忙碌莫把祝福忘。祝七

7、从见你的第一眼开始,我就发现终于找到我的另一半了!我要给她一生的幸福!从未动摇过!我坚信一生不动摇!

8、给爱一张不老的容颜,让相爱过都终身不变;给爱一个不悔的誓言,让相爱过都彼此思念;给爱一片辽阔的蓝天,

9、再好的东西都有失去的一天。再深的记忆也有淡忘的一天。再爱的人也有远走的一天。再美的梦,也有苏醒的一天

10、人生就像坐火车,爱情停停走走,朋友去去留留,有人中途下车有人半路上车,多少人在你生命列车与你擦肩而过

11、即使有一天,你的步履变得蹒跚,青丝变成白发,红润的脸上爬满了皱纹,但我仍要携着你的手,漫步在夕阳的余

12、我向上天许了一个愿望,希望能把我一天的快乐平均放到你今年生活的每一天,这样,在你今年生活的每一天里都

13、我不会爱你一万年,我会爱你每一天;我不会爱你总浪漫,我会爱你到永远;我不会爱你常新鲜,我会爱你手相挽

14、我愿用上世五百次回眸换来与你插肩而过,我愿用一万年的等待换来与你相守今生!!!

15、爱你的每一刻,心总是为你而跳动。你的每个笑容、你的每一个动作都带着缠绵的爱意。白天黑夜总是为你的情意

16、对你,爱可爱,十分爱;看你,美可美,十分美。庆幸在茫茫人海,遇到光芒四射的你,为我的爱指引了方向。愿

17、若你流泪,湿的是我的脸,若你难过,苦的是我的心,若你开心,幸福快乐属你我!

18、千里相思信息牵,你我恩爱复年年;比翼双飞共连理,不羡鸳鸯不羡仙。

19、我用那 K歌之王 的歌声唱着 你是未来 ,我 那么爱你为什么 ?原来是 我不够爱你 ,请让我继续 爱下

20、想你的心就像是蛀牙,时不时的想你,时不时的疼。我疼着,却舍不得从心里拔去对你的思念,宁愿就这么疼着。

21、也许我不太会讨你欢心,可是我真的很用心。也许我不太懂得浪漫,可是我却从不给你任何羁绊。也许我对你的爱

22、可爱的你,偷走了我的情,盗走了我的心,我决定告上法庭,该判你什么罪呢?法官翻遍所有的犯罪和案例,最后

23、就算时间停止变换,我仍不能和你分散;就算海水不再蔚蓝,我仍不能和你分开。爱你的心,永不摇摆。哪怕花草

24、岁岁年年月东升,牛郎伴着织女星,万千里路心图腾,郎耕女织为相逢,期盼花好月圆夜,遥寄银河诉衷情,沉舟

25、牛郎钞票没几个,房子堪称是草窝,时而少吃又没喝,织女依然会执着,真爱千古来传说,七夕心情多快乐,学习

26、流不尽的是甜蜜的泪,唱不够的是爱恋的歌,品不够的相爱的酒,看不够的是你的美。七夕节,酒不醉人人自醉,

27、君可见银河之水隔情侣,绵绵情思似江水;君可见鹊桥两岸照相思,牛郎织女长相守;人生得意需爱情,莫使七夕

28、爱需要时间,一点点成长;爱需要空间,一点点距离。爱是找到一个平衡点,紧相拥,但又能喘得过气;在一起,

29、七夕,几许相思泪;七夕,佳人心相随。七夕,天地唱团圆,七夕,爱情是最美,祝天下有情之人把手牵,无情之

30、天上牛郎会织女,地上七夕又一年。喜鹊搭桥星满天,真情总被相思扰。眼前若有珍惜人,切莫错过悔终生。有情

31、七夕到了,送你份精美礼品:一条七 喜 短信,祝你心喜情喜事喜业喜生活喜感情喜一切都喜,笑如晨曦,乐如

32、佳节又到,短信一条,祝工作顺利,快乐每秒,开心常笑,心情愉快身体好,大把大把赚钞票,没爱的爱情快来到

33、这是一条王母娘娘赐予的短信,凡是读到它的人将终生幸福,恋爱中的情侣将一生相爱,单身男女将遇美满爱情,

34、我把问候准备好,它却给风吹去;我把祝福准备好,它却被水冲走;今天为了把祝愿顺利给你,我把它交给了牛郎

35、七夕了,愿有情人的给爱情加密,情感保鲜,永远幸福;没情人的,积极进取,奋发图强,早日甜蜜,祝天下痴情

36、七夕不偷懒,爱你是必然,吻吻你的脸,投掷感情弹,悄悄把手牵,释放浪漫烟,爱意来侵犯,霸占你心田,七夕

37、假如真的有鹊桥。我要跟你走到桥的尽头,然后把桥拆了,毫不让你走。愿意吗?

38、点点飞星传情,片片纤云弄巧,脉脉月华如练,悠悠又见鹊桥。天淡银河垂地,相思无计回避。纵然千山万里,寄

39、天边漂浮的是白云,人间普撒的是关爱;鹊桥相约的是情侣,树下共度的是恋人;有你,有我,就有真爱,美丽的

40、鹊桥是银河的传奇,你是我心中的传奇。浪漫缘分是上天的安排,爱情神话是永恒的未来。许多的奇迹只有相信才

41、喜悦是因为你,悲伤也是因为你。无论黑夜白昼,思念里从未忘却的就是你。你掌管着我世界的美丽,这一生爱的

42、七夕将至,送你一支七色花:红色是吉祥,蓝色是如意,绿色是生机,黄色是幸运,橙色是甜蜜,粉色是快乐,紫

43、做你自己,说出你的感受。因为那些对你重要的人不会介意,而那些介意的人对你并不重要。

44、花儿有个希望,希望天空给它阳光;白云有个希望,希望风带它一起飞翔;蜜蜂有个希望,希望四季都有花香;我

45、红色花儿表吉祥,橙色花儿表甜蜜,黄色花儿表幸运,绿色花儿表生机,青色花儿表幸福,蓝色花儿表如意,紫色

46、七夕老公准则:收入全部上交,家务主动承包,事事请示汇报,处处去向明了,应酬统统推掉,加班全部取消,礼

47、七夕来临之际,送你一棵枝繁叶茂的爱情树,上面结满开心果幸运梅富贵枣温馨李幸福桃美满梨兴旺菊快乐糖吉祥

48、你的照片放在我的办公桌上,清晨看着你,上午看着你,中午看着你,下午看着你,傍晚看着你,晚上看着你。咕

七夕表达爱范文第2篇

目的 探讨真核细胞起始因子4E(eIF4E)在大肠癌组织中的表达,eIF4E与大肠癌发生、发展、临床病理特征及预后间的关系。方法 采用免疫组化法检测60例大肠癌组织中eIF4E的表达情况,以癌旁正常组织和大肠腺瘤各20例作对照。结果 大肠癌组织、癌旁正常组织和大肠腺瘤组织中eIF4E阳性表达率分别为91.7%、10%和90%,eIF4E阳性表达在不同性别、年龄、腺瘤史及肿瘤家族史患者间未见统计学意义,不同肿瘤部位、大小及分化程度、临床分期及有无淋巴结转移的eIF4E阳性表达差异也未见统计学意义(P>0.05),但肿瘤浸润深度不同eIF4E阳性表达不同(P<0.05)。结论 大肠癌组织中存在着eIF4E蛋白高表达现象,eIF4E阳性表达与患者性别、年龄、腺瘤史、肿瘤家族史、病变部位、肿瘤大小、病理分化程度、临床分期及淋巴结转移无关,与浸润深度有关(P<0.05)。

【关键词】 大肠癌;真核细胞起始因子4E;免疫组织化学

Expression of eIF4E in Human Colorectal Cancer

(The Affiliated Hospital of Ningxia Medical College,Yinchuan 750004)

Abstract:Objective To study the expression of Eukaryotic Initiation Factor 4E(eIF4E)in human colorectal cancer and its relationship to clinical pathologic feature.Methods The express of eIF4E in 60 cases with colorectal cancer were examined by immunohistochemical assay.The normal tissue of adjacent to cancer and large intestine adenomas(20 cases)were served as a contral group.Results The positive expression rates of eIF4E in the colorectal cancer tissues,the normal tissues of adjacent to cancer,and the large intestine adenoma tissues were 91.7%,10%,and 90% respectively.Compared colorectal cancer tissue with the normal tissue of adjacent to cancer,there was a significant difference(P<0.05);compared large intestine adenoma tissue with the normal tissue of adjacent to cancer,there was a significant difference(P<0.05);The positive expression was associated with invasiveness depth,but not related to patients' gender,age,profession,family history,location of cancer,tumor size,histological differentiation,lymph node metastasis and Dukes'stage.Conclusion eIF4E was over-expressed in colorectal cancer.

Key words:colorectal cancer;eIF4E;immunohistochemistry

近年来,真核细胞起始因子4E(eukaryotic initiation factor 4E,eIF4E)与肿瘤的关系日益受到重视。eIF4E即mRNA帽结合蛋白,在蛋白质合成的起始阶段起重要调控作用,是蛋白质合成的限速因子,参与细胞生长调节,并具有抗凋亡活性[1-4]。有关eIF4E在大肠癌方面的研究尚少,本研究通过检测eIF4E在大肠癌组织中的表达情况,探讨其在大肠癌发生、发展中的作用。

1 资料与方法

1.1 临床资料

宁夏医学院附属医院2001—2003年收住且随访资料完整60例大肠癌患者,均经病理组织学确诊。其中男36例,女24例,年龄26~74岁,中位年龄56岁。有肿瘤家族史7例,大肠腺瘤病史10例。肿瘤部位:直肠21例,乙状结肠12例,升结肠17例,横结肠3例,降结肠7例。组织学类型按WHO国际肿瘤学分类标准,其中:低分化腺癌17例,高中分化腺癌43例。浸润深度:浆膜内9例,浆膜外51例。肿瘤大小:最长径≤5cm者32例,>5cm者28例。按我国大肠癌Dukes分期标准进行临床分期:A期6例,B期33例,C期11例,D期10例。术后发现有淋巴结转移16例,无淋巴结转移44例;远处转移9例。根治性切除50例,姑息性切除10例。根治术后出现复发转移12例。所有患者术前均未接受化疗、放疗或针对肿瘤的非手术治疗。病例均随访2年以上,随访率100%;尚存活46例,死亡14例。取癌旁正常组织和大肠息肉各20例作为对照。

1.2 方法

兔抗人eIF4E多克隆抗体购于CST公司,DAB及免疫组化Elivision plus广谱试剂盒均购于福州迈新生物技术开发有限公司。所有标本经10%福尔马林固定,石蜡包埋、连续切片4μm厚,脱蜡水化。经微波炉热修复和3%H2O2处理后,加eIF4E抗体4℃过夜。PBS洗片后加入第二抗体室温下孵育30min。PBS洗片后加入DAB显色液,光学显微镜显色,苏木素复染,脱水,封片。用PBS液代替一抗作阴性对照,用已知的肺癌阳性片作阳性对照。

1.3 结果判断

eIF4E定位于细胞浆,以细胞浆中出现棕黄色颗粒,而背景清晰为阳性。高倍镜下取10个不同视野,每个视野计数100个细胞,取平均值。结合阳性细胞所占百分比和染色强度进行半定量分析[5]:染色强度按下列标准评定:阴性为0分,π淡黄色为1分,棕黄色为2分,棕褐色为3分;染色的阳性细胞所占百分比评定:阴性为0分,阳性细胞数≤25%为1分,26%~50%为2分,51%~75%为3分,>75%为4分。综合染色细胞百分比及染色强度分为三级:0~3分为阴性表达(-);≥4分为阳性表达(+)。

1.4 统计学方法

数据处理采用SPSS 13.0统计软件,χ2检验及Kaplan-Meier法,P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 eIF4E在大肠癌组织、大肠腺瘤及癌旁正常组织中的表达

eIF4E在大肠癌组织及大肠腺瘤组织的表达较癌旁组织高(P<0.05);大肠癌组织与大肠腺瘤组织差异无统计学意义(P>0.05),详见表1,免疫组化表达见图1~3(见封2)。表1 eIF4E在三种组织中表达水平的比较(略)

2.2 eIF4E表达与大肠癌一般临床特征的关系

不同性别、年龄、腺瘤史及肿瘤家族史患者的eIF4E阳性表达差异未见统计学意义(P>0.05),详见表2。表2 eIF4E的表达与大肠癌患者一般临床特征的关系(略)

2.3 eIF4E表达与大肠癌病理特征的关系

不同肿瘤部位、大小及分化程度组织eIF4E阳性表达差异未见统计学意义(P>0.05),详见表3。表3 eIF4E表达与大肠癌病理特征的关系(略)

2.4 eIF4E表达与大肠癌临床分期的关系

eIF4E阳性表达与临床分期及淋巴结转移情况无关(P>0.05),而与肿瘤浸润深度有关(P<0.05),阳性表达率随浸润深度的增加而增高。表4 eIF4E表达与临床分期的关系(略)

2.5 eIF4E表达与大肠癌根治术后复发转移的关系

eIF4E在根治术后无复发转移的38例中阳性表达34例,有复发转移12例均为阳性表达,表达率分别为89.5%及100%,两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。

2.6 eIF4E表达与大肠癌患者生存的关系

eIF4E表达阳性者生存曲线较阴性者降低,2年生存率eIF4E(-)者为100%,(+)者为87.0%,(++)者为69.6%。(-)、(+)及(++)三组间比较差异无统计学意义(P>0.05),(详见图4,见封3)。

3 讨论

eIF4E是分子量为25kD的细胞质蛋白,基因定位于4号染色体。正常情况下,eIF4E的表达水平低,主要用于维持细胞正常生命活动。高水平eIF4E选择性增加体内影响细胞生长、分化的蛋白质的合成,促进细胞的增殖反应,并对癌基因表达起重要作用,导致细胞恶性转化。也发现eIF4E在一些肿瘤中高表达,调控肿瘤恶性相关基因和因子的表达,参与肿瘤的侵袭和转移。

Rosenwald等[6]报道eIF4E在大肠癌组织中出现高表达,证实eIF4E表达水平增高是大肠癌发生的早期事件。Barkeld等[7]检测结肠癌、结肠息肉及正常组织中eIF4E的表达情况,发现结肠癌中eIF4E表达水平最高,而正常组织表达水平最低,说明其对结肠癌的发生起重要作用,他们通过多元分析进一步发现,eIF4E的表达与结肠癌患者性别、年龄、种族、息肉史及结肠癌家族史没有相关性。本研究结果显示eIF4E在大肠癌组织中的阳性表达率为91.7%,在癌旁组织中阳性表达为10%,在大肠腺瘤中阳性表达为90%。大肠癌及大肠腺瘤与癌旁正常组织相比差异有统计学意义(P<0.05),大肠癌与大肠腺瘤间的阳性表达率差异无统计学意义,提示eIF4E参与了大肠黏膜的早期癌变,在大肠癌的发生中起了重要作用。本研究未发现eIF4E的表达与患者性别、年龄、病变部位、肿瘤大小有关,与上述Barkeld[7]的研究结果一致。

本研究结果显示eIF4E的表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移、临床分期无关,而与原发病灶浸润深度密切相关。这与一些作者将该指标用于其它肿瘤研究的结果不完全一致[1,5,8-9],进一步说明肿瘤的浸润、转移机制复杂,尚难得出一致结论。本研究发现eIF4E表达与根治术后有无复发转移及生存率之间无关,提示eIF4E可否作为大肠癌的预后指标尚需进一步论证。

参考文献

[1]Rosenwald IB.The role of translation in neoplastic transformation from a pathologists point of view[J].Oncogene,2004,23(18):3230-3247.

[2]Norton KS,McClusky D,Sen S,et al.LK1B is elevate with eIF4E over expr-ession in breast cancer[J].Surg Res,2004,116(1):98.

[3]Seki N,Takasu T,Mandai K,et al.Expression of eukaryotic initiation Factor 4E in atypical adenomatous hyperplasia and adenocarcinoma of the Human peripheral lung[J].Clin Cancer Res,2002,8(10):3046-3053.

[4]Topisirovic I,Guzman MJ,McConnell JD,et al.Aberrant dukaryotic translation initiation factor 4E-dependent mRNA transport impedes hematopoietic differentiation and contributes to leukem-ogenesis[J].Mol Cell Biol,2003(18):8992-9002.

[5]刘子沛,朱瑾,周金莲,等.胆管癌组织中真核细胞翻译起始因子4E和基质金属蛋白酶-9 的表达及临床意义的研究[J].消化外科,2005,4(2):113-118.

[6]Rosenwald IB,Chen JJ,Wang S,et al.Upregulation of protein synthesis initiation factor eIF4E is an early event during colon carcinogenesis[J].Oncogene,1999,18(15):2507-1257.

[7]Berkeld H,Elba A,Turbat H.Expression of the Translation Initiation Factor eIF4E in the Polyp-Cancer Sequence in the Colon1[J].Cancer,2001,10:663-666.

七夕表达爱范文第3篇

【摘要】 目的 探讨RhoA基因与肝细胞癌的发生、发展和侵袭、转移的关系。方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)在半定量水平检测42例肝细胞癌及其相对应的癌旁肝组织中RhoA mRNA的表达,同时采用PCR产物单链构象多态性(PCR-SSCP)银染法检测RhoA基因的突变情况。结果 本组42例肝癌组织中RhoA mRNA光密度相对值明显高于癌旁肝组织(P

【关键词】 肝癌;RhoA;基因表达;RT-PCR

【Abstract】 Objective To investigate the expression of RhoA gene in hepatocellular carcinoma and to evaluate the relationship between RhoA gene expression and invasion of hepatocellular carcinoma.Methods The mRNA expression of RhoA gene was examined by RT-PCR in 42 cases of hepatocellular carcinoma and adjacent non-cancerous tissue.In addition,the mutation of RhoA gene was examined by PCR-SSCP.Results The opacity density (OD) of RhoA mRNA expression in hepatocellular carcinoma tissues was significantly higher than that in adjacent non-cancerous tissues (P

【Key words】 hepatocellular carcinoma;RhoA;gene expression;RT-PCR

原发性肝癌发生率高,手术切除是目前最主要的治疗方法。尽管随着影像诊断和外科技术的进步,尤其是肝移植在肝癌中的运用,肝癌的预后已经有所改善,但肝脏的特殊解剖结构和功能决定着肝癌术后复发率高,术后复发已成为影响患者预后的主要问题。肝癌侵袭转移是主要的影响因素之一,深入研究肝癌侵袭转移机制对于改善肝癌患者的总体预后有重要作用。Rho蛋白和肿瘤发生有密切的关系,参与肿瘤的浸润和转移过程。Rho家族属于Ras超家族,是重要的细胞内信号分子,在细胞的许多基础生命活动中起关键的作用[1]。目前研究证实,Rho蛋白特别是RhoA在肿瘤发生、发展中起重要作用,在结肠癌、乳腺癌、肺癌、头颈癌等均报道有RhoA表达的异常增高[2]。本研究利用RT-PCR技术及分子定量成像系统分析42例肝细胞肝癌(HCC)病人的肝癌组织及癌旁肝组织中RhoA mRNA的表达,并探讨其临床意义。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要试剂及仪器 RT-PCR试剂盒购自MBI公司;dNTP及DNAmarker购自Promega公司;琼脂糖、TRIzol试剂及DEPC购于Gibco公司。凝胶成像系统购自美国Genesis公司;UV-3000型紫外分析仪购自上海天能科技有限公司;PE-2400TMPCR仪购自美国Perkin。

1.1.2 标本来源 42例患者的原发性肝癌组织及相对应的癌旁肝组织来自第四军医大学附属第一医院2004年8月~2005年3月的新鲜手术标本,离体后30min内分装保存于液氮罐中,所有病例均附癌旁肝组织作为对照,分别伴有慢性炎症、纤维化和肝硬化,全部标本均经病理科医师切片确诊。

1.2 方法

1.2.1 扩增引物设计 以GenBank中人RhoA基因全长序列为模板,按引物设计原则予以设计,采用Primer premier 5.0软件设计,其序列如下(U,D分别表示上游和下游引物):RhoA U1 5’CTGGTGATTGTTGTTGGTGATGG3’,U2 5’GATTCGTTGCCTGAGCAATG3’,D 5’GCGATCATAATCTT-CCTGCC3’。Bactin引物序列:上游引物,5’CGGGAAATC-GTGAT3’;下游引物,5’GAACTTTGGGGG ATGCTCGC3’。其中U1、U2为RhoA上游引物,分别用于定量RT-PCR和PCR-SSCP,D为下游引物。RhoA产物分别为183bp和221bp。

1.2.2 总RNA提取 组织总RNA的抽提取:0.5g组织块,加入Trizol试剂1ml,在电动玻璃匀浆器中,充分匀浆。将全部匀浆液转入1ml离心管中,加0.25ml氯仿,充分振荡混匀,冰浴15min。低温 13000r/min离心15min。小心吸取上层水相至另一1.5ml离心管中,注意不要吸到蛋白层或有机相,加等体积异丙醇,摇匀,室温放置10min,低温13000r/min离心15min,沉淀RNA。加70%酒精漂洗沉淀,5000r/min,离心10min,小心弃去酒精,空气中干燥10min。经电泳证实有两条明显的18S及28S条带,用紫外可见分光光度仪检测RNA的纯度及含量。

1.2.3 RT-PCR扩增RhoA mRNA及鉴定 cDNA制备:应用逆转录试剂盒,总RNA投入量为2μg,使用随机引物。第一链cDNA合成后终体积10μm,具体方法按说明操作。RhoA与Bactin反应同管进行,反应终体积为50μl,反应条件为94℃ 30s,57℃ 30s,72℃ 40s,共25个循环。PCR产物在含0.5g/ml溴化乙锭的1.0%琼脂糖凝胶上电泳,应用凝胶成像系统对条带进行扫描分析。利用分析软件计算并比较每一对样品中RhoA mRNA与B-actin的光密度的相对比值,从而获得每对样品中肝癌组织及癌旁肝组织RhoA mRNA表达的相对含量。

1.2.4 PCR-SSCP分析 PCR反应试剂基本同前,仍用cDNA模板,改用U2和D引物扩增RhoA基因,反应条件为94℃ 1min,57℃ 2min,72℃ 1min,共扩增30个循环。扩增产物变性后行聚丙烯酰胺凝胶电泳,观察泳动条带是否异位以判断突变情况。

1.3 统计学方法 所有数据以均数±标准差(x±s)表示,用SPSS10.0进行分析,组间比较用Student’s t检验,P

2 结果

将各样品RT-PCR产物经分子定量成像系统分析,以Bactin条带为内参照,其光密度值设定为1.000,计算RhoA mRNA表达的相对丰度。肝癌组织中RhoA mRNA光密度相对值为(0.276±0.069);癌旁肝组织中为(0.137±0.058);两者差异有非常显著性(P

转贴于

为探讨RhoA基因突变在肝癌发生发展中可能的作用,我们采用了PCR-SSCP的方法检测RhoA基因中结构改变可能影响RhoA功能的总长为221bp的片段,结果在检测的42例肝癌组织中均未发现异常泳动条带,提示肝癌的发生发展与RhoA基因突变无关。

3 讨论

Rho家族属小G蛋白超家族成员,有GDP结合的活性态和GTP结合的非活性态,两种活性形式之间的转换使他们能够发挥一种类似“分子开关”的作用。活性态的小G蛋白能激活下游的信号传导通路,行使其功能。与Ras基因突变导致其持续激活相似,Rho基因若发生结构改变,使GTP水解发生障碍,而处于持续GTP结合的激活状态,可致其多种功能增强,称为组成型激活突变体,如RhoA(G14V)、RhA(Q63L)等。

Rho家族蛋白参与调节了细胞的多种生命过程,包括肌动蛋白的细胞骨架重组、细胞黏附、细胞运动、细胞周期进展、细胞分裂以及基因转录等,Rho家族分子功能的多样性与其下游效应分子的多样性有关,以RhoA为例,已经发现的RhoA的下游效应分子包括ROCK、PKN、Citron、PI-3K等,这些分子介导了RhoA的作用[3]。越来越多的证据表明,Rho家族蛋白与肿瘤发生发展的各个方面均有联系,包括肿瘤的生长和增殖、侵袭和转移、细胞周期进展、细胞凋亡、肿瘤新生血管的形成等。近年来研究发现,Rho家族成员在多种肿瘤组织中表达增加并和肿瘤恶性程度相关,即在恶性程度高的肿瘤表达更多,提示其在肿瘤发生和转移中具有重要作用。

尽管Rho家族与肿瘤相关的基础研究已有大量报道,但Rho家族与临床肿瘤发生发展关系的研究仍然较少。已有的研究发现,RhoA和RhoB在乳腺癌中的表达增高,且与乳腺癌的恶性表型相关;RhoC主要与有侵袭能力的炎性乳癌有关;Rac1、Rac3和Cdc42在乳腺癌中也有高表达,但与乳腺癌的分期和增殖无关。另外还发现,RhoA在精原细胞瘤和上尿道肿瘤中的转录水平升高,RhoA和Rac1b在大肠癌中的表达升高,Rac2在头颈部肿瘤中和RhoC在胰腺癌中的表达也是升高的[4]。这些研究提示,尽管Rho家族分子的同源性较高,但它们在不同的肿瘤中可能起不同的作用。Fritz在对乳腺肿瘤的研究中发现,乳腺癌组织较正常组织高表达RhoA,RhoB,Racl,Cdc42蛋白,且RhoA,RhoB,RhoC蛋白表达水平与组织学分级及增殖指数呈明显正相关;而Rho mRNA的表达与正常组织无显著差异[5]。另外,正常乳腺组织、囊性变、非典型增生、导管原位癌均不表达RhoC,其表达与肿瘤组织学分级显著相关。有研究表明乳腺癌组织中RhoA蛋白表达增加,且和乳腺癌的WHO分级相关,即第三级乳癌表达RhoA蛋白较第一级乳癌显著增多。Kamai T用RT-PCR方法检测了精细胞瘤中RhoA的mRNA表达水平,发现其表达和肿瘤分期相关,恶性程度越高RhoA表达水平也越高,笔者进一步检测精细胞瘤中RhoA的一种效应器Rho激酶ROCK的mRNA表达水平,也发现肿瘤组织中ROCK表达明显高于相应正常组织,而且RhoA和ROCK的mRNA表达水平呈正相关。该研究提示RhoA基因和精细胞瘤发生发展有关,且可能通过ROCK起作用[6]。

RhoA与肝癌转移的关系,目前尚未见报道。本研究检测了肝癌组织中RhoA mRNA的表达,发现有门静脉癌栓者RhoA mRNA表达明显高于无癌栓者(P

结果表明,RhoA在肝癌组织中高表达,肝癌组织RhoA表达高于相应癌旁肝组织,高侵袭肝癌组织表达高于低侵袭性肝癌组织,二者差别显著。因此Rho家族成员可能成为一种新的肿瘤标志物,用于判断良恶性及判断肿瘤转移能力和估计预后,具有潜在的重要临床价值。

1 Mori K, Hata M, Neya S, et al. Common semiopen conformations of Mg2+-free Ras,Rho,Rab,Arf,and Ran proteins combined with GDP and their similarity with GEF-bound forms.J Am Chem Soc,2005,127(43):15127-15137.

2 Hall A. Rho GTPases and the control of cell behaviour. Biochem Soc Trans,2005,33(5):891-895.

3 Fujisawa K, Madaule P, Ishizaki T, et al. Different regions of Rho determine Rho-selective binding of different classes of Rho target molecules. J Biol Chem,1998,273(30):18943-18949.

4 Matos P, Skaug J, Marques B, et al. Small GTPase Racl:structure,localization,and expression of the human gene. Biochem Biophys Res Commun,2000,277(3):741-751.

七夕表达爱范文第4篇

【关键词】端粒酶;乳腺癌;肿块大小;浸润;转移

文章编号:1009-5519(2007)06-0797-03 中图分类号:R36 文献标识码:A

端粒酶(telomerase)是一种由RNA和蛋白质组成的核糖白复合物,具有逆转录酶的活性,能以自身RNA为模板,合成端粒序列,维持细胞端粒的长度,使细胞无限增殖。本课题采用原位杂交的方法,主要研究乳腺癌端粒酶的表达与肿块大小、浸润及转移的关系,探讨端粒酶在乳腺癌形成及发展过程中的作用。

1 资料与方法

1.1 资料:收集近年来本院乳腺癌70例,年龄19~70岁,中位年龄46岁。试剂:端粒酶原位杂交检测试剂盒购自北京大学医学部病理系。

1.2 方法

1.2.1 端粒酶原位杂交:将原蜡块切厚3 μm的白片,切片脱蜡,水化、水洗,1×PBS 5秒×2次;0.1N HCL室温10分钟;1×PBS 5 秒×2次;滴加PK(1∶10 PBS稀释),37℃ 15分钟;1×PBS 5秒×2次;4%多聚甲醛后固定,室温10分钟,1×PBS 5秒×3次;90%乙醛脱水15秒;滴加20 μl杂交液,封口膜覆盖后放湿盒中42℃ 20分钟;揭下封口膜,含50%甲酰胺2×SSC 37℃洗30分钟,2×SSC 37℃洗15分钟×2次,0.1×SSC 37℃洗15分钟×1次,1×PBS 5分钟×1次,Bufferl 5秒×1次,马血清封闭室温30分钟,Auti-Dig-AP(1∶500)BufferⅠ稀释50 μL,室温1小时,BufferⅠ洗15分钟3次,BufferⅢ洗1分钟×2次;NTB-BCIP显色,苏木素衬染,脱水,封固后光镜观察。切片中不加杂交液,滴加缓冲液作空白对照,切片预先用Rnase在37℃消化1小时作阴性对照,以随试剂盒所附阳性性片作阳性对照。

1.2.2 结果评估:原位杂交阳性染色为胞浆、胞膜呈紫红色。

1.3 统计方法:χ2检验。

2 结果

70例乳腺癌端粒酶阳性表达54例,阳性率77%;肿块直径>3 cm 23例,0.05)见表1,与肿瘤浸润之间的差异有显著性(P

3 讨论

端粒酶是一种能延长端粒末端的核糖白酶,主要成分是RNA和蛋白质,含有引物特异识别位点,能以自身RNA为模板,合成端粒DNA并加到染色体末端,使端粒延长,从而延长细胞的寿命甚至使其永生化。自从1989年Morin首次在人的癌细胞系中发现端粒酶以来,肿瘤细胞永生化的“端粒-端粒酶”假说已为越来越多的研究结果所证实。

越来越多的资料表明,端粒酶的激活虽然不是引起细胞癌变的最早因素,但确实是一个维持肿瘤生长的继发性改变。Counter[1]认为端粒酶的表达是肿瘤发生的后续事件,而不是肿瘤发生的病因。Harley等[2]人提出了“端粒-端粒酶”假说。在细胞有丝分裂过程中,伴随部分端粒序列的丢失,端粒长度缩短,当端粒缩短到一定长度,可能触发某种信号,使细胞进入第一致死期M1,此时细胞不再分裂,退出细胞周期而死亡。如果细胞被病毒转染,或者某些抑癌基因如p53、RB等的突变,细胞可越过M1期而继续分裂,端粒继续缩短,最终达到一个关键阈值,细胞进入第二致死期M2,这时染色体可能出现形态异常,某些细胞由于端粒太短而失去功能,导致细胞死亡。但极少数细胞在此阶段进一步激活端粒酶,使端粒功能得以恢复,维持了染色体的稳定,从而避免死亡,具有无限增殖的能力。尽管迄今还不知道端粒酶激活的具体过程,但这一假说已被一些研究证实,提示端粒酶再激活可能参与细胞的癌变过程,可能是肿瘤发生过程中多步基因改变中的至关重要的一步。

肿块的大小与肿瘤的生长时间长短有关,也与肿瘤的生长速度有关。Mokbel等认为乳腺癌端粒酶活性与肿块大小无关。我们的研究结果认为乳腺癌端粒酶活性与肿块大小之间的差异无显著性(P>0.05)。乳腺癌病人的肿瘤细胞内可检测到端粒酶活性,而且,随着乳腺肿瘤的发展,端粒酶活性呈进行性增高[3]。但是。肿瘤的大小并非与肿瘤的成熟程度有关,肿瘤生长时间越长,或单位时间内生长速度越快,肿瘤的体积自然较大,这与端粒酶的表达并不存在必然的联系。

乳腺癌端粒酶的表达与肿瘤浸润的关系:肿瘤的浸润是肿瘤细胞的生物学特性所决定,一般来说,浸润性明显的肿瘤,恶性程度较高。有学者认为乳腺癌端粒酶的表达与肿瘤的分化程度有关,中分化或低分化乳腺癌端粒酶活性高于高分化乳腺癌[4]。我们的结果表明乳腺癌端粒酶表达与肿瘤浸润之间的差异有显著性(P

乳腺癌端粒酶的表达与肿瘤转移的关系:肿瘤细胞的不断分裂、增殖,并对脉管的浸润是肿瘤转移的基础。由于端粒酶促使细胞端粒的不断延伸,细胞得以永生化,细胞的分裂与增殖永久存在,转移也必然会发生。Kalogeraki等认为乳腺癌端粒酶的表达与肿瘤转移之间有关系[5,6]。我们的结果也发现乳腺癌端粒酶的表达与肿瘤转移之间的差异具有统计学意义(P

端粒酶是细胞获得永生化的必要条件,乳腺癌细胞中端粒酶的原位表达较高,而且与肿瘤的浸润、转移有关。说明端粒酶在乳腺癌细胞的永生化中起到决定性的作用,同时也在肿瘤的发展过程中起到一定的作用。端粒酶在乳腺癌细胞的发生过程中的作用,可能为由于某些抑癌基因如p53、RB等的突变,从而激活了端粒酶,细胞因此而获得永生化。由于端粒酶在乳腺癌细胞的发生、发展中起到一定的作用,这种作用在形态学上有所表现,因此,可以将端粒酶作为一种新的肿瘤标记,通过对细胞端粒酶的检测来协助乳腺癌的诊断,同时也可与其他预后指标一起作为判断乳腺癌预后的一个指标。

参考文献:

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七夕表达爱范文第5篇

[关键词] eIF-4E基因;表达;非小细胞肺癌;预后

[中图分类号] R734 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2015)01(a)-0012-04

Expression of eIF-4E in non-small cell lung cancer and its correlation with prognosis

WANG Binliang LI Xiaobo KONG Yiming ZHANG Rongying

Department of Respiratory Medicine, the Affiliated Huangyan Hospital of Wenzhou Medical University the First People's Hospital of Taizhou City, Zhejiang Province, Taizhou 318020, China

[Abstract] Objective To investigate eIF-4E expression in patients with non-small cell lung cancer (NSCLC), and its correlation with prognosis. Methods Tumor tissues were collected from 60 NSCLC patients who underwent surgical resection from January 2009 to December 2010 in the Affiliated Huangyan Hospital of Wenzhou Medical University, and 30 adjacent normal tissues samples were also collected. The expression level of eIF-4E in NSCLC tissues and adjacent normal tissues were measured by immunohistochemical method. All the NSCLC patients after resection were subject to treatment with elemene plus cisplatin for more than 2 weeks. A systematic follow-up evaluation was also performed to investigate the correlation of eIF-4E expression level with disease-free survival (DFS) and overall survival (OS). Results The expression rate of eIF-4E in the tumor tissues (80.00%) was significantly higher than that in adjacent normal tissues (33.33%), the difference was statistically significant (P < 0.01). The eIF-4E high expression rate of the patient with age≥60 years and clinical stage of Ⅲ-Ⅳ was higher than whose age<60 years and clinical stage ofⅠ-Ⅱ, the differences were statistically significant (P < 0.05). The DFS and OS values of patients with low eIF-4E expression level were significantly larger than those of patients with high eIF-4E expression level, the differences were statistically significant (P < 0.05). Conclusion eIF-4E is highly expressed in NSCLC tissues; the DFS and OS values of patients with low eIF-4E expression level are significantly larger. High eIF-4E expression level may be an independent predictor of poor NSCLC prognosis.

[Key words] eIF-4E gene; Expression; NSCLC; Prognosis

目前,肺癌是发病率和病死率最高的恶性肿瘤,其引起的死亡在各种癌症导致的死亡中居首位,这与其肿瘤细胞侵袭性和转移性的生物学特征密切相关[1]。非小细胞肺癌(non-small cell cancer,NSCLS)约占肺癌的80%,大部分患者发现患有非小细胞肺癌时已属于晚期,因此化疗是治疗非小细胞肺癌的主要方法[2]。真核细胞翻译起始因子-4E(eukaryotic initiation factor-4E,eIF-4E)是相对分子质量25 000、碱基序列>50 kb、包括7个外显子和6个内含子的多肽[3],在许多肿瘤中过度表达,并且与多种恶性肿瘤的发生、浸润和转移密切相关。eIF-4E在诸如甲状腺癌、食管癌、前列腺癌、膀胱癌、子宫颈癌、肺癌、白血病以及胆管癌等恶性肿瘤和肿瘤旁组织中过度表达并与肿瘤的侵袭转移能力呈正相关。eIF-4E基因科是肺癌演进过程中重要的标志物,可指导非小细胞肺癌的生物治疗并为其临床分期和预后判断提供参考价值,在肺癌的复发和转移方面有着重要的意义。本研究EIF4E基因在NSCLC的表达及其与疗效及预后的关系,现将结果报道如下:

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2009年1月~2010年12月于温州医科大学附属黄岩医院(以下简称“我院”)进行外科手术切除的60例非小细胞肺癌组织样本,同时收集30例癌旁正常组织(距离癌组织大于5 cm以上的组织)作为对照。所有患者术前均未进行过化疗或者靶向治疗。根据2002年美国癌症联合会和国际抗癌联盟制订的TNM分期,Ⅰ~Ⅱ期27例,Ⅲ~Ⅳ期33例,根据2002年WHO分类标准,60例非小细胞肺癌组织中鳞癌29例,腺癌31例,低分化36例,中高分化24例。60例非小细胞肺癌组织中男31例,年龄35~83岁,平均(56.47±18.85)岁,女29例,年龄32~86岁,平均(58.75±19.23)岁。30例癌旁正常组织中男18例,年龄34~85岁,平均(58.94±19.62)岁,女12例,年龄33~81岁,平均(55.84±18.52)岁。非小细胞肺癌组织和癌旁正常组织性别、年龄等基本资料比较差异无统计学意义(P > 0.05),具有可比性。本研究经我院伦理委员会通过,患者均知情同意并签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 治疗方法 60例患者均在术后接受2~4周期的榄香烯(大连金港制药公司,生产批号:0705131)联合顺铂(山东德州制药厂,生产批号:9050212DC)化疗:榄香烯:125 mg/m2,d1、d8;顺铂;30 mg/m2,d1~d3。药物均静脉滴注给药,所有患者均接受至少2周的化疗,对于耐受良好患者进行3~4周期的化疗。

1.2.2 检测方法 将获得标本制成3 μm厚的石蜡切片,常规脱蜡后使用苏木精染色和DAB显色(北京中杉金桥生物科技有限公司),脱水后二甲苯透明并以中性树脂封固后置于显微镜下观察。

1.2.3 结果判读方法 以细胞中出现棕黄色颗粒为阳性。免疫组化标准[5]:每例标本均在400倍视野下选取500~1500个肿瘤细胞进行阳性细胞染色强度的观察并计算阳性细胞的百分数。按阳性细胞染色强度:无着色为0分;黄色为1分;棕黄色为2分;深棕色或棕褐色为3分。按阳性细胞百分数:0%~10%为0分,>10%~25%为1分,>25%~50%为2分,>50%~100%为3分。以按阳性细胞染色强度得分和按阳性细胞百分数得分之和为最终结果。0~1分:阴性(-),2~3分:弱阳性(+),4~5分:中阳性(++),6分:强阳性(+++)。-~+为低表达,++~+++为高表达。

1.2.4 预后评价方法 无瘤生存期(DFS)[4]:从开始化疗至转移、复发或死亡之间的时间。总生存时间(OS)[4]:从开始化疗至死亡或者最后1次随访之间的时间,最后1次随访时间为2014年3月20日。

1.3 统计学方法

采用SPSS 17.0统计学软件进行数据分析,计量资料数据用均数±标准差(x±s)表示,两组间比较采用t检验;计数资料用率表示,组间比较采用χ2检验,以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 真核细胞翻译起始因子-4E在癌组织以及正常肺组织中的表达

非小细胞肺癌组织中eIF-4E基因的阳性表达率为80.00%(48/60),显著高于癌旁正常组织的33.33%(10/60),差异有高度统计学意义(χ2=9.38,P < 0.01)。见图1(封四)。

2.2 真核细胞翻译起始因子-4E的表达与患者临床特征的关系

非小细胞肺癌组织中eIF-4E表达与患者的性别、病理类型和分化程度无关(P > 0.05),年龄≥60岁及TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期患者的eIF-4E高表达率明显高于年龄<60岁及分期为Ⅰ~Ⅱ期的患者,差异均有统计学意义(P < 0.05)。提示IF-4E表达与患者的年龄及临床病理分期有关。见表1。

2.3 真核细胞翻译起始因子-4E的表达与患者的无瘤生存期和总生存时间关系分析

与eIF-4E基因高表达患者比较,eIF-4E基因低表达患者的DFS和OS均延长,差异均有统计学意义(P < 0.05)。见图2、3。

图2 真核细胞翻译起始因子-4E的表达与患者无瘤生存期的关系

图3 真核细胞翻译起始因子-4E的表达与患者总生存时间的关系

3 讨论

肺癌是发病率和病死率增长最快的恶性肿瘤,目前在世界范围内已成为严重危害人类生命和健康的主要疾病,肺癌的发病率和病死率在男性中均占第一位,在女性中,肺癌的发病率仅次于乳腺癌。肿瘤的形成是一个复杂的多阶段连续过程,受多种因素的影响。目前对肺癌的治疗仍缺乏有效的方法,对于失去手术机会的患者来说药物治疗的有效性紧密关联着其生存质量及生存期。对肺癌的转移机制、预后影响因素和药物对肺癌细胞作用的分子机制的研究可为肺癌的药物治疗提供依据[6]。eIF-4E是真核细胞翻译起始和调控的核心成分,它与mRNA 5'端帽子结构结合,在蛋白质翻译起始过程中发挥重要作用[7]。有研究进展表明eIF-4E是影响肿瘤的生长、侵袭、演进等生物学行为的肿瘤相关因子,在许多肿瘤中过度表达且与多种恶性肿瘤的发生、浸润和转移密切相关[8],其过度表达成为肿瘤恶性改变及判断其恶性程度的一个重要分子标志,可为抗肿瘤治疗提供新思路[9-10]。通过反义mRNA介导降低eIF-4E的表达可以抑制癌细胞的肿瘤特性,有研究表明,可以通过降低eIF-4E的表达抑制头颈部恶性肿瘤细胞、肝癌细胞、乳腺癌细胞等多种肿瘤细胞的生长、侵袭[11-13]。榄香烯是在中药姜科植物温莪术的挥发油中提取的有效成分,是由α-榄香烯、β-榄香烯、δ-榄香烯和γ-榄香烯组成的复合物,是临床上一种被广泛应用并取得了治疗效果的广谱抗肿瘤药物,β-榄香烯通过阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡来实现其在甲状腺癌中的抗肿瘤效果[14],在临床上其不仅具有较强的抗肿瘤作用,而且可逆转化疗产生的多药耐药性[15]。目前关于eIF-4E基因在非小细胞肺癌细胞内的表达及其与榄香烯联合顺铂治疗非小细胞肺癌的效果与预后关系的研究甚少,明确eIF-4E基因在非小细胞肺癌细胞内的表达及其与榄香烯联合顺铂治疗非小细胞肺癌的效果与预后关系可为非小细胞肺癌的治疗提供依据。

本研究结果显示,eIF-4E基因在非小细胞肺癌组织中呈现高表达,提示eIF-4E基因在非小细胞肺癌的发生发展过程中可能起着重要的作用。eIF-4E的表达与患者的性别、病理类型和分化程度无关。本研究结果亦发现,年龄较大以及分化等级较高的非小细胞肺癌患者的eIF-4E阳性表达水平明显增高,提示非小细胞肺癌患者的eIF-4E基因表达与其年龄和肿瘤分化程度密切相关。榄香烯顺铂联合化疗后eIF-4E低表达患者的DFS和OS均明显延长。eIF-4E低表达患者榄香烯顺铂联合化疗效果较eIF-4E高表达患者明显提高,提示eIF-4E低表达患者对化疗更加敏感,因此eIF-4E的低表达是影响非小细胞肺癌化疗效果的重要因素,eIF-4E基因的高表达可能成为非小细胞肺癌治疗效果及预后不良的预测因子。榄香烯联合顺铂化疗可能通过组织有活性的eIF-4E基因的低表达抑制细胞的增长,导致致癌细胞的自我繁殖受阻,从而控制癌细胞进展及扩展eIF-4E复合物的形成,起到抑制肿瘤形成、发展和转移的目的。eIF-4E基因表达在肺癌治疗效果和预后中的作用可从分子学角度找到肺癌诊断和预后的分子指标。

综上所述,eIF-4E基因在非小细胞肺癌组织存在过表达。榄香烯联合顺铂化疗后eIF-4E低表达患者的DFS和OS均明显延长,因此eIF-4E基因的高表达可能成为非小细胞肺癌治疗效果及预后不良的预测因子。

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