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历时7天的2006北京国际低音提琴音乐节,日前在中国音乐学院落幕。来自美国、英国、新加坡和中国的优秀低音提琴艺术家,在北京音乐厅、中国音乐学院演奏厅共同为首都观众奉献了9场个人低音提琴独奏、重奏、协奏音乐会与大师班。艺术总监侯俊侠教授主持召开了低音提琴专业发展研讨会,中国低音提琴界老前辈演奏家邵根宝、尤奎、牛珉特邀参加了此次研讨会。
本届音乐节演出阵容宏大,特邀世界级大师杰夫・布拉德蒂奇(美国)、彼得・巴科克(英国)、徐理(新加坡)、张小笛(中国)等加盟,友情出演的艺术家有中国音乐学院侯俊侠、陈蓓、方元、赵嘉楠,中国交响乐团许玉莲,中央音乐学院曹海、曹飞,中国爱乐交响乐团曾诚,中央音乐学院的研究生及本科生王灵犀、杨蕊、陈青志,蒙特利尔音乐大学研究生白灵灵等。还有来自中国音乐学院、中央音乐学院、艺术学院三个院校的研究生、本科生以及附中学生参演。
音乐会上演除巴赫、贝多芬、门德尔松、拉赫玛尼诺夫等大师作品外,还推介鲁道夫・图拉切克(捷克)、乔瓦尼・波泰西尼(意大利)、欣德米特(德国)、埃内斯特・布洛赫(瑞士)、本哈德・龙贝格(德国)、阿斯特・皮亚佐拉(阿根廷)等的作品。风格多样、异彩纷呈。值得一提的是,中国音乐家侯俊侠改编的乐曲《渔舟唱晚》《阳关三叠》,是此次音乐节为数不多的中国作品,作品在保持原有中国民族器乐特色的前提下,又充分体现了低音提琴独特的魅力,实现了用外来乐器表现中国人的审美情趣和意境,受到专家和听众的一致好评。
此届音乐节是中国音乐学院管弦系建系以来一次重大的艺术实践活动,它的成功举办,实现了通过不断引进国外优质教育资源与教育理念,从而逐步实现管弦系“构建国内一流、国际知名的低音提琴演奏和教育的交流平台”的目标;同时,为国内同行提供了一次与国际沟通和互动的机会与窗口。
湖北教育网台《空中音乐课堂》开课
杜磊
走过青涩的花季雨季,理解与宽容消除中西隔阂
1986年年底,怀着对新生活的向往,斯琴高娃带着女儿孙丹远赴瑞士日内瓦,与瑞士籍华人音乐家陈亮声组建了新家庭。在教堂举行婚礼那天,继女陈露茜满脸的兴奋与喜悦,当庄重悠扬的《婚礼进行曲》在教堂里响起时,陈露茜将一大束洁白的康乃馨放在斯琴高娃怀里,真诚地说:“欢迎您,希望我们能成为幸福的一家人,成为朋友。”
当时16岁的陈露茜是陈亮声与小提琴家前妻的独生女儿,正在日内瓦上高中。良好的家教与修养让她待人接物落落大方,很有分寸。因此,在陈露茜面前,斯琴高娃丝毫不感到继母身份难堪。
朝夕相处中,斯琴高娃与陈露茜虽然没有继母与继女间的隔阂和冷漠,但东西方文化的差异,不知不觉也给她们带来了矛盾与冲突。1988年6月的一天,斯琴高娃在家里大扫除,将继女的房间彻底清理了一遍。陈露茜放学回家,发现自己的房间变了样,不仅没有半点感激,反而冲斯琴高娃大声嚷嚷:“您没有经我同意,怎么能随便动我房间的东西?”斯琴高娃赶紧分辩:“孩子,我是觉得你的房间有些乱,清理了一下。”“那您也得事先给我打招呼。您这样做侵犯了我的隐私权!”斯琴高娃觉得陈露茜不可理喻,憋了一肚子气。
这年10月的一天,斯琴高娃正在洗头时,家里的沙皮狗调皮地将洗发水叼到了垃圾桶里,她生气地在它背上拍了一下,小狗顿时“汪汪”大叫起来。陈露茜从房间里探出头来,尖叫着:“您虐待动物,我要报警!”斯琴高娃以为她说着玩呢,没想到10多分钟后,警察真的赶来了。了解情况后,警察狠狠教育了斯琴高娃一番,并警告她,如果再发生这样的事情,一定将她拘留。这孩子太过分了!斯琴高娃只觉得血直往头上涌,但想到她是继女,只得将火气强压在心底。就这样,因为思维方式不一样,斯琴高娃与陈露茜经常发生摩擦,关系开始变得紧张、微妙起来。一天,陈露茜患了重感冒,吃西药始终不见好。斯琴高娃拿出从中国带来的中药,熬成药汤要继女喝下。陈露茜一看这黑乎乎泛着苦味的汤水,哪里敢喝?她把碗往旁边一推:“您熬的是什么?是人喝的吗?”斯琴高娃忍耐到了极限,黑着脸说道:“你这孩子真不知好歹!我再也不管你了!…告诉您,我已经是成年人了,您本就不应该管我,否则就是干涉我的自由,我可以您!”
看陈露茜如此“不知好歹”,斯琴高娃气愤难平。晚上,陈亮声演出回来,斯琴高娃含泪对他说起陈露茜的刁蛮脾性。陈亮声先安慰了斯琴高娃一番,又认真地对她说:“孩子在瑞士出生、长大,接受的是西式教育,她的生活习惯和思维方式与传统的中国人截然不同,与她相处,你要尽量用西方的方式来看问题,这样你就会理解她的所作所为了。”
斯琴高娃恍然大悟,细细梳理自己的心绪,她意识到,尽管在瑞士生活快两年了,也知道西方人与中国人的处世方式确实大相径庭,但自己一直在以中国母亲的方式对待陈露茜,母女之间怎么能不产生矛盾?
陈露茜经父亲开导,也意识到自己以前对继母产生了很多误会。她真诚地向斯琴高娃道歉:“阿姨,对不起,以前我在很多生活小事上错怪了您,请求得到您原谅。”感受着陈露茜的坦荡和真诚,斯琴高娃百感交集,她心头的烦恼像夏季风一样一刮而过……
今生母女前世缘分,每一个选择都有彼此爱的关注
陈露茜和孙丹上大学了,丈夫陈亮声总是在世界各地来往奔波。斯琴高娃长时间一个人守着偌大的家,加上语言不通,在当地没有什么朋友,孤独、寂寞和失落常常将她的心塞得满满的,让她有说不出的郁闷。
1991年2月的一天,斯琴高娃百无聊赖地在家看自己主演的电影《骆驼祥子》,忆起曾经的峥嵘岁月,斯琴高娃抽噎难语。陈亮声从英国演出回来后,斯琴高娃哽咽着对他说,她是个演员,她想回到中国重返影坛,要不然她一个人在家会闷死的。陈亮声非常不理解她的想法:“女人就应该享受安逸舒适的生活,何苦要把自己弄得像个女斗士似的在外面冲锋陷阵?”他坚决反对斯琴高娃重返影坛,夫妇俩为此闹起了别扭。
陈露茜得知这些,一针见血地批评父亲:“爸,您怎么可以束缚阿姨的自由?要是我们都反对您去演出,您会怎么想?”陈亮声之所以反对斯琴高娃再去拍戏,只是觉得她以前吃了太多苦,没有必要再去受那份罪,他完全有能力让她过上锦衣玉食的生活。这会儿见女儿都站在斯琴高娃一边,他不再反对了。
斯琴高娃决定复出的消息传开后,电影《香魂女》剧组第一个找上门来,邀请她出演女主角香二嫂。斯琴高娃离开瑞士那天,陈露茜开车去机场送她,再三叮嘱她:“家里不靠你拍戏挣钱,你就当去满足自己的爱好,拍戏千万别累着,也不用担心爸爸,家里有我呢。”斯琴高娃感激地看着女儿,感叹她真的长大了。
《香魂女》公映引来好评如潮,一举夺得第43届柏林国际电影节金熊奖,斯琴高娃也因此再度成为媒体瞩目的焦点。此后短短几年时间,斯琴高娃先后主演了《老人与狗》、《太后吉祥》等多部影视剧,迎来自己事业的第二个黄金时期。
1998年10月,斯琴高娃回瑞士休养。陈露茜一脸甜蜜地告诉她:“阿姨,我交男朋友了。”女儿都二十七八岁了,是该交男朋友了。但在斯琴高娃眼里,陈露茜非常单纯,还是个没长大的女孩。因为自己情路坎坷,她希望女儿在感情上能够顺利一些。
斯琴高娃认真地对陈露茜说:“孩子,阿姨想见见他,行不?”要是在以前,陈露茜又该埋怨斯琴高娃是在干涉她的隐私;可是这时,她已经完全适应了斯琴高娃表达情感的方式,能理解一个中国母亲对子女终身大事的关心和牵挂。几天后,陈露茜就将男友乔亚浦带回家,接受斯琴高娃的“审查”。
乔亚浦在日内瓦经济学院担任教师,他内敛文静,彬彬有礼。斯琴高娃与他交谈,发现他博学多才,很有内涵,觉得陈露茜眼光真不错。在瑞士,谈恋爱只是男女两个人的事情;而在中国,双方父母必须了解对方的家庭情况。斯琴高娃征得陈露茜同意,与乔亚浦的父母取得联系,亲赴乔亚浦家做客。乔亚浦的父亲是律师,母亲是政府机关的公务员,在轻松融洽的气氛中,斯琴高娃感到这是一个善良、和睦且流淌着爱的家庭,终于彻底放下心来。
2000年5月,陈露茜与乔亚浦在日内瓦举行婚礼,斯琴高娃亲手为陈露茜披上了洁白的婚纱,含泪说:“孩子,按照中国的传统,女儿出嫁后,再回娘家就是客人了,你可要经常回来看我和你爸爸啊!”接着,她再三叮嘱乔亚浦,“露茜是个好女孩,很小时她亲生父母就分开了,这些年来很不容易。阿姨希望你像父亲、像哥哥一样宠她、疼她!”
这年秋天,斯琴高娃在北京怀柔影视基地拍摄电视
连续剧《大宅门》,她扮演二奶奶白文氏一角,斯琴高娃为此付出了常人难以想象的体力和精力。一天,斯琴高娃拍摄一场从楼梯上滚下来的戏,本来可以用替身,但她为了追求效果逼真,坚持自己完成这个高难度动作。早年拍电影《归心似箭》时,斯琴高娃曾从马上摔下来,造成左腿骨折。这一次,滚摔动作让她老伤复发,她痛得走路都非常吃力。陈露茜得知心疼得直掉眼泪,在越洋电话里埋怨继母:“阿姨,您拍戏连身体都不顾了,知道我和爸爸有多担心您吗?赶快去医院做手术!”
陈露茜知道继母性格倔强,两天后,她飞到北京,准备把继母“押”进医院。但斯琴高娃根本没有时间与她见面,陈露茜一直在宾馆里等了两天。直到第三天中午,斯琴高娃才向导演请了几个小时假,一瘸一拐地赶来。见继母连坐下来都痛得龇牙咧嘴,陈露茜忙捋起她的裤管看,只见她左腿的膝关节肿得老高,一摁就是一坑。陈露茜坚决要陪斯琴高娃去医院治疗。此时,陈露茜已经怀孕好几个月了,想到女儿不远万里颠簸10多个小时来看自己,斯琴高娃心头的温暖和感动无以言表:“孩子,阿姨听你的,下午就去治疗。”陈露茜陪着斯琴高娃去医院,可是档期太紧,斯琴高娃只能接受保守治疗。
次日一大早,陈露茜要返回瑞士了,斯琴高娃忍不住潸然泪下――这个与自己没有任何血缘关系的继女竟如此贴心,今生能与她成为母女,是前世的缘分!
横跨两个半球的牵挂,浓情厚爱的日子鲜活灿烂
次年4月,《大宅门》顺利杀青后,斯琴高娃回到瑞士休养。正好这时,陈露茜做了幸福妈妈。女儿坐月子,斯琴高娃当然得照顾。只是她腿伤越来越严重,连走路都很困难。但她不管腿痛,一大早就赶到陈露茜家,高兴地说:“太好了,我升级做外婆了!”
陈露茜是剖宫产下女儿的,产后恢复十分重要。斯琴高娃用传统的中国方法照顾坐月子的女儿。每一天,她都忍受着腿部剧痛,为女儿沏红糖水、熬莲子羹、炖乌鸡桂圆汤,并警告女儿:“妇女坐月子是个非常时期,一定要懂得爱惜自己,你这时候不注意,会落下一生的病根!”陈露茜听从继母的意见,月子里没做“出轨”的事,身体恢复得很快。
女儿坐完月子,斯琴高娃却终于撑不住了。陈露茜这才知道继母是忍受着剧痛在照顾自己,她流着泪和父亲急忙将斯琴高娃送进了当地有名的医院。医生为斯琴高娃做了检查后,一脸凝重地告诉他们:“病人左腿有两小块骨头已经坏死,必须尽快手术,否则有可能终身瘫痪。”陈露茜心急如焚,马上为斯琴高娃办理了住院手续。
腿伤康复后,斯琴高娃继续回中国拍戏,在《党员二愣妈》、《走出蓝水河》、《绝对权力》等影视剧中均有精彩演出,并荣获第四届中国电视艺术“十佳演员奖”。在戏里,斯琴高娃大多扮演慈祥、坚强的母亲,生活中的她也将母亲的慈爱发挥得淋漓尽致。
时光就这样在斯琴高娃与陈露茜浓醇的母女情中悄然流逝。2005年12月圣诞节,斯琴高娃回瑞士与家人团聚。出乎她意料的是,陈露茜气色很不好,昔日光彩照人的脸变得有些灰暗憔悴。她细问究竟。陈露茜含泪告诉继母:“我和乔亚浦感情出了问题,我想离婚。”
女儿的话让斯琴高娃一脸惊愕,忙问:“孩子,为什么?”陈露茜告诉她,乔亚浦变得越来越没有责任心了,经常在外面和朋友喝酒,很晚才回家,她照顾孩子非常辛苦,可他却没有一点体恤。斯琴高娃松了口气,女儿女婿并没有什么原则性的矛盾,只是生活的琐碎让他们的心灵有了距离。作为过来人,她知道这个问题是可以解决好的。
这天晚上,因为心里有气,陈露茜不愿回家。斯琴高娃态度坚决地说:“你是结了婚的人,那里才是你真正的家。丈夫在家里,你应该回去住。”
第二天晚上,斯琴高娃来到陈露茜家,一直等到晚上10点,乔亚浦才回家。见斯琴高娃在家里,乔亚浦支支吾吾地解释说:“下班后,朋友老拉我去喝酒,我不好意思拒绝他们的热情。”斯琴高娃语重心长地对他说:“你现在是丈夫,是父亲,怎么还能像单身一样?你应该把家庭的担子挑起来。”接着,斯琴高娃讲述了陈露茜带孩子的艰辛和她内心的痛苦。乔亚浦羞愧地低下了头,他向岳母保证,一定“痛改前非”,扮演好丈夫、父亲的角色。
斯琴高娃又细致地开导继女:“乔亚浦毕竟才30多岁,你们结婚也才几年,他要成熟起来需要过程,你得有耐心,得给他时间。组建一个家庭不容易,不要轻易说分手。”继母的开导让陈露茜迈过了心理那道坎,她点了点头。一个星期后,陈露茜在电话里高兴地告诉继母,乔亚浦彻底变了,变得像刚结婚时那样对她好了。斯琴高娃欣慰地笑了……
斯琴高娃一年到头大部分时间在拍戏,远在西半球的陈露茜想到继母已经50多岁,身体又不是很好,身边需要人照顾。于是,她与孙丹商量,希望孙丹能经常陪伴在斯琴高娃身边。2006年7月,孙丹转让了在法国的中餐馆,在北京朝阳区东四十条附近开了一家中餐厅。这样一来,斯琴高娃拍戏间隙就可以到女儿餐厅里,一边享受美食,一边享受女儿的照顾。这下,陈露茜彻底放下心来。
(P
关键词:乌珠穆沁羊;骨骼肌;肌内结缔组织;Ⅲ型胶原蛋白
Changes of Type Ⅲ Collagen in Intramuscular Connective Tissue during Growth of Ujumqin Sheep
WU Qiong, Lü Ya-qiong, ZHANG Dong-mei, BORJIGIN Gerelt*
(College of Food Science and Engineering, Inner Mongolia Agricultural University, Huhhot 010018, China)
Abstract: Ujumqin sheep, aged from 1 to 18 months, were employed in this study. The type Ⅲ collagen of intramuscular connective tissue was extracted and identified by SDS-PAGE, also three major amino acids were determined by high performance liquid chromatography (HPLC), and then the content of type Ⅲ collagen was calculated based on hydroxyproline. The changes of type Ⅲ collagen in intramuscular connective tissue during growth of Ujumqin sheep were analyzed by SAS software. The results showed that the glycine and proline contents in type Ⅲ collagen in intramuscular connective tissues were decreased significantly with increasing age of Ujumqin sheep (P < 0.05), whereas the hydroxyproline content was increased significantly (P < 0.05). In addition, the content of type Ⅲ collagen in intramuscular connective tissues showed a significant increase with the age of Ujumqin sheep (P < 0.05).
Key words: Ujumqin sheep; skeletal muscle; intramuscular connective tissues; Type Ⅲ collagen
中图分类号:TS251.1 文献标志码:A 文章编号:1001-8123(2014)05-0001-05
肌内结缔组织的主要成分、胶原蛋白占动物体全蛋白质的1/4~1/3。因动物的种类、性别、肌肉类型和不同生长阶段中胶原蛋白含量各不相同。肌外膜、肌束膜以及肌内膜有它们独特的形态结构,而这些结构其应对它各自的机能而形成。这些形态结构特征因构成胶原蛋白细纤维的三维结构排列的不同而有所差异。胶原蛋白是由3条多肽链以特有的右旋,形成螺旋状的胶原蛋白分子,构成的多肽链叫α链。胶原蛋白有许多种遗传性变异体。Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ和Ⅵ型胶原蛋白广泛分布于骨骼肌肌束膜和肌内膜之中,Ⅳ型在肌内膜、特别是基底膜的稠密层里存在。Ⅰ型主要存在肌束膜,Ⅲ型以及Ⅴ型在肌束膜和肌内膜中的存在。因结构的不同,有可能食肉质地之间有某种程度的相关关系。Nishimura等[1]报道牛生长过程中的不同类型胶原蛋白的变化和存在位点。Listrat等[2]在猪、兔、生长110d和成年牛骨骼肌中前后发现了Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ型5种胶原蛋白。据报道[3],Ⅲ型胶原蛋白是纤维型胶原蛋白的胚胎形式,随着动物的成熟Ⅲ型胶原蛋白逐渐被Ⅰ型胶原蛋白和具有更成熟交联结构的胶原蛋白所代替。所以Ⅰ型和Ⅲ型胶原在不同年龄动物肌肉中含量不同且还可能相互转换。家畜的不同饲养管理、不同生长速度和饲草料以及血统的不同也影响胶原蛋白特性[3]。随着动物的生长胶原蛋白交联形成的程度增加。这主要受家畜品种、年龄、肌肉部位以及饲养等因素的影响。胶原蛋白总含量、胶原蛋白类型、分子之间的交联形成、热稳定性等影响食肉品质的一个重要因素。Ngapo等[4]发现比利时牛杂交双层肌肉牛和纯种双层肌肉牛的半腱肌和股二头肌中的胶原蛋白含量和胶原蛋白交联浓度也有所差异。Shiba等[5]对山羊肌肉中的速肌之腓肠肌和慢肌的比目鱼肌中胶原蛋白和胶原吡啶交联浓度的变化进行比较研究时发现,出生之前两种骨骼肌中的总胶原蛋白的百分比可溶性胶原蛋白浓度显著下降,之后下降比率慢慢缓解。青春前期之间两种骨骼肌中总胶原蛋白的胶原吡啶交联浓度增加,但比目鱼肌中胶原吡啶交联浓度与腓肠肌相比增加的快而浓度高。胶原吡啶交联浓度的增加是出生前期之间开始,而且随着年龄的增加交联程度的发达比目鱼肌中的比腓肠肌的快。
本研究采用我国优良地方品种乌珠穆沁羊,研究生长过程中骨骼肌Ⅲ型胶原蛋白变化。以往对羊肉的相关研究主要集中在宰后肉的成熟、饲草料与肉风味之间的关系方面研究较多。而对家畜生长过程中不同类型胶原蛋白在肌内结缔组织中含量方面的研究极少。已有文献对乌珠穆沁羊生长过程中肌内结缔组织胶原蛋白含量和热溶解、蛋白多糖、胶原蛋白细纤维变化、吡啶诺林含量、糖醛酸含量、肌纤维类型变化以及Ⅰ型胶原蛋白等方面进行了探讨过[6-9]。因此,在此研究基础上进一步探讨乌珠穆沁羊的骨骼肌中Ⅲ型胶原蛋白的含量进行探讨。以及不同月龄肉羊的骨骼肌进行对比研究。这对掌握乌珠穆沁羊的肌内结缔组织的变化规律和乌珠穆沁绵羊的产肉性能的改变和肉质量的提高、食肉嫩化成熟机理研究等提供重要的科学理论依据。对于畜牧业生产和畜产食品加工具有重要意义。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
选择自然放牧条件下的1、3、6、9、12 月和18 月龄的乌珠穆沁羊,所选的各月龄肉羊是同一个羊群中年龄相同的去势公羊,每个月龄选用3 只。屠宰后采取股二头肌,将样品直接投入液氮中速冻,放置在-80 ℃条件下保存。
三羟甲基氨基甲烷(Tris)、十二烷基硫酸钠(SDS) 南京博尔迪生物科技有限公司;盐酸胍 上海生工生物;β-巯基乙醇、胃蛋白酶(Pepsin)、四甲基乙二胺(TEMED)、过硫酸铵(APS)、溴酚蓝、羟脯氨酸对
照品 美国Sigma公司;乙二胺四乙酸二钠(EDTA)、苯基甲烷磺酰氟化钠(PMSF)、考马斯亮蓝R-250 加拿
大BIObasic Inc生物工程公司;对甲氧基苯磺酰氯(MOBS-Cl)、脯氨酸对照品(L-proline) 成都格雷西亚化学技术有限公司;甘氨酸对照品 上海源叶生物科技有限公司;乙腈(色谱纯) 天津市光复精细化工研究所。
1.2 仪器与设备
Arium 61316超纯水器 德国赛多利斯仪器厂;XHF-D型高速分散器 宁波新芝生物公司;H2500R-2型冷冻高速离心机 湖南湘仪离心机仪器有限公司;BG-power 600型稳流恒压电泳仪 北京百晶生物技术有限公司;LGJ-10C型冷冻干燥机 北京四环科学仪器厂有限公司;pB-10型pH计 北京赛多利斯科学仪器有限公司;DSH-300A型回旋式恒温水浴振荡器 上海
雅荣生化设备有限公司;GRX-9253A型热空气消
毒箱 上海一恒科技有限公司;SHB-Ⅲ 循环水式多用真空泵 郑州长城科工贸有限公司;KQ-800TDE型高频数控超声波清洗器 昆山市超声仪器有限公司;Agilent Technologies 1260 Infinity HPLC 美国Agilent公司。
1.3 方法
1.3.1 Ⅲ型胶原蛋白的提取
参考久保木方德[10]、永井裕[11]和Fujii等[12]的方法进行提取。取肌肉组织20 g,实验时4 ℃下解冻,除去外侧脂肪和肌外膜;破碎,将肉样置于烧杯中加入10倍量(V/V)的洗净液(1 mL β-巯基乙醇,1 mL PMFS,5 mL EDTA,3.582 g Na2HPO4,用蒸馏水定容至1 L)充分搅拌之后破碎均质;离心(5000 r/min,15 min),去除上清液,沉淀上加肉样的10倍量(V/V)洗净液,缓慢搅拌3~10h后离心;重复5~7次,直到上清液透明为止。去除上清液,沉淀上加肉样10倍量(V/V)抽出液(1 mg/mL
胃蛋白酶-0.5 mol/L醋酸),缓慢搅拌室温下过夜;离心(10 000 r/min,20 min),将上清移入烧杯中,缓慢搅拌并加入粉末状NaCl,使终浓度达到2 mol/L,
室温过夜;离心(10 000 r/min,20 min),去除上清液,沉淀用10倍量50 mmol/L醋酸溶液溶解;离心,上清液加入粉末状NaCl,使终浓度达到1 mol/L,缓慢搅拌过夜;离心后用沉淀的10倍量50 mmol/L醋酸溶液溶解,分别用 0.45 mol/L NaCl-5 mmol/L Tris-HCl缓冲溶液和1.2 mol/L NaCl-5 mmol/L Tris-HCl缓冲溶液透析12 h;高速离心,取沉淀,4 ℃用蒸馏水透析12 h,离心(100000×g,1 h),取沉淀(Ⅲ型胶原蛋白)备用。
1.3.2 利用聚丙烯酰氨凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gelelectrophoresis,SDS-PAGE)对Ⅲ型胶原蛋白纯度的鉴定
参考Leammli[13]的方法对冻干的各月龄Ⅰ型胶原蛋白样品进行SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳[10]。分别配制8%的分离胶和5%的浓缩胶溶液。凝胶后,用微量取样器吸取已处理好的蛋白质样品12 μL,分别单个注入胶孔。保持恒压100 V,进行电泳。电泳结束后,加入染色液过夜,次日倾出染色液,用蒸馏水漂洗2次,然后加入脱色液,室温浸泡凝胶,直至蛋白质区带清晰为止,采集图像。
1.3.3 利用高效液相色谱测定Ⅲ型胶原蛋白中3种主要氨基酸含量
参考周桂友等[14]、崔琳等[15]的方法测定Ⅰ型胶原蛋白中羟脯氨酸、甘氨酸和脯氨酸的含量。将冻干的Ⅲ型胶原蛋白溶于6 mol/L HCl溶液中,110 ℃水解12 h,冷却,用6 mol/L NaOH溶液中和后取胶原蛋白水解液1 mL,加入5 mL乙腈,超声振荡20 min,然后在离心机中以5 000 r/min
离心10 min。取离心后上清液200 μL加入200 mmol/L
Na2HPO4溶液1 mL和500 μmol/L MOBS-Cl溶液200 μL使其充分混合,混合物在45 ℃恒温振荡反应35 min。冷却后,上层溶液经0.22 μm滤膜过滤后进入高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)分析。
色谱条件:SB-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 ?m);流动相组成:A相为磷酸缓冲液(15 mmol/L,
pH3.5),B相为乙腈(使用前过0.22 μm滤膜),梯度洗脱:0~8 min,17%~34% B,8~10 min,34%~40% B,10~15 min,40% B,15~20 min,40%~17% B;流动相流速1.0 mL/min;柱温35 ℃;检测器检测波长232 nm。
1.3.4 各月龄乌珠穆沁羊肌内结缔组织中Ⅲ型胶原蛋白含量测定
参考Grant[16]的方法计算Ⅲ型胶原蛋白百分含量:胶原%=HYP%×7.46(7.46为换算常数)。
2 结果与分析
2.1 SDS-PAGE凝胶电泳分析Ⅲ型胶原蛋白
1. 1月龄;2. 3月龄;3. 6月龄;4. 9月龄;5. 12月龄;6. 18月龄。
图 1 骨骼肌Ⅲ型胶原蛋白的SDS-PAGE电泳图
Fig.1 SDS-PAGE profile of type Ⅲ collagen of skeletal muscles
由图1可知,Ⅲ型胶原在SDS-PAGE凝胶上得到清晰的分离,条带中显示出一条α(Ⅲ)肽链与一条β(Ⅲ)肽链,其中β(Ⅲ)肽链是α(Ⅲ)的二聚体,基本符合Ⅲ型胶原蛋白的结构特征,可以初步判定所提取的胶原蛋白为Ⅲ型胶原蛋白。图中各月龄条带深浅基本一致,可以说明Ⅲ型胶原蛋白各月龄之间变化不大。
2.2 胶原蛋白中三种主要氨基酸含量测定结果
2.2.1 线性关系考察
取羟脯氨酸13.1 mg、脯氨酸11.5 mg、甘氨酸7.5 mg,置100 mL容量瓶中,用200 mmol/L pH 9.3的Na2HPO4衍生缓冲液配制成1 mmol/L标准液,分别稀释成浓度为2、5、10、25、50、100、250、500 μmol/L的标准溶液。定量移取每种氨基酸1 mL于10 mL具塞试管内,加入MOBS-Cl的乙腈溶液(500 μmol/L)2 mL,混匀,盖紧瓶塞后将其放入45 ℃水浴锅中恒温振荡35 min。进样前用0.22 μm滤膜过滤。按上述色谱条件,移取标准系列反应液各20 μL进样,以峰面积值(A)为纵坐标,氨基酸浓度(c)为横坐标,绘制标准曲线,计算回归方程(表1)。
2.2.2 胶原蛋白中3种主要氨基酸含量测定
1.脯氨酸(proline)2.甘氨酸(glycine)3.羟脯氨酸(hydroxyproline)
图 2 对照品(A)和样品(B)的HPLC色谱图
Fig.2 HPLC chromatograms of reference substances (A) and sample (B)
按照建立的HPLC方法分别对实验中提取的各月龄(1、3、6、9、12、18月龄)的Ⅲ型胶原蛋白中3种主要氨基酸,即羟脯氨酸、甘氨酸和脯氨酸的含量进行测定。如图2所示(以1月龄为例),通过峰面积积分值代入回归方程,求得各氨基酸平均含量,结果如表2所示。
从表2可看出,随月龄的增大,乌珠穆沁羊骨骼肌肌内结缔组织中羟脯氨酸不断增加,甘氨酸和脯氨酸含量有不断减少的趋势。通过SAS软件的ANOVA方差分析对所测结果进行分析可知,Ⅲ型胶原蛋白中甘氨酸和脯氨酸在1月龄和3月龄之间差异不显著(P>0.05),其他各月龄之间2种氨基酸含量差异显著(P
2.2.3 乌珠穆沁羊生长过程中Ⅲ型胶原蛋白含量的变化分析
同理计算Ⅲ型胶原蛋白含量。表2中的数据表示各月龄每单位湿质量乌珠穆沁羊股二头肌中Ⅲ型胶原蛋白含量的平均值和标准差。根据表2中的数据可知,随月龄的增加,肌内结缔组织中Ⅲ型胶原蛋白的含量不断增加。通过SAS软件的ANOVA方差分析对所测结果进行分析可知,Ⅲ型胶原蛋白含量各月龄之间差异均显著
(P
3 讨 论
Ⅲ型胶原蛋白是构成肌内结缔组织中肌内膜和肌束膜的主要成分之一,它的含量与性质对食肉嫩度和食肉加工特性有一定影响。Seideman等[17]报道,不同品系的牛和羊,由于它们的性成熟时间不同还会使品系和性别、年龄一起协同影响肌肉内胶原蛋白的含量。此外,来自相同品系的牛和羊,同一肌肉的不同部位中胶原蛋白含量也存在差异。Lovell等[18]研究证明,哺乳动物Ⅲ型胶原蛋白的含量在其生长初期处于较高水平,但随着动物生长期的不断延长,由于胶原蛋白酶的作用使得Ⅲ型胶原蛋白部分被降解,从而导致Ⅲ型胶原蛋白的含量逐渐降低,而Ⅰ型胶原蛋白的含量逐渐升高。Ⅲ型胶原蛋白和Ⅰ型胶原蛋白分子的不同之处在于,Ⅲ型胶原蛋白分子之间含有二硫键,这个共价键在肉制品的加热熟制过程中,由于热收缩而引起成熟胶原蛋白稳定性的增加,从而使肉的硬度增加。Mccormick[19]认为,随着动物年龄的增长,胶原蛋白之间非还原联的结构增多,这就使得胶原蛋白更加稳定,难以消化和水解,从而导致肌肉嫩度下降。李晓波[20]对不同月龄苏尼特羊的不同部位的肌肉总胶原蛋白含量进行分析后表明,随着月龄的增加,总胶原蛋白的含量呈增加的趋势,同一月龄不同部位肌肉中总胶原蛋白含量也不同。本课题组已有研究也证明了乌珠穆沁羊随着月龄的增加肌内结缔组织以及Ⅰ型胶原蛋白含量不断增加[6-8]。肌肉中胶原蛋白含量的增加与肌肉组织本身的生长发育有同步的原因是因为随着动物年龄的增加,胶原纤维的平均直径及分子间的交联程度不断增加,肌肉中的胶原蛋白以量的增长为主,当达到一定年龄后,肌肉中的胶原蛋白则主要与分子间的交联结构变化有关。本实验分析了乌珠穆沁羊随月龄的增加肌内结缔组织中Ⅲ型胶原蛋白含量的变化规律,但对家畜肌内结缔组织中胶原蛋白共价交联以及它的交联程度对肉质的作用还存在争议,有待进一步研究。
4 结 论
不同月龄乌珠穆沁羊肌内结缔组织Ⅲ型胶原蛋白在SDS-PAGE凝胶上得到清晰的分离,条带中显示出一条α(Ⅲ)肽链与一条β(Ⅲ)肽链,其中β(Ⅲ)肽链是α(Ⅲ)的二聚体;乌珠穆沁羊生长过程中,随月龄的增大肌内结缔组织中甘氨酸和脯氨酸含量显著下降(P
(P>0.05),其他各月龄之间2种氨基酸含量均差异显著(P
(P
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5月12日 国际护士节
给护士阿姨的一封信(北京理工附中初一(8)班 阎旭)
每当晨曦降临到窗前,每当生日的蜡烛熄灭的瞬间,我的眼前都仿佛出现一个模糊的身影――白色的身影或是粉色的身影,慢慢地清晰,最终化作母亲的微笑。
您还记得我吗?我睁开双眸的第一次,那隐约闪现的身影。我不知道您的姓名,甚至无法清晰地回忆您的面容,但我知道您有一颗美丽善良的心。在那些充满关爱的日子里,我想说,谢谢您,护士阿姨!接引我来到人间的天使。
5月13日 国际母亲节
给妈妈的一封信(山东省东营市春晖小学一(3)班 耿子涵)
亲爱的妈妈:
您好!5月13日是国际母亲节,我想写这封信作为节日礼物送给您。
妈妈,您为我做了很多,我都记在心里呢!是您陪我慢慢长大,让我懂得很多。我上一年级了,您更辛苦了。每天上学送我放学接我,晚上还陪我做作业。您对我的学习从来不放松,是您让我对学习有了兴趣。
妈妈,我爱您,我每天都离不开您。我在心里感谢您,心疼您!我想在5月这个特殊的日子里好好表现,让您开心、快乐地度过这个有意义的节日。让您知道,我想当一个孝顺的好女儿。
祝您身体健康,万事如意,节日快乐!
世上只有妈妈好(江苏省海门市海门镇中心小学二(1)班 黄炜博)
“世上只有妈妈好……”听着那动听的歌声,我就不由得想起我的妈妈。虽然她长得不是很美,可她高兴时笑眯眯的,我就觉得她是最美的。在我眼里,妈妈的笑像春雨,绢丝一样轻柔地滋润着我,让我变得生机勃勃;妈妈的笑像春风,温柔地从我身上拂过,令我不由得泛起了笑容;妈妈的笑更像阳光,时刻温暖着我,使我精神抖擞、活力四射。那笑容里隐藏着我信心的源泉和前进的动力。妈妈,我想悄悄地告诉你,母亲节快到了,我要送你一份礼物,那就是用我的闪光卡来换取你每天灿烂的笑容。妈妈,你笑起来真的很美!
母亲节计划(四川省南充市蓬安县实验小学五(3)班 郑镜蓉)
在母亲节那天,我要给妈妈送上礼物和关怀,要让妈妈感到幸福和快乐!我制定了以下计划:
一、用我挣的稿费去买一些紫色的带子,做一枚戒指和一束玫瑰花,在母亲节那天送给妈妈。
二、那天早上,我会在妈妈起床之前,悄悄地为妈妈准备一份她爱吃的早餐。
三、下午我会带妈妈到江边去玩,给她买她最喜欢吃的糖烧馍。
四、晚上我会给妈妈洗脚,修脚指甲,和妈妈一起睡大床,给妈妈讲故事,陪妈妈睡觉。
亲爱的妈妈(广东省阳春市第一中学一(35)班 冼业娟)
你为我的操劳磨起了岁月的皱纹,风雨里含辛茹苦。你的温暖浸润了我不少美丽的梦。你的
眼睛是我永远愿意沉迷的温暖,你的怀抱是我永远不舍起航的港湾,你的双手是我永远不能忘怀
的春风。你给了我多少关爱多少希望,多少呵护多少情!在这里,请接受女儿最诚挚的感谢:妈
妈,谢谢你!女儿一直想对你说:“妈妈,你是女儿这辈子最爱的人!妈妈,我爱你!”
5月15日 国际家庭日
长大了,我要养他(四川省会理县实验小学一(2)班 罗逢兴)
三外公从小就脚残、智障、口吃,就是这么一个“废”人,活了半个世纪,其中原委,是家庭的关爱给了他生命的活力。不抛弃不放弃照顾残疾生命,成为我家有别于其他家庭的独特生活方式,一代代接力照顾下去。一个残疾生命牵动三代人的真情,龙年春节,我悄悄把50元的压岁钱给三外公送去。当三外公接过我的钱时,出乎意料,眼眶里有泪花闪烁,手颤抖着把钱递给我:“娃儿……娃儿的……钱……我不……不……要。”妈妈流着泪说,这是孩子的心意,收下吧。
5月20日 全国助残日
你是否给了他们微笑(同济大学第二附属中学预备(2)班 王佳樱)
你是否给了他们拥抱?你是否给了他们温暖的眼神?
他们是十分令人怜惜的残疾人,我认为他们也可以活得精彩!就像第一季达人秀中的冠军“断臂钢琴师”刘伟,不也创造了难以想象的辉煌吗?
沉睡的心灵,醒来吧!你们的人生坎坷与痛苦我们知道,前方的道路无论多艰难,我们会帮助你们,这不是同情与怜悯,我愿意付出,相信未来吧。
5月31日 世界无烟日
给外公的留言(江西省赣州市章贡区西津路小学四(1)班 兰小烽)
外公,您在外孙的心目中,是一个了不起的人,因为您对人和蔼,受人尊敬。而今,您在我的心中已经出现了“信任危机”。因为每当我看您“吞云吐雾”,就觉得您是个“杀手”,而被害人就是您、我和外婆,凶器正是您心爱的香烟。
父亲节:每年6月的第三个星期日
那么它们都是怎么来的呢??
母亲节的来历
母亲节是美国法定的全国性节日。在每年5月的第二个星期日举行。为母亲过节最早源于古希腊的民间风俗。那时,古希腊人每年春天都要为传说中的众神之母、人类母亲的象征--赛比亚举行盛大的庆祝活动。但这时还未形成母亲节。
母亲节是由一位名叫贾维斯的妇女倡导,并由她的女儿安娜·贾维斯发起创立的。
贾维斯夫人是一个有着10个子女的母亲,是当时美国格拉夫顿城教会主日学校的总监。在美国以解放黑奴为目的的南北战争结束后,她在学校里负责讲述美国国殇纪念日的课程。贾维斯是一位心地善良,极富同情心的女人。她讲述着战争中那一个个为正义捐躯的英雄的故事,望着台下那一张张充满稚气的孩子们的脸,一个想法猛然涌上心头:为祖国贡献了这么多英勇战士,保证了战争胜利的,不就是那一个个含辛茹苦地抚育着子女的母亲们吗?她们的儿子血染疆场,承受了最大的痛苦和牺牲的,不也是这些默默无闻的母亲吗?因此,她提出应该设立一个纪念日或母亲节,给这些平凡的女人一些慰藉,表达儿女们对母亲的孝思。可惜的是,这个良好的愿望还没有实现,贾维斯夫人便与世长辞了。她的女儿安娜·贾维斯目睹母亲抚养自己和兄弟姐妹成人的辛劳,深感母亲的提议是适合天理人心的。因此,她写出了几十封信,发给美国国会。地方州长和妇女组织等,提议创立母亲节。在她的一再呼吁下,这一提议得到了社会上的广泛响应和支持。
1914年,美国总统威尔逊郑重宣布,把每年5月的第二个星期天,也就是贾维斯夫人的忌日,定为母亲节。美国政府还规定,母亲节这天,家家户户都要悬挂国旗,以表示对母亲的尊敬。由于贾维斯夫人生前喜爱康乃馨花,这种花也就成了母亲节的象征。
母亲节是个充满人间温情的节日,这一天,家里的男成员要把全部家务活都包下来,儿女们每人都要做一件让母亲高兴的事,以尽孝道。即使远在异地的孩子,也要打电话向母亲表示祝贺。这一天,美国人民都要在胸前佩上一朵花。母亲健在的,戴一朵有色的花,表示欢愉;母亲逝世的,戴一朵白花,表达哀思。
母亲节创立后,也得到了全世界各国人民的支持。安娜·贾维斯在世时,设立母亲节的国家已达43个。时至今日,欢庆这个节日的国家就更多了。母亲节,已经成了一个名副其实的国际性节日。按惯例,“国际母亲节”被定在每年的5月11日举行。
日本的母亲节也是5月的第二个星期日。节日里人们送给母亲一枝红石竹,表示祝贺。
母亲节在我国是地区性节日,最早是在港澳台地区有此节日。改革开放后,母亲节也为内地所接受。广东省于1988年开始,杭州等城市于1989年开始,都由各级妇联组织母亲节的庆祝活动,并把评选“好母亲”作为节日的内容之一。
关于“父亲节由来”,有两个说法:
第一个说法:
1909年,华盛顿一位叫布鲁斯·多德的夫人,在庆贺母亲节的时候突然产生了一个念头:既然有母亲节,为什么不能有个父亲节呢?