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[关键词] 冰片; 鉴定方法; 鉴别方法; 龙脑
[中图分类号] R932[文献标识码] A[文章编号] 1005-0515(2011)-01-136-01
中药冰片为龙脑香料常绿乔木龙脑香Dry obalanop sarornatica Gaertaf. 树脂的加工品(称为“梅片”), 或菊科植物B lum ea balsam if era DC.的提取物(称为“艾片”),或以樟脑、松节油为原料经化学合成的加工制成品(称为机制冰片), 天然冰片主成分是龙脑(bo rneol) , 合成冰片为外消旋体, 其中含有大量异龙脑(isobo rneo l)。
中药冰片来源、用途广泛,对其成分进行的鉴定十分必要。冰片从外观上看为白色透明或白色半透明的结晶,很容易掺有其他外观相似的物质而以次充好,所以,在使用前应进行鉴别。现通过回顾近十年有关冰片的鉴定分析及对掺有其他物质冰片的鉴别研究,探讨冰片的鉴定、鉴别方法,为其临床安全用药提供保证。
1 冰片的鉴定
1.1 生药材鉴定
①龙脑冰片,为龙脑香树脂的加工品。呈半透明块状、片状或颗粒状结晶,直径1~7 毫米,厚约1毫米,类白色至淡灰棕色。气清香,味清凉,嚼之则慢慢溶化。微量升华后,在显微镜下观察,其结晶为棒状或多角形。燃烧时无黑烟或微有黑烟。以片大而薄、色洁白、质松、气清香纯正者为佳。②机制冰片。呈半透明薄片状结晶,直径5~15毫米,厚约2~3毫米。白色,表面有如冰的裂纹。质松脆有层,可以剥离成薄片,手捻即粉碎。气清香,味辛凉。燃烧时有黑烟,无残迹遗留。另有菊科植物艾纳香 Blumea balsamifera DC的叶提取的结晶,习称艾片。
1.2 中成药中冰片的鉴定
2005 年版《中国药典》中收载了20 多种含冰片的中成药,如安宫牛黄丸、冰硼散、复方丹参滴丸等,其中的很多成药中还含有与冰片结构类似的化合物,如樟脑和薄荷脑等。文献[5]用GC 法测得3 批
冰芷滴鼻剂中龙胆的含量分别为0. 127%、0. 122%、0. 125%。文献[6]同法测定了痛瘀消散贴中冰片和樟脑的含量,结果每1 g 痛瘀消散贴中含冰片以龙脑计不得少于35 mg,樟脑不得少于57mg。
2 冰片的鉴别
2.1 经验鉴别
纯品冰片为无色透明或白色半透明的片状松脆结晶,似雪花状,手感较平,有清香气,味辛凉。而混淆品为樟脑或樟脑掺入少量冰片经人工压制而成的无色透明或半透明片状。因为人工压制,其压制平面较平直,片形大且厚,质地坚实,无自然结晶的疏松不规则雪花状, 手感较湿,有刺激性臭味, 味初辛,后清凉。而掺入少量白矾的混淆品除具上述特征外,并可见非片状(块状或颗粒状)的无色透明或半透明细小结晶、味酸、涩、咸。
2.2 理化鉴别
2.2.1 取冰片及其混淆品各10mg,分别加乙醇数滴使溶解,分别加新制的1%香草醛硫酸溶液1~2 滴。冰片显紫色,而混淆品不显色或紫色较淡(掺有少量冰片)。
2.2.2 取冰片及其混淆品各3g,分别加硝酸各10ml。冰片即发生红棕色气体,而混淆品则无。
2.3 结果
2.3.1 冰片显紫色,而混淆品不显色或紫色较淡(掺有少量冰片)。
2.3.2 冰片即发生红棕色气体,而混淆品则无。
2.3.3 掺入白矾的混淆品其水溶液显铝盐、钾盐与硫酸盐的鉴别反应。如其水溶液加氯化钡试液生成不溶于盐酸及硝酸的白色沉淀(鉴别硫酸盐);其水溶液加氢氧化钠生成白色胶状沉淀,沉淀在过量的氢氧化钠试液中溶解(鉴别铝盐)等。
3 展望
冰片对中枢神经系统的作用以及其促进治疗中枢神经系统疾病药物透过血2脑屏障的作用机制, 还有待进一步深入研究, 这不仅对阐明冰片的药效有一定研究意义, 更重要的是利用冰片“引药上行”的功效为开发脑靶向给药系统提供一种有利的工具。鉴于目前心脑血管疾病患者的增多, 研究相应的对策已成当今药物研究开发的重要领域, 深入研究冰片的药理作用, 特别是对心脑血管以及中枢神经系统的作用机制, 这将为心脑血管疾病以及中枢神经系统疾病的治疗开辟新的途径。
冰片的鉴定和鉴别方法可分为两类,第一类理化鉴定,其中包括外观性状的鉴定、显微鉴定以及理化实验; 第二类为色谱鉴定,其中包括TLC、GC、GC - MS 等。只有将其中的几种方法结合使用才最为合理,如理化实验和TLC 法结合进行简单的鉴定分析或是TLC 法结合GC 法进行含量测定。另外,有些药店中出售的冰片樟脑的含量可达45%,有的甚至达到97%,中医认为冰片无毒而樟脑有毒,如果这种冰片用于临床的话,对身体健康会造成危害,若将其用于科学实验,所得的结论也将毫无意义,因此,有必要在使用冰片前对其进行简单的鉴定分析以确保其质量,这样才能为临床安全用药和实验提供保证。
参考文献
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[3] 邓茂芝,龙玉琼. 冰片与假冰片的比较鉴别J]. 中国药事,2007,21( 5) : 350.
我院体疗科担负着特勤疗养员的体能训练任务。多年来我们在坚持传统的锻炼项目的同时,始终在寻找和探索针对职业特点的体练方法。最近,我们将自行创编的一组水兵健身操运用于来我院疗养的潜艇艇员,内容如下。
1 水兵健身操的创编与目的
潜艇艇员发病有三大特点和危害:其一,舰艇官兵长期工作在空间狭小,仪器和设备密布的战位上,操作的姿势单一固定,活动空间极为受限。加之高温高湿的侵害,易使肌体的某一关节部位和骨骼肌肉造成劳损和损伤。其二,由于长期生活在多种有害气体的环境中,对心肺功能损伤大,加之高气压环境下由于压力和氧分压的增加可使心率呼吸频率减慢,血管舒张压升高,血管外周阻力和呼吸阻力增大。其三,在长航过程中,由于远距离航行海域的不同,时间和季节变换,使人易产生头昏,乏力,睡眠欠佳,注意力不集中,甚至心情郁闷等亚健康状况。为使艇员在两个航次之间迅速而有效的恢复体能和调整好精神状态,除了有的放矢的治疗外,我们还创编了一套水兵有氧健身操进行辅矫正。
2水兵健身操的训练内容与对象
我们选用了动感性较强的,大家熟悉和喜爱的军旅音乐,踏着青春的脚步,使潜艇官兵在身心愉悦中接受有氧健身训练。本套操共分六个部分:①头颈部,②肩臂部,③腰胯部,④脚足部,⑤热身,⑥伸拉放松。共需30min。在做完操之后,达到热身、骨骼肌肉锻炼充分、心肺功能得到充分的有氧训练。
组织首次试训的人数共58名,最小年龄19岁,最大年龄34岁,平均年龄26.6岁。每日一次,每次为30min,共组织了28个锻炼日。30min有氧水兵健身操,其运动强度心率最高达114~130次/分,平均为103~112次/min,最高收缩压和舒张压分别为19.5kPa和13kPa,平均分别为16kPa和10.5kPa。
3 水兵健身操训练后有关健康数据
3.1 心肺功能的明显变化 与训练前比较,心率平均降低10次/min,肺活量明显增加(表1)。
3.2 肌力的明显增强 我们对腰背和腿肌进行测试(表2)。
3.3 亚健康状态的改善和变化(表3)。
4 讨论
水兵健身操是为水兵官兵量体裁衣精心编排的,适合艇员在长航和日常训练中运用。潜艇艇员反映,该套健身操是集保健娱乐于一体的有氧健身运动,值得推广。
[关键词]水稻纹枯病 抗性鉴定 遗传多样性
中图分类号:S5 文献标识码:A 文章编号:1009-914X(2016)25-0395-01
田间水稻纹枯病的泛滥严重威胁着我国粮食的总体产量,在其发展的多年时间里,有很多的科研人员研究其发病机理,随着人们对于纹枯病菌重视程度的提高,我们了解其适宜的生长环境与病害发生程度的相关因素。但是,纹枯病菌的适应能力超强,容易大量繁殖,我国在水稻纹枯病抗性遗传方面的研究就非常有限。本研究将从纹枯病菌入手,同时阐述病菌致病型的鉴定技术,希望能够为我国水稻种植提供帮助。
1.水稻纹枯病菌的相关探究
要想确立并完善田间水稻纹枯病抗性鉴定体系,应该首先了解纹枯病菌的生长形态与致病机理。水稻纹枯病的病原菌为立枯丝核菌,其有性态为瓜王革菌,初生菌丝无色,分枝与主枝近于直角,分枝基部明显缢缩,距分枝不远处具分隔。通过相关的实验测定认为,水稻纹枯病菌菌丝细胞为多核,菌核由菌丝体交织纠结而成,开始的时候为乳白色,之后逐渐变黑,成熟之后具有粗糙的表面与坚固的保护层,可以让纹枯病菌抵抗严寒与恶劣的自然环境。对于纹枯病菌的多样性研究也是十分必要的,运用菌丝融合作为立枯丝核菌的种内分类与鉴定方法,能够最大限度的将各种融合群的遗传本质体现出来,有利于接下来的融合菌群与遗传菌群的关系研究,立枯丝核菌不同菌系间的菌丝生长速度、菌核形成所需时间、菌核多少等性状存在明显的差异。笔者通过大量的实验室研究并观察菌群在培养皿中的分布情况认为,纹枯病菌的培养性状可以分为中央分布、边缘分布于随机分布三种。
2.田间水稻纹枯病抗性鉴定体系的建立
2.1 水稻纹枯病菌的致病型鉴定
分析植物至病的原因以及病菌的类型与分化方式能够有助于植物物种的抗性鉴定与品种杂交,尤其是对水稻种植而言,应该广泛地采取多种鉴定体系实现水稻纹枯病菌的致病型的鉴定,其中成株接种测定的方法最为常见,其优点是能够客观的分析出致病菌株的程度与扩展进度之间的关系,从而便于合理的分配水稻的种植空间。实验结果证实了纹枯病菌致病的多样性,表现为水稻不同面积的患病。事实上,致病菌株的数量呈现连续的分布界限,这也体现为致病能力的不同。还有一种方法就是稻杆离体接种法。顾名思义,就是将水稻置于实验室的特殊环境下。当然,这也要模拟水稻实际的生长环境,通过将患有纹枯病的稻杆与正常的水稻接种,组成新的稻杆后培养观察,从而探究纹枯病菌的致病类型。这种方法简单实用,但对于实验设备与技术要求较高,而我国大部分地区不能够实现全面推广。所以,目前我国对于田间水稻纹枯病菌的致病类型还没有全面的研究,建立完善的纹枯病抗性鉴定体系迫在眉睫。
2.2 菌株与纹枯病抗性鉴定
由于田间水稻纹枯病的生长速度较其他的菌株生长迟缓。因此,在选择致病菌株做实验的时候要收集不同的水稻做实验数据,为了建立水稻纹枯病抗性鉴定体系,最好选择生长三个月的水稻幼苗,其抗性与致病性能够有统一的表现型。与此同时,完善的水稻纹枯病抗性鉴定系统需要相应的评价机制,这不仅有利于纹枯病害的防治,还有利于水稻纹枯病菌遗传工作的展开。相关的科研人员需要认真的工作态度与理想的鉴定方法。幸运的是,水稻纹枯病的抗性性状比较典型,也就是说,可以通过已感染病害的水稻来研制抗性更高的品种。可见,科学高效的资源评价机制至关重要,需要大量的实际经验与专业知识做基础,制定出符合我国国情的水稻纹枯病抗性鉴定体系。菌株与纹枯病抗性鉴定实验首先应该将菌株放在适宜的培养基中,当新的接种菌株培养完成后,再加入一定浓度的四环素,要保证避光的培养条件,温度不要超过三十摄氏度。最后,把新培养出的菌种放在另一种碱性培养基中使其继续繁殖一个星期,即得到我们要研究的菌丝团。需要注意的是,实验室模拟的是正常的田间环境,取样时选择被实验水稻的实际生长土壤,在其中注入消毒液,使得土壤底部有一定的预留空间。植株对纹枯病菌抗感表现的表型数据是将病斑生长高度除以幼苗底部到第一个叶领的高度的比率。实验证实,纹枯病菌不容易产生芽孢。因此,很难确定致病菌株的数量与分布,以往的接种方法不能够有效的防止周边菌株被传染,而且目前我国发现的水稻高抗品种价格昂贵,不能够大规模使用,还需要一套鉴别寄主之间细微差别的抗性鉴定技术。
3.对水稻纹枯菌的遗传多样性研究
3.1 水稻纹枯病菌的分子遗传
研究田间水稻纹枯病的遗传多样性具有十分重要的意义,尤其是菌群的遗传结构可以反映出遗传的变异类型及空间分布方式,其中包括菌株之间与菌株内部的研究、有性生殖与无性生殖的影响以及选择作用对于遗传变异的影响等。选择不同的病害防治方法在一定程度上影响着致病菌的遗传性状。同时,外界环境的改变也决定着变异的速度与程度。另一方面,对纹枯病菌进行遗传标记能够更方便实验数据的统计和分析,要随机的扩增基因片段的多态性,引入目的基因进行核算复制,再通过扩增反应将纹枯病菌引物与核算模板配对,从而实现致病菌的人工繁殖。需要注意扩增的特异性以及退火温度的控制。水稻纹枯病菌的分子遗传是建立抗性鉴定系统的基础,应用核糖体限制菌核的融合,再分析同一融合群内的特征谱带数目,尽管纹枯病菌的分子遗传方法众多,但是各有利弊,应该根据实际情况选择使用,最大限度地避免实验偏差,提高菌株遗传准确性。
3.2 菌株生物学指标与遗传多样性分析
纹枯病菌的致病能力与菌株的生长速度存在正相关,通过计算线性回归方程能够发现纹枯病菌的毒性与生殖能力之间的关系,通过实验数据的比较还不能够非常准确地确定纹枯病菌的生物学指标。但是从中可以得出水稻纹枯病菌的生长速率以及致病力与 ISSR 遗传聚类组群的相关性不明显。我国种植水稻的地域极为广阔,不同地区由于环境因素与种植方法的不同使得水稻纹枯病的遗传基因出现多样性。例如,福建地区水稻纹枯病的发病就较为迅速,且波及范围大;而北方地区的水稻种植虽然面积较南方小,但是纹枯病的遗传性状较为稳定,不容易出现大范围的爆发。那么,如何鉴定纹枯病菌的致病力,采用谷物接菌法接菌鉴定不同地理来源菌株的致病力,结果表明不同地理来源以及同一地理来源不同菌株的致病力差异明显。
4.结语
综上所述,本研究对如何建立与完善田间水稻纹枯病抗性的鉴定系统进行了阐述,强调了研究纹枯病菌遗传多样性的重要意义。同时,对于水稻等寄主的协同进化研究成为分析区域分化群体特征的依据。尽管目前许多学者对纹枯病菌展开研究,但尚未确定统一的实验鉴定体系。如何采用正确的实验方法获取尽可能可靠的实验数据是研究工作成败的关键,也是今后值得重视的课题。希望通过研究水稻纹枯病菌遗传结果的变化,能够对水稻病虫害的防治提供一定的帮助。
参考文献
[1] 郑君海,邹吉承,张燕之等.水稻纹枯病抗性遗传研究进展[J].辽宁农业科学,2006(2):69-70.
关键词:宽柄芥;胞质雄性不育系;选育;性状;鉴定
中图分类号:S637.2 文献标识码:A 文章编号:1001-3547(2016)22-0049-04
宽柄芥(Brassica juncea var. latipa)属芥菜类蔬菜的一个变种[1],俗称笋壳菜、青菜、宽板菜等,是闻名于世的四川酸(泡)菜的主要原料,也是市民鲜食或农户常作饲用的蔬菜种类之一。因其叶柄及中肋宽大肥厚、质地脆嫩,且有一定辛辣味,煮汤或涮火锅味道尤美,具去热、御风湿、利五脏、补天阳、促进血液循环之功效[2],所以颇受世人喜爱。但目前,国内外还未见有关宽柄芥胞质雄性不育系的选育与研究的报道,限制了该作物杂种优势利用工作的开展。本项研究从2010年8月开始,利用重庆市渝东南农科院范永红等[3]培育出的茎瘤芥(榨菜)胞质雄性不育系JL154-5A为不育源,以宽柄芥中的优良品种为转育父本,通过杂交和连续回交等方式,培育出4个具代表性、不育性状稳定、经济性状良好且各具特色的宽柄芥胞质雄性不育系,为较大规模开展宽柄芥杂交一代新品种的选育、实现“三系”配套,进而为提高酸(泡)菜原料作物的产量及品质提供了条件和可能。
1 材料与方法
1.1 试验材料
①不育源 重庆市渝东南农科院范永红等[3]培育出的茎瘤芥胞质雄性不育系JL154-5A。
②转育父本 2011年3月,在田间系统鉴定并确证JL154-5A不育性状的基础上,选择4个具代表性的不同性状、不同生态类型、不同熟性的宽柄芥优良自交系(DJ、K6、HK-1、K46)作转育父本。
③观察鉴定的不育系及其保持系 DJA、K6A、HK-1A、K46A和DJB、K6B、HK-1B、K46B。
④SSR分子标记鉴定材料 选取经回交7代且特征及性状表现稳定的各不育系及对应保持系的幼嫩叶片组织。
1.2 试验方法
①以茎瘤芥不育系JL154-5A作母本,宽柄芥优良自交系作父本进行常规杂交,后代择取典型单株与父本连续回交8代,选育不育性状稳定、经济性状良好的宽柄芥胞质雄性不育系。
②在杂交和各回交世代,花期进行单株套袋自交,考察其自花授粉的结实性。
③对回交7代(不育系)及其父本(保持系),随机抽选3~5株典型单株在盛花期分别观察测定花冠、雄蕊、雌蕊和蜜腺的形状及大小,并对其开花特性进行系统观察。
④对回交7代(不育系)及其父本(保持系)的花粉,用0.5%的氯化三苯四氮唑(TTC)液在38℃恒温下染色50 min,测定其生活力。
⑤对不育系和保特系,在重庆市渝东南农业科学院(海拔273 m)进行正季种植,常规管理,各材料现蕾时,每材料选取5株典型单株,按《芥菜类蔬菜田间试验观察记载项目及标准》,系统观察其形态特征和主要性状表现。
⑥不育系SSR分子标记鉴定,选用十字花科芸薹属网公布的600对SSR引物,均由生工生物工程有限公司合成,并采用CTAB法提取全基因组DNA,然后分别进行PCR反应、电泳及银染等。
2 结果与分析
2.1 宽柄芥胞质雄性不育系的选育
2010年10月将茎瘤芥不育系JL154-5A在重庆市渝东南农业科学院试验地进行播种育苗移栽,2011年3月在开花期对不育系花器官构造、不育性状表现进行了观察鉴定,确证为不育性彻底、性状稳定的不育系后,以茎瘤芥不育系JL154-5A作母本,选取4个优良宽柄芥自交系(每自交系3株单株),与之分别成对杂交,得到F1代。2011年8月夏繁,从F1代中选择3株典型单株作母本,用上述对应的自交系回交,同时母本单株自交测定其结实性。连续4 a(2011-2014年)的春季和夏季,继续用宽柄芥自交系作轮回父本与之回交,同时母本单株套袋自交,测定其育性。到2015年5月选育出了不育度达100、不育株率为100%,经济性状良好且稳定的宽柄芥胞质雄性不育系及保持系4个。
2.2 宽柄芥胞质雄性不育系形态特征及主要农艺性状表现
2014年9月至2015年2月,对已经完成回交转育并经育性鉴定达不育系标准的4个不育系和保持系,集中在渝东南农业科学院同一生态条件下栽培,对其形态特征和主要农艺性状进行了系统观察鉴定(表1)。
经连续7代回交转育后的宽柄不育株系,在叶形、叶缘、中脉颜色、叶片刺毛蜡粉、单株有效叶片数等方面,均与对应的保持系表现相同或相近,但在株高、开展度、单株鲜质量、中肋宽及厚度等方面,与对应的保持系有不同程度的差异,即不育系比对应保持系的植株高2~4 cm,开展度大4~9 cm,单株鲜质量大100~300 g等,同时,不育系的营养生长期比对应保持系长3~5 d。
2.3 宽柄芥胞质雄性不育系花器官特征及性状表现
2014年3~5月,在继续进行宽柄芥不育系回交转育的同时,对不育系和相应保持系的花器官形态特征、开花特性及花期变化进行了系统观察(表2)。
①不育系的花器官特征 调查发现,保持系的花冠由4片花瓣组成,呈“十”字形,黄色或浅黄色,雄蕊6枚、4强2弱;雌蕊单生,柱头表面多乳突,花药和花丝的长度稍大于花柱的长度,花药较饱满;蜜腺发育良好,3~4个,圆形,绿色或浅绿色,个别深绿色。
经连续回交7代转育的宽柄芥不育系花器官与对应的保持系相比较,在形态特征和结构上的差别为:盛花时不育系花瓣表现为半开或全开,呈不规则的“十”字形;每朵花雄蕊5~6枚,但花药干瘪、纤瘦,有棱或多棱;花丝比保持系短0.87~1.45 mm;雌蕊单生,柱头表面多有乳突,子房外观形态和大小与保持系基本相同;蜜腺发育良好,与对应的保持系没有明显差异。
②不育系的开花特点 经连续7代回交转育的宽柄芥不育系,几乎每朵花的柱头在花蕾成熟之前就伸出蕾外2.1~3.1 mm,形成特殊的花柱异长期,此时人工授以正常的芥菜花粉能够正常结实结籽,平均结实率达90%以上。柱头外露2~3 d后,花瓣才全展开或半展开,呈不规则的“十”字形,再经2~3 d花瓣脱落,柱头表面变黑。而对应的保持系花蕾没有异长期,每个花蕾从萼片裂开到花瓣展开仅3~4 h就呈“十”字形,再经1~2 d花瓣脱落。在植株的开花顺序、每天的开花时间等方面,不育系与对应的保持系没有明显的差别。
③不育系的花期 与对应的保持系相比,经连续7代回交转育的宽柄芥不育系的始花期一般推迟2~3 d,盛花期和终花期相应推迟3~5 d,整个花期持续20~27 d,长的达29 d以上,即不育系的花期比保持系长5~6 d。
2.4 宽柄芥胞质雄性不育系的育性
①雄蕊的育性 a.自然生态气候条件下的育性。2011-2015年,在对宽柄芥雄性不育株系的每个世代进行回交转育的同时,对中选单株进行了套袋自交测定,除发现个别材料的回交世代株系有单株自交结实指数≥1(已淘汰)的情况以外,未发现有自交结实现象。2014-2015年,又对经回交6代后的DJA、K6A、HK-1A、K46A 4 个具代表性的不育系及对应保持系的单株自交结实情况进行了系统考察,4个不育株系春季及夏季的自交结实指数均为0,表现为高度的不育且育性稳定;而保持系在不同的季节结实率差异较大,一般是春季结实率高于夏季,这可能与夏季气温较高、植株营养体小有关。
b.不育系花粉的生活力。2014年3月,对DJA、K6A、HK-1A、K46A 4个具代表性的不育系及对应的保持系的花粉进行染色镜检观察。结果表明,不育系的花粉粒均不着色,且多数花粉呈不规则圆球形、透明,部分花粉粒还有开裂、缺失现象,花粉粒边沿呈乳突状(图1);而保持系的花粉着色率为85%~96%,表现为有生活力的花粉占绝大多数,花粉粒的形状多为圆球形或椭圆形,不透明、饱满。
②雌蕊的育性 2011-2015年,每个世代的回交转育结果表明,宽柄芥不育系(或不育单株)的雌蕊柱头在人工授粉后,不但能结实结籽,而且后代生长发育正常,不存在生殖隔离。同时,观察不育系雌蕊的形态特征,均未发现与对应的保持系(或回交父本材料)有质的差异。由此证明,宽柄芥雄性不育系的雌蕊育性是完全正常的。
2.5 宽柄芥胞质雄性不育系SSR分子标记多态性鉴定
2016年1~4月,对培育出的4个具代表性的宽柄芥雄性不育系及保持系(DJA和DJB、K6A和K6B、HK-1A和HK-1B、K46A和K46B)进行了SSR分子标记筛选鉴定。图2结果表明,引物KBJ416(F:5'-TATCAACAGAAACGCACCGAG-3';R:5'-CCACTTGTTTCTCTCTCTAG-3')在不育系及保持系中扩增出的条带呈多态性,且在不育源和经连续回交转育的不同宽柄芥胞质雄性不育系上扩增的条带完全一致,而与对应的宽柄芥保持系扩增出的带型表现有显著差异。
3 结论与讨论
本研究以茎瘤芥胞质雄性不育系JL154A为不育源,通过杂交和连续回交转育而成的宽柄芥胞质雄性不育系,不但不育性彻底,不育性状稳定,而且育性不因环境条件的改变而变化,另外,其经济性状良好,与对应的宽柄芥保持系无质的差别,是一批可利用的宽柄芥胞质雄性不育系,为大规模开展宽柄芥杂种优势的利用奠定了基础和提供了可能。
陈竹君等[4]对榨菜雄性不育雄蕊形态的分类和遗传表现的研究结果及范永红等[3]对茎瘤芥胞质雄性不育系的定义证明,芥菜(茎瘤芥)胞质雄性不育类型在不同环境条件下表现育性稳定,不因环境条件的变化而发生育性的改变。据此认为,DJA、K6A、K46A、HK-1A 4个具代表性的宽柄芥雄性不育应属胞质互作不育类型,其不育性状可能是由细胞核内的不育基因和不育细胞质共同作用的结果。因为本研究所选育的宽柄芥雄性不育系的不育源为茎瘤芥JL154-5A,并经过4个年度不同生长季(春季和夏季)的回交转育证明,每个回交世代单株套袋自交结实指数均为0,后代无可育株出现,该不育系的不育性状非常稳定,不育株率达100%,表现为高度不育。
本研究筛选的SSR引物KBJ416,可成功地将宽柄芥不育系及保持系区分开来,且不育源的条带和不育系的条带表现完全一致,表明引物KBJ416与宽柄芥胞质雄性不育系的不育源(茎瘤芥不育系JL154-5A)基因相连锁,可以用来辅助进行不育系株系纯度鉴定和为该类不育系的保存与保护提供分子标记手段,也为宽柄芥不育基因分子标记辅助育种技术体系的建立奠定了基础。
参考文献
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大拇指汤姆是国王的玩偶,经常受到国王的赏赐,但是好景不长,没一、两年国王就因病去世了。国王的大儿子继承了王位,国王的大儿子非常痛恨汤姆,因为,国王生前十分喜爱汤姆,开始疏远自己的儿子。所以,国王的大儿子继承王位后。便把汤姆赶出了皇宫。但汤姆并没有灰心,他想:你吧接受我就算了,我自己出去遨游世界。
当汤姆来到一个叫“坚定国”的王国时,他看见街道上有一个穿着制服、扛着长枪、一条腿站着的锡兵,眼中泛着泪光,就问:“你怎么了?”“我曾是个坚定的锡兵,主人非常喜欢我,但自从主人有了新玩具以后,就不喜欢我了,就从窗户吧我扔出来了。”“你和我一起走吧!我也是被别人遗弃的玩偶,我准备去遨游世界!”“好啊!”锡兵突然转悲为喜!
锡兵和汤姆开始遗弃遨游世界,他们经过鸟国时,看见一个猎人准备射一只喜鹊。于是,大拇指他们便迅速爬到猎人身上,东绕一下,西挠一下,弄的猎人心神不安,无法射箭,只好走了,喜鹊看到汤姆救了它,十分感激汤姆,就从树枝上飞到汤姆面前说:“谢谢你救了我的命,你有什么要求,我会尽量满足你。”“这样吧!你会飞,而且比我和锡兵都更大,你就和我们一起去遨游世界吧!”“好啊!只在这个鸟国里闷得慌,我们走吧!”于是,锡兵、大拇指汤姆和喜鹊开始一起旅行。
当它们走在一条山间小路时,一个人趁喜鹊不注意把它抓起来,放进一个鸟笼里,又把汤姆和锡兵放进一个礼品盒里。不知不觉已经是第二天了,汤姆、锡兵和喜鹊已经来到皇宫,原来汤姆来到的这个国家叫“快乐国”,恰好今天是快乐国国王的小儿子的生日,昨天抓汤姆它们的那个人是快乐国的大臣,抓汤姆它们是因为,那个大臣把汤姆它们当做礼物送给国王的小儿子。
现在,汤姆、锡兵和喜鹊快乐的住在皇宫,没有烦恼与苦恼,一直到老。