妹妹的脸色

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妹妹的脸色范文第1篇

【关键词】 盐霉素； 白色链霉菌； 发酵工艺

Study on the improvement of fermentation process　for yield of salinomycin

ABSTRACT The study refers to the improvement of fermentation process for increasing the yield of salinomycin. Using Streptomyces albus SLF2110 as the producing strain， the yield of the fermentation can be increased largely with the method of mutagenesis induced by UV and LiCl and the optimization of the bean oil feeding for salinomycin fermentation process.

KEY WORDS Salinomycin; Streptomyces albus; Fermentation process

盐霉素(salinomycin)是从白色链霉菌(Streptomyces albus)的深层培养液中分离得到的一种聚醚类抗生素，由6分子乙酸，6分子丙酸和3分子丁酸提供的相应酰基缩合而成［1～2］。日本于1979年批准盐霉素用作球虫病防治剂，1987年欧共体批准盐霉素用作抗球虫剂和促生长剂，1993年我国农业部正式批准其作同样的用途。盐霉素作为禽用抗球虫剂在世界范围内得到普及，应用前景将十分广泛。

抗生素发酵水平的提高，主要取决于菌种改良和培养工艺优化［3］。为提高白色链霉菌中盐霉素产量，在过去工作的基础上［4～7］，我们从菌种选育和补料工艺两方面进行研究，以期提高盐霉素的生产水平。

1 材料与方法

1.1 菌种

供试菌株为白色链霉菌(Streptomyces albus)SLF2110。

1.2 培养基

斜面培养基 高氏一号培养基。

摇瓶培养基(g/L) 牛肉膏5，酵母粉3，氯化钾2，丙三醇20，消泡剂1。

种子培养基(g/L) 葡萄糖15，黄豆粉20，小麦胚芽10，碳酸钙3，牛肉膏5，酵母粉3，氯化钾2，丙三醇20，KH2PO4 1，消泡剂1。pH6.5～7.0。

发酵培养基1(不补料工艺)(g/L) 硫酸铵5，黄豆粉30，豆油85，，KH2PO4 1，MgSO4 1.2，碳酸钙5，食盐3，消沫剂1。pH6.5～7.0。

发酵培养基2(补豆油工艺)(g/L) 硫酸铵5，黄豆粉30，豆油50，KH2PO4 1，MgSO4 1.2，碳酸钙5，食盐3，消沫剂1。pH6.5～7.0。

效价测定培养基(%) 蛋白胨0.3，酵母粉0.3，葡萄糖0.1，琼脂粉1.4。pH6.8～7.0。

1.3 实验规模

摇瓶种子 250ml三角瓶内装25ml培养基，接入成熟斜面孢子， 33℃于摇床培养70h左右， 转速220r/min。

种子培养 20L种子罐装12L培养基，接入摇瓶种子，接种量120ml，罐温35℃，罐压0.05Mpa，搅拌转速500r/min，通气比为1∶0.5vvm，培养30h左右。

发酵培养 50L发酵罐装培养基30L，从种子罐取种3L接入，罐温33℃，罐压0.05Mpa，搅拌转速400r/min，通气比为1∶0.5vvm，中途采用补加豆油工艺与不补料工艺两种方式，12d放罐，测定放罐液效价。

1.4 测定方法

还原糖测定 斐林试剂法。

氨基氮测定 甲醛法。

盐霉素效价测定 以杯碟法测定，检定菌为短小芽孢杆菌。

豆油和脂肪酸的测定 按文献［8］进行。

脂肪酶活力的测定 37℃下，将1ml发酵液每分钟分解底物产生1μmo1脂肪酸定义为一个酶活单位。

菌丝浓度的测定 10ml发酵液于离心管内3000r/min离心10min，测量上清液体积，计算得出：

菌丝浓度(%)=(10-上清液体积)÷10×100%

1.5 诱变方法

(1)悬浮液制备 将生产用SLF2110孢子斜面，加蒸馏水l0ml，制成孢子悬液，倒入盛有玻璃珠的三角瓶中，置旋转摇床振荡15min，然后用滤纸过滤，使成单孢子悬液，供诱变处理用。

(2)氯化锂处理 选用0.05%、0.10%、0.30%三种浓度进行处理。氯化锂与培养基按上述比例混合后置平皿培养3～5d，观察敏感度，10d观察菌落形态，过筛后进行摇瓶发酵试验，比较突变株与对照株的效价。

(3)氯化锂与紫外线复合处理

氯化锂前处理 制成0.30%氯化锂的单孢子悬浮液，28℃振荡4h，取5ml于无菌平面皿中，置波长253nm、功率30w的紫外灯下30cm处，磁力搅拌照射一定时间，立即稀释分离于平皿。

氯化锂后处理 单孢子悬浮液，在摇床上振荡培养4h，取5ml于无菌平面皿中，置波长253nm、功率为30w的紫外灯下30cm处，磁力搅拌照射一定时间进行分离于含0.30%氯化锂的上层培养皿中培养。

2 结果与分析

2.1 自然分离

供试菌株SLF2110的单孢子悬液，经自然分离，从中获得一株新菌株lNSLF2110作为出发菌株，效价49118u/ml，较SLF2110提高18%(41588u/ml)。

2.2 氯化锂处理

(1)氯化锂敏感度 以lNSLF2110为出发菌株，用不同剂量的氯化锂处理，其敏感度结果见表1。

(2)突变菌株的菌落形态 以lNSLF2110为出发菌株，经氯化锂处理后培养，形成的菌落形态有3种类型，3种菌落类型的菌株中分别挑出代表性菌株进行斜面培养，过筛，观察诱变后的变异率。其中圆帽状型(类型Ⅲ)的正变率为最高。结果见表2。

(3)氯化锂与紫外线复合处理 以lNSLF2110为出发菌株，分别采用①氯化锂前处理与紫外线复合处理和②氯化锂后处理与紫外线复合处理，考察其诱变效应，同时以不经过诱变处理的各稀释浓度的单孢子悬浮液涂于空白平板作为对照，结果见表3。

表3结果表明，先用氯化锂前处理后再与紫外线复合处理对菌株的诱变效应较氯化锂后处理更好，正

表1 不同剂量氯化锂对出发菌株的敏感度　略

表2

三种典型菌落的菌株诱变后的变异率情况　略

表3 氯化锂与紫外线复合处理的诱变效应　略

(4)筛选结果比较 以lNSLF2110为出发菌株，经单一的氯化锂处理后筛选出的正变率高氯Ⅳ突变株和经氯化锂前处理与紫外线复合处理后筛选出的正变率高氯UVⅩ突变株，与1NSLF2110菌株进行对比试验，筛选结果见表4。结果表明，经氯化锂前处理与紫外线复合处理后筛选出的突变株氯UVⅩ发酵水平最高，比原出发菌株提高54%，脂肪酶的活力比原出发菌株提高近两倍。

2.3 补豆油工艺

盐霉素的合成途径为聚多酮途径，起始单位是三碳单位丙二酰CoA。以植物油或动物油作为培养基碳源能提供更多的三碳和二碳单位，有利于盐霉素的合成。葡萄糖作碳源时，尽管也可以转化为短链脂肪酸参与盐霉素的生物合成，但大部分进入TCA循环而被作为能源。

豆油是盐霉素发酵的优良碳源，一方面豆油能为初级代谢提供碳骨架和能量，另一方面能为盐霉素的合成提供前提物质，促进盐霉素的合成。由于豆油对发酵液溶氧影响非常大，而且过量的豆油会吸附在菌丝体上，严重影响菌体生长和代谢，采用减少培养基中初始豆油含量和发酵过程中补加豆油的工艺，有助于提高盐霉素的发酵水平。

为提高盐霉素发酵水平，在原基础培养基中减少41%的豆油加量，采用中间补豆油控制。以豆油质量分数、脂肪酸质量分数以及脂肪酶活力为综合指标进行发酵补豆油工艺。补豆油分阶段进行。

在50L罐上发酵前144h，每24h的补油量(g)计算公式为：G=(5.0%-A%-B%)×27×100+C×10［其中A、B分别为豆油和脂肪酸质量分数(%)，C为豆油消耗速率(g/h)］；发酵的第144～168h期间，每8h补豆油80g；发酵第168h至发酵终止，用豆油消泡；发酵终止前8h停止补豆油。发酵过程中每24h取样测定豆油、脂肪酸质量分数、抗生素效价，计算豆油消耗速率、补油量。

结果表明，在初始发酵培养基中减少豆油质量分数，发酵过程分阶段进行补油，能够使豆油质量分数和豆油消耗稳定在一定水平，脂肪酸质量分数能保持在比较高的水平，发酵水平有大幅度上升。

2.5 补豆油工艺与没有补料工艺的比较

采用以豆油、脂肪酸质量分数和豆油消耗速率为指标的补油工艺，在50L发酵罐上连续进行8批试验，其发酵水平与没有补料的发酵相比效价提高22.3%，且该补油发酵工艺有很好的结果重现性，结果见表5。

3 结论

(1)氯化锂或紫外线复合氯化锂方式来诱变育种是筛选获得盐霉素高产菌株的有效手段。本研究通过氯化锂和紫外线复合氯化锂诱变成功，获得高产菌株具有较高的脂肪酶活力，比原出发菌株的脂肪酶活力提高近两倍，盐霉素增产达50%以上。

(2)比色测定发酵液中豆油、游离脂肪酸质量分数，间接计算出脂肪酶的活力，不仅可以知道不同发酵阶段菌体对豆油的分解能力，而且知道残油量及脂肪酸的利用情况。考察发酵过程中脂肪酶活力的动态变化，可作为控制发酵的一个参数。实验证明脂肪酶是由

表4 氯Ⅳ、氯UVⅩ突变株与1NSLF2110菌株摇瓶效价比较(略)

表5 补豆油工艺与不补料工艺结果比较　略

(3)盐霉素发酵过程中微生物产生的脂肪酶将豆油分解成甘油和脂肪酸，通过测定发酵液中的脂肪酸和豆油浓度，可以计算出脂肪酶活力，用于优化盐霉素发酵的补油工艺。

(4)在基础培养基中减少豆油加量，采用发酵中途分阶段补豆油方式可提高盐霉素发酵水平22.3%。该补料工艺的发酵结果重现性很好，为今后工业化生产提供了一定的经验。但是豆油补加时机和补加量是否合理，对盐霉素发酵水平有重要影响，需要进一步深入的研究。

参考文献

［1］ Miyazaki Y， Shibuya M， Sugawara H， et a1. Salinomycin， a new polyether antibiotic ［J］. J Antibiot (Tokyo)，1974，27(11):814

［2］ West1ey J W， B1ount J F， Evans R H Jr， et a1. Biosynthesis of 1asa1ocid. II. X ray ana1ysis of a naturally occurring isomer of 1asa1ocid A ［J］. J Antibiot (Tokyo)，1974，27(8):597

［3］ 储炬，李友荣编著. 现代工业发酵调控学［M］. 北京：化学工业出版社，2002

［4］ 陈代杰，周光分阝，许文思. 盐霉素生物合成的研究Ⅰ. 浅蓝菌素对盐霉素生物合成的影响［J］. 中国抗生素杂志，1988，13(3)：208

［5］ 陈代杰，周光分阝，许文思. 盐霉素生物合成的研究Ⅱ. 短链脂肪酸在盐霉素生物合成中作用机制的初步探讨［J］. 中国抗生素杂志，1988，13(3)：214

［6］ 罗敬完. 国产盐霉素生产菌株——白色链霉菌61477的诱变育种试验［J］. 中国兽医科技，1991，21(12)：37

妹妹的脸色范文第2篇

在帮助球员提高战术素养和制定比赛策略中，教练无疑是关键人物，教练的角色定位和作用主要表现在以下六个方面：

01　综合评估比赛策略

赛前赛后，教练都要花时间对比赛策略进行综合评估。赛前教练的主要工作有：听取球员对比赛的看法，分析研究对手的技术特点，和球员沟通确定多种战术策略，评估各种策略在不同形势下的可行性和有效性，预测比赛中可能遇到的困难和逆境，弥补战术策略缺陷等。教练要鼓励球员在比赛中养成思考和自我改善、改变战术策略的习惯。教练要仔细观摩比赛，取得第一手比赛的信息，无论比赛策略是成功还是失败，赛后教练都要和球员一起做总结，以上教练的工作对提高球员技战术水平是很有价值的。

02　敦促球员思考将会发生什么

在平时训练中教练要培养球员独立思考和应对不测的能力，“将会发生什么？”是个很好的问题，让球员自己思考并回答。教练可以安排多种球路风格的训练内容，给球员提出问题。例如“对方双手反拍技术突出，脚步移动迅速，该用什么策略应对？”、“你从未和对手交过手，在了解对手球路后会采用哪些策略？”等，教练多提问题可以帮助球员正确思考和决策。

03　注重“进攻策略”的训练

教练安排各种模拟比赛的场景来测试战术策略是否可行有效。一般情况下球员会有自信实施各种策略，特别是进攻策略，但是一到真实比赛中，由于压力大，进攻有效性会大打折扣，因此平时训练一定要加强进攻策略的训练。通过不断的模拟比赛训练，消除妨碍球员正常实施策略的技术和心理的不良因素，以期达到得心应手的境界。

04　向职业球员学习

鼓励年轻球员向职业球员学习，这是取得成功的有效方法之一。球员们可以多观看职业球员的比赛，特别要留意冠军球员的比赛技术统计数据。在电视转播过程中技术统计表时常出现在屏幕上，包括发球与接发球成功率、正反手得分率、非受迫性失误、制胜分、网前得分率、破发成功率等等，这些技术数据极有参考价值，直接反应出球员的技术特点、身体状态和战术策略。另外职业球员在赛后新闻会上的发言也值得学习。在新闻会上，双方球员一般会谈论对比赛的感想和总结，各自的比赛思路、技术发挥水准、战术策略运用等。有的球员还会谈到赛前的策略在比赛中如何实施，哪些是意料之中的，哪些方面出现问题，出现问题后是怎样进行调整节奏和改变策略的。职业球员的点评能帮助年轻球员学习和获得宝贵的比赛经验和教训，是一堂实践检验理论的课程。

05　防范策略中潜在的陷阱和缺陷

讲解比赛策略时，教练应告知球员策略潜在的陷阱和困境，遇到陷阱和陷入困难时如何避免陷阱、克服困难，这非常重要，做到“防患于未然”，球员心理上对陷阱和困难多一份预防，在比赛中就多一份获胜的希望。

06　收集对手的情报信息

所谓“知己知彼，百战不殆”，从上个赛季开始教练就要认真仔细地收集所有对手的情报信息，包括身体状况、技术特点、战术素养、心理状态、优点和缺点，还要了解对手教练的专业背景和教练水平。如有机会可将对手比赛和训练的场景进行录像，这样能取得第一手的直观信息。教练要能帮助球员了解和熟悉对手的特点（优点和缺点），制定针对性的训练计划和比赛策略。

妹妹的脸色范文第3篇

一、色彩与舞台美术

色是光之子，光是色之母。有了光的作用，我们就能通过视觉感知出自然界丰富的色彩。随着光的变化，人们所观察到的色彩也随之千变万化，其实，反映到人们视觉感知中的色彩是一种光色感觉。绘画艺术和舞美设计在运用色彩时，色彩语言的表现代表了一种思想含义的表现与再现，色彩给舞台美术以多样化的艺术生命与动感灵魂，在舞台上体现了丰富的艺术境界。

色彩在任何艺术中都具有表现力，对于戏剧艺术来说也不例外。在各类戏剧演出中，舞台美术要再现大自然环境或要表现隐喻和暗示的含义及渲染气氛、烘托人物都离不开色彩。色彩运用准确与否，对整场戏的演出效果有着不可忽视的影响。因为色彩是表达浓烈感情的无声语言。色彩在舞美设计中的运用，主要有五种：第一，自然色，包括表现时间、地点、季节等的不同色彩，如蓝天、白云、红花、绿草等；第二，象征色，色彩的象征、隐喻意义，如绿色象征春天或希望，金黄色象征秋天或富丽，红色象征革命或忠诚；第三，人物色，如黑人、白人以及女人的白、男人的黑等；第四，情感色，如红色表现热烈与温暖，灰色表现悲哀与寒冷；第五，美感色，如红、绿、黄的艳丽，有赏心悦目之效，紫、黑、灰的暗淡，影响审美愉悦与审美情趣。色彩具有非常丰富的语言，人们通过视觉的感受，会产生各种不同的联想和情感，因此在舞台艺术设计中，色彩基调是整场戏的主题再现，色彩的变化是剧情、感情产生张力的有效手段。随着科学与经济的发展，新技术、新材料的运用，舞台美术开始朝着多元化形式迈进。对于舞台美术家来说，在舞台美术设计中如何运用色彩表情达意、展现主题，让色彩与内容、色彩与形式、色彩与表演、色彩与观众有机协调，为戏剧演出服务，是当今舞美设计的新课题。

二、色彩与环境的再现和表现

任何戏剧表演都离不开相对的环境衬托、人物塑造。环境的再现与表现对戏剧表演、剧情的展开与发展起着非常重要的作用。戏剧环境从季节上分有：春、夏、秋、冬；从时间上分有：早、中、晚；从空间上分有：近、中、远；从剧情上分有：喜、悲、闹；等等。不管哪种季节和时空、剧情，都需要选择恰当的主题色彩来表现。因为色彩会给观众带来情绪上的激发及对剧情的联想。随着剧情的展开、环境色彩的变化，观众会逐渐了解和融入剧情，产生各种不同的情绪和情感。正如俄国抽象主义大师康定斯基所说：“色彩的感官作用在你摆脱开它之后就会把它忘掉，不会对它留下任何长久的印象。然而假如这种感官效果渗透很深，引发比较强烈的感觉，就会引起心理感受的完整连锁反应，色彩引起的表面印象也会发展成感受。”

观众对色彩会产生很多联想，如由红色联想到喜庆、欢乐、烈日、鲜血、革命等；由绿色联想到春天、清醒等；由蓝色联想到冰凉、清爽等；由黑色联想到庄严、肃穆等。在舞台美术设计中，色彩运用往往是根据剧情的需要来确定的，每个场景的基调也是根据每场戏的主题来确定色调的。

色调选择准确与否，对整场戏的艺术展现会有着不可小视的影响。色彩的选择往往与每场戏的剧情和表演息息相关。人们对色调的认识，是通过生活来认知的。色调就是色彩的调子，分为冷色调、暖色调。旭日东升，东方沐浴在金黄色调之中，倾向于暖色调；明月之夜，大地沉浸在暗绿的冷色调之中。

在舞台美术设计中，设计者运用色彩的丰富语言来表现一定的气氛、情调和意境。舞台美术设计中的常用手段，无非是写实与非写实两种。写实手段是把大自然的形象表现在舞台上，并把它表现得栩栩如生，使人如身临其境。布景中的气氛情调主要是靠色彩来表现的。如在写实布景中表现秋天的森林，根据现实生活中的真实感受，在环境气氛的色彩选择中以金黄色为主色调，让观众有秋天的感觉。色彩运用得贴近生活，对舞台上季节、时空转换，气氛渲染的作用非常重大。除写实布景外，非写实布景，有时甚至是抽象的色块组合布景，也同样能营造表演中所需要的时空转换、气氛与情调。

三、舞台色彩的独特性

舞台美术是一门综合艺术，它包括布景、灯光、化妆、服装、道具、音响，它与演员的表演直接相关，并直观地面对观众进行表现。在人物的塑造上，正面人物与反面人物、主要人物与非主要人物的着装、化妆以及使用的道具，表演环境的变化营造，都离不开色彩。在对人物的处理上，光的明暗强弱和色的冷暖、浓淡以及色相、色度和明度对比都与主要人物的塑造密切相关。比如在素色背景中，主要人物可以身着色彩比较鲜艳或华丽的服装。此外，道具和装饰物色彩的运用对整场戏的色调统一也非常重要。通常情况下，浅色的背景宜用深色的道具；花色的背景宜用素色的道具。

舞台色彩与绘画色彩有区别。绘画色彩的运用以突出个性为主，是以个人对大自然和生活的体验来选择的，主色调确定后，直接体现在画面上，表现自然与生活的某一瞬间。而舞台色彩就不同，它受时间、空间、剧情、人物塑造、舞台灯光、气氛渲染等因素的影响，在运用色彩时，必须根据剧情的需要和整场戏的演出效果来全面地考虑色彩的运用。如话剧《蔡文姬》中的舞美设计，以高悬的黑色帐幔与色彩缤纷的仪仗互相映衬，用衣着绚丽的胡婵营造一种典型的环境，把自然色、象征色、人物色、情感色、美感色熔为一炉，创造出特有的意境和美感。

四、光与色的处理

舞台灯光是舞台美术的一个组成部分，是现代戏剧不可缺少的重要元素。任何舞台布景，如果没有灯光的作用，就不会有自己的舞台语言，也不会赋予戏剧思想艺术美。灯光帮助舞台创造了不同的季节时间、不同层次的空间，以及千变万化的气氛。它参与演出，展现并剖析着戏剧人物的个性。瑞士舞台美术大师阿板亚曾说过“灯光是舞台的灵魂& rdquo;，捷克舞美大师斯沃博达也说过“利用灯光和投影代替颜料画的布景就是未来”。舞台灯光对整场戏的剧情展开、人物塑造、环境描述、气氛渲染、情绪和节奏表现、创作的主题揭示起着非常重要的作用。光与色的运用在舞台布景中，能起到举足轻重的作用。

灯光色彩是最富有艺术表现力的因素，具有迅速、直接唤起人们情感的作用。布景的亮与暗、冷与暖，整场戏的主题色调、环境渲染都可以通过灯光色彩的处理，达到剧情所需要的艺术效果。灯光色彩处理恰当，能给观众以强烈的礼堂感、情绪感，并使他们产生情感上的联想。如话剧《阿Q正传》，在用光上采用白光照明和黑白灰的色调，包括服装上极少采用花的、鲜艳的色彩，只对蓝色作了微妙的层次处理，使舞台更具有苍白、单一、压抑的病态气氛，集中地刻画了人物的造型，摒弃了舞台可能的抒情和浪漫色彩。简洁、明确但又深邃，富含寓意的白描手法，从色彩到形象，恰如其分地表现了戏剧环境，积极调动了观众的想象和思考。越剧《第十二夜》则是充满了浪漫色彩的喜剧，白色的线条使舞台画面舒展，既有越剧的婉约韵味，又符合莎士比亚的抒情诗意。人物服装色彩淡雅，整个舞台给人一种清新明快的感觉。在“撩开面纱”这一场景中，绿的春色涌入舞台，舞台上呈现一派生机，颂扬了爱情的美好，展现了莎士比亚的人文主义精神。舞蹈《千手观音》在灿烂的光色中，用缤纷的“手姿”和婀娜的舞姿，虚化出一个慈祥庄严、典雅纯静的观音形象，让人们从内心深处涌出一股暖流，仿佛置身于温馨、祥和的环境之中。上述案例说明，在舞台美术中，光与色是不可分离的，它们是相互依存的整体。同时也说明，舞台美术中的色彩运用，不只是记录大自然，还是让大自然的色调在舞台上逼真地再现；不只是唤起观众的幻觉，更要以传达表情、意会情感、融化情绪为目的。色彩的艺术表现力与光结合，可以提示剧作的思想内涵、渲染舞台气氛、塑造人物形象，这是舞台美术的独特魅力所在。

五、结语

总而言之，在如今多样化的舞台上，色彩的意义显得更加重要，色彩对于人们通过视觉感受，产生各种联想和情感，比其他的视觉元素更加有效。所以在舞台美术设计中，要合适准确地对色彩进行运用，对表演的主题和观众的需求进行综合考虑，增强舞台表演的艺术感染力，给观众带来难以忘却的享受。

参考文献：

妹妹的脸色范文第4篇

[关键词] 噻托溴铵；沙美特罗替卡松；慢性阻塞性肺疾病；临床效果

[中图分类号] R974 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）03（c）-0081-02

慢性阻塞性肺部疾病（COPD）是一种以气流受限为特征的疾病，其气流受限不完全可逆、呈进行性发展，现有的治疗无法改变COPD潜在的病理状况，但能减慢病情进展，减轻症状，降低死亡率[1]。本研究主要探讨新型的β2受体激动剂噻托溴铵联合吸入糖皮质激素沙美特罗替卡松治疗的临床效果，现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2009年1月～2012年10月本院收治的慢性阻塞性肺部疾病患者88例，随机分为两组，各44例，观察组：男31例，女13例，年龄56～87岁，平均（64.5±3.9）岁，体重43～68 kg，平均（51.3±2.6） kg，病程5～31年，平均（16.5±2.1）年；对照组：男32例，女12例，年龄55～86岁，平均（65.1±3.8）岁，体重43～69 kg，平均（52.1±2.7） kg，病程5～30年，平均（16.3±2.0）年；两组患者性别、年龄、体重以及病程等差异无统计学意义（P > 0.05）。

1.2 方法

所有患者入院后均实施吸氧、卧床休息、抗菌药物等处理，其中对照组单纯使用噻托溴铵（勃林格殷格翰公司生产，每粒18 μg，进口药品注册证号：H20100194）每天1粒噻托溴铵干粉吸入胶囊；观察组则在对照组的基础上使用沙美特罗/丙酸氟替卡松粉吸入剂（60泡装）（英国葛兰素史克公司，国药准字H20090242）进行联合治疗，比较治疗后2周患者肺功能，并比较上午10：00测定的患者生活活动能力（ADL）评分和6 min步行距离。

1.3 统计学处理

应用SPSS 13.0进行，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，两组间均数的比较使用t检验，组间率的比较采用χ2检验，P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组治疗后1周肺功能比较

观察组治疗后1周FEV1和FVC均显著大于对照组（P < 0.05），FEV1/FVC和FEV1占预计值则显著高于对照组（P < 0.05）。见表1。

2.2 两组患者治疗后生活活动能力（ADL）评分和6 min步行距离比较

观察组生活活动能力评分显著高于对照组（P < 0.05），且6 min步行距离显著长于对照组（P < 0.05）。见表2。

3 讨论

慢性阻塞性肺疾病（COPD）是内科常见的慢性疾病，是不完全可逆的气流受限为特征的进行性慢性肺部疾病，其病死率正逐年升高[2]。胆碱能受体的激动使得起到分泌物增多，是导致COPD患者出现通气功能障碍的主要原因之一，分泌物的增多导致气道的阻塞，而肺内气体无法排除的条件下，长期以往引起患者肺部的过度充气，而出现肺气肿，当环境中的刺激性气体进入患者呼吸道后将对其气道上皮起到一定的损伤作用，致使起到上皮的迷走神经末梢被暴露，当神经受刺激激动后引起中枢神经系统激活，导致全身神经内分泌的增多，出现乙酰胆碱的释放增多，而通过乙酰胆碱作用于患者气道平滑肌上的M3受体引起气道平滑肌的收缩，同时腺体内乙酰胆碱的激活导致呼吸道腺体分泌显著增多，过渡分泌的黏液和收缩的平滑肌对阻塞气道，引起呼吸道的狭窄，气流阻力的增加，而成为患者出现喘息和活动受限等临床症状的主要原因。噻托溴铵是一种新型的抗胆碱能药物，近几年已成为治疗COPD的一线药物，它通过选择性阻断气道平滑肌上M3受体而发挥长效扩张支气管效应，其临床作用时间超过24 h，有效延长了患者给药后的血药浓度，对于改善患者夜间支气管的收缩，减少呼吸道分泌物的增多，减少咳嗽咳痰次数效果显著[3]。本研究对照组单纯使用噻托溴铵，而观察组则联合使用沙美特罗替卡松。

噻托溴铵与胆碱能受体的结合力较异丙托溴铵大10倍，噻托溴铵为选择性抗胆碱药物，且与M1及M3受体解离极慢，是一种高效而长效的抗胆碱能药[4]。本研究中观察组治疗后1周FEV1和FVC均显著大于对照组，FEV1/FVC和FEV1占预计值则显著高于对照组，同时生活活动能力评分显著高于对照组，且6 min步行距离显著长于对照组。沙美特罗与丙酸氟替卡松联合制成复合吸入性喷剂，其中沙美特罗是一种选择性的β2受体激动剂，能选择性地作用于气道平滑肌，起到舒张支气管的作用。根据COPD慢性炎症的特点，在治疗过程中对抗炎症反应是必不可少的步骤，丙酸氟替卡松是一种中效类糖皮质激素，局部应用后能有效地抑制患者的炎症反应过程，对于炎症细胞和炎症因子均起到一定的抑制作用，对于减轻患者气道的炎症反应，缓解临床症状具有一定的效果，并且对体内糖皮质激素受体具有高度的选择性[5]。而丙酸氟替卡松通过呼吸道给药局部于肺组织后激活肺内的糖皮质激素受体起到强烈的抑制炎症反应的作用，尤其是针对患者的喘息症状将得到较好的改善，并减少了全身应用糖皮质激素的副作用，即使是在长期给药后，对于患者的肾上腺皮质激素的每日分泌量仍保持在正常范围以内，当由其他的吸入皮质激素改换过来后，尽管过去及现在间断使用口服皮质激素，肾上腺皮质激素的每日分泌量仍逐渐改善，这表明在吸入丙酸氟替卡松时肾上腺功能可恢复至正常[6-7]。通过本研究笔者认为：噻托溴铵联合沙美特罗替卡松治疗COPD，能加快改善患者肺功能，且提高患者生活质量，值得临床推广。

[参考文献]

[1] 谭焰，孙丽华，方苏榕. 噻托溴铵对稳定期慢性阻塞性肺疾病患者肺功能的影响[J]. 中国医院药学杂志，2008，28（5）：378-380.

[2] 刘秀云，张倩云. 噻托溴铵治疗中度慢性阻塞性肺疾病稳定期的临床疗效观察[J]. 实用医学杂志，2011，27（6）：1074-1075.

[3] 宋莹，王伟，苗妹. 噻托溴铵和沙美特罗/丙酸氟替卡松联合治疗稳定期慢性阻塞性肺疾病患者的疗效观察[J]. 中国医师进修杂志，2009，32（34）：65-67.

[4] 狄松波. 噻托溴铵联合沙美特罗/丙酸氟替卡松治疗COPD稳定期患者的疗效观察[J]. 现代实用医学，2010，22（2）：210-211.

[5] 张秀伟，杨健，朱颖. 联合应用噻托溴铵与沙美特罗/氟替卡松对慢性阻塞性肺疾病肺功能的影响[J]. 实用老年医学杂志，2008，22（5）：398-399.

[6] 陈瑞祥. 噻托溴铵联合沙美特罗/丙酸氟替卡松治疗慢性阻塞性肺病的疗效分析[J]. 实用医学杂志，2012，28（5）：816-818.

妹妹的脸色范文第5篇

【关键词】 金黄色葡萄球菌B型肠毒素；酶联免疫检测；临床应用价值；研究

DOI：10.14163/ki.11-5547/r.2015.18.192

改革开放以来， 我国国民经济进入了快速增长的阶段， 随着人们生活水平的提高， 日常生活的饮食结构和消费观念产生了巨大的变化， 动物源性食品的比重在人们生活中所占有的比重越来越多。金黄色葡萄球菌B型肠毒素是重要的食源性和医源性双重致病菌， 经常存在于多种物质中， 这种病菌对营养物质水平的要求不高， 耐盐性较强， 大量聚集会产生食物中毒的情况发生。为了探讨金黄色葡萄球菌B型肠毒素的酶联免疫检测的临床应用价值， 本院特进行了一次研究， 取得了较为良好的效果， 现将具体情况报告如下。

1 材料与方法

1. 1 材料 本次研究中所使用的分光光度计主要由日本岛津提供， 型号为UV-265FW；在实验中ZFQ-85A型酶联免疫检测仪主要由华中电子管厂提供；研究中采用的离心机型号为TGL， 由北京医用离心机厂提供。金黄色葡萄球菌B型肠毒素主要由信阳农业高等实验室保存。牛血清白蛋白主要由华美公司提供。

1. 2 检测方法

1. 2. 1 金黄色葡萄球菌B型肠毒素的制备 金黄色葡萄球菌B型肠毒素的制备主要包括3个方面：①从琼脂板上挑选出单菌落， 将其接种到10 ml的培养液中， 需要保持培养环境的温度为37℃， 培养的时间为12 h， 得到种子液， 将1 ml含量的种子液接种到200 ml的培养基中进行培养， 培养的温度、时间与上述时间相同；②将培养好的金黄色葡萄球菌B型肠毒素菌液进行离心处理， 离心的速度为10000 r/min， 离心后取其上清液， 用滤膜过滤后放置在300 ml的滤杯之中 ， 用截留孔径为10 k的超模在氮气压力下对其进行浓缩处理， 浓缩成其原体积的1/10。需要注意的是， 氮气压力设置在0.2 MPa。液体浓缩好之后将其放置在冰浴之中， 根据体积的具体情况分次进行磁力搅拌并加入固体达到饱和度为60%的状态， 再冰浴4 h之后进行15 min的离心处理， 取上清液继续放置在冰浴中加入（NH4）2SO4， 将饱和度情况提高到85%， 放置在4℃的环境中即可。过夜后需要对取得的液体进行蛋白沉淀， 离心， 除去上清后加入其体积1/10的水重新溶解， 随后进行为期为24 h的透析；③根据仪器中的色谱柱相关要求对毒素进行纯化。

1. 2. 2 金黄色葡萄球菌B型肠毒素抗血清的制备 此种制备的方式主要包括2个方面：①在进行抗原注射前的1周对小白鼠进行皮内注射， 注射的药物为卡介苗， 这样能够刺激动物的免疫系统， 然后再进行抗原注射， 抗原注射使用的量为0.1 ml/次；②抗原注射后的1个月之后对小白鼠进行断尾， 采其血样， 将其放置在室温中进行凝血处理， 在4℃的环境下进行过夜， 采用转速为3000 r/min的速度进行离心处理， 离心的时间为5 min。

1. 2. 3 ELISA进行检测 按照ELISA的相关检测标准进行操作即可。

2 结果

小白鼠最高效价为1：10000， 当金黄色葡萄球菌B型肠毒素的浓度在2～1000 ng/ml之中时竞争性抑制率与金黄色葡萄球菌B型肠毒素浓度10～450 ng/ml时样品中的金黄色葡萄球菌B型肠毒素浓度会随之增加。

3 讨论

金黄色葡萄球菌B型肠毒素英译为Staphylococcal Enterotoxin B， 简称为SEB。金黄色葡萄球菌B型肠毒素经常会蕴藏在蛋白质、水分含量充足并且同时含有一定含量的淀粉之类的食物之中[1]。在日常生活中， 牛奶、大多数乳制品均符合金黄色葡萄球菌B型肠毒素生长的条件， 在牛奶中含有的金黄色葡萄球菌B型肠毒素具有极强的耐热性， 耐受度可高达100℃300 min[2]， 也就是说在原料乳经过热处理后虽然金黄色葡萄球菌能够被杀死， 但是金黄色葡萄球菌B型肠毒素还能够导致机体致病的情况发生， 因此， 对乳制品中的金黄色葡萄球菌B型肠毒素进行检测对人类的身体健康具有极其重要的意义[3]。金黄色葡萄球菌B型肠毒素在检测中传统的方式是采用动物学试验的方式进行的， 但是这种检验方式动物来源较为困难， 并且灵敏度情况较低， 在检验的过程中经常会出现检测结果不满意的情况[4]。本次研究中， 作者根据具体的情况用自制的金黄色葡萄球菌B型肠毒素进行研究， 将小白鼠作为免疫实验的对象， 取得了较为良好的效果， 检测的灵敏度情况明显提高。

综上所述， 金黄色葡萄球菌B型肠毒素的酶联免疫检测这种检测方式具有极强的临床应用价值， 值得在实际中应用。

参考文献

[1] 杨静. 食源性金黄色葡萄球菌肠毒素基因在液体培养基和牛肉制品中的表达研究.南京农业大学， 2013.

[2] 章建辉. 免疫磁珠快速检测金黄色葡萄球菌方法的研究.湖南师范大学， 2013.

[3] 李乐. 致病微生物新型检测方法及预防体系应用研究.中南大学， 2014.