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乳清蛋白

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乳清蛋白

乳清蛋白范文第1篇

1. 缩短手术恢复期

由于手术需要,癌症患者术前、术后要限制饮食,使得蛋白质摄入减少;手术本身对机体有损伤,也增加了蛋白质的消耗;术后伤口愈合、细胞修复也增加了对蛋白质的需求。若不能及时补充,很容易出现蛋白质缺乏,导致术后感染发生率大大增加,伤口不易愈合,延长住院时间。

乳清蛋白是存在于乳汁中的一种品质非常优秀的蛋白质,富含人体需要的所有必需氨基酸,且氨基酸配比与人体蛋白质模式相接近,极易被消化吸收。与大部分蛋白质相比,乳清蛋白是一种富含支链氨基酸的优质蛋白质。支链氨基酸可以作为合成肌肉蛋白的原料,刺激蛋白质合成,抑制蛋白质分解,是手术前后补充蛋白质的理想选择。比如,腹部肿瘤手术后,饮食要分几步进行,开始先进食米汤、藕粉、淡果汁、蔬菜汤等清淡流食,然后吃一些容易消化的大米粥、面片汤、白面包等。这样的饮食蛋白质相对不足,此时可以在这些流食和半流食中加入乳清蛋白质粉,以弥补饮食缺陷。

2. 有助于放疗、化疗的顺利完成

头、颈、胸部放疗容易出现口腔、咽喉、食道的放射性损伤,造成咀嚼、吞咽、进食困难。患者常常只能进食流质,严重者需要通过胃管将食物输注到胃中,以保证营养物质的供给。由于输注食物所用的管腔较细,肉类等富含蛋白质的食物难以捣碎,容易阻塞管腔,故一般采用牛奶、鸡蛋或乳清蛋白质粉等作为蛋白质的食物来源。

癌症患者在化疗过程中,往往会因恶心、呕吐和食欲不佳等因素,不能正常进食,造成膳食营养摄入不足,使体重下降、肌肉组织丢失,易发生蛋白质营养不良。此阶段,化疗患者可以选择乳清蛋白质粉,以补充蛋白质的不足。

3. 增强抵抗力

免疫功能低下是癌症患者普遍存在的问题。被确诊为癌症后,因各种治疗和心理上的压力,常常促使患者的免疫功能进一步降低。在癌症死亡病例中,有相当一部分人不是死于肿瘤本身,而是免疫功能低下并发感染。可见,调节免疫功能、增强抵抗力是预防和治疗癌症的关键所在。

乳清蛋白中含有的β乳球蛋白、α乳白蛋白、免疫球蛋白、乳铁蛋白等多种活性蛋白成分,这些成分被证实在调节人体免疫功能方面发挥着不可忽视的作用。谷胱甘肽过氧化物酶是人体抗氧化系统中的一个重要成分,它在维护免疫系统功能方面具有重要作用。谷胱甘肽由半胱氨酸、谷氨酸及甘氨酸三种氨基酸构成,其中半胱氨酸是谷胱甘肽过氧化物酶形成过程中一个关键性的氨基酸,乳清中的半胱氨酸浓度高于大部分优质蛋白质,在抗氧化调节免疫功能方面有一定优势。如果检测发现癌症患者存在免疫力低下,可适当补充乳清蛋白质粉,以增强免疫力。

特别提醒

乳清蛋白范文第2篇

关键词:乳清蛋白;功能特性;广泛运用

乳清蛋白是通过利用先进的分离工艺技术从牛奶中提炼出来的珍贵的蛋白质成分,而其自身因存在氨基酸组合最合理、数量最多等特点在所有同类蛋白质成分中配居首位,因此乳清蛋白又被称为蛋白之王。乳清蛋白自身存在生物价高、易消化、高蛋白以及利用效率高等特点受到各个乳制品行业的青睐,并在我国许多食品加工行业中被广泛使用。

一、乳清蛋白的功能特性以及营养特性

1.乳清蛋白的功能特性

(1)成胶性

乳清蛋白加热可形成热诱导性凝胶,并保持大量水分。在成胶作用过程中,乳清蛋白形成一种网络结构,使水分镶嵌在其微小的空隙中。乳清蛋白加热到65℃左右开始成胶,当蛋白质质量分数在10%~12%之间、温度在70~90℃之间、pH值在4.6~6.0之间时,是成胶的最佳条件。在水溶液中蛋白质质量分数达7%时,乳清蛋白开始成胶。乳清蛋白中的β-乳球蛋白和BSA是乳清中主要的胶凝蛋白,将其加热可形成热诱导性凝胶,并保持大量的水分。乳清蛋白的凝胶特性可以用来调整食品的组织结构,如硬度、弹性等。

(2)乳化性

乳清蛋白每个分子中既有亲水基团,又有疏水基团,在水溶液中,亲水基团大多数分布于外侧,而呈现较好的水溶性。这种结构赋予乳清蛋白极佳的表面活性和乳化稳定性。在均质过程中,乳清蛋白能够吸附在脂肪球表面,形成稳定的蛋白、脂界面膜,防止脂肪球聚集,达到均匀乳状液的目的。乳清蛋白的乳化稳定性在糖果、烘焙食品、乳和肉制品、色拉罐头、汤和沙司中得到广泛的应用。

(3)涂层性

乳清蛋白是一种可食用的膜,可用于提高产品的稳定性,优化外观,改善口感,保护产品的风味和香味。乳清蛋白可食膜有良好的氧气和水分阻隔性能,良好的香味隔绝性和释放性能。如将其应用在以花生这类坚果为原料的食品中,可降低食品的哈败速度,使坚果在食品体系中仍能保持香脆。

(4)搅打起泡性

乳清蛋白在形成泡沫时具有表面活性作用。乳清蛋白的搅打性能使其成为鸡蛋清的有效替代品,特别是低脂肪乳清浓缩蛋白,具有较高的泡沫膨胀性能,能延长起泡时间。起泡性能在诸如冷冻甜食、蛋奶、奶糖和蛋白甜饼等食品的加工中起非常重要的作用。

2.乳清蛋白的营养特性

第一,乳清蛋白在所有的蛋白质中属于营养价值最高的一种,属于优质蛋白质,能够为人类提供必须的氨基酸,对调节人体机能、增强抗衰老能力等具有一定作用;第二,母乳中含有大部分乳清蛋白,经实验证明食用母乳的婴儿的粪便比大部分食用其他乳制品的婴儿软,并存在粪便较少的情况,因此可见乳清蛋白具有一定的易消化性;第三,由于乳清蛋白中富含免疫球蛋白、α-乳白蛋白以及其他营养物质,这些成分能起到刺激人体免疫系统的作用,能够人体提高免疫力,同时也解释了许多服用母乳的婴儿生长状况良好的现象。此外,在人类服用肉类等动物蛋白的过程中容易因其中的饱和脂肪和胆固醇等存在导致人体出现脂肪和胆固醇升高的现象,而通过蛋白粉等乳清蛋白制品能够有效地避免这类情况发生,从而降低心血管疾病的发生率,对人体起到保护作用。

二、乳清蛋白在乳制品中的应用

1.在酸奶中的应用

酸奶是一个极好地体现牛奶所有优点的食品体系,它能通过配方设计和加工最大限度地降低脂肪和乳糖含量,提高蛋白质和矿物质含量,同时也是一种极佳的保健品。对乳清蛋白功能的最新研究结果表明,在加工酸奶时,添加乳清浓缩蛋白有益于改善产品风味和质地,减少乳清析出,保护有益菌发酵剂。用WPC-34替代脱脂乳粉生产的酸奶,由于乳清蛋白在发酵后不凝固,因此其粘度不及全部用脱脂乳粉生产的酸奶。为此可以在酸奶中增加一定量的稳定剂(如明胶、淀粉)以校正粘度。当使用WPC-80或WPI生产酸奶时,培养时间可以缩短,产品风味纯正、口感醇厚、滞水性增强,不会出现乳清析出和脱水收缩现象。据报道,采用超滤技术制得的乳清浓缩蛋白对发酵速度和嗜酸乳杆菌的生长具有促进作用,在酸奶中添加WPC能最大限度地防止益生菌在胃中被破坏,并提高肠道中酶的活力。

乳清蛋白的添加有利于无添加剂酸奶粘度的增加,这是由于固形物含量的增加而使得体系的粘度增加。乳清蛋白的添加对脱水收缩作用以及持水力有利,这与酸奶的质地和微观结构的空隙大小以及分布有关。乳清蛋白的最适宜添加量为3%~4%,通过添加乳清蛋白可实现无添加剂酸奶在保质期内的稳定。

2.在干酪生产中的应用

乳清蛋白的胶凝性质在干酪生产中具有广泛的应用。添加WPC能缩短干酪的成熟期,改善感官性能,增加干酪的出品率以及加快乳的凝结。如将WPC-60应用于重制干酪的配料中,可以改善风味和保持良好的涂布性;在生产加工奶酪片和涂布型的奶酪时使用WPC-80部分替代酪蛋白非常成功,它赋予产品爽滑的组织状态和柔和的风味。

3.在冰淇淋生产中的应用

乳清蛋白的最大用途应该是在冰淇淋的生产中,特别是WPC-80良好的乳化和滞水作用,能使冰淇淋水分分布更加均匀,不仅能防止由于冰晶的形成给产品带来不良的砂感,还能大大提高冰淇淋的抗融性。在冰淇淋配料中使用乳清制品,同样能保持良好的产品品质、风味和口感。在冰淇淋的生产中,只要优化组合乳化剂、稳定剂的品种和用量,就能获得理想的效果,在保证质量的同时大幅降低成本。

三、小结及展望

现如今人民在解决温饱后受到生活水平提高的影响,对食品的营养程度重视程度逐渐提高。我国食品行业在近年来备受关注,而食品加工和健康一直是我国居民重视的问题,由于许多行业中不法加工窝点被曝光后,人们对食品安全问题越来越重视,甚至出现许多谣言对我国食品行业进行打击,导致我国许多居民对我国食品加工行业严重缺乏信心,因此,我国许多食品企业正利用打造良心食品进行辟谣,并提高人们对食品的信心。而我国乳制品行业也同样需要利用高营养的物质来提高乳制品的质量。乳清蛋白的出现大大提高了乳制品的质量和营养,并取得一定的经济效益和成果。通过以上分析我们能够得出,乳清蛋白不断富含营养物质和氨基酸,对人体健康和提高免疫力都具有良好效果,而其自身成本低、供应稳定的特点能够使我国乳制品企业达到稳定发展的目的。在未来过程中,我国科学家也会逐渐完善科技手段,研发出更多优质蛋白质,为提高人体健康、占我国乳制品产业经济做出巨大贡献。

乳清蛋白范文第3篇

关键词 :双水相; 乳清分离蛋白; 聚(乙二醇ran丙二醇)单丁基醚; 分离

1 引 言

乳清分离蛋白(WPI)是蛋白质混合物,在乳清分离蛋白中,α乳白蛋白(αLA)和β乳球蛋白(βLG)的含量占总WPI含量的80%以上[1],并被广泛应用于食品、医药、精细化工等领域,因此具有很高的商业价值[2,3]。现已发现αLA具有多种生理功能,人αLA可以被转化成一种可以诱导肿瘤细胞凋亡的蛋白质,牛αLA也可以被转化成这种对肿瘤细胞有相似活性的物质。在αLA中发现有血管紧张素转移酶(ACE)抑制活性,含有ACE抑制肽的水解产物已经用于高血压患者的血压控制。βLG具有优异的热与冷凝胶特性以及良好的氨基酸谱。然而,儿童对βLG有过敏效应,因此在水解或脱除这种蛋白质后再应用于婴儿或低敏人群[4]。

近年来,双水相体系(ATPS)常应用于分离乳蛋白中各种单体蛋白质。2011年,Jara等[5]采用乳清分离蛋白浓缩物(WPC)/羟丙基甲基纤维素作为双水相体系, 分离WPC中的αLA和βLG,结果表明,分子量低的蛋白质αLA和βLG均被保留在上相,分配比例高达90%,但两种蛋白未能分开。Alcntara等[4,6]利用响应面分析法优化WPI在PEG/磷酸盐双水相和PEG/NaPA双水相体系中的分配情况,实验结果表明,PEG相只含有αLA,但盐相中除含有βLG外,还含有部分αLA。Sivakumar等[7]利用PEG1000/柠檬酸钠双水相体系分离乳清蛋白中的αLA和βLG,在最适条件下,αLA在上相分配系数为16.67,βLG在下相分配系数为0.27。Kalaivani等[8]利用PEG1000/柠檬酸钠双水相体系分离乳清蛋白中的αLA和βLG,通过响应面协同节线长度、pH值、体积比和乳清蛋白浓度等变量的相互作用,优化出最佳提取条件,使上相中αLA的提取率为89%,纯化率为96%,下相中βLG的提取率为96%,纯化率为76%,但此体系对αLA的提取率偏低。

聚(乙二醇ran丙二醇)单丁基醚(聚合物)是一种水溶性聚合物, 可与合适的盐溶液混合, 构成双水相体系。 Chen等[9]利用Poly (ethylene glycolranpropylene glycol)(EOPOL31)/磷酸盐双水相体系结合高效液相色谱法成功分离、富集和测定了牛奶、鸡蛋和虾产品中的环丙沙星(CIP),CIP的萃取率最高可达97.7%。Dembczyski等[10]利用环氧乙烷环氧丙烷共聚物(EO50PO50)/磷酸盐双水相体系分离溶菌酶,并利用响应面模型计算分配系数K和上相中酶的产率,实验结果与响应面模型计算结果一致。本研究采用聚(乙二醇ran丙二醇)单丁基醚(分子量3900)与磷酸盐形成双水相体系, 分离WPI中αLA和βLG, 通过液相色谱监测,系统地研究了双水相体系的pH值、WPI浓度、NaCl添加量和聚合物与磷酸盐体积比对分离效果的影响,优化出最佳提取条件。

2 实验部分

2.1 仪器与试剂

1260半制备液相色谱仪, 配紫外可见检测器 和ChemStation工作站(美国Agilent公司); SC3610型低速离心机(安徽中科中佳科学仪器有限公司);A150011型涡流混匀器(南京佳俊生物有限公司);FE201EL20型pH计,AL04电子分析天平(梅特勒托利多仪器(上海)有限公司)。

WPI(上海诺申食品贸易有限公司,蛋白质含量88%±4.5%);αLA和βLG标准品(美国Sigma公司);聚(乙二醇ran丙二醇)单丁基醚(Poly(ethylene glycolranpropylene glycol) monobutyl ether, Mn~3900,美国Sigma公司);乙腈、三氟乙酸(色谱纯,美国Dikma公司);其它试剂均为分析纯。

2.2 相图测定

以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标绘制标准曲线,αLA在 0.1~2.5 mg/mL、βLG在 0.2~5.0 mg/mL浓度范围内线性关系良好,αLA和βLG线性方程分别为y=1414.2x-129.86(R2=0.9998)和y=473.47x+16.008(R2=0.9989)。 将WPI进行液相色谱分析所得到的αLA和βLG的含量分别为19%和73%,与市售WPI中αLA和βLG标注含量基本一致。

3.3 双水相组成对αLA和βLG分离的影响

3.3.1 pH值对αLA和βLG分离的影响 分别考察了加入2 mL 10 mg/mL WPI溶液,0.40 g/10 mL NaCl固体,40%(m/m)聚合物溶液与15.5%(m/m)磷酸盐溶液体积比为5∶3的双水相系统对αLA和βLG分离的影响,结果如表2所示,双水相体系上下相的液相色谱图见图3和图4。

WPI浓度不影响聚合物/KH2PO4双水相体系对αLA和βLG分离,但从表3可见,随着WPI浓度增大,αLA萃取率反而下降,WPI浓度大于3 mg/mL时,双水相分界层会有白色沉淀析出,下相体积变大,导致相比变小,同时βLG萃取率变大。当WPI浓度较低时,相比基本相等。而αLA是疏水性蛋白,βLG是亲水性蛋白[16],富含聚合物相比富含盐相具有更大的疏水性,聚合物相中可用于相互作用和溶解的自由水很少,所以加入高浓度WPI的双水相中间层会出现αLA沉淀,导致萃取率显著降低。1 mg/mL WPI对聚合物/KH2PO4双水相体系分离αLA和βLG较为有利。

3.3.3 NaCl添加量对αLA和βLG分离的影响 在聚合物/K2HPO4(5∶3, V/V)双水相体系中分别加入0.30 g/10 mL、0.35 g/10 mL、0.40 g/10 mL NaCl,考察体系对1 mg/mL WPI的萃取效果,如表4。

聚合物/KH2PO4的体积比分别为5 mL∶3 mL和4 mL∶4 mL时,双水相体系能将WPI中αLA和βLG分离,但体积比为5 mL∶3 mL的双水相体系上下相中αLA和βLG萃取率比较低,体积比为3 mL∶5 mL的双水相体系上相中还有部分βLG。从表5可见,聚合物与KH2PO4体积比为4∶4时的双水相体系对αLA和βLG的萃取率更高一些,分离效果也更好。这是因为随着聚合物含量的增加,界面张力增大,同时聚合物相体积增大,相比增大,从而促进其与疏水性蛋白质的相互作用[18]。综合考虑,选取聚合物和磷酸盐的体积比为4 mL∶4 mL, 即相比为1.0时, 为WPI中αLA和βLG的最佳条件。

4 结 论

考察了聚合物(聚(乙二醇ran丙二醇)单丁基醚)/磷酸盐双水相体系分离WPI中αLA和βLG的条件。研究结果表明,在加入40%(m/m)聚合物溶液与15.5%(m/m)KH2PO4溶液体积比为4 mL∶4 mL,加入WPI浓度为1 mg/mL及NaCl固体添加量为0.40 g/10 mL时,构成的双水相系统对αLA和βLG分离效果最佳,αLA和βLG萃取率分别为98.23%和96.56%。αLA和βLG分别进入上下相,有利于后续的进一步分离纯化。与传统的PEG/盐形成的双水相[7,8]萃取αLA和βLG相比,聚合物/KH2PO4双水相分离效果更好,单一变量变化图更直观可见,萃取率更高,聚合物在室温下稳定,萃取过程中无有害物质生成,且聚合物相在较低温度与水溶液形成分层,利用工业化回收进行二次使用,达到了绿色环保的效果。

References

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8 Kalaivani S, Regupathi I. Sep. Purif. Technol., 2015, 146(26): 301-310

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10 Dembczyski R, Biaas W, Jankowski T . Food Bioprod. Process, 2013, 91(3): 292-302

11 Souza R L, Lima R A, Coutinho J A P, Soares C M F, Lima S. Process Biochem., 2015, 50(9): 1459-1467

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15 Mokhtarani B, Mortaheb H R, Mafi M, Amini M H. J. Chromatogr. B, 2011, 879(1112): 721-726

16 De Oliveira M C, De Abreu Filho M A N, Pessa Filho P A. Biochem. Eng. J., 2007, 37(3) : 311-318

17 Berggren K, Johansson H O, Tjerneld F. J. Chromatogr. A, 1995, 718(1): 67-79

18 Kalaivani S, Regupathi. J. Bioprocess Biosyst. Eng., 2013, 36(10): 1475-1483

乳清蛋白范文第4篇

关键词:表面加强激光解析电离化飞行时间质谱 乳腺癌

乳腺癌是一种全身性疾病,主要治疗手段有化疗、手术、放疗及内分泌治疗等,其中手术是乳腺癌综合治疗的重要组成部分。部分乳腺癌病人经过手术及后续的综合治疗能够长期存活,但也有病人术后很快出现复发转移,而一旦复发转移,乳腺癌就成为不可治愈的疾病。因此,早期发现复发转移就成为治疗的关键,目前临床上主要依靠定期随访影像学(包括彩超、钼靶、CT、ECT、PET/CT等) 以及血清学指标(如CEA和CA153),但影像学存在难以发现小病灶(1cm以下)、费用较高、存在辐射等缺陷,血清学标志物也存在敏感性、特异性较差的缺点[1]。由于恶性肿瘤的发生是一个逐步的过程,可能发生一系列蛋白组学的改变,因此,通过近年出现的表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)蛋白组学技术,能够快速、敏感地在血清中同时筛选出多个的未知生物标记物,其检测肿瘤的敏感性和特异性均高于传统肿瘤标志物[2],因此,我们应用SELDI技术分析乳腺癌病人手术前后的血清蛋白质谱变化,以期发现其变化规律。

1.资料与方法

1.1临床资料:收集我院2013年1月-2013年10月经病理确诊的65例女性乳腺癌病人手术前后的血清标本,中位年龄47岁,其中Ⅰ期18例, Ⅱ期19例,Ⅲ期28例。

1.2. 主要仪器及试剂:ProteinChip Biology System质谱仪(PBSⅡ-C型)、CM10蛋白质芯片、BioMarker Wizard分析软件,三氟乙酸( TFA ) 、乙腈(ACN ) 、Tris-HCl 、能量吸收分子SPA等试剂(Sigma公司)。

1.3. 样品的处理:采集患者清晨空腹静脉血5ml,4℃静置1小时后再分离血清,分装后- 80℃保存。分析前将- 80℃保存的血清标本冰浴中解冻,10000rpm、4℃离心5min,取10μl与20μlU9缓冲液在EP管中充分混匀,冰浴振荡30min使蛋白质充分变性,将360μl CM10-buffer加入30μl上述变性后的样品,尽快混匀。

1.4. 芯片监测、数据采集和参数设置:经芯片处理、上样和洗脱步骤后,采用PBSⅡ-C型蛋白质芯片阅读仪读取芯片,收集数据采用Ciphergen ProteinChip软件,分析数据采用BioMarker Wizard软件。控制筛选出的蛋白质峰在10%以上样本中同时存在,且同一蛋白质峰在不同样本中的偏差

1.5 统计分析:所得数据以均数±标准差表示,对不同组中相同质荷比的蛋白质含量数据进行方差分析,P

2 结果

2.1乳腺癌病人手术前、术后7天以及术后1月血清蛋白质谱比较.我们随访收集了65例行改良根治术的乳腺癌病人手术前、术后7天以及术后1月的外周血血清,并分别检测其差异蛋白质谱。共筛选出11个差异蛋白质峰,其中术前高于正常女性的差异蛋白质峰有5个(2947、3272、7783、7985、15952 Da),术前低于正常女性的差异蛋白质峰有6个(4179、5642、6442、6639、8705、13771 Da),其变化结果见表1及图1、2。

表1 乳腺癌病人手术前、术后7天以及术后1月血清蛋白质谱差异蛋白质峰

P

图1. 术前增高的5个蛋白质峰(Da均值)在术后的变化及与健康对照的比较

图2. 术前降低的6个蛋白质峰(Da均值)在术后的变化及与健康对照的比较

2.2乳腺癌病人手术前后血清蛋白质谱差异蛋白质峰变化趋势分析

进一步分析表明,术前增高的5个蛋白质峰中有4个蛋白质峰(2947、3272、7985、15952 Da)在术后1个月的峰值有向正常峰值变化的趋势,而其中的7985、15952 Da两个峰值虽然在术后7天较术前有明显增高(P

3 讨论

中国是乳腺癌发病率增长速度最快的国家之一,近年来乳腺癌发病率正以每年3%的速度递增,乳腺癌目前已成为威胁我国女性健康的一大杀手,早期乳腺癌有治愈的可能,但乳腺癌一旦发生复发转移,将不可治愈[3]。因此,如何在手术后及时、尽早发现微小或潜伏的转移灶是乳腺癌是否可以治愈的关键。目前乳腺癌缺乏有效的监测复发手段。影像学检查常用于定期随访,但影像学检查对

SELDI技术通过寻找和筛选不同样本之间蛋白质谱存的差异,从而获得对某些关键蛋白的定性和功能分析,又称差异蛋白组学[5]。我们采用的CM10芯片表面由弱羧基阴离子构成,可捕获表面带有正电荷的蛋白质分子[6],通过洗去弱结合蛋白质,再结合上能量吸收分子(EAM),利用激光脉冲使吸附的蛋白质解析形成电荷离子,这些不同的荷质比的离子在真空电场中飞行时间不同,检测器就能接收到强弱不等的电信号并由此绘制出蛋白质的飞行质谱图,其中纵坐标为蛋白质相对含量,横坐标为蛋白质质荷比。因此SELDI技术能分析血清中蛋白质较完整的信息,在寻找肿瘤相关生物标志物方面具有优势,Li等应用SELDI技术分析了包括103例乳腺癌、25例乳腺良性病变及41例健康女性的血清标本,建立了由3个蛋白峰组成的诊断模型,诊断乳腺癌灵敏度为93%,特异度为91%。我们前面进行的研究也发现,蛋白质峰15952 Da在乳腺癌与健康女性、乳腺癌与乳腺良性肿瘤比较中有差异,而蛋白质峰7985 Da在乳腺癌、乳腺良性肿瘤与健康女性三组比较中差异均有差异。

为了寻找乳腺癌手术前后血清蛋白质谱的差异,观察乳腺癌血清蛋白质峰在手术治疗前后的动态变化,我们随访收集了33例行改良根治术的乳腺癌病人手术前、术后7天以及术后1月血清蛋白质谱,综合后总结发现术前有11个蛋白质峰的峰值与健康对照峰值存在差异(5个高于正常,6个低于正常),他们均有可能是乳腺癌相关的血清标志物,变化趋势有可能与预测复发转移有关。

我们研究结果显示5个术前增高的乳腺癌相关蛋白质峰的大部分(有4个,分别为2947、3272、7985、15952 Da)在术后1个月的时候与健康对照女性差异无统计学意义,即降至正常水平,提示它们的水平可能与肿瘤负荷的大小有关,随着术后肿瘤负荷的明显减小,这些峰值也向正常水平趋近。虽然其中的两个蛋白质峰(7985、15952 Da)在术后7天的时候较术前有明显增高,但在术后1个月仍可恢复到接近健康对照水平,术后7天的这两个蛋白质峰的增高可能与手术改变解剖结构使这些蛋白释放入血有关,需进一步研究及扩大病例数。结果还显示并非所有术前增高的乳腺癌相关蛋白峰在术后均恢复到接近正常水平,如蛋白质峰7783 Da在术后7天及术后1月均持续高于正常水平。另外,术前降低的6个乳腺癌相关蛋白峰在术后7天及1月也低于正常峰值,也就是说,局部手术治疗并不影响这部分蛋白质峰的峰值,这可能是由于乳腺癌是一种全身性疾病,局部手术切除肿块并不能杀灭其他部位的隐匿病灶有关,还需要进一步的研究。

综上,根据乳腺癌病人手术前后血清蛋白质谱SELDI分析结果,我们发现了一些乳腺癌相关蛋白峰在术后的动态变化规律,我们希望随着样本量的扩大,随访时间的延长,收集到更多这些病人发生复发转移时的血清样本进行SELDI检测以进一步分析,以期在乳腺癌术后复发转移监测方面提供新的思路。

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乳清蛋白范文第5篇

【关键词】 乳腺癌 C-erbB-2 酶联免疫吸附试验

Abstract: Objective To study the extracellular level of P185, a soluble oncoprotein fragment of C-erbB-2, in breast cancer patients. Methods Serum samples from 42 patients with primary breast cancer, 29 with benign breast diseases and 40 healthy controls, were assayed in an ELISA for P185. Results The serum level of P185 was higher in the cancer patients than in the patients with benign breast diseases and healthy controls [(22.67±12.61) mg/L vs. (8.34±5.70) mg/L and (5.79±4.47) mg/L respectively, P

Key words: breast cancer; C-ebrB-2; ELISA

C-erbB-2又称为EGFR2、neu、HER2、NGL,是一种细胞来源癌基因,编码185×103的表皮生长因子受体样跨膜糖蛋白(P185),此糖蛋白有一个酪氨酸激酶活性的细胞外跨膜功能区和细胞内功能区,在血清中有其可溶性蛋白碎片存在[1-2]。在多种肿瘤组织中,C-erbB-2癌基因及其蛋白产物P185均有过表达和扩增[3-4]。运用定量病理学、免疫组织化学和分子生物学等方法研究发现,20%~30%乳腺癌患者的病变组织中有C-erbB-2癌基因扩增或过度表达。目前普遍认为,C-erbB-2蛋白的阳性表达可作为判断乳腺癌预后的独立指标[5-6],并且与较多的腋窝淋巴结转移及较差的内分泌治疗和化学治疗效果相关[7]。本研究运用ELISA法定量分析乳腺癌患者血清中C-erbB-2蛋白碎片P185的水平。

1 材料和方法

1.1 一般资料 42例乳腺癌及29例乳腺良性病变患者为2005年6月—2006年9月来我院就诊的门诊患者,均为女性。乳腺癌组:患者年龄31~71岁,平均44.6岁,未经任何化疗和放疗。乳腺良性病变组:包括乳腺增生13例,乳腺导管内状瘤5例,乳腺纤维腺瘤11例,患者年龄27~63岁,平均40.2岁。对照组40例来源于本院的体检者,均为女性,年龄32~53岁,平均42.2岁,经体格检查,未见乳腺有结节、硬块等情况。

1.2 试剂 C-erbB-2/c-Neu Rapid Format ELISA kit (QIA10)购于德国Merck公司。

1.3 方法 用BD公司的真空采血管(不含抗凝剂和促凝剂)采集患者或体检人群静脉全血3 ml,分离血清,-80℃保存。ELISA法参照试剂使用说明书,用酶标仪读取光密度值并换算成质量浓度。

1.4 统计学处理 PASS统计软件进行数据处理,计量数据以±s表示,采用单因素方差分析,P

2 结 果

乳腺癌、乳腺良性病变患者及正常体检者血清P185蛋白水平见表1。各组血清中P185蛋白的检测水平分别为:乳腺癌11.42~88.34 mg/L、乳腺良性病变2.44~30.92 mg/L,正常体检者0.88~24.53 mg/L 。如果以cut-off值为15.8 mg/L判断,正常体检组中只有1例P185蛋白阳性(1/40,2.5%),乳腺良性病变组中有2例阳性(2/29,6.9%),乳腺癌组有19例阳性(19/42,45.2%)。表1 乳腺癌、乳腺良性病变及体检者血清P185蛋白含量 与乳腺癌组比较:*P

3 讨 论

近年来乳腺癌的发病率呈上升趋势,已成为威胁妇女生命的主要肿瘤之一。随着科研技术的飞速发展,对于乳腺癌癌基因的研究也不断深入,特别是对乳腺肿瘤相关抗原或特异性抗原的研究。1981年,Shinc等首次通过NIH/3T3细胞转染试验发现了neu基因。Schechter 等进一步证实neu瘤基因的表达产物为P185蛋白,并且该基因与编码表皮生长因子受体的癌基因一样与病毒癌基因 v-erbB具有同源序列,因此将neu癌基因命名为C-erbB-2。随着研究的深入,发现在多种腺癌细胞中C-erbB-2基因均有高水平表达,并可以用其蛋白产物P185的高表达间接反映。对P185的病理研究首先见于乳腺癌。Kalogeraki等[8]报道乳腺导管癌C-erbB-2基因表达率60%,P185的过量表达率为10%~30%。我们也发现C-erbB-2蛋白在乳腺导管内癌的细针抽吸物的阳性表达率为57.1%,浸润性导管癌为59.1%[9]。

由于C-erbB-2蛋白定位于细胞膜上,它的细胞外区域(extracellular domain)会被切割而释出,在血清或血浆中,或者是某些细胞株的培养上清液中,可以找到这种形式的蛋白。通常肿瘤组织中C-erbB-2癌基因有过度表达,其血清中C-erbB-2蛋白的浓度会升高,因此考虑将其用来作为癌症的指标。在本研究中,正常体检者中只有1例(1/40)P185蛋白水平增高明显(cut-off值=15.8 mg/L),乳腺良性病变有2例(6.9%),而乳腺癌患者中有19例显著增高(45.2%),与报道[10~12]一致。

C-erbB-2癌基因编码的185×103跨膜磷酸糖蛋白[2],已确认在细胞外的磷酸糖蛋白作为一个受体而代表一个未确定的配体,在细胞内的部分有促进酪氨酸激酶活性的作用。Jukkola等[12]报道C-erbB-2阳性乳腺癌患者预后差,阳性晚期患者对激素治疗及含或不含蒽环类抗生素联合化疗的疗效均差,复发的概率也较大。近年来,用Herceptin药物治疗转移性乳腺癌是成功的一个例子,其实这种药物就是一种对抗C-erbB-2蛋白细胞外区域的单克隆抗体,对过度表达C-erbB-2蛋白的患者特別有效。

本研究结果提示,乳腺癌患者血清中C-erbB-2基因产物P185可视为癌症的早期标记物,有助于术前对乳腺病变的辅助诊断;另一方面,推测可以帮助医生选择适合做Herceptin治疗的患者,并可能用以追踪治疗的疗效,有待于进一步研究。

【参考文献】

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