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一、指导思想和方针
(一)以科学发展观为指导,推进积极的民政政策,解放思想,改革创新。
(二)根据新的《农村五保供养条例》,按照构建和谐社会和建设社会主义新农村的要求,以改善农村五保供养条件,完善农村五保供养服务机构(以下简称农村敬老院)养老服务功能,进一步提高五保供养对象服务质量为核心,大力提高全县农村五保供养对象集中供养率为基础,从整体上为提高全县农村五保供养工作达到新水平提供保障条件。
(三)采取政府主导,社会参与,统一规划,分期实施相结合的方针。
二、建设目标及任务分解
建设目标:各镇(场)人民政府作为农村敬老院建设的责任主体和管理主体,要把提高五保供养标准和农村敬老院建设纳入经济社会发展规划和社会主义新农村建设规划,全面做好五保供养工作。其目标:从至20__年,新建30所标准化乡镇敬老院,新增入院五保对象3000人以上,集中供养率达到50%,每所敬老院平均入住100名以上五保供养对象。省民生工程分配我县700张床位,全县新增980个床位(扩建280张床位列入20__年民生工程上级配套资金),集中供养率达35%以上。同时,建成内部设施较齐全,服务功能较完善,管理较规范,五保对象较满意的农村五保供养对象服务体系。
新建任务分解:新建980张床位任务分解到10个镇,石弓30张,曹市100张,标里120张,临湖106张,公吉寺80张,义门172张,新兴124张,店集68张,林场80张,高公100张。
改造任务分解:陈大、青疃、楚店扩建大门等,院内适度绿化;马店、龙山、丹城、牌坊、高公、公吉寺、城东、城西改造厨房、餐厅(各新建6间,长3.3米,宽9.5米)。
三、建设原则和形式
原则:坚持省级为主,地方配套;整合资源,完善功能,确保需要;统一标准,规范建设。
形式:一是以新建敬老院院民住房为主;二是整合资源,对撤并乡镇后能置换的办公室、学校等适当进行改扩建;三是经济薄弱的乡镇,对原有的敬老院进行改扩建,尽可能地增加床位数;四是添置设备和附属设施建设。
四、投资规模及建设标准
(一)投资规模:计划投入资金823.2万元,按省规定标准进行建设,新增980张床位,每间2张床位,宿舍350间。同时,积极筹措资金,完善辅助设施,购置宿舍生活用品用具980套。
(二)建设标准:
1.布局。原则上应临近镇(场)人民政府驻地或集中居住区,交通便利,环境安全、卫生。
2.占地面积。新建或扩建100人的乡镇敬老院,院区面积原则上不少于20亩(含生产基地),要保证人均菜地0.1亩。
3.床位数量。新建、扩建或改建的乡镇敬老院,居室每间入住2人。
4.居住房标准:五保对象人均居住面积不少于10平方米,通风透光。新建为平房,房长3.3米,宽5.74米(另挑檐走廊1.2米),墙檐高3.3米,砖木结构、砌二四墙、沙灰口、一门两窗(含纱窗、纱门帘、吊顶及室内外灯饰)。有条件的可建符合老年建筑设计要求的三层以下楼房,建房质量标准符合审定图纸要求和国家强制性规定。
(三)设施功能标准:坚持从实际出发,按照经济实用、环境优美、服务周到的要求建设。做到通电、通水、通路、通电话。
1.基础设施。辅助用房床均建设面积4平方米,设置值班(办公)室、厨房、餐厅(文体娱乐室)、储藏室、衣物储备库、医疗(康体保健)室、适度活动场地、洗碗池(棚)、洗浴室和公厕及一定规模种养殖场地。家具用品齐全、统一,卫生设施清洁、方便,公共服务设施齐全,生产基地配套。
2.院容院貌。经济实用、生活方便、环境适度美化绿化、生活区与生产区分设。
3.院办经济。做到蔬菜、肉、禽、蛋实现生产自给有余,年人均纯收入400元以上。
五、建设资金筹集
敬老院建设所需资金:一是由省、县通过财政预算按比例承担;二是省、市、县级福彩公益金安排;三是开展向城乡孤老爱心认建认助等社会捐资活动解决。根据省、市民生工程文件按平均每张床位8400元的定额测算。具体测算补助标准为每张床位建设面积14平方米(居住房床均建设面积10平方米、辅助用房床均建设面积4平方米),每平方米造价(含土建、装潢、供电系统和给排水系统等)600元。农村五保供养服务机构的内部设施、设备等基本配置经费,由县财政另行安排解决,不在8400元的补助标准之内。
六、项目建设与管理模式
县人民政府是农村五保供养服务机构建设的责任主体,负责建设的组织领导、规划制定以及配套资金、优惠政策。项目建设以镇(场)政府为主体,按照工程建设的规定,实行法人责任制、招投标制、工程监管制和合同管理制。县财政部门对资金实行专户管理,按照工程进展监督拨款,工程启动时拨付资助额的50%,土建工程完成后拨付资助额的30%,竣工验收合格、决算 审计结束后拨付15%,预留5%的质保金,一年后无质量问题付清。
七、实施步骤
第一季度,一月布置任务,镇(场)申报;二月编制项目建议书及实施方案,落实镇(场)承诺,进行项目选址,编制长远规划;三月确定今年床位数量,对主体工程和辅助工程进行资金测算,细化实施方案,进行申报立项,进入招投标、聘请监理和质检人员。
第二季度,四月及时签订施工合同,做好开工前的检查和安全管理,4月份要开工建设,4-6月为紧张的施工期,严格按照设计进行规范施工,保证工程质量。工程分阶段验收达标,进入下阶段工期,镇(场)要配备专职工程质量和进度督察员,认真进行现场督查,施工、监理等有关人员要到岗到位;民政局、财政局等部门定期不定期开展监督检查,确保工程质量和进度。
第三季度,七月对照标准,全面验收,做好决算,进入审计阶段;八月做好入住老人的摸底工作,选聘敬老院管理人员,采购、落实附属设施、设备、生活用品用具,建立健全规章制度,做好入住前准备工作;九月完成入住任务。
第四季度,十月及时开展入住老人和管理人员的教育、培训工作;十一月开展集中居住检查评比考核。十二月工作总结,谋划20__年工作。
八、敬老院运作体制和管理模式
(一)农村敬老院的管理责任主体是乡镇政府,政府投资新建的乡镇敬老院所有权归乡镇政府。镇(场)政府要加强农村敬老院建设和管理,按照院民与工作人员10:1的比例招聘敬老院院长和其他工作人员,各地应采取公开招聘的形式,聘用有文化、懂管理、对服务对象有爱心的、年龄在55周岁以下同志到农村敬老院任职,并报县民政局备案。县民政局和各镇(场)实行年度考核,考核称职的继续聘用,不称职的予以解聘。
(二)农村敬老院的管理经费,按照实际集中供养床位数年人均不低于1200元的标准列入财政预算,全年分两次按实际床位数划拨到乡镇敬老院专户,主要用于工作人员工资和敬老院维护发展经费,敬老院管理工作人员生活和补助标准,50人以下规模的敬老院,院长月工资600元,其它工作人员月工资500元;50人以上规模的敬老院,院长月工资800元,其它工作人员月工资600元。
(三)小额临时医疗救助资金按实际供养床位人数年人均不低于360元的标准,于年初从城乡医疗救助资金专户拨到敬老院专户,作为集中供养人员小额临时医疗费;患大病住院治疗,按新农合报销分割部分,由乡镇民政办审核报民政局审批从城乡医疗救助经费中解决。
(四)敬老院要积级开展生产自给活动,增加经济收入,改善敬老院五保对象的生活,实现蔬菜、禽、鱼、蛋、肉自给。
八、保障措施
1、加强领导。各镇(场)要采取有效措施,精心组织,确保五保供养服务机构建设顺利实施。要把五保供养工作和敬老院建设纳入当地经济社会发展规划,成立专门的领导小组,镇(场)书记为第一责任人,分管领导为项目负责人,民政办主任为具办人。
一、指导思想
以素质好、态度好、技能好、效率好为主要目标的服务质量竞赛活动和以“零距离、零推诿、零投诉、零积压”为主要内容的窗口形象示范活动为载体,促进全系统干部职工文明素质进一步提升,服务环境进一步改善,服务水平进一步优化,为建好恩来家乡、加快苏北重要中心城市建设、建成全面小康社会提供道德支撑和精神动力。
二、活动范围
全系统窗口服务单位。
三、活动内容
(一)开展服务设施达标活动。各窗口服务单位要积极为市民提供整洁优美的服务环境。服务场所要做到环境舒适、设施齐全、卫生良好、物品摆放有序,要设置服务公示栏、引导牌、宣传栏、便民书报角、饮水机、便民药箱等便民服务设施,为群众创造舒适的服务环境和人文环境。在醒目地点放置窗口审批服务事项《办事指南》,含项目名称、申报材料、办理程序、承诺时限、收费依据、项目依据等。尽量统一着装、挂牌上岗,坐姿端正、站姿稳重、仪表端庄。热情接待服务对象,耐心准确答疑,尽量提供方便,用语文明,不讲“忌语”。
(二)开展服务质量竞赛活动。围绕争当服务明星,各窗口服务单位要以服务人民、奉献社会为主题,大力开展文明服务培训,强化从业人员服务意识和奉献意识,改善服务态度,提高服务质量和水平,营造文明和谐的服务环境。要把提升窗口工作人员素质、增强服务意识、改进工作作风、提高办事效率和服务质量、塑造良好形象作为竞赛活动的重点,进一步提高服务窗口文明优质服务水平,提高消费者的满意度。
(三)开展窗口形象示范活动。以“零距离、零推诿、零投诉、零积压”为标准,大力开展窗口形象示范活动,积极营造人人重服务、处处抓服务、事事讲奉献的浓厚氛围。推行“三声”服务,做到服务方式“零距离”。所有工作人员对前来办事的群众做到“来有迎声、问有答声、去有送声”,做到有问必答,百问不厌。实行首问负责,做到服务受理“零推诿”。规定第一个接待办理审批事项的人员即为“首问负责人”,“首问负责人”必须为办事人提供向导服务,并做到“回答问题一口明,审验材料一手清,办事手续一次行”。坚持开门纳谏,做到服务标准“零投诉”。设立投诉意见箱和投诉电话,市局定期采取“实地察看和暗访检查相结合,查阅内部资料与群众投诉举报查处相结合,领导抽查与聘请政风行风监督员检查相结合,日常检查与专项检查相结合”的“四结合”办法对各服务窗口进行全面的考评,严厉查处违规违纪人员,力争达到“零投诉”。实行限时服务,做到服务事项“零积压”。对审批项目实行“急事急办,特事特办”,为重点项目实行重点服务。简化办事手续,对常规业务实行限时办理,尽量当天完成;对于不能当天办理的,与办事人约定办理时限。
四、活动步骤
第一阶段,宣传教育(7月中旬)
各窗口服务单位要结合本自身工作实际和行业特点,制定具体的、可操作性强的实施细则,并召开会议进行学习动员,对广大干部职工和服务人员进行职业道德教育、诚信服务教育、作风纪律教育,明确活动的目的意义、目标任务和方法步骤,进一步统一思想,明确目标,提高参与优质服务主题实践活动的积极性和主动性。
第二阶段,组织实施(7月下旬至8月下旬)
围绕活动内容要求和标准,结合实际,制定有利于加强职业道德建设和提升服务效能的举措,采取多种形式,广泛开展主题实践活动,重点要做好“四查、四看”:一是查建立完善制度措施情况,看制定出台的相关服务制度规定和服务措施是否具有针对性和可操作性,并得到有效落实。二是查文明服务、诚信经营情况,看有无话难听、事难办,对服务对象冷横硬,欺诈顾客。三是查环境卫生,看有无卫生死角,便民设施是否完备。四是查投诉处理机制情况,看受理投诉渠道是否畅通,解决投诉是否及时有效。
第三阶段,督查整改(9月上旬至10月上旬)
对于各窗口服务单位活动开展情况,市软建办将采取听取汇报、查看资料和明察暗访等形式进行督查,同时组织和邀请人大代表、政协委员、行风监督员等,对窗口服务活动进行评议和定期巡查,进一步督促窗口单位查摆问题,分析原因,整改落实。
第四阶段,长效管理(10月中旬以后)
各窗口服务单位要及时总结实施优质服务主题实践活动以来的成效,对存在的问题,要分析原因,提出改进措施,进一步健全规章制度,落实监管责任,堵塞管理漏洞,形成长效管理机制,使各项工作更加符合经济社会发展的需要,更加符合人民群众的利益和意愿。
五、相关要求
(一)加强组织领导。各窗口服务单位要紧密结合业务工作,加强领导和指导,明确领导责任、工作机构和工作人员。要根据本行业特点,制定实施细则,明确目标任务、活动载体、具体措施,细化要求,推动落实。
关键词:旅游业服务外包可行性对策
随着我国加入WTO和经济全球化的深入,多种经济成分的产业经营模式逐步渗入我国的经济领域。众多发达国家的跨国公司在向发展中国家大量转移其制造业的生产职能和加工基地后,现在又开始将其非核心的服务产业的部分职能向海外特别是新兴市场国家和地区转移。旅游业作为一种重要的服务产业,也将不可避免地迎来由服务生产国际分工而导致的机遇和挑战。
一、服务外包的概念和由来
服务外包(servicebusinessprocessoutsourcing),或称离岸服务外包,是指作为生产经营者的业主将服务流程以商业形式发包给本企业以外的服务提供者,以保持服务的稳定供应以及最优的质量和最低的成本的经济活动。其本质是通过合同发包、分包或转包等方式向第三方转移非核心的商业技术和服务流程,以提高资源的配置效益和利润空间。近年来,随着国际通讯和网络技术的快速发展,使发达国家的大型跨国公司将低附加值的经营环节和服务职能转移到相对具有比较优势的发展中国家,自己则专注于产品研发、生产管理、财务运作、营销推广、产业升级等具有相对竞争优势和高附加值的核心业务,服务外包由此发展起来。服务外包的产生于上世纪80年代IT产业的软件服务,在90年代由于“计算机千年虫问题”得到加速发展。随着服务外包这种经营模式在IT领域的成功,本世纪初外包业务范围逐步拓展到金融、保险、医疗、资产管理、顾客服务等服务业领域。据统计,全球的服务业外包市场已从2001年的1500亿美元增长到2004年的3000亿美元,成为一项新的全球性产业转移和增值模式。从外包方式上看,离岸外包将成为服务外包的主要方式,如国际零售业巨头沃尔玛公司提出将把80%的公司外包业务采用离岸方式。著名管理咨询公司麦肯锡预测,今后五年内,美国白领工作的离岸外包将增长30%。
二、旅游业发展服务外包的可行性
旅游业作为国民经济的一项支柱产业,一直都是服务业的重要组成部分。如同服务业的产生与发展是有历史阶段一样,旅游业本身就是一个集吃、住、行、游、购、娱等相关要素于一体的关联度较高的传统产业。随着近年来我国旅游业的迅速发展,行业的规模不断扩大,产业结构得到了进一步的改造和提升,实现了现代管理理念指导下的现代高科技、信息化的运营模式。在此基础上,产品形态日趋复杂化和专业化,与相关传统产业及新兴产业的交叉和融合进一步加剧,对原来形成的产业固定化边界进行了一定程度的调整和改造,出现了诸如会展旅游、旅游咨询、旅游规划与策划、旅游信息服务等新型业态。但几乎与此同时,也发生了行业恶性竞争激烈、经营绩效持续下降、行业管理边缘化的不良现象。因此,如何有序、规范、健康地发展我国旅游业,提高行业自身效能和产业层次,是新时期我国旅游业界和学界普遍关注的问题。
旅游业作为一种高成长性的服务产业,其产业扩张能力和渗透性较好,因此具有外包的潜力。旅游业在原有生活核心业态的基础上,受到生产服务业、专业服务业、信息服务业、创意服务业的明显影响,从而引致旅游业内部结构和能级提升,出现了高增值性、高层次性、高功能性、高技术性、高知识性的新特点。随着我国旅游产业规模的不断增长,“入世”的呼声日渐高涨,通过外包的方式实现与国际旅游业接轨的内在需求已经成熟。
其次,旅游业是服务业经济中一个较为活跃的产业代表,是国家经济和社会繁荣的“晴雨表”,包含了传统服务业的内容和现代服务业的元素,有着显著的二元结构特征,即以生产和生活为其要素的产业结构模式。而随着旅游业的发展和延伸,现代企业制度的普及和生产职能的强化,旅游业的服务对象也扩大到了生产者,建立以生产为主体的新型旅游业已是大势所趋。这就要按生产要素和生产方式来重新布局旅游产业,通过“归核化”的战略,将“非核心”的生产环节通过外包的方式加以整合、重组,实现旅游业产业结构的优化和升级。
由于现代旅游服务业同样具有高技术性、高知识性和高人力资本等现代服务业特征,因此决定了在同样的产出水平下,无形智力投入较高而有形资产投入较少,引进外包经营方式,不仅能直接创造价值增量,还有降低经营成本、提升经营效益、增加无形资产等间接途径和作用。如现代企业的一些非核心业务的外包,使旅游业为生产性企业提供第三方会展、商务等专业服务成为可能,从而形成某种经营功能的规模化效应,促使企业经营成本的大幅度下降。又如旅游规划或策划、旅游咨询和信息服务的外包,可使企业的经营效益大幅度提高,创造可观的经济价值。再如旅游企业形象的策划和营销、旅游广告的宣传运作,将使企业的品牌声誉和社会形象得到明显改善,无形资产的价值也就随之上升。
三、旅游业发展服务外包的对策和建议
服务外包作为一种新型的管理思想和经营实践,将成为旅游业今后获取竞争优势和实现自身可持续发展的重要战略抉择之一。由此,笔者认为,应围绕以下几个方面开展服务外包,抢占旅游业发展的制高点,形成现代服务业驱动GDP增长的新型发展模式。
(一)加强旅游业服务外包的外部环境建设
相比生产性企业而言,服务性企业对外部环境的依赖更大。各级政府相关部门应集中建设公共支持技术平台,强化对旅游业服务外包的技术支持和基础,以低廉的使用成本向服务外包企业提供旅游产业的综合开发环境、服务环境和管理环境,制定针对承接服务外包的优惠政策,降低企业运营成本,改善其运营环境。积极构建旅游服务的外包数据库,为旅游企业提供服务外包政策咨询、信息服务和业务指导工作,使企业能把握服务外包国际市场动向和发展趋势,在发展中少走弯路。另一方面,采取政府指导,市场化运作的方式,鼓励引进世界著名的专业化旅游服务商,优化配套服务措施;鼓励境内、外企业参与旅游相关产业带的基础建设,加快建设进度,提高旅游服务产业的规划和建设水平。加大地方知识产权保护的执法力度,增强旅游外包企业的知识产权保护意识;在已经建立的行业规范的基础上,集成现有法律、法规,构建服务外包政策体系,充分利用已有的政策资源,形成对服务外包的支持体系。
(二)旅游业服务外包的组织文化协调和流程再造
企业与外包商的文化协调,是指在外包运作过程中,外包双方能相互尊重,,努力扩大双方产业文化的兼容性和共识面,从而有效地减少或降低因文化冲突和摩擦带来的不利影响。旅游业通过实施服务外包,各相关企业的组织机构和运作机制都将发生较大的改变,经营职能也将随着外包业务控制权的转移而与以前有所区别,这必然要求企业对自身的组织文化和运作机制进行再造,以确保旅游企业外包业务的正常运营。具体地说,企业应就实施外包的业务制定切实可行的合作模式,整合各方资源,共同建立科学、有效的沟通机制,包括:定期举行信息会、案例分析会、提交各自的业务报告等,尽量消除交流中的文化壁垒,充分了解外包企业的相关信息,并采取建设性的态度化解因组织文化差异引起的各种纠纷。其次,对外包企业的生产模式和服务流程进行监控,及时搜集和反馈业务运转信息,提供必要的协助和业务培训,建立外包服务产品的评介体系和质量标准,以使外包企业的服务产品符合自身的质量要求。最后,企业还应本着互助与诚信的原则,与外包商就售后服务、企业CIS的统一化等建立可靠的协商机制。
(三)旅游服务外包的人才培养
人才是保证旅游服务外包成功的根本前提,旅游业发展服务外包离不开大量既熟悉旅游企业经营管理模式,又具备相关外包理论知识和实践经验的专门人才。我国发展旅游服务外包尚处于起步阶段,相关的人才严重不足,尤其缺乏具有相关技术和项目管理能力的高级管理人才。同时,由于旅游业人力资源的流动性较大,服务业外包缺乏相应的知识产权的保护,也会阻碍旅游服务外包的进一步发展。因此,对于服务外包这种快速增长的行业来说,建立一套完善、有效的人才供给机制显得更加紧迫。政府可以通过建立专属的服务外包管理机构,联合行业协会和服务外包行业工会,为服务外包人才的培养提供引导与支持;第二,通过举办国际性企业与人才洽谈会,搭建有利于人才与企业交流的平台;第三,推动建立“产学联盟”,支持大学的商学院建立“服务外包人才培养基地”,按照全球服务外包的发展趋势与特点,包括管理、策划、运作、外语能力等,为服务外包企业培养和提供高素质的服务外包人才;第四,全面推行职业资格认证制度,制定相关政策吸引和聘用海外高级人才,鼓励“海归人才”回国创业,以提升我国旅游服务外包业的国际化水平。
四、结论
世界服务业加速现代化和跨国转移的趋势,一方面进一步推动了世界经济向服务经济转型;另一方面也使服务业日益告别传统的地缘导向发展模式,不断打破时间、空间乃至文化、观念的隔离,开始进入全球化发展阶段。这不仅使服务业的全球重组和资源优化配置达到了空前高度,也正在使世界各国经济、产业、技术创新乃至经营管理模式出现全方位变革,对世界经济的重大影响。我国旅游业正进入快速发展期,特别是其中的科技、研发及营销、设计等环节,对整个产业链的技术进步和创新越来越有关键性的决定作用。在此基础上,积极发展旅游业服务外包以促进服务业现代化,是落实科学发展观、转变经济增长方式的客观要求,对于实现十一五经济社会发展目标具有重要战略意义。
参考文献
[1]张文建,试论奖励旅游与生产者服务[J].旅游科学,2005,(1)
[2]周振华,现代服务业发展研究[M].上海:上海社科院出版社,2005.(189)
[关键词]纳米羟磷灰石-脂肪族聚酯酰胺;成骨细胞;生物相容性
[中图分类号]R 783.1[文献标志码]A[doi]10.3969/j.issn.1673-5749.2012.01.009
Biological effects of nano-hydroxyapatite-aliphatic polyester-amide composite on the osteoblastsDeng Xia1, Xia Xi2.(1. Dept. of Stomatology, Nuclear of Industry 416 Hospital, Chengdu 610051, China; 2. Dept. of Prosthodontics, The Affiliated Hospital of Stomatology, Chongqing Medical University, Chongqing 400015, China)
[Abstract]ObjectiveTo evaluate the biological effects of nano-hydroxyapatite-aliphatic polyester-amide composite(nHA-PEA)on the osteoblast.MethodsThe Dulbecco minimum essential medium(DMEM)leaching liquor of nHA-PEA was applied to the osteoblasts of the test groups while the DMEM itself was applied to control. The methyl thiazolyl tetrazolium assay, flow cytometry and alkaline phosphatase(AKP)analysis were used to evaluate the changes in cell growth, cell cycle and cell function. Moreover, osteoblasts were cultured on the surface of nHA-PEA composite and the attachment, growth and proliferation of osteoblast were investigated. Results The cultured osteoblasts grew well and showed nomorphological variation. Osteoblasts of different test groups demonstrated relative proliferation rate ranging from 92%~107% without dose-dependent effect(P>0.05). The cell cycle and AKP activity were similar in test and control groups(P>0.05). Good cell attachment and proliferation manner were observed on the membranes. ConclusionnHA-PEA has no negative effects on the osteoblast and its osteoblastcompatibility is proved.
[Key words]nano-hydroxyapatite-aliphatic polyester-amide composite;osteoblast;biocompatibility
有机-无机复合生物材料是组织工程学研究的热点[1],该材料主要用于修复和重建人体的硬组织。纳米羟磷灰石-脂肪族聚酯酰胺(nano-hydroxyapatite-aliphatic polyester -amide composite,nHA-PEA)复合材料由nHA粒子与PEA均匀混合制得,其中羟磷灰石(hydroxyapatite,HA)是人体骨、牙等无机组织的主要成分,PEA及其共聚物是一类新型的生物可降解高分子材料[2]。nHA- PEA复合材料兼具了有机物的韧性和无机物的刚性,具有良好的理化性能。本研究将nHA-PEA复合材料作用于体外培养的成骨细胞,检测其对细胞生长、增殖能力、细胞周期、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)活性的影响,观察细胞在其表面的黏附、铺展形态,评价其对骨细胞的相容性和生物活性。
1材料和方法
1.1主要材料和仪器
达尔贝科极限必需培养液(Dulbecco minimum
essential medium,DMEM)、胰蛋白酶(Gibco公司,美国),新生小牛血清(成都哈里生物工程有限公司),甲噻唑四唑氮(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)试剂(Sigma公司,美国),AKP试剂盒(北京柏定生物工程有限公司)。Sanyomco-17AI二氧化碳孵箱(Sanyo公司,日本),Olympus IX50相差倒置显微镜(Olympus公司,日本),JSM-5900LV型扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM;JEOL公司,日本),可见光高效分析仪/HTS 7000plus多孔板紫外/荧光(PE公司,美国),流式细胞计数(flow cytometry,FCM;Coulter公司,美国),LightCycler检测仪(Roche公司,德国)。1.2浸提液制备
按文献[3]制得4组nHA-PEA复合材料,按其无机和有机成分的质量分数分组,分别为A组0和100%,B组10%和90%,C组20%和80%,D组30%和70%。将4组nHA-PEA复合材料(平均厚度0.5~1 mm)消毒灭菌后,按照国际标准化组织ISO 10993-5医疗器械生物学评价标准所推荐的试样表面积和浸提介质为6 cm2·mL-1的比例[4],置37℃滤除细菌的培养液中,浸提3~4 d的浸提液备用。
1.3成骨细胞培养和细胞悬液的制备
取生长稳定的第4代SD乳鼠颅骨成骨细胞,经质量分数0.25%的胰酶消化后行细胞计数,用DMEM配制5×104个每毫升的细胞悬液。
1.4甲噻唑四唑氮比色
将200μL密度为5×104个每毫升的细胞悬液加入96孔板,置于体积分数5%的二氧化碳培养箱,37℃培养24 h,细胞贴壁后弃掉原有培养液,将细胞分为试验组(A~D)和对照组(E),试验组每组均分别加入200、100、50μL终质量分数分别为100%、50%和25%的浸提液,形成A1、
A2、A3,B1、B2、B3,C1、C2、C3,D1、D2、D3,
对照组加入原培养液。每日于相差显微镜下观察细胞形态,生长和增殖情况。分别于第1、3、5、7 d各取96孔板1块,每孔加入20μL的MTT,孵育4 h,每孔加入200μL二甲基亚砜,振荡1 min,混匀,570 nm波长下测定各孔吸光度(A),取3孔均值,计算细胞增殖率(proliferation rate,RP):RP=(A试验组/A对照组)×100%。1.5流式细胞计数
接种对数生长期的成骨细胞1×105个每毫升瓶,细胞贴壁后A~D组弃原培养液加入质量分数均为100%的复合材料浸提液,E组加入新鲜原培养液,标准环境下3 d换液1次,培养7 d,消化、离心并收集沉淀细胞。流式细胞计数DNA荧光强度及散光参数,Multicycle软件分析细胞的周期分布和程序性死亡情况。1.6碱性磷酸酶活性检测
取1×105个每毫升的细胞悬液3 mL加入小号培养瓶,将其置于体积分数5%的二氧化碳培养箱,37℃培养24 h,细胞贴壁后弃掉原有培养液,A~D组均加入质量分数100%的浸提液,E组加入新鲜原培养液,分别于第4天和第7天中止培养,收集80μL细胞悬液,以AKP试剂盒通过HTS 7000plus多孔板高效分析仪行AKP活性测试。
1.7成骨细胞与材料的复合培养
将载有nHA-PEA复合膜的血盖片试样置于6孔板内,环氧乙烷冷消毒,磷酸缓冲盐溶液浸泡清洗3次,每次1 h,DMEM孵育过夜备用。取1×105个每毫升的细胞悬液,分别接种于已准备好的材料上,37℃,体积分数5%的二氧化碳孵箱继续静置培养5 d。分别于第1天和第5天将试样取出,以体积分数10%的多聚甲醛固定,体积分数30%~100%的乙醇梯度脱水,醋酸异戊酯置换乙醇,临界点干燥,表面喷金,SEM下观察。1.8统计学分析
使用单因素方差分析,分析各组总体均数间差别有无统计学意义,在检验数据之前对数据行方差齐性检验。用q检验比较两组间均数的差别。P>0.05为差异无统计学意义。
2结果
2.1细胞生长观察及甲噻唑四唑氮比色结果
显微镜下,不同质量分数的nHA-PEA复合材料浸提液组及对照组细胞培养6 h后均已贴壁,12 h细胞突逐渐舒展,24 h细胞开始铺展,72 h后细胞数目明显增多,排列规则密集,细胞呈梭形、三角形或不规则形,形态分析各试验组与对照组细胞形态相似,显示各组细胞均生长良好。试验组和对照组不同时间的MTT比色结果见表1。试验组间的MTT值及其与其对照组间的差异无统计学意义(P>0.05);试验组成骨细胞的相对增殖率为92%~107%,不同质量分数的nHA-PEA复合材料浸提液组对成骨细胞的细胞毒性级数为0~
1级(0级:细胞相对增殖率大于等于100%,1级:细胞相对增殖率为90%~99%)[5],不同质量分数浸提液组间差异无统计学意义(P>0.05)。
3讨论
在生物医学材料的细胞毒性试验方法中,最常用的是材料浸提液培养法和细胞材料直接接触法。本试验综合运用了这两种方法,首先选择浸渍法,具体原因如下。1)对于nHA-PEA复合材料,nHA的生物相容性勿庸置疑;而PEA是新型的人工合成的生物降解型高分子材料,其理化性能和降解性能已有相关研究[6],但其生物相容性鲜有报道。2)由于直接接触法共同培养时,细胞对材料表面和对培养孔板底部的黏附性有差异,细胞洗脱率的不同会产生干扰而使试验复杂化。事实上,仅需考察nHA-PEA复合材料溶出物的
细胞毒性,就可以达到初步评价其生物相容性的目的,而且以材料的浸提液代替材料本身在材料学的研究中已得到公认。本试验严格按照国际标准化组织ISO 10993-5医疗器械生物学评价标准和要求制备生物医学材料浸提液[4],以浸提出最大量的滤出物质,考察其对成骨细胞增殖和细胞周期的影响。
MTT比色是常用的细胞增殖能力检测方法,可以对材料的细胞毒性作出可靠的定量评价[5]。本试验在相差倒置显微镜下观察到nHA-PEA复合材料浸提液不影响细胞的生长形态;MTT值在试验组间以及各组与对照组间差异无统计学意义,试验组的细胞增殖率在92%~107%,表明nHA-PEA复合材料浸提液对成骨细胞的生长无不良影响。因此在进一步地对细胞周期和功能进行的分析中,仅选用最高质量分数的nHA-PEA复合材料浸提液作为试验组进行分析比较。在加入HA的试验组,MTT值略高于对照组,但差异无统计学意义且无量效关系。原因可能与其中的钙、磷水平较高有关。
流式细胞计数已广泛应用于肿瘤学、生物化学和免疫学等领域,细胞周期检测已成为生物材料生物相容性评价的一种可靠方法和指标[7],是常规细胞增殖试验的一项重要补充。近年来,生物材料生物相容性研究进展之一是生物材料的生物功能性评价[8]。生物材料作用于细胞后使其周期改变,从而使其行为和功能发生改变。本试验在MTT比色的基础上进一步使用流式细胞计数,旨在从细胞增殖周期的角度来分析nHA-PEA复合材料浸提液对细胞增殖周期DNA合成的影响,从分子水平上评价材料的细胞毒性。从MTT比色可见,组间、组内不同质量分数的nHA-PEA复合材料浸提液对成骨细胞的增殖和增殖周期影响不大,细胞周期各亚期组成比和程序性死亡率差异亦无统计学意义。B、C、D组处于S期的细胞略多,表明加入HA对细胞增殖有一定促进作用,但不显著,不存在量效关系。此结果与MTT比色结果一致。
除了对细胞增殖的影响,生物材料的细胞相容性还表现在材料对细胞重要功能的影响。AKP是骨形成所必需的酶,是生物矿化和成骨细胞分化成熟的早期标志物[9-10]:其表达代表骨形成状况,表明细胞分化的开始,并随细胞分化的发展而增强;其活性的高低,反映了相应细胞向成骨方向化的趋势。本研究采用酶联法对成骨细胞AKP的表达进行检测,结果显示试验组AKP的表达量与对照组相比较差异无统计学意义,说明nHA-PEA复合材料对成骨细胞的功能酶表达无不良影响,也没有明显的促进作用,不抑制其分化功能。
用浸提液作为试验样品测定复合材料中滤出物质对细胞生长、增殖的影响,仅为预测材料植入体内的潜在危害提供了初步依据,其结果尚有一定的局限性;因此,需在浸渍试验良性结果的基础上再采用直接法将成骨细胞与材料联合培养,以进一步考察材料本体的结构性能对细胞生物学的影响。本研究表明,成骨细胞在复合材料上具有良好的黏附、铺展和增殖行为,即nHA-PEA复合材料具有成骨细胞相容性和良好的细胞相容性等特性。
4参考文献
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(一)深化普法依法治理。今年是“六五”普法收官之年,我们进一步加强阵地和载体建设,上半年迎接了督查组对我区“市级民主法治示范村”和__市首批“法治文化建设示范基地”、“法制宣传教育示范基地”的复核验收,申报的南张街道艾平村被司法部、民政部表彰为“全国民主法治示范村”,成为__区首个“全国民主法治示范村”。发挥传统媒体和新媒体在普法中的作用,成功举办第二届城区法制宣传员选拔赛,切实提升全区青少年法律素质;配合办好《法治__》电视栏目,联系律师事务所,协调电视台,寻找案源和合适的拍摄地点,坚持每周一期;今年上半年“法治__”普法微信公众平台已上线试运行,用户只需要用微信搜索“法治__”即可关注,真正实现指尖学法,截至目前已发信息48期,上海、广州、武汉等很多大中城市对这个平台进行了关注并互动,充分发挥自媒体受众范围广、不受地域限制等优势。继续深化“法律六进”,在机关举行《法治政府建设新起点》专题报告,邀请北京大学法学院王锡锌主讲,全面深刻的阐述了依法行政;为进一步增强全区师生的法治观念和法律意识,在原有98名法制副校长的基础上,又聘任14名同志为__市第十二中学等学校的法制副校长;在社区和乡村,到喻屯镇万福家园积极参与“文化、科技、卫生、惠民”宣传,捐赠价值4000余元的法律书籍一批,并现场开展开展免费法律咨询活动。今年上半年共申报创建“民主法制示范村”20个、制作普法宣传专题片1部、制作《法治__》栏目21期、会同司法所、律师事务所等为中小学生做法制报告5场次,经层层推荐、严格考核,我区被评为第三批“全国法治县(市、区)创建活动先进单位”,也是__市唯一获此殊荣的县(市、区)。
(二)抓好基层基础工作。持续推进规范化司法所创建活动,今年上半年对全区司法所进行了2轮不同层次的摸底调研,充实17名人员到各司法所,目前全区司法所基本达到每所3人,解决了人员不足和分配不均的问题。上半年还投资10余万元,对唐口、金城、喻屯、长沟司法所进行了改建,与安居街道办事处合建新的司法所业务用房,目前正在准备相关手续。人民调解工作常抓不懈,上半年全区各级调解组织共调处案件758件,成功调处744件,调处成功率98%以上。进一步拓宽调解领域,继消费者纠纷调解委员会、道路交通事故调解委员会之后,又在__市__保安服务有限公司成立了“__市__保安人民调解委员会”,目前全区行业性专业性调委会已经达到8个,覆盖面进一步扩大。创新调解模式,仙营司法所和辖区内的派出所联合成立“公调中心”,依托派出所的“110接警平台”,目前已处理各类矛盾纠纷27件,更加及时有效的化解矛盾。全力推进基层法律服务,在二十里铺街道试点推行“法治村主任”派驻,通过召开座谈会、开通“法律服务村居行”QQ群和微信群等方式,实现村居和
法治村主任无缝隙对接,现已初见成效,自“法治村主任”派驻以来,为村里修改了重要合同16份,修改了村规民约42份,化解重大矛盾纠纷4起,赠送普法类书籍2000余本,区级以上案件同期减少20%。 (三)管控特殊重点人群。开展社区矫正开展“监管教育双轮驱动”活动,上半年共接收社区矫正对象209人,解除209人,目前共有社区矫正对象679人,其中,缓刑575人、管制54人 、假释46人、暂予监外执行4人。上半年共接收安置帮教对象87人,目前共有安置帮教对象1437人。没发生重新违法犯罪现象。共开展集中入矫宣告活动10次,并对29名社区矫正对象给予警告处分。每周五定期对新入矫社区矫正人员举行集中入矫宣告仪式,要求他们及监管人按时参加,使之充分认识社区矫正纪律的严肃性以及违规后果的严重性。除了做好这些日常监督管理工作外,还定期举办专题培训,针对社矫正人员犯罪后的心理情况等实际问题,特邀山东省心理学会会员、国家二级心理咨询师等专家授课,提高工作人员业务能力。进一步规范社区矫正监管工作,为各司法所配备了人脸识别报到机,社区矫正监控平台已全部安装完毕,现正在调试运行。
(四)提供优质法律服务。加强对律师事务所和律师的日常监管,对23家律师事务所报送的年审材料逐项进行审核把关形成初审意见,加强指导的实效性。组织全区各所开展“三牵手三促进”律师法律服务活动,通过构筑“三大平台”,提供“三式”服务,开展“三个一”法律服务活动,确保每家律师事务所至少牵手一个重点工程,每名律师至少牵手一个中小企业和一个村居(社区)。在法律援助工作中加大宣传力度,先后到喻屯镇万福家园社区、惠普人力资源市场、市文化广场开展不同受众、不同主题的宣传活动。同时利用各类媒体强化宣传力度,今年法律援助中心联合__市广播电视台在__新闻广播《依然热线》和__交通广播《我的汽车有话说》栏目中,开设了律师“在线释法”平台,全方位提高法律援助知晓率。上半年共办理法律援助案件360件,结案215件;共解答法律咨询625人次,其中电话咨询65件。
(五)建设过硬司法行政队伍。根据区委、区政府部署开展“解放思想—科学发展融合发展大讨论”活动要求,通过召开动员大会,开展集中学习讨论,座谈交流,征文比赛,演讲比赛等方式,迅速在全局掀起思想大解放的热潮,为全区司法行政科学发展融合发展注入强劲动力。制定党员集中培训方案,翻印下发了学习资料,安排每周四下午进行集中学习,邀请市委党校吕明伟教授为全体党员干部作了题为《加强作风建设 提升执行力》的专题报告。加强队伍作风建设,开展“作风建设集中整治月”活动和“三严三实”专题教育,及时下发实施方案,学习规定内容,深刻查摆问题,引导全系统党员干部不断提升自身素质,激发党员干部的向心力和凝聚力,打造为民务实清廉的司法行政队伍。
上半年我区司法行政工作取得了一定成绩,但是当前全区司法行政工作面临的基层基础工作薄弱,司法所任务重、人员力量薄弱的状况仍然突出;人民调解、法律援助、法律服务、社区矫正等管理与服务不规范的问题仍不容乐观;工作中创新思路不多,争先创优氛围不浓,提炼总结不够,特色亮点工作不突出;个别同志担当意识不强,务实作风不强,进取精神不强,这些困难和问题需要我们在今后的工作中认真加以解决。
(一)着力推进法治宣传和“六五”普法检查验收工作。一是要拓展普法新阵地,形成浓厚法治文化氛围。下半年拟在__湿地公园建成一处法治文化广场,集休闲健身和法制宣传于一体,有效发挥广场阵地的教育引导功能,增强法治文化的渗透力和感染力,更好地满足人民群众的法治文化需求。二是努力推动“谁执法谁普法”的责任制落实,扎实构建全区“大普法”格局;协调区内有关部门、单位承担公益普法的社会责任,继续利用广播、电视、报纸、手机的传媒优势,制作播放普法公益宣传内容,扩大法治宣传社会覆盖面。三是做好“六五”普法检查验收相关工作。6月24日召开了全区普法依法治理工作领导小组全体会议,下一步我们将按照区里检查验收方案和省市文件要求,全面进行安排部署,确保交一份合格答卷。
(二)大力构建人民调解工作体系,维护全区和谐稳定。一是要强化人民调解基层基础,依托村(社区)调委会,成立一批品牌调解工作室。二是进一步拓宽调解领域,抓好专业性、行业性人民调解组织建设,在现有8个专业调委会的基础上,推动人民调解组织向物业管理、消费、环保等新领域拓展。三是提升人民调解能力水平,专题举办全区人民调解员培训班。深入开展矛盾纠纷排查调处专项活动,认真做好抗战胜利70周年纪念、国庆节、党代会期间的矛盾排查调处工作。推进人民调解员等级管理制度,提高全区人民调解员业务素质和工作能力。
(三)努力构建规范的社区矫正管理体系,预防和减少重新违法犯罪。一是提升社区矫正工作规范化水平,继续开展好“监管教育双轮驱动”活动,进一步提升教育矫正的质量和效果,实现执法环节规范化。二是狠抓重点时段安全管控。确保在抗战胜利70周年纪念、国庆节、党代会期间全区稳定,确保无特殊人员脱管、漏管、失控现象发生。三是进一步整合各界资源,强化合力,形成协助矫正力量,同时对监狱服刑人员未成年子女进行排查统计,对其中的失学儿童协调有关部门进行帮扶。