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1、了解水质、水的物理性状、化学成分、水的富营养化污染。
2、培养对饮用水净化、消毒、硬水软化、污水处理的探索兴趣。
3、初步学会研究水质的方法,强化生态观点和环保意识。
教学重点:影响水质的化学成分、水的富营养化污染
教学难点:溶解氧和有机物之间的关系,水的富营养化污染
教学方法:谈话法、讲述法
教学过程:(第一课时)
导入新课:“水是生命之源”,请同学们谈谈水的重要性,介绍我国城市缺水的情况,增强感性认识。既然水对我们如此重要,水质的好坏当然关系到我们的身体健康。下面我们就来学习-------水质和饮用水的卫生。(宁波的河流?爱不?)
出示自学提纲:
1、1、什么是水质?水体的物理性状包括哪些方面?
2、2、水体的化学成分中重要的检测指标有哪些?
3、3、水体中的溶解氧与水中有机物之间有什么关系?
4、4、什么是“水花”?什么是“赤潮”?
5、5、水的富营养化污染的概念、原因、过程、结果分别是什么?
在学生自学后,师生共同总结如下:
温度:“热污染”
味道:生物死亡
物理性状:气味:工业废水
浑浊度:泥沙、有机物、浮游生物、微生物
颜色:藻类、工业废水污染
一水质pH:天然水常呈弱酸性,7.2~8.6(注意大小写)
生活饮用水6.6~8.5
硬水
化学成分:硬度:溶于水中的含钙和(能否补钙?)
(极为复杂)镁的盐类的总含量软水
重要的检测指标(1)空气
来源:(2)水生植物光合作用
溶解氧作用:
与水中有机物之间的关系(重点理解)
溶解氧[溶解氧间接反应水受有机物污染程度]
《忆江南》据考证是到宁波(明州)
有机物
二、水的富营养化污染
1、富营养化的涵义:富营养化是指水中N、P等元素含量过多,使藻类等浮游生物获得丰富营养而大量繁殖的状态。
2、水中氮、磷等元素的来源:
①生活污水,
②含大量N、P的工业废水,
③含大量N、P的农田退水。
3、“水华”或“水花”:
河、湖、池塘富营养化污染时,藻类大量繁殖,水变浑浊,并呈现绿、黄绿等颜色的现象。
4、“赤潮”:海水中含营养物质过多(根本原因)时,浮游生物大量繁殖(直接原因)。因浮游生物种类不同,可使局部海水呈现红色、
绿色或褐色。
危害是:鱼类及其他水生生物会大量死亡。
5、理解水受富营养化污染后的发展过程:
工业废水和生活污水含有大量的氮、磷元素排入水体(根本原因)
藻类等浮游生物获得丰富营养而大量繁殖(“水华”的直接原因)
由于生存环境有限,进行生存斗争,使藻类等浮游生物大量死亡
需氧微生物数量增加,用于分解有机物
水中溶解氧降低(水生生物死亡的直接原因)
水生生物大量死亡
厌氧型微生物大量繁殖
水变黑发臭。
6、6、防治:
①①控制N、P进入水体:A、使用无磷洗衣粉
B、禁用农药
C、控制化肥使用量
②②疏浚淤泥:如:西湖治理
③③去除水草:如:水葫芦
④④增大水体,引入低营养水稀释
注意多联系实际以帮助理解
小结:强调本节重点:水质的化学成分、水的富营养化污染
练习:1、富营养化污染排序
2、多选:过量使用过磷酸钙[有效成分Ca(H2PO4)2]会引起水体的()
A硬度变化BpH下降
CpH上升D富营养化污染
课后小记
(第二课时)
复习提问:
1、什么是水质?
2、水体的化学成分中重要的检测指标有哪些?
3、水体中的溶解氧与水中有机物之间有什么关系?
4、什么是“水花”?什么是“赤潮”?
5、水的富营养化污染的概念、原因、发展过程分别是什么?
引言:
我们在了解一般水污染之后,更要关心饮用水的知识。
出示自学提纲:
四、饮用水的卫生
1、家庭饮用水必须、、。
2、生活饮用水卫生标准:(1)
(2)
(3)
3、家庭饮用水的净化方法:通常是在水中加入;
还可使用。
4、家庭饮用水的消毒方法:一般使用
五、硬水的软化
1、硬水的危害:①②
2、硬水软化的方法:
①通常往水中加入适当的,使溶解在水里
的和转化为不溶于水的物质,生成沉淀,从而被除去。
化学方程式:
②用除去水中的和,使硬水软化。
七、污水的净化
1、1、水质恶化:
2、2、污水处理方法:
①①
②②氧化塘法:氧化塘是将污水蓄于水塘中,利用水塘中
的和,对污水进行自然净化。
在学生完成知识填空后,可由学生举例分析,提高应用能力。
小结:
习题巩固
课后小记:
第三节大气与健康
教学目标:
1、1、了解大气主要污染产生的原因和危害
2、提高学生联系实际,运用所学知识分析、解决问题的能力。
3、培养学生探索环境问题的兴趣,加强学生珍惜身体健康、保护大气的意识,渗透辨证唯物主义教育及爱国主义教育。
教学重点:大气污染的来源及表现
教学难点:SO2和光化学烟雾
教学方法:自学讨论法、谈话法
教学过程:
复习提问:1、什么是水污染?主要表现是什么?
2、溶解氧与水中有机物之间的关系怎样?
导入新课:宁波市政府决定将宁波钢铁厂迁出市区,为什么?
问:食堂也会排出废气,会不会引起大气污染?
钢铁厂排出大量的废气,将怎样?
在学生回答的基础上,得出大气污染的概念。
一、大气污染:
1、概念:大气与水体一样,对进入其中的有害物质具有一定的自净能力。如果进入大气的有害物质的量很多,超过了它的自净能力,那么,存留在大气中的有害物质将会影响人体健康。这种现象就
叫做大气污染。
问:大气中的有害物质来自何处?
学生答后总结:自然的,人为的。
填下表:
2、大气污染的来源:
①,
②主要来源───(主要有、、等)。
③。
问:我国主要燃料是什么?由此推测燃烧后有什么污染物?
提供相关信息:
燃烧1吨煤的产物SO2碳氮化合物悬浮颗粒NO2
170Kg0.5Kg11Kg9Kg
燃烧1吨石油产物SO2碳氮化合物CONO2
10Kg100Kg70Kg30Kg
通过该表总结:
二、、烟尘、二氧化硫和光化学烟雾
1、烟尘:主要来自的燃烧
2、二氧化硫:主要来自的燃烧,居民区的
汽车等排出的废气
3、光化学烟雾————(紫外线)
二次污染物
光化学烟雾污染的表现。
对人体最突出的危害是
重点强调二氧化硫及光化学烟雾的来源,可联系实际,如:尺蛾黑化现象,1992年上海光化学烟雾,2001年广西南宁助动车导致光化学烟雾,马斯河谷事件,伦敦烟雾事件,无铅汽油
三、酸雨:
洁净的天然降水也具有,但pH不会低于5.6。
方程式
1、酸雨的概念:
2、酸雨产生的主要原因:
严重危害:。(结合课本插图理解并联系实际,如:森林、农作物、水体)
重点强调:酸雨概念,形成原因注意与天然降水原因比较,酸雨危害可让学生读图总结。“空中死神”——酸雨,如何从根本上减少酸雨?
四、大气与健康
阅读课本思考:
1、1、宁波市民“十不规范中”有“不随地吐痰”、“不随地大小便”
2、2、“绿色家电”——室内负离子发生器面市
3、3、祖国传统医学——中医常用风、暑、寒、燥、湿来分析疾病成因
该部分知识为介绍性内容,可让学生联系实际了解,对生物性污染强调其来源即可。重点落在珍惜身体健康,保护环境意识上。
拓展:城市空气质量日报
小结
用所学知识解释:
1、1、西柳州“雨后浇菜”
2、2、洪水后“洗苗”
1、早睡晚上最好让孩子不要超过九点睡觉,早睡才能避免过度疲劳,早起就会比较容易了,所以一定要早睡觉,而且对孩子的健康也有好处;
2、适度的工作量除了孩子必须要完成的学习外,尽量不要给孩子多增加学习负担,这样才能保证孩子休息好,休息好了,早晨就不会睡懒觉了;
3、提醒睡觉的时候,尤其冬天不爱起床,这都是比较正常的现象。大人也一样,所以到了起床的时间就要起床,要提醒孩子起床,不能让孩子睡到自然醒;
自来水每烧开一次,就会为壶底、壶壁上结的水垢出一份力,倒在杯子里,上面还会漂着一层白沫,喝起来也有股“怪味”,尤其在北方更常见。其实,这都是水里含有过多钙镁离子捣得鬼,这种水矿物质含量较高,被人们形象地称为“硬水”。中国农业大学食品科学与营养工程学院教授姜微波指出,水垢的主要成分是碳酸盐类和镁盐类,对人体没有危害。但如果水壶里结了很多水垢,它就容易吸附水里的有害物质,最好定期清除。清除水垢,使用物理方法比较有效,即先把壶烧干,看到水垢发干发白,迅速灌入凉水,由于热胀冷缩的原理,水垢会大量脱落。也可以试试化学方法――用酸性物质溶解,比如先给壶里加点白醋,再倒入多半壶水,烧开后放20分钟,用软布擦拭即可。如果嫌麻烦,不妨试试著名美食专家文怡在超市淘的宝贝――“水碱滤片”,可以起到除垢和消除异味的双重作用,“如果还是觉得水有异味,可以放片柠檬进去,或泡茶喝。”文怡建议。
要想烧的水口感更好、水质更安全,不要将自来水接出来后马上就烧,先放一会。水快开时把盖子打开,水开后等两三分钟再熄火,能让水里的有害物质有效挥发掉。
自来水经过过滤饮水机的加工,口感提升了不少,而有的人图省事,干脆直接喝桶装水。不管是哪一种,想要长期保持水质健康,定期清洗饮水机是最重要的环节。
“目前市场的饮水机在电器安全方面有证可依,但在卫生安全方面是缺失的。”中国家电研究院国家家用电器质量监督检验中心综合检验部主任鲁建国说,因此在购买时就得把好关,一定要选择正规企业的产品。在此基础上,必须定期清洗饮水机。
过滤型饮水机的清洁主要在过滤器,用得时间一长,会积攒很多细菌和微生物,甚至还会长出“青苔”,最好每两三个月就清洗一次。“一般不建议自己拆卸清洗,应请专业人员来操作,否则很容易损坏电路,导致饮水机罢工,还会造成用电安全隐患。”鲁建国说,如果你家的饮水机可以将整个过滤器卸下来,必须按照说明书操作,用清水反复冲洗干净。滤芯一般1~2年更换一次。
桶装水饮水机清洗的关键是水桶与机器接触的部位。清洗时,先拿掉水桶,放空机储水槽的剩水,用中性清洗剂将其擦净,然后再给里面放满水,加入专用消毒剂,浸泡一会再排干净,然后倒入清水反复冲洗,直到放出的水没有异味才行。
另外,无论哪种饮水机,每次清洗时,机身表面、进水口、出水口和积水托盘也要记得清洗、消毒。
桶装水越来越多地出现在人们生活中,使用时需要注意以下三点。
纯净水配白开水。最常见的桶装水为纯净水和矿泉水,虽说纯净水中的杂质和污染物已被去除,但这种水不能长期喝。因为在对水进行纯净处理的同时,把水中对人体有益的矿物质和微量元素也去除了,尤其不适合老人和孩子喝。研究表明,儿童和老人身体中钙的需求量30%来自水,长期喝纯净水,这部分钙的吸收就不够了,而体内已有的矿物质反而会随着纯净水的代谢,排出体外。最好的办法是纯净水配着白开水或矿泉水喝,可满足人体对矿物质的需求。
一周内要喝完。桶装水出水的原理是通过空气压力取水,每放出一升的水,必定有相应一升体积的空气夹带着细菌和尘埃进入机体中。每次换水时,会有一部分水残留在出水槽里,也会产生大量微生物。因此,安全起见,桶装水最好一周内喝完。如果家里人少,可用小一点的桶。
最好喝热的。由于现在桶装水的质量参差不齐,对水桶的清洁消毒不严格,使原本安全的水变得不安全。因此,喝桶装水最好烧开了再喝,购买时也要选择大品牌。
热水器里的水不能喝
有的人图方便,经常会用热水器里的水烧水、做饭,这种做法不可取。因为进入热水器的自来水会受到管网的二次污染。其次,热水器里的水反复加热,水里起到消毒作用的氯会减少,给储水箱和管道里的微生物、细菌生长提供了有利条件。另外,现在不少小区都是统一供应热水,这些公用热水大多是提供给居民洗澡用的,没有达到饮用水的标准,烧水、做饭最好别用。
早起先给龙头放水
停用一夜的水龙头处及其附近水管中的自来水,可能会受到金属管壁和附着细菌的污染,不适合刷牙、漱口或烧水做饭。建议每天早起先用脸盆接走半盆水(可用来冲马桶、擦地等)后再用。新装修或经常不在家的房子,尤其要注意。
电热水壶选不锈钢的
电热水壶烧水方便快捷,但选择和使用也需要注意。首先要买质量过硬的产品,最好选用不锈钢材质的,烧水更安全。第二,用电热水壶烧水一定要随时喝随时加水,因为其温度降低到一定程度,就会自动加热,一壶水反复加热,水质就不会太好。
关键词: 浅谈南水北调 沙河梁式渡槽U型橡胶止水 安装
中图分类号:TV文献标识码: A
1、前言
南水北调中线沙河渡槽工程(以下简称沙河渡槽)位于河南省平顶山市鲁山县境内,是南水北调中线局直管项目,主要由渠道工程、沙河渡槽工程及大郎河渡槽工程组成。沙河梁式渡槽全长1410m,横跨沙河,单跨4槽,共47跨。渡槽槽身采用预应力钢筋混凝土U 形槽结构型式,槽身净直径8m,每2槽支承于一个下部槽墩上。槽身纵向为简支梁型式,跨径30m。沙河、大郎河总共228榀渡槽,单片槽体总重量1200t。
2、施工方案
2.1、施工流程
脚手架搭设—止水带基础面处理—混凝土基础面处理—坡面修整及界面剂涂刷—不锈钢螺栓安装—橡胶止水带安装—止水带压杆制作及安装—密封处理。
2.2、脚手架工程
据现场的实际情况,对施工各作业面根据流水作业需要搭设多个钢管架平台(或者特制可以移动钢制施工平台),对止水带进行各项工序安装施工。
2.3、止水带基础面处理
采用金刚片对原基础面进行打磨,彻底清除表面上的粘贴物及其它附属材料,直至露出新的混凝土面,并适当整形。用压缩空气对基础面进行吹净处理。
2.4、伸缩缝立面处理
渡槽止水缝因预制和安装误差,目前存在宽窄不均匀的问题,槽缝宽度在0~140毫米(不含填充泡沫板)之间。设计宽度为40毫米,为使胶止水带受力均匀,保证止水带与槽体之间有效的粘结面积,必须对槽缝进行修整,修整步骤如下:
1、切除槽缝端部填充泡沫板,切除高深度不小于220毫米。
2、重新测量槽缝宽度,对缝宽度大于50毫米的缝段进行清理,除掉浮尘及油污,并用清水冲洗。
3、待清理面充分干燥后涂刷JME改性环氧基液,涂刷高深度不小于200毫米。
4、依据槽缝具体形态制立模板,并保证满足槽缝宽度的设计要求(40mm~50mm);
5、在需修补的部位填充JME改性环氧砂浆,并用9cm压型定位。
6、对于槽缝宽度大于80毫米的缝隙,需采用植筋挂网的方法处理,再按3~5条的步骤施工,拟增强修补材料和槽体的连接强度。
7、对于缝宽小于40毫米缝段,采用切割的方法将槽缝砼切除,拟满足槽缝宽度为40毫米的设计要求,切除深度不小于100毫米。
2.5、界面剂涂刷
1、结构表面处理:在混凝土破损处(新老混凝土界面)用钢丝刷刷净表面,除去混凝土表面浮尘,再用棉纱擦净。
2、浆液的配制:界面结构胶是一种反应型胶粘剂,化学计量比偏差较大对粘接力和粘接耐久性都会产生重要的影响,因此要按使用说明严格计量。为避免因温度过高或灌浆时间过长浆液暴聚合,每次配胶量为1-2kg为宜 ,配好的胶应在40min内用完。
3、搅拌:将胶的A、B两组份按化学计量比放入同一容器内,每次配制时A、B组份应搅拌混合均匀,搅拌时间不少于5min, 搅拌一般沿顺时针方向以免带入过多的气泡,影响胶体固化质量。搅拌好后应静置3-5min,以利于气泡及时排出。
4、灌浆施工环境;为保证胶体的强度,注浆施工时环境温度应不高于60℃。
5、涂胶:用毛刷把调匀的胶液涂刷在破损混凝土表面1-2遍,涂刷必须均匀满涂,不得留有针孔,涂刷时应尽量让胶液浸润老混凝土。
6、趁湿抹灰:待胶液初凝(指表面不流动,一般在1-2小时左右),指触胶液未干,立即涂抹JME改性环氧砂浆。
7、养护:施工与养护温度应在5℃以上,施工养护同JME改性环氧砂浆。
2.6、不锈钢螺栓安装
1、施工放线:依据结构施工图,结合现场的实际情况,准确无误地放出植筋孔洞位置,然后采用钢筋探测仪对孔洞原有结构的钢筋进行探测,如有钢筋侧孔洞偏移(在设计要求允许范围内)。
2、钻孔、清孔
⑴、根据标出的孔洞位置,为控制钻孔精度和垂直度钻孔时将钻杆插入固定孔位的钢模具套筒内用电锤进行钻孔,直至设计深度。钢模具套筒间距根据施工图螺栓间距制作。
⑵、清孔:先用吹风机将孔洞内灰尘吹除,然后用棉纱沾清洗剂清洗孔壁,直至干净钻孔后必须保证孔洞内干燥。
3、钢筋处理
⑴、下料:按设计要求,对钢筋进行下料
⑵、表面处理:将植入混凝土内的钢筋部分打磨除锈,并用棉纱醮丙酮清洗干净。
4、配胶
按结构胶产品使用说明书要求,将胶液倒入干净容器内,以人工或电动工具将其完全调匀,注意翻看容器底部与边角处的颜色,确保配好的胶体色泽一致。
5、植筋
将调好的结构胶装入注胶器内,然后用注胶器将结构胶注入植筋孔洞,孔洞内注胶容量必须大于70%。转动钢筋缓缓植入孔洞内,使其达至设计深度要求。对于水平方向植入钢筋后需将孔洞阻塞。
6、固化
对温度在10℃以上时,固化时间达48h后可受力使用,温度在24℃以上时,固化时间达36h可受力使用,温度低于0℃,应采取红外线加热。固化期间不得对钢筋有任何扰动,固化后用结构胶对植入孔洞口进行封口修补。
7、检测
为了检测植筋是否满足设计要求,应对所植螺栓进行抽样检测,检测结果必须达到设计要求。
2.7、橡胶止水带安装
在橡胶止水带上打孔,孔的间距与安装好的不锈钢锚栓的间距尺寸相符。橡胶止水带的粘贴面进行打磨处理,并用丙酮(或酒精)擦拭干净。在槽沟粘贴面WSJ建筑结构胶,胶层厚度2~3毫米。由槽底向两侧顺序安装止水带,并逐段压实。待胶体充分固化后可拆除施压顶固杆及压板,并进行洁净处理。
1、表面处理。包括粘贴基面处理及橡胶止水带贴合面处理,结合面处理是关键的工序,应认真进行。
⑴、粘贴基面处理:用吹风机吹去JME环氧砂浆修整层表面灰尘,再用棉纱沾丙酮擦净表面。
⑵、对湿度较大的面层,除上述要求外,尚须进行人工干燥处理。
⑶、橡胶止水带贴合面处理:用角磨机打磨,打磨粗糙后用棉纱沾丙酮擦拭干净。
2、划线定位:根据加固施工图,准确地在JME改性环氧砂浆修整层表面划出粘贴部位轮廓线。
3、开孔:根据螺栓位置在橡胶止水带上放样并开孔:
4、配胶:采用WSJ结构胶粘贴,按产品使用说明书要求,将A、B两组份倒入干净容器内,以人工或电动工具将其完全调匀,注意翻看容器底部的颜色,确保配好的胶体色泽一致。
5、粘贴。用抹刀将配好的结构胶涂在橡胶止水带贴合面上,要求橡胶止水带的胶层中间厚边缘薄且胶层厚度宜为2-3mm左右,然后将橡胶止水带件贴于预定的位置。
6、固定与加压。橡胶止水带粘贴好后立即用角钢压杆及预埋螺栓等固定,并适当加压,以使胶液刚从橡胶止水带边缘挤出为度。
7、固化与拆模。对温度在10℃以上时,固化时达到36小时后可以固化,若温度较低低于0℃时应手取人工加温,一般采用红外线灯加热。胶体固化时,在10℃以上一般在24小时强度达到设计值的70%以上,48小时后完全固化。
8、检测:一般采用非破损检验。即外观检查橡胶止水带边缘溢胶色泽、硬化程度。
2.8、止水带压杆制作及安装
止水带压杆采用L40×4不锈钢角钢,加工前先在角钢翼缘一侧钻直径16毫米的孔,孔距为150mm。按槽底圆弧直径加工角钢,将其非孔翼缘侧切开,切割段距为150mm,切割缝宽4mm,并在放样弧线上进行弯曲处理,达到要求后即可安装。止水压杆由多段组成,多个圆弧段和两个直线段。在压杆粘贴面上涂WSJ建筑结构胶,涂层厚度2-3mm,然后安装在锚栓上,装好垫片和螺帽,调整定位后拧紧,直至两面有胶体溢出,并满足设计扭矩要求。
关键词:β-内酰胺类抗性菌株;Ⅰ类整合子;基因盒
中图分类号 X703 文献标识码 A 文章编号 1007-7731(2016)07-15-03
Abstract:In this paper,PCR techniques were used to detect the presence of classⅠintegron and gene β-lactam antibiotics which selected from sewage water samples. Second,the plasmid DNA were extracted from β-lactam resistant strains with classⅠintegron and gene cassette,which detected the position of classⅠintegron and gene cassette. Finally,the response of a strain containing classⅠintegron and gene cassette to antibiotics were investigated.
Key words:β-lactam antibiotics;ClassⅠintegron;Gene cassettes.
1 前言
随着抗生素使用越来越频繁,细菌具有了更强的抗药性,从而使耐药性广泛传播。耐药基因的水平传播主要由质粒、转座子、噬菌体介导,而整合子起着至关作用[1]。Stokes[2]在1989年首次提出了整合子的概念,Hall[3]在1991年正式提出了基因盒-整合子系统的概念。整合子是细菌DN段,与细菌耐药性密切相关[4],是一种存在于细菌质粒或染色体上的遗传元件系统,通过自身编码的整合酶来获取外源基因并使之表达。
整合子由5′-保守末端(CS)、3′-保守末端及位于2段保守序列之间的可变区组成,它能够捕获、整合及表达耐药基因。5′-CS是整合子的基本结构,包括一个编码整合酶的IntⅠ基因、一个整合子重组位点attI和启动子(Pant)[5]。中间可变区域有不同种类和数量的耐药基因盒,表现出多耐药特征。而基因盒是一种结构比较小的、自己无法转录翻译,需要借助外界力量来帮助自己表达,而整合子经常是它的首选目标。基因盒通过整合子上整合酶被整合到整合子中或从整合子里被剪切下来,使耐药基因得以传播与扩散[6]。3'-CS的结构因整合子种类而不同。
到目前为止,Ⅰ类整合子是研究最多也是被检测到最多的。Ⅰ类整合子的5′-CS部分一般相似,而3′-CS存在差异。多数3′-保守端有3个开放的基因读码框:磺胺耐药基因(SulⅠ),季铵盐化合物及溴乙锭的耐受基因(qacE1),以及功能尚不清楚的ORF5[5]。本实验主要通过PCR等方法检测污水厂分离的39株抗性菌株的Ⅰ类整合子以及基因盒的存在情况。通过对含有Ⅰ类整合子-基因盒系统的抗性菌株提取质粒,分析Ⅰ类整合子-基因盒所在的位置。最后,探讨了整合子在介导LFE对抗生素产生多重抗性的作用。
2 实验方法
2.1 样本采集及DNA的提取 实验菌株来自闵行污水厂中分离的39株耐β-内酰胺类乳糖发酵型肠杆菌。用水煮法(99.5℃,10min)裂解提取菌落DNA。同时做好标记保存使用。
2.2 抗性菌株Ⅰ类整合子基因检测 将水煮提取的39个菌落DNA在Ⅰ类整合子基因扩增引物下进行PCR检测,反应总体系为30μL:3μL 10×PCR Buffer,1.8μL MgCl2,3μL dNTPs,正、反向引物各0.6μL,2μL DNA模板,0.2μL的Taq聚合酶,18.8μL超纯水。PCR扩增条件为:94℃预变性5min,94℃变型30s,59℃退火30s,72℃延伸60s,30个循环,最后72℃延伸10min。最后在1%的琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。
2.3 抗性菌株Ⅰ类整合子基因盒检测 用上述使用过的39个菌落DNA在Ⅰ类整合子基因盒扩增引物下进行PCR检测,反应总体系为30μL:3μL 10×PCR Buffer,1.8μL MgCl2,6μL dNTPs,正、反向引物各1.2μL,4μL DNA模板,0.4μL的Taq聚合酶,12.4μL超纯水。PCR扩增条件为:94℃预变性7min,94℃变型40s,59℃退火40s,72℃延伸80s,30个循环,72℃延伸10min,最后在1%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。
2.4 带Ⅰ类整合子抗性菌株整合子位置确定 用质粒抽提试剂盒(桑尼生物科技有限公司)对闵行污水厂中分离的39株耐β-内酰胺类乳糖发酵型肠杆菌抽提质粒。用PCR方法对抽提的质粒做整合子及基因盒检测,步骤同上面2个实验相同。
2.5 β-内酰胺类抗性菌株对多重抗生素的耐药性研究 将分离出的含有39株β-内酰胺抗性菌株分别转接于含有浓度为50μg/mL的氨苄西林钠、16μg/mL的头孢呋辛钠、20μg/mL的四环素的麦康凯琼脂平板中,37℃培养24h。
3 结果与分析
3.1 抗性菌株Ⅰ类整合子-基因盒检测结果 取9、10、11月从闵行污水处理厂分离出的39株具有2种以上抗性基因的Ⅰ类整合子-基因盒检测结果,见表1。从表1可以得出:在分离的39株具有多个抗性基因的菌株中,其中约15.38%含有Ⅰ类整合子但不含有基因盒;15.38%含有基因盒但是在intⅠ上没有检测到;同时15.38%的菌株检测出Ⅰ类整合子及基因盒,另外约有30.77%未含有Ⅰ类整合子和基因盒。其中对于都含有Ⅰ类整合子及基因盒的月份上分析:11月份
3.2 Ⅰ类整合子-基因盒位置的分析 对含有Ⅰ类整合子-基因盒的6株菌进行了对该系统位置的研究,结果表明,这6株菌的质粒DNA也都能检测到该系统,说明这6株的Ⅰ类整合子-基因盒系统均位于质粒上。
3.3 β-内酰胺类抗性菌株多重耐药性的研究 携带Ⅰ类整合子-基因盒系统的抗性菌株在不同抗生素中生长情况,结果见表3。从表3可以看出:SA15、OC4、OD6这3株菌能在氨苄西林钠、头孢呋辛钠、四环素这3种抗生素中生长,说明这3株菌对这3种抗生素都具有抗性,即为多重抗性菌。另外,这也从侧面反映出含有Ⅰ类整合子-基因盒的细菌对抗生素极易表现出多重抗性。
4 结论
在闵行污水处理厂分离出的39株带有多重抗性的菌株中,Ⅰ类整合子的检出率为30.77%,基因盒的检出率为30.77%,同时带有整合子-基因盒系统的检出率为15.38%[7]。对6株含有Ⅰ类整合子-基因盒的β-内酰胺类抗性菌株对其质粒检测,结果发现在这6株菌的质粒上都检测到了Ⅰ类整合子-基因盒的存在。β-内酰胺类抗性菌株中的Ⅰ类整合子-基因盒可能位于质粒上。整合子在介导β-内酰胺类抗性菌株对抗生素产生多重抗药性的过程中起到了重要作用。
参考文献
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