前言:想要写出一篇令人眼前一亮的文章吗?我们特意为您整理了5篇税法的义务性范文,相信会为您的写作带来帮助,发现更多的写作思路和灵感。
记得公司曾经招聘过一批实习生,一起应该有十几个,其中有三个实习生是分给我来带,有一个实习生皮肤黑黑的,做事情非常勤快,一点都不含糊,她爱学习,我也喜欢教,我交给她做什么事情都很省心,她有一点特别好,就是发现问题不仅只是看到了,而且会提供解决办法。
另外两个实习生呢,总是喜欢抱怨,公司的制度这里不好,那里不好,一件事情摆在他们面前,他们总习惯性地看到不好的一面,不好是吧,那我也看到了,有没有解决方案?这时,他们又答不上来了。
你永远无法叫醒一个装睡的人,他们这种心态我和他们说过很多次,但是没有改观,在工作上,他们的表现也不好,喜欢耍小聪明,交代他们一点事老是给我偷工减料。
一个月过去了,那个皮肤黑黑的女孩,做事情已经溜得不行,她上手特别快,反正有时候没事我就会偷懒,跑到休息室偷偷睡觉或者看美剧,她可以独当一面,挡不了会再来叫我,我暗爽了1个月。
记得她当初实习转正被调走的时候,我还伤心了好久,再也不能窝在休息室看美剧睡懒觉了。
而另外两名实习生呢?被开除了,准确地说是和另外11名实习生一起被开除的。
那是公司历史上第一次一次性开除那么多人,起因是他们13名实习生一起在外面餐厅吃饭,吃完饭兴致还不错,就开始瞎逼逼,一会儿说公司报销制度不行,一会儿说公司请假的制度不行,那叫一个群情激奋,口水四溅,唾沫横飞。
然而无巧不成书,隔壁桌竟然就是老董事长,他不常来公司他们自然没见过,老董事长全程一脸黑线地吃完饭,回公司就麻溜地把他们全开除了。
【关键词】 无形资产; 摊销; 计提减值准备; 所得税调整; 会计处理
无形资产的后续计量指的是使用寿命有限的无形资产摊销及无形资产计提减值准备两个方面的内容。在这两个方面,企业会计准则与税法的规定存在着一定的差异,这些差异均属于暂时性差异,因而需要进行所得税的纳税调整。本文通过列举实例进行解释,以期能帮助广大财会工作者顺利地进行该方面所得税调整的会计处理。
一、无形资产摊销方面会计与税法的差异
(一)会计准则的规定
1.对于使用寿命有限的无形资产,应当在其使用寿命内将其价值系统合理地摊销。如果无法可靠确定与该项无形资产有关的经济利益预期实现方式的,应当采用直线法摊销,即无形资产应当自可供使用时起开始摊销,至不再作为无形资产确认时止。使用寿命不确定的无形资产,其价值不应摊销。可见,会计准则规定无形资产的摊销方法一般是采用直线法,如果有其他系统合理的摊销方法也可采用其他方法,如生产总量法进行摊销;无形资产的摊销年限应是其经济使用寿命。
2.使用寿命有限的无形资产,其残值应当视为零,但如果有第三方承诺在无形资产使用寿命结束时购买该无形资产,或可以根据活跃市场得到预计残值信息,并且该市场在无形资产使用寿命结束时很可能存在,则应保留残值。
(二)税法规定
1.无形资产不论其使用寿命确定与否,规定只允许采用直线法进行摊销,且摊销方法一经确定,不得随意改变。使用寿命有限的无形资产摊销年限是其法定使用寿命。作为投资或受让的无形资产,在协议、合同或有关法律中规定使用年限的,可以按照协议、合同或者有关法律规定使用年限分期摊销;如果协议、合同或有关法律没有规定使用年限的,摊销年限不得少于10年。使用寿命不确定的无形资产,摊销年限也不得少于10年。
2.无形资产摊销时不要求保留残值。
(三)差异分析及所得税调整
从上述会计准则与税法的规定可以看出,无形资产的后续计量在不存在减值迹象的情况下,由于会计与税法在摊销方法、摊销年限、预计残值等方面存在着不同,从而导致会计上每期计提的摊销额与按税法规定每期计提的摊销额会产生暂时性差异。这种暂时性差异可分为以下两种情况:
1.使用寿命有限的无形资产产生的暂时性差异
上述公式中,会计的初始计量成本与税法的初始计量基础,对于外购的无形资产来说,通常情况下两者是一致的,但对于外购无形资产的价款超过正常信用条件(3年以上)延期付款的,则两者是不同的。
若(1)>(2),会计处理上以(2)为准,则(1)与(2)之间的差异属于无形资产本期产生的可抵扣暂时性差异,应调增本期的应纳税所得额。因而,在不考虑其他纳税调整因素的情况下,企业本期的应纳税所得额=本期的税前会计利润+本期产生的可抵扣暂时性差异,再按本期的应纳税所得额与适用的所得税率计算的结果确认为本期的应交所得税;同时将本期产生的可抵扣暂时性差异对所得税影响的金额(递延所得税资产)作为对本期所得税费用的调整(本期所得税费用=本期应交所得税-递延所得税资产本期增加额)。
若(1)<(2),会计处理上以(2)为准,则(1)与(2)之间的差异属于无形资产本期产生的应纳税暂时性差异,应调减本期的应纳税所得额。因而,在不考虑其他纳税调整因素的情况下,企业本期的应纳税所得额=本期的税前会计利润-本期产生的应纳税暂时性差异,再按本期的应纳税所得额与适用的所得税率计算的结果确认为本期的应交所得税;同时将本期产生的应纳税暂时性差异对所得税影响的金额(递延所得税负债)作为对本期所得税费用的调整(本期所得税费用=本期应交所得税+递延所得税负债本期增加额)。
2.使用寿命不确定的无形资产产生的暂时性差异
(1)会计本期摊销额=0
显然,若(1)<(2),会计处理上以(2)为准,则(1)与(2)之间的差异属于无形资产本期产生的应纳税暂时性差异,应调减本期的应纳税所得额。其他阐述见(1)中的同类情况。
(四)会计处理举例
[例1]甲股份有限公司2010年1月1日接受A企业作为投资投入的一项非专利技术,双方协议约定的价值为40万元(公允价值也为40万元),甲公司综合考虑各方面的情况,确定该项非专利技术能为公司带来未来经济利益的期限为8年,有关法律没有规定其使用年限。另外,甲股份有限公司根据市场发展的需要,于当年1月6日购入一项专利权,其入账价值为100万元,甲公司无法预计该项专利权为企业带来未来经济利益的年限。该项非专利技术和专利权预计的净残值为零。假设甲公司对非专利技术和专利权按年进行摊销,年末均未发生减值。甲公司当年实现利润总额为129万元,适用的所得税率为25%,且预计未来年度不会改变,不存在其他纳税调整因素,以前年度无递延所得税资产和递延所得税负债的余额。
综合(1)与(2)可得:甲公司无形资产会计本年摊销额=50 000+0=50 000(元),无形资产税法本年摊销额=40 000
+100 000=140 000(元)。显然,甲公司无形资产会计本年摊销额50 000元<税法本年摊销额140 000元,因此,两者之间形成的差异90 000元属于无形资产本年产生的应纳税暂时性差异,应调减甲公司本年的应纳税所得额90 000元。
因甲公司当年不存在其他纳税调整因素,以前年度无递延所得税资产和递延所得税负债的余额。故:
甲公司本年的应纳税所得额=1 290 000-90 000
=1 200 000(元),
甲公司本年的应交所得税=1 200 000×25%
=300 000(元),
甲公司本年产生的应纳税暂时性差异形成的“递延所得税负债”的本年增加额=90 000×25%=22 500(元),
甲公司本年确认的所得税费用=300 000+22 500
=322 500(元)。
编制的会计分录为:
借:所得税费用322 500.00
贷:递延所得税负债 22 500.00
应交税费――应交所得税300 000.00
二、无形资产计提减值准备方面会计与税法的差异
(一)会计准则规定
会计期末,如果无形资产的可收回金额低于其账面价值,则应将其低于的金额确认为资产减值损失,计提相应的无形资产减值准备。无形资产计提减值准备后,其摊销费用应当在未来会计期间作相应调整,即无形资产应摊销的金额除扣除预计残值外,还应扣除已计提的减值准备累计金额,以使无形资产在剩余使用寿命内,系统地分摊调整后的账面价值。
(二)税法规定
会计上本期计提的无形资产减值准备,不允许在税前扣除,无形资产的计税基础也不得剔除减值准备,无形资产仍按初始计税基础采用直线法进行摊销。
(三)差异分析及所得税调整
从上述会计准则与税法的规定可以看出,无形资产的后续计量在发生减值的情况下,会计上本期既要对使用寿命有限的无形资产进行摊销,又要对无形资产确认减值损失,计提相应的减值准备,而税法只对无形资产进行摊销,因而导致会计上本期的摊销额、本期计提的减值准备与税法本期的摊销额之间会产生暂时性差异。这种暂时性差异也可分为以下两种情况。
1.使用寿命有限的无形资产产生的暂时性差异
会计本期摊销额、税法本期摊销额的计算同“一”中的“(三)1.”
(1)若:(会计本期摊销额+会计本期计提的减值准备)>税法本期摊销额,则这两者之间的差异属于无形资产本期产生的可抵扣暂时性差异,应调增本期的应纳税所得额。其他阐述见“一”中的“(三)1.”同类情况。
(2)若:(会计本期摊销额+会计本期计提的减值准备)<税法本期摊销额,则这两者之间的差异属于无形资产本期产生的应纳税暂时性差异,应调减本期的应纳税所得额。其它阐述见“一”中的“(三)1.”同类情况。
2.使用寿命不确定的无形资产产生的暂时性差异
会计上本期不存在摊销额,只存在计提的无形资产减值准备;税法上本期仍按原初始计税基础进行摊销。
(1)若:会计本期计提的减值准备>税法本期摊销额,则这两者之间的差异属于无形资产本期产生的可抵扣暂时性差异,应调增本期的应纳税所得额。其他阐述见“一”中的“(三)1.”同类情况。
(2)若:会计本期计提的减值准备<税法本期摊销额,则这两者之间的差异属于无形资产本期产生的应纳税暂时性差异,应调减本期的应纳税所得额。其他阐述见“一”中的“(三)1.”同类情况。
(四)会计处理举例
[例2]承例1的资料,所不同的是甲股份有限公司2010年末对接受投入的非专利技术和外购的专利权进行减值测试时,发现专利权已发生减值,计提了无形资产减值准备12万元。
本例的有关分析见[例1]。
1.甲公司该项非专利技术会计本年摊销额=50 000(元),税法本年摊销额=40 000(元)。
2.会计上对使用寿命不确定的无形资产(专利权)不进行摊销,但甲公司会计上对该项专利权本年计提了减值准备=120 000(元);税法对会计本年计提的无形资产减值准备,不允许在税前扣除,但税法本年仍摊销的金额=100 000(元)。
综合(1)与(2)可得:甲公司无形资产会计本年摊销额+会计本年计提的减值准备=50 000+120 000=170 000(元),无形资产税法本年摊销额=40 000+100 000=140 000(元)。显然,前者>后者,因此,这两者之间的差异30 000元属于无形资产本年产生的可抵扣暂时性差异,应调增本年的应纳税所得额30 000元。
因甲公司当年不存在其他纳税调整因素,以前年度无递延所得税资产和递延所得税负债的余额,故:
甲公司本年的应纳税所得额=1 290 000+30 000
=1 320 000(元);
甲公司本年的应交所得税=1 320 000×25%
=330 000(元);
甲公司本年产生的可抵扣暂时性差异形成的“递延所得税资产”的本年增加额=30 000×25%=7 500(元);
甲公司本年确认的所得税费用=330 000-7 500
=322 500(元)。
编制的会计分录为:
借:所得税费用 322 500.00
递延所得税资产 7 500.00
贷:应交税费――应交所得税 330 000.00
【主要参考文献】
[关键词] 羊水异常;超声检查;胎儿畸形
[中图分类号] R715 [文献标识码]B [文章编号]1673-7210(2008)01(a)-083-02
Analysis of relationship between amniotic fluid volume and fetal malformation adjunct
LI Zai-hong,HAN Li
(Function test Dept,the Twelfth People′s Hospital of Guangzhou ,Guangzhou510620,China)
[Abstract] Objective: To analyze the relationship between amniotic fluid volume and fetal malformation adjunct.Methods:14 308 fetus above 24 weeks were analyzed from 2002 to 2005,there were 211 cases with abnormal amniotic fluid volume. Amniotic fluid volume and locations of malformation and placenta and fetal membrane and navel were studied. Results:There were 125 cases with hyperamnios and 86 with hypoamnios among 211 cases.Their rates with fetal malformation were 40% (51/125)and 23%(20/86) respectively.Conclusion:In the diagnosis of Color Doppler ultrasound,the high accuracy and no any hurting advantage are higher than other imaging method. Abnornal AMV is related to the fetal malformation and adjunct.
[Key words] Abnormal amniotic fluid volume;Color Doppler ultrasound;Fetal malformation
适量羊水具有维持胎儿体液平衡、保护胎儿、促进胎儿发育等重要作用。羊水量多少与胎儿有否畸形密切相关,尤其神经系统、消化系统及泌尿系统的畸形可以直接从羊水量反映出来。现将本院2002~2005年检查的羊水异常211例分析情况报道如下:
1 资料与方法
1.1研究对象
本组211例羊水异常均来自我院2002年1月~2005年12月门诊与住院妊娠24~41周初或经产妇。
1.2仪器与方法
应用美国ATL-3000型彩色超声诊断仪,探头频率3.5 MHz。孕妇取仰卧位,多切面,多方位扫查,常规测量羊水最大深度,28周以后测量羊水指数,发现胎儿及附属物发育异常,记录及摄片。诊断标准参照《胎儿畸形产前超声诊断学》[1]。
2 结果
羊水量异常211例孕妇中,125例羊水过多,其中51例合并胎儿畸形。51例胎儿畸形包括脑积水、脑膜脑膨出、脊柱裂、全前脑并心脏多发畸形、小脑发育不良等神经缺陷10例;消化道畸形10例(食管闭锁3例、十二指肠闭锁5例、下消化道梗阻2例);先天性心脏病7例(大多数为室缺及心内膜垫缺损);腹裂1例;脐疝1例;软骨发育不良1例;唇、腭裂5例、不明原因胎儿水肿并胸腹积液6例;胎儿淋巴水囊瘤3例;胎盘绒毛膜血管瘤2例;脐带假性囊肿1例;双胎输血综合征3例;联体双胎1例;良性羊水过多74例。而羊水过少86例,其中20例合并畸形。20例合并畸形包括泌尿系统7例(多囊肾4例、双肾发育不良2例、双肾多发肾囊肿1例)。胎儿水肿综合征(巴氏水肿胎13例);宫内发育迟缓8例;胎盘早剥4例;胎膜早破1例、过期妊娠20例。
本组羊水过多者胎儿畸形的发生率为41%,羊水量过少者发生率23%。总计羊水量异常时畸形发生率32%。比魏茂华等[2]学者研究的发生率低。
3 讨论
羊水量的多少是母体、羊水、胎儿三者之间双向交换取得动态平衡的结果, 一旦平衡失调, 即可导致羊水过多或羊水过少。羊水量异常首先应想到胎儿有否畸形,尤其是泌尿系统畸形。羊水量正常不能说明泌尿系统没有畸形。羊水过多,首先应排除消化系统畸形及影响胎儿吞咽的疾病(唇腭裂)及神经系统畸形(脊柱裂等)及肌肉系统畸形等[1]。
孕龄16周以后的胎儿,随妊娠进展胎儿通过吞咽大量羊水、排尿行为、胸廓运动及呼吸道来参与调节羊水量;胎儿的皮肤也有明显的吸水作用;脐带的华通胶积极参与水的代谢。任何一个部位发生障碍,都可能造成羊水过多。明显的羊水过多常伴有胎儿畸形,尤其多见于中枢神经系统畸形,中枢神经系统畸形(图1)可能是由于脑脊膜,脉络组织增殖,渗出液增加或者来自丧失了保护的脑脊中心的刺激,无吞咽反射或损害了血管加压素的分泌而致抗利尿激素的缺乏引起的不能吞咽羊水和尿量多,造成羊水积聚[3];消化系统畸形,例如十二指肠下段狭窄或闭锁(图2),由于吞咽羊水的量不足而形成羊水过多;脐带假性囊肿(图3)被认为可能与局部华通胶退行性变有关,羊水吸收减少而致羊水过多。大的胎盘绒毛膜血管瘤(直径>5 cm)可并发羊水过多、早产、胎盘早剥、前置胎盘等[4]。产后证实胎儿并无合并其他系统畸形,笔者认为羊水过多与大的胎盘绒毛膜血管瘤导致胎盘血流量增加有关。双胎输血综合征及先天性心脏病合并羊水过多大多数由于血流动力学改变最后导致心衰引起。
孕龄20周后,羊水的生成主要或完全来自胎儿尿液,胎儿双侧泌尿系统畸形,胎儿泌尿量骤减,羊水来源减少,笔者发现一侧肾缺如或发育不良,胎儿羊水量并无明显减少,健侧肾体积代偿增大。双侧肾脏发育异常,羊水量测值均明显减少,羊水过少发生的原因不明,一般认为与泌尿道畸形、胎儿宫内发育迟缓、过期妊娠、胎膜发育不全或功能减退以及胎盘功能不全有关[5]。本组羊水过少病例中,宫内发育迟缓8例,过期妊娠20例,胎盘早剥4例。可能由于胎儿宫内低氧,胎儿自身“脑保护效应”,导致肾血流量减少,泌尿量减少,表现为羊水相应减少。过期妊娠时,胎盘功能减退,灌注量不足,胎儿脱水,导致羊水减少。也有学者认为过期妊娠时,胎儿成熟过度,其肾小管对抗利尿激素的敏感性增高,尿量减少导致羊水过少[6]。
HbBart's水肿儿(即珠蛋白生成障碍性贫血引起)超声表现为胎盘增厚,心胸比例增大,胸腹积液,心包积液,皮肤水肿。胎儿水肿综合征常伴有羊水量异常。Poeschmann等[7]报道,非免疫性水肿儿73%羊水过多、12%羊水过少[8],本组13例HbBart's水肿儿,全部羊水过少,水肿的发生可能是由于胎儿严重贫血导致体内外液体交换、血管内外液体交换平衡失调所致。羊水中的水分通过胎儿皮肤、羊膜向胎儿组织间隙及体腔中积聚 ,胎儿水肿,导致羊水过少。
羊水过少胎儿肢体明显聚拢,脏器显示困难,容易漏诊,检查中应格外仔细。曾经因为羊水过少、后壁胎盘、孕周过大漏诊1例胎儿附属物发育异常――帆状胎盘并血管前置合并羊水过少。
胎儿畸形合并羊水异常较常见,因此,检查者应仔细观察胎儿各部位、各器官,加以认真分析与判断。彩色多普勒影像能准确判断脐带血管与羊水,测量羊水量较精确,能动态观察羊水量的变化,及时发现胎儿畸形。
[参考文献]
[1]李胜利.胎儿畸形产前超声诊断学[M].北京:人民军医出版社,2004, 85,555-557.
[2]魏茂华,王立坤.羊水量与胎儿畸形的相关性研究[J].医学影像学杂志,2004,2:123-124.
[3]朗景和(主译).威廉姆斯产科学[M].第20版.西安:世界卫生出版公司西安公司,2001.693.
[4]Asadourian LA,Taylor HB. Clinical significance of p lacental hemangiomas[J].Obstet Gynecol,1968,31:5515.
[5]Cash JB,Powell DE. Placental chorioangioma: Presentation of a case with electron-microscopic and immunochemical studies[J].Am J Surg Pathol,1980,4:87.
[6]乐杰.妇产科学[M].第5版.北京:人民卫生出版社,2000.146-147.
[7]Poeschmann RP,Verheijen RHM,Van Dongen PWJ.Differential diagnosis and cause of nonimunological hydrops fetalis: A Review[J]. Obstetrical and Gynecological Survey,1991,4(4):223-231.
[关键词] 蒙花苷;效应面分析法;金合欢素;醛糖还原酶抑制剂
[收稿日期] 2013-12-09
[通信作者] 张铁军,Tel:(022)23006848,E-mail:
[作者简介] 王娇,硕士研究生,Tel:(022)23006843,E-mail:
糖尿病慢性并发症是严重影响患者生命质量的全身性病变,糖尿病视网膜病变是发病率较高的一种糖尿病慢性并发症。醛糖还原酶抑制剂是通过抑制醛糖还原酶的活性,间接抑制多元醇通路的一类延缓和阻断糖尿病并发症的药物[1-2]。近年来从植物提取出的具有抑制醛糖还原酶活性的化合物主要有黄酮类化合物。
蒙花苷为菊科植物野Chrysanthemum indicum L.的主要天然黄酮类成分[3]。近年来国内外研究表明,蒙花苷对大鼠晶状体的醛糖还原酶(AR)有抑制活性[4]。本实验室前期研究表明,蒙花苷属于低溶解度,透过性较差的药物[5]。药物比表面积和脂溶性对药物体内吸收有重要的促进作用,因此通过去糖基化增加蒙花苷的比表面积和脂溶性,对蒙花苷进行结构修饰。效应面法具有试验次数少,精确度高,应用方便的特点,该设计方法可以很好地应用于药学领域[6]。本研究以蒙花苷水解率为指标,运用效应面法进行蒙花苷水解工艺优化。选用经典的非细胞模型[7-9],评价醛糖还原酶在水解物金合欢素干预下的变化。
1 材料
Lab Alliance高效液相色谱仪(SeriesⅡ一元泵系统,Lab Alliance色谱工作站);AB204-N电子天平(瑞士METTLER TOLEDO公司);HS-3120超声波清洗器(奥特赛恩斯机器有限公司);DF-101S集热式恒温加热磁力搅拌器(巩义市英峪高科仪器厂)。
蒙花苷对照品(实验室自制,经HPLC归一法检测纯度>97%),金合欢素(中国食品药品检定研究院);甲醇(色谱醇,天津市康科德科技有限公司);冰醋酸(色谱醇,天津市康科德科技有限公司);其他试剂均为分析醇。
Wister大鼠,雄性,天津市山川红实验动物技术有限公司,动物合格证号SCXK(津)2009-0001。
2 方法与结果
2.1 含量测定
2.1.1 色谱条件 流动相乙腈-水-冰醋酸(40∶59∶1);体积流量1 mL・min-1;检测波长326 nm;进样量10 μL;柱温30 ℃。
2.1.2 标准曲线的绘制 分别精密称取蒙花苷和金合欢素对照品5.35,11.00 mg,置于100 mL量瓶中,加甲醇溶解至刻度,作为蒙花苷对照品储备液和金合欢素对照品储备液。采用逐级稀释法用甲醇配置成不同浓度的蒙花苷对照品溶液和金合欢素对照品溶液,摇匀,按照2.1.1项下色谱条件进行测定,记录蒙花苷色谱峰面积及金合欢素色谱峰面积。以蒙花苷对照品溶液质量浓度为横坐标(XL),峰面积积分值为纵坐标(YL)进行线性回归,得回归方程为YL=7XL-373.742,R2=0.999 2,线性范围0.1~52.9 mg・L-1;以金合欢素对照品溶液质量浓度为横坐标(XA),峰面积积分值为纵坐标(YA)进行线性回归,得回归方程为YA=7XA-4 828.128,R2=0.999 0,线性范围2.2~110.0 mg・L-1。
2.1.3 水解率的计算 蒙花苷水解率=金合欢素峰面积/(金合欢素峰面积+蒙花苷峰面积)×100%。
2.2 单因素试验设计
2.2.1 水解时间 称取6份蒙花苷,按固液比1∶1,加入相应0.45 mol・L-1硫酸甲醇,搅拌加热,水解温度95 ℃,水解时间分别设为4,5,6,7,8,9 h,放冷,取上清液测定蒙花苷水解率,结果见图1,可知最适水解时间为7 h。
2.2.2 酸浓度 称取6份蒙花苷,按固液比1∶1,分别加入0.15,0.3,0.45,0.6,0.75 mol・L-1硫酸甲醇,搅拌加热,水解温度95 ℃,水解时间7 h,放冷,取上清液测蒙花苷水解率,结果见图2,可知最适酸浓度0.45 mol・L-1。
2.2.3 固液比 称取6份蒙花苷,分别按固液比1∶1,2∶1,3∶1,4∶1,5∶1,加入相应0.45 mol・L-1硫酸甲醇,搅拌加热,水解温度95 ℃,水解时间7 h,放冷,取上清液测蒙花苷水解率,结果见图3,可知最适物料比3∶1。
2.3 效应面试验设计
2.3.1 试验设计 根据Box-Benhnken中心组合实验设计原理[8],结合单因素实验结果,选择对蒙花苷水解反应影响较大的酸浓度(X1)、固液比(X2)、水解时间(X3)3个因素作为考察因素,以水解率为响应值,采用3因素3水平的响应面实验设计,见表1。
2.3.2 效应面试验结果及数据分析 多元二次模型方程的建立与检验:各试验点根据设计进行15次试验,以水解率Y为响应值,试验点设计及试验结果见表2。
采用Design-Expert 7.1.6软件对表2中实验数据进行多元回归拟合,得到蒙花苷水解的回归方程:Y=0.91+0.15X1+0.013X2+0.23X3-0.037X1X2-0.16X1X3+0.027X2X3-0.098X12-0.056X22-0.16X32。
对该模型进行方差分析,结果见表3。结果显示所选用的二次回归模型具有高度的显著性(P
效应面分析及优化:利用Design-Expert7.1.6软件对回归分析结果作相应的曲面图,见图4。根据Box-Behnken实验所得结果及二次多项回归方程,利用Design Expert软件中的数据优化(numerical optimization)程序求得各因素最佳范围分别为水解时间6.8~7.6 h,硫酸甲醇0.48~0.56 mol・L-1,固液比2.8∶1~3.1∶1。
2.4 验证性试验
依据二次多项回归方程,选取的最佳水解条件为水解时间7.4 h、硫酸甲醇0.54 mol・L-1、固液比3∶1,预测最优水解率79.64%。为了验证优化结果的可靠性,在最佳水解条件下进行了3组试验,测得蒙花苷平均水解率为78.97%,RSD 0.90%,与预测值(79.64%)的偏差为0.8%,说明本实验建立的数学模型工艺稳定,重复性好,可见该模型能较好地预测实际水解情况。
2.5 水解物金合欢素对醛糖还原酶抑制活性研究
2.5.1 醛糖还原酶的提取 Wistar大鼠颈椎脱臼处死,立即摘除眼球,分离晶状体(冰上进行)放入20 mL 10 mmol・L-1β-巯基乙醇[含有135 mmmol・L-1磷酸缓冲液(pH 7.0)]中,匀浆,4 ℃离心30 min,取上清液,-20 ℃保存。
2.5.2 反应体系的建立 设立阳性对照组和阴性对照组,每组4个复孔。反应体系中加入180 mmmol・L-1磷酸缓冲液(pH 7.0)225 μL,1.0 mmol・L-1硫酸锂溶液50 μL,10 mmmol・L-1 DL-甘油醛溶液50 μL,阳性对照溶液(提取的酶溶液100 μL),阴性对照组加去离子水100 μL混合,30 ℃预热3 min,加入0.3 mmol・L-1 NADPH溶液50 μL,30 ℃反应30 min,加入0.5 mmol・L-1盐酸150 μL终止反应,各测试管分别加入10 mmmol・L-1咪唑(含6 mmol・L-1氢氧化钠溶液)10 μL,60 ℃反应20 min,室温放冷后于激发波长360 nm ,吸收波长460 nm检测荧光吸收度,见图5,阴性对照为NADPH在此反应体系中自身氧化变化趋势,阳性对照组中NADPH的荧光强度显著降低,说明AR的活性较强。
2.5.3 标准曲线的绘制 180 mmmol・L-1磷酸缓冲液(pH 7.0)2 450 μL,1.0 mmol・L-1硫酸锂溶液700 μL,10 mmmol・L-1 DL-甘油醛溶液700 μL,二甲基亚砜(DMSO)350 μL,提取的酶溶液1 400 μL和0.5 mmol・L-1的盐酸2 100 μL混合后取出600 μL,分别加入NADP溶液0,1,2,4,8,16 μmmol・L-1,各测试管分别加入10 mmmol・L-1咪唑(含6 mmol・L-1氢氧化钠溶液),60 ℃反应20 min,室温放冷后于激发波长360 nm,吸收波长460 nm检测荧光吸收度。以NADP溶液浓度为横坐标,荧光强度为纵坐标,绘制标准曲线,计算得回归方程A=13.195C+57.062(r=0.998 9),线性范围为0~18 μmmol・L-1。
2.5.4 样品溶液的配置 180 mmmol・L-1磷酸缓冲液(pH 7.0)采用倍比稀释法分别将蒙花苷和金合欢素的DMSO溶液稀释成一定浓度,溶液在终浓度时所含DMSO体积相等且小于2.5%。
2.5.5 筛选方法 按表5设置反应组,每个反应组中均加入提取的酶溶液50 μL,1.0 mmol・L-1硫酸锂溶液100 μL,180 mmol・L-1磷酸缓冲液(pH 7.0)225 μL。
2.5.6 实验结果 按照下式计算有效组分各浓度的抑制率。据各浓度的抑制率应用Origin Pro4.0软件计算出IC50。抑制率=(A-B)/(A-C)×100%,式中,A为阴性对照组吸收度,B为样品组吸收度,C为空白组吸收度。由此计算的蒙花苷醛糖还原酶抑制活性的IC50的平均值为3.53 mg・L-1,金合欢素醛糖还原酶抑制活性的IC50的平均值为2.74 mg・L-1。
3 讨论
中医药治疗糖尿病并发症所使用的天然药物毒副作用小,价廉易得,适合作为终身病的糖尿病患者服用。已有报道称蒙花苷有较好的醛糖还原酶作用,但蒙花苷的溶解度小,生物利用度低,所以,改变蒙花苷的构型是增加其生物利用率的一个重要途径。本研究从大鼠晶状体中提取醛糖还原酶,建立了体外测定醛糖还原酶活性的反应体系,并观察了蒙花苷和其水解物金合欢素对大鼠晶状体醛糖还原酶活性的影响结果蒙花苷醛糖还原酶抑制活性的IC50的平均值为3.53 mg・L-1,证明蒙花苷具有较强的醛糖还原酶抑制作用,并且,经本实验优化的蒙花苷水解工艺后,生成的水解物金合欢素(金合欢素醛糖还原酶抑制活性的IC50的平均值为2.74 mg・L-1)具有相似甚至为更好的醛糖还原酶抑制活性。通过水解蒙花苷脱糖基的工艺研究,使其从黄酮苷转换成具有相似活性成分苷元,提高亲脂、亲油性,增加其生理活性,方便人体更好的吸收利用。
传统的数理统计常通过正交设计或均匀设计寻求最佳的因素水平组合。但其中存在一些问题,如试验的精度不够,选择的试验取值仅仅是接近最佳取值,无法精确找到最佳点,条件优选凭经验,不能灵敏地考察各因素间的交互作用等等。而响应面分析法是通过中心组合试验研究几种因素间相互作用的一种回归分析方法,可从图形方面分析寻求最优的考察因素和响应值[10-12]。本实验对蒙花苷水解工艺条件进行了单因素和效应面优化实验。结果显示,水解时间和硫酸浓度对水解率的影响极其显著,影响作用按主次顺序排列为水解时间>硫酸浓度>固液比。确定最佳水解条件为时间7.4 h、硫酸甲醇0.54 mol・L-1、固液比3∶1,在此条件下,蒙花苷78.97%以上转化为金合欢素。
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Optimization of hydrolysis process of linarin using response surface
methodology and research about ARI activity of glycosylation-acacetin
WANG Jiao, XU Jun, ZHANG Tie-jun
(1.Tianjin Medical University, Tianjin 300070, China;
2. Tianjin Institute of Pharmaceutical Research, Tianjin Engineering Laboratory of Quality Control Technology of
Traditional Chinese Medicine, National Local United Engineering Laboratory of Modern Preparation and
Quality Control Technology of Traditional Chinese Medicine (Tianjin), State Key Laboratory of Drug Delivery
Technology and Pharmacokinetics, Tianjin 300193, China)
[Abstract] Objective: To optimize the hydrolysis process of linarin by response surface methodology, and to use the model of aldose reductase to study the acacetin′s activity of aldose reductase inhibitory. Method: The model of acacetin enzyme in vitro was established by the determination of fluorescence absorption of NADPH, the inhibition rate of acacetin aldose reductase was calculated, and then the IC50 of hydrolysis was obtained. The hydrolysis process of linarin hydrolysis condition was optimized by using response surface method. Result: The results indicated that the IC50of acacetin (2.74 mg・L-1) was less than the IC50of linarin (3.53 mg・L-1). Hydrolyzation time of 7.4 h, sulphuric acid concentration of 0.54 mol・L-1 and the ratio of material to liquid of 3∶1 were the optimum conditions. Conclusion: Hydrolyzate acacetin has preferable inhibitory activity of aldose reductase. The optimized hydrolysis condition of linarin is convenient to use with good predictability.
关健词:科学发展观;医院;基层一线;机关;服务
医院是救治病人的场所,基层一线的广大医务工作者,每天面对的是大量表情、心情、病情不一的病人,工作繁重、精神心理压力大,为缓解基层一线广大医务工作者的压力,为他们解决一些后顾之忧,使他们腾出更多的精力服务好病人。机关科室必须践行科学发展观,落实以人为本理念,坚持以基层一线广大医务工作者为服务重点,为促进医院又好又快发展创造良好的环境氛围。现将医院机关职能科室服务基层一线存在的主要问题、主要原因,解决这些问题的主要措施简述如下:
一、当前机关科室中存在的主要问题
1.服务基层一线医务工作者不主动。少数机关科室服务意识淡薄,工作期间坐办公室的多,基本不下到基层一线,除了处理自己所要办的事外,很少听取基层一线医务工作者的所思所想;还有少数机关科室即使下到基层一线,对基层一线医务工作者反映的问题,也要进行过滤,只对属于自己职责范围内的问题给予答复,对不属于自己职责范围内的问题,过后就如石沉大海、杳无音信等等。这些都是工作不主动的种种表现形式。
2.服务基层一线医务工作者不及时。少数机关科室对基层一线提出需要解决的问题,明明是自己责任范围能够立刻解决,却非要搞形式,走程序,左请示右汇报后再办;还有的机关科室对基层一线提出需要帮助解决的问题,先来个经验主义,自我“评估”,自作主张地认为办与不办,对基层一线的影响不是太大,因而有意无意拖着不办,等把基层逼急了,告了状才去帮助解决等等,这些都是工作不及时的各种表现形式。
3.服务基层一线医务工作者不到位。少数机关科室服务基层一线除了不主动、不及时,还存在不到位现象。有时虽提供服务,但不全面、不彻底,明明能一次性把问题解决到位而没有一次性把问题解决到位;有时提供服务的产品使用不久,就又出现问题,不仅基层一线医务工作者不满意,而且还会一定程序上影响基层一线医务工作者服务病人的质量。
二、存在这些问题的主要原因
1.“官本位”思想作祟。存在上述问题的少数相关科室人员,或多或少地存有“官本位”的思想。认为自己手里掌握着一定的行政权力资源,你基层一线医务工作者有些需要办的事,不经过我点头同意审核批准,就别想办成。存在这种想法的机关科室,就会使本来应该主动服务基层一线的事情变成了基层一线求我为其办事,我才为其办理。这是典型的“官本位”思想在作祟,机关工作的优越感自我膨胀,自我放大,以为自己有了一官半职就可以做官当老爷了,忘记了自己手中权力是谁给的,应为谁服务,殊不知,水能载舟,也能覆舟。不然你这张所谓的“官椅”是坐不稳的。
2.“病人中心”理念淡薄。医院是救治病人的场所,基层一线的广大医务工作者,每天面对前来就诊的病人,都要一视同仁,精心施治,热情服务,目的是让病人安心、放心、舒心,使病人早日康复,展示镇江四院广大医务工作者的良好面貌,这是以“病人为中心”理念的具体表现。而我们少数机关科室不能体谅基层一线工作的艰辛,慢腾拖拉的工作作风,阴晴不定的面部表情,以我为中心的傲慢态度,将会影响基层一线医务工作者对病人施治的心情和专注度,是“病人中心”理念的淡薄,甚至是无视。
3.市场竞争意识缺乏。少数机关科室不能很好的服务基层一线,存在不主动、不及时、不到位的现象。主要是计划经济的意识还在脑海里存在。市场经济意识不强或缺乏,对竞争缺乏足够的认识。不知当今医院的生存和发展,主要是在市场经济规则下,以竞争取胜,靠服务、技术、环境等各方面的竞争优势来吸引病人、留住病人,占领医疗市场。竞争可谓无所不在,无时不有,在竞争中占优势,医院就能生存和发展;反之,医院就可能出现生存困难。因此,从某种意义上讲病人就是我们的“衣食父母”。
三、如何减少或避免这些问题发生
1.转变观念,摆正位置。要解决机关科室服务基层一线的作风问题,首先要加强教育,强调机关服务基层一线是本职,基层一线服务病人是天职,两者服务的目标是一致的,最终使病人少花钱治好病又得到优质的服务。通过教育要使机关科室转变观念,积极主动服务基层一线。要使机关科室摆正位置,树立机关科室就是基层一线的“勤务员”的思想和观念。
2.提升服务水平能力。机关科室有了服务基层一线的意识,还必须有服务基层一线的能力水平,有服务的意识,而没有服务的能力水平,这种服务是无效的服务,只能给基层一线添乱。因此,要使服务有效高效,就必须注重平时自身各项业务能力的锻炼,提高自身技能,掌握各项本领,做到业务知识烂熟于心,业务技能掌握手中。只要基层一线有需要,随时都能提供优质高效的服务,为医院发展争做贡献。