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[关键词] 乙型肝炎病毒;大蛋白;临床价值
[中图分类号] R446.62 [文献标识码] B [文章编号] 1673-7210(2011)12(a)-099-02
Clinical significance of detecting HBV-LP on patients with chronicity type B hepatitis
ZHAO Xia
Department of Clinical Laboratory, Red Cross Hospital in Nanjing City, Jiangsu Province, Nanjing 210001, China
[Abstract] Objective: To investigate the clinical significance of detecting HBV-large protein (HBV-LP) on patients with chronicity type B hepatitis. Methods: 120 cases of patients with chronicity type B hepatitis were selected, HBV-DNA were detected by immunofluorescence, HBV-LP and HBV e antigen (HBeAg) were detected by enzyme linked immunosorbent assay, the detection rate of HBV-DNA, HBV-LP and HBeAg were compared, the detection rate of HBV-LP and HBV-DNA were compared in patients with negative HBeAg, correlation of HBV-LP with HBeAg and HBV-DNA was analyzed. Results: The detection rate of HBV-LP (87.50%) was higher than HBV-DNA (70.00%) (χ2=10.980 4, P<0.01) and HbeAg (38.33%) (χ2=62.165 3, P<0.01), the detection rate of HBV-LP (82.43%) was higher than that of HBV-DNA (44.59%) in patients with negative HBeAg (χ2=22.858 9, P<0.01), correlation testing shown there were positive correlation between HBV-LP with HBV-DNA and HBeAg (rs=0.573, P
[Key words] HBV; Large protein; Clinical value
我国慢性乙型肝炎患者约占世界的1/3[1],且HBeAg阴性患者较多,目前对慢性乙型肝炎患者的治疗效果监测仍以HBeAg和HBV-DNA阴转及临床肝脏功能改善为主,对HBeAg阴性患者没有有效监测指标。近年来研究表明,HBV-LP具有反式激活HBV细胞内复制的功能,与HBV感染、病毒复制及预后均具有密切关系[2]。本文中笔者对120例慢性乙型肝炎患者血清HBV-LP、HBeAg、HBV-DNA进行检测,现将结果报道如下:
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择我院2007年1月~2010年12月收治的慢性乙型肝炎患者120例,其中,男78例,女42例;年龄34~67岁,平均(46.1±12.4)岁。所有患者均符合乙型肝炎病毒感染的临床诊断标准,且无其他类型病毒性肝炎合并感染。
1.2 方法
所有患者均于清晨采集空腹静脉血2~5 ml,分离血清,并置于-20℃冰箱冻存备用。HBV-LP和HBeAg检测采用酶联免疫吸附法进行,仪器为瑞士HAMILTON公司全自动酶联免疫分析仪,试剂盒为苏州新波生物技术公司生产。HBV-DNA检测采用免疫荧光分析法,仪器为美国PE7700型自动荧光PCR分析仪,试剂为中山大学达安基因股份有限公司生产。所有试剂均在有效期内严格按试剂使用说明书使用。比较HBV-DNA、HBV-LP及HBeAg的检出率,并对HBeAg阴性的患者HBV-LP、HBV-DNA血清学检出率进行比较,并分析HBV-LP与HBeAg、HBV-DNA的相关性。
1.3 统计学方法
采用SPSS 13.0软件进行统计学分析,计数资料比较采用χ2检验,相关性分析采用Spearman相关检验,P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 慢性乙型肝炎患者三组指标的检测结果
HBV-LP阳性率为87.50%(105/120),显著高于HBV-DNA的检出率[70.00%(84/120)]以及HBeAg的检出率[38.33%(46/120)](均P
表1 HBV-LP、HBV-DNA、HBeAg检出率比较
注:与HBV-DNA检出率相比,χ2=10.980 4,P<0.01;与HBeAg检出率相比,χ2=62.165 3,■P<0.01
2.2 HBeAg阴性患者中HBV-LP与HBV-DNA检测结果
74例HBeAg阴性的慢性乙型肝炎患者中,HBV-LP阳性率为82.43%(61/74),HBV-DNA阳性率为44.59%(33/74),HBV-LP阳性率显著高于HBV-DNA阳性率(P
表2 HBeAg阴性者HPV-LP与HBV-DNA检出率
注:与HBV-DNA检出率相比,χ2=22.858 9,P
2.3 HBV-LP同HBeAg及HBV-DNA表达的相关关系
相关性检验显示HBV-LP与HBV-DNA及HBeAg之间存在正相关关系(rs=0.573,P
表3 HBV-LP与HBeAg及HBV-DNA表达的相关关系(例)
3 讨论
近年来,随着对乙型肝炎发病机制、病毒感染、复制过程中HBV-LP的作用研究,HBV-LP受到专家、学者们越来越高的重视,越来越多的人逐渐认识到HBV-LP的重要临床意义。HBV-LP是一种由s基因编码的HBV包膜蛋白[3],具有复杂的空间构象。Dane颗粒与管状病毒颗粒(亚病毒颗粒)内均存有HBV-LP。HBV核壳体膜可与其内侧结合,而病毒受体又能与其外侧结合,HBV-LP对HBV颗粒的成熟、包装有重要作用。HBV患者血清具有感染性与否,与富含HBV-LP的亚病毒颗粒及Dane颗粒的多少有密切关系。目前临床上广泛应用的HBV持续抗病毒治疗方案仅对cccDNA的再复制具有一定的抑制作用,而对于已形成的病毒表达蛋白无抑制能力,故不能清除富含HBV-LP的亚病毒颗粒,其在细胞内的长期累积可造成肝细胞的液化和凋亡,同时病毒的继续复制可被亚病毒颗粒反式激活。临床上即使患者达到治愈标准,其肝脏组织内仍然能检测出cccHBV-DNA的复制,说明仍有HBV持续感染[4]。因此,笔者认为,可以通过患者血清HBV-LP的检测对乙型肝炎病毒外膜的完整性进行判断,从而了解到病毒基因或亚病毒颗粒的存在与否。
本研究结果中显示,HBV-LP与HBV-DNA及HBeAg之间均存在显著相关性,其阳性检出率与二者的阳性检出率同样显著相关,但在总体对比上,HBV-LP阳性检出率显著高于HBV-DNA与HBeAg的阳性检出率,在HBeAg阴性组患者中,HBV-LP阳性检出率显著高于HBV-DNA,同时在HBeAg与HBV-DNA均为阴性的患者组中,HBV-LP仍有67.64%的阳性检出率。分析出现上述结果的原因可能为:①血清HBeAg的阴性结果不能说明不存在病毒的复制[5-6],可能与长期抗病毒治疗导致病毒基因变异造成抗原合成障碍有关;②血清HBV-DNA阴性同样不是一定表明患者体内的HBV完全清除,可能是因为HBV-DNA检测敏感度有限或水平较低,有研究称,血清HBV-DNA水平较低时,肝脏内仍旧可以存在一定量的HBV-DNA;③HBV-LP易在细胞内滞留等多种原因均可造成上述结果的出现。HBV患者血清HBV-LP浓度的检测,可弥补HBV-DNA检测在HBV患者抗病毒治疗终点判断及疗效评估中的不足。当HBV患者血清HBeAg阴性时,通过HBV-LP检测可了解体内病毒的复制、疾病进展情况以及抗病毒疗效与预后[7-9],有效减少更严重的肝硬化及肝癌的发生。如果HBV患者血清HBV-LP阳性而HBV-DNA阴性时,进行HBV-LP检测可避免不必要的停药反跳,具有更好的临床指导意义。
综上所述,笔者认为对乙型肝炎患者特别是血清HBeAg阴性的乙型肝炎患者,检测血清HBV-LP可作为监测患者体内病毒复制、疾病进展及抗病毒治疗效果的敏感指标,对提高血清学手段诊断HBV的水平有积极意义。
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【关键词】 纤维蛋白原降解产物;抗凝血酶-Ⅲ;慢性阻塞性肺疾病
文章编号:1003-1383(2012)04-0484-03
中图分类号:R 563 文献标识码:A
doi:10.3969/j.issn.1003-1383.2012.04.012
Significance of detecting FDP and AT-Ⅲ in patients with chronic obstructive pulmonary disease
Abudusupuer?mijiti1,Tuerxunjiang?silamu2,TIAN Gang3
(1.Department of Respiratory,Tuberculosis Control Institution,Kashi 844000,Xinjiang;2.The Community Hospital Affiliated to Kashi First People’s Hospital,Kashi 844000,Xinjiang;3.Laboratory Department,Tianjin Public Security Hospital,Tianjin 300040)
[HJ1*6][HJ]
【Abstract】 Objective To explore the significance of detecting FDP and AT-Ⅲ in patients with chronic obstructive pulmonary disease(COPD).
Methods 120 patients with COPD were divided into GroupⅠ(30 cases),Group Ⅱ(30 cases),GroupⅢ(32 cases) and Group Ⅳ(28 cases).100 healthy check-up people were selected as the control group. 3 ml of peripheral venous blood was drawn from each of COPD patients and healthy check-up people. PT and TT of each group were detected by the hematopexis equipment and FDP was measured by ELISA,AT-Ⅲ by immunoblot assay.
Results Patients with COPD from GroupⅠto Group Ⅳ had much higher level of FDP,obviously lower level of AT-Ⅲ than the control group(P<0.05) while their TT and PT had no statistical difference(P>0.05).The difference of AT-Ⅲ of every group was significant(P<0.05).The AT-Ⅲ and FDP level of each group was in negative relevance from Group Ⅰ to Group Ⅳ(r=-0.954,P<0.01).
Conclusion FDP and AT-Ⅲ are useful for diagnosis of hematopexis disorder in patients with chronic obstructive pulmonary disease.
【Key words】 FDP;AT-Ⅲ;chronic obstructive pulmonary disease
慢性阻塞性肺疾病(COPD)是严重危及人类健康的呼吸系统性疾病,绝大多数患者的肺换气功能存在一定的缺陷[1]。长期的缺氧和血氧饱和度偏低使该病群凝血和纤溶系统的功能存在一定的问题。当正常的凝血和抗凝系统失衡,就会引发出血和栓塞的危险。抗凝血酶-Ⅲ(AT-Ⅲ)是血浆生理性抑制物中最主要的抗凝物质,可直接抑制凝血酶的活性。纤维蛋白原降解产物(FDP)是在纤溶酶的作用下,血液中的纤维蛋白/纤维蛋白原被溶解所产生的各种降解产物的总称,也是原发性纤溶亢进及继发性纤溶亢进的指标[2]。本研究旨在探讨AT-Ⅲ和FDP两个指标在COPD患者血栓前状态的检测价值,现报道如下。
本文应用SYSMEXKX―21N血细胞计数仪,对慢性肾炎病人RBC中血红蛋白(Hb)、红细胞分布宽度(RDW)及血小板中平均血小板体积(MPV)、血小板分布宽度(PDW)等参数检测分析,旨在探讨其贫血的性质及其他可能的原因。
1 资料和方法
1.1 实验对象:肾病组:21例均为本院肾病内科就诊的慢性肾炎病人,采样前未接受肾透析的治疗。对照组:80例经体检诊断为健康者。
1.2 测定方法:(1)标本留取:血液标本为清晨9:00左右采取的末梢血,用EDTAK2抗凝。(2)测定仪器及试剂:日本SYSMEX医疗电子有限公司生产的KX―21N 血细胞计数仪。溶血剂、稀释液及清洗剂均由该公司提供。(3)测定方法:末梢采血20 ?滋l加入500 ?滋l稀释液中,充分混匀后放置10分钟,由SYSMEXKX-21N血细胞计数仪测定。
2 结果
慢性肾炎组与对照组红细胞及血小板测定参数结果见表1,相应的红细胞直方图见图1,慢性肾炎组红细胞曲线波形明显变宽,波峰平坦;慢性肾炎组与对照组血小板直方图见图2,慢性肾炎组图形比对照组宽,呈左偏态分布。
3 讨论
【摘要】 目的 探讨Ph染色体和bcrabl mRNA在慢性粒细胞白血病诊断、分期、治疗及微小残留病变监测中的意义。方法 同时检测437份慢粒标本的Ph染色体和bcrabl mRNA的表达情况。结果 慢性期、加速期和急变期的bcrabl mRNA定量结果逐渐增高(P
【关键词】 慢性粒细胞白血病;实时定量PCR;Ph染色体;bcrabl
ABSTRACT: Objective To evaluate the significance of Ph chromosome and bcrabl mRNA expressions in diagnosis, staging and treatment of chronic myeloid leukemia (CML) as well as in monitoring minimal residual disease. Methods Expressions of Ph chromosome and bcrabl mRNA of 437 CML patients were detected at the same time. Results Expression of bcrabl mRNA gradually increased in blastic phase (BP), accelerated phase (AP) and chronic phase (CP) (P
KEY WORDS: chronic myeloid leukemia; realtime quantitative PCR; Ph chromosome; bcrabl
慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia, CML)是一种起源于造血干细胞的血液系统恶性疾病,细胞遗传学特征是具有Ph染色体,即t(9;22)(q34;q11),其分子水平上形成bcrabl mRNA。染色体和融合基因的检测对CML的诊断、治疗及疗效评价有重要作用。我们对2006年12月~2009年8月门诊及住院437份慢粒患者标本的Ph染色体及bcrabl mRNA结果进行分析,明确融合基因定量检测在慢粒诊治及微小残留病变监测过程中的作用。
1 材料与方法
1.1 研究对象 2006年12月~2009年8月来自河南省肿瘤医院门诊及住院的291例CML患者的437份标本,同时进行Ph染色体和bcrabl mRNA定量检测,其中男175例,女116例,中位年龄36(9~82)岁。其中223例仅做了1次,68例分别作了2~9次检测,19例异基因造血干细胞移植患者共检测78份标本,24例服用格列卫患者共检测94份标本。根据患者的临床表现、血象、骨髓象、Ph染色体、bcrabl mRNA等结果参照文献[1],确定慢性期CML 198例,加速期69例,急变期24例。
1.2 方法
1.2.1 细胞遗传学分析 全部病例均采用骨髓细胞直接法或外周血不加植物凝集素的短期培养法(24h)制备染色体标本,然后采用热处理姬姆萨R显带技术进行核型分析。核型异常的描述参照《人类细胞遗传学国际命名体制(ISSN1995)》的有关规定。
1.2.2 bcrabl mRNA定量检测 RNA提取采取新鲜骨髓或血液标本经肝素或EDTA抗凝,用相对密度为1.077的淋巴细胞分层液分离单个核细胞。经TRIzol试剂(美国Invitrogen公司)提取总RNA。
1.2.3 仪器与试剂 采用实时定量PCR方法检测bcrabl mRNA。仪器为ABI7300荧光检测仪。试剂来源于上海申友生物技术有限责任公司生产的白血病融合基因bcrabl检测试剂盒(核酸扩增荧光定量法),严格按试剂盒说明书操作。
1.2.4 标本bcrabl水平的计算 根据标准曲线分别计算出各份标本abl和bcrabl的拷贝数。如果abl拷贝数≥3×103,即认为该标本可用。对于bcrabl拷贝数
bcrabl水平(‰)=bcrabl拷贝数abl拷贝数׉
1.3 统计学分析 应用SPSS15.0统计软件进行统计学分析。慢粒各分期及治疗后不同时间数据的比较, 应用非参数检验的KraskalWallis H检验和秩和检验两两比较的t检验进行统计分析,检验水准α=0.05。
2 结 果
2.1 Ph染色体与bcrabl mRNA对比分析 437份标本同时检测Ph染色体与bcrabl mRNA,其中Ph染色体和bcrabl mRNA均阳性标本291份;Ph染色体阴性,bcrabl mRNA阳性[0.618(0.02~33)]标本39份,分别为异基因造血干细胞移植或服用格列卫后患者;Ph染色体阳性,bcrabl mRNA阴性标本15份,主要为标本采集不合格或可能表达P230bcrabl融合蛋白(本实验室未开展此项检测);Ph染色体和bcrabl mRNA均阴性标本92份,为异基因造血干细胞移植后或服用格列卫后分子遗传学完全缓解者。
2.2 不同分期CML患者 bcrabl mRNA定量结果分析 检测291例CML患者bcrabl mRNA水平,其中慢性期198例、加速期69例和急变期24例,定量检测结果分别为0.99‰、80‰和539.8‰,bcrabl mRNA水平逐渐增高,不同分期比较差异均有统计学意义(P
2.3 CML患者异基因造血干细胞移植后不同时间bcrabl mRNA分析 19例异基因造血干细胞移植患者,移植前与移植后不同时间bcrabl mRNA检测对比,其中3~6月bcrabl mRNA 55%转阴,较移植后3月内转阴高(39%),且有统计学差异(P
2.4 CML患者服用格列卫后不同时间bcrabl mRNA分析 24例服用格列卫的CML患者,服药前与服药后不同时间bcrabl mRNA对比,其中服药后3月内和3~6月转阴分别为17%和23%,二者无统计学差异(P>0.05)。服药6~12月检测bcrabl mRNA 56%转阴,与3~6月内结果比较差异有统计学意义(P
3 讨 论
慢粒的Ph染色体和bcrabl mRNA检测已成为慢粒诊治及微小残留病变监测的重要手段,而PCR扩增技术可成百万倍地扩增放大目的基因,因此其灵敏度远高于Ph染色体,而且检测时间短、特异性强,弥补了染色体检查周期长、技术要求高、少数病例还会出现无分裂相或可供分析的分裂相有限等情况。本研究检测标本中,Ph染色体阴性,而bcrabl mRNA阳性标本有39份,这些患者分别为异基因造血干细胞移植或服用格列卫治疗后的患者,细胞遗传学已取得完全缓解,而分子遗传学上尚未转阴,提示利用RQPCR技术检测bcrabl mRNA更适用于微小残留病变的监测。
不同病期的CML骨髓增殖情况不同,白血病细胞的增殖也存在差异,慢性期和加速期的bcrabl mRNA水平均明显低于急变期,且均有统计学差异,与文献报道一致[2]。这为应用荧光定量技术检测bcrabl mRNA来诊断CML的白血病细胞的增殖情况和病程分期提供了理论依据。异基因造血干细胞移植利用移植物抗白血病反应清除肿瘤细胞,是慢粒根治的重要手段。而移植后短期内仍可检测到bcrabl mRNA,一般在移植后6个月左右消失[34]。本研究检测的19例患者中,移植后6月内仍有45%的患者未能转阴,而到6~12月时全部患者分子遗传学已完全缓解,与文献报道相似。其中有1例移植12月后随访,出现bcrabl mRNA阳性,而此时染色体尚未发现异常,提示复发,继续治疗。
格列卫针对bcrabl位点进行分子靶向治疗,PASCHKA等[5]研究发现,RQPCR结果显示患者经伊马替尼治疗达到细胞遗传学完全缓解时,绝大部分仍可检测到bcrabl mRNA,随着治疗时间延长,定量结果呈持续下降趋势,直至检测不到。本研究中24例服用格列卫的患者,随着服药时间的延长,bcrabl mRNA逐渐下降,12月后随访到的9名患者分子遗传学全部转阴,与文献报道一致。但无论采用何种治疗手段,bcrabl mRNA转阴后仍需继续监测,可早期提示疾病进展,为治疗带来机会。
参考文献
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目前开展的慢性病研究内容局限,主要是收集身高、体重、腰围、血压等生物危险因素,吸烟、饮酒、饮食习惯、身体活动等行为危险因素,以及高血压、糖尿病等慢性病的患病情况等相关信息,而无慢性病患者临床症状、体征、实验室检验、影像学检查等指标,与临床关联性不强,对保健工作的临床指导作用有限。人群流动性大依从性不理想现况调查所获得的描述性资料是在某一时点或在较短时间内收集的,客观地反映了这一时点的疾病分布以及人们的某些特征与疾病之间的关联,但由于被调查人群的不固定性,难以继续进行再次或多次调查,因而无法与既往的调查资料进行对比分析。此外,受年龄、职业、受教育程度等因素影响,所表现出的依从性也并不理想。监测形式陈旧人力投入较多目前,我国慢性病信息监测主要是依靠常规报卡和流行病学调查,大样本人群和较高层次的监测网络尚未建立。在监测中,通过单病种流行病学调查收集的信息量较少,通过常规报卡效率低、环节多,手工操作量大,数据质量不高。同时,所收集的信息不便于数据交换、数据共享和数据再利用,制约了研究的延展。
2慢性病监测新思路
有关慢性病行为方式的研究已经很多,但呈现给临床医生的患者大多已经是症状明显或相关临床指标警示明确的人群,而处在临界状态的人群却失去了更好的干预时机。对于有相同特征的固定人群,或是有更高医疗保健需求的人群,我们提出了一个慢性病监测新思路:将健康管理与慢性病监测结合起来,实现慢性病研究的早期化、临床化、连续化、数字化。
2.1长期监测与随访实现监测早期化
较好的预防疾病和及早发现疾病是保健工作的重点。对于健康医疗需求较高的保健人群,不仅需要在患病后得到良好的诊治,更需要对健康状况进行长期监测。通过对各种健康指标的长期监测并及早进行临床和行为因素的干预,为处在临界状态的人群赢得更好的干预、治疗机会,实现疾病的早发现、早诊断、早治疗,以期获得良好的预后。
2.2结合体检与临床实现监测临床化
将慢性病监测的内容由单一的行为因素拓展到更多的临床项目,将患者的症状、体征、实验室检验、影像学检查等指标纳入监测内容。这不仅对研究临床指标变化与疾病发生、发展的关系有所帮助,更可以为保健计划的制定及体检项目的设立和执行提供指导。
2.3开展持续性调查
实现监测连续化开展长期的、连续的、有间隔的、定时定点的现况调查,短则6个月1次,长则24个月1次,将同质指标的结果按时间顺序排列或连接起来,形成慢性病相关的临床指标和危险因素曲线。这些曲线既可以反映慢性病及相关因素的变化,也可以反映临床和行为因素干预的效果和效益。
2.4运用计算机技术实现监测数字化
随着较大规模研究的开展,监测的数据量将不断增加,传统的纸张记录和手工操作已不能满足信息化发展的要求。运用计算机网络技术,建立监测信息采集、管理、分析和利用的管理系统,可以更好地支撑业务活动的信息管理需求,从而实现数据采集网络化、信息管理自动化、调查分析一体化[4]。这不仅可以大大减少手工操作环节,提高工作效率,更可以较好地提升信息准确性并提高数据质量。