生物药剂动力学
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生物药剂动力学范文第1篇
[中图分类号] R9 [文献标识码]B [文章编号]1674-4721(2010)05(a)-137-02
生物药剂学是研究药物及其剂型在体内的吸收、分布、代谢和排泄过程,阐明药物的剂型因素、机体生物因素和药物疗效之间相互关系的一门学科[1]。要求学生通过这门课的学习,具备合理设计制剂处方、科学评价药物制剂质量、科学制订给药方案等方面的基本理论知识和实验技能,为从事制剂研究和应用工作奠定基础。
为达到上述教学要求,不断提高教学质量,笔者回顾近年《生物药剂学与药物动力学》教学中实践过程,调阅教研室多年上课后的师生评语及追寻学生走上工作岗位后的反馈信息,结合本学科当前的教学工作状况,广泛阅读他人已发表的教学改革方法和经验,总结以往教学工作中存在的问题和值得肯定的地方,拟采百家之长,进一步提高该课程的教学质量,为社会培养有用之才。
1 大学课程的时间设置
《生物药剂学与药物动力学》这门专业课程在多数院校都是安排在大学的最后一个学年才开始学习,但其内容涉及到许多《高等数学》 (微积分、线性代数等)的基础知识,而《高等数学》则安排在大学一年级,其后几年的课程均很少涉及[2],这样就造成多数学生对一些高等数学基础知识的遗忘,尤其对那些原来数学基础较差的学生来说,面对药代动力学部分中大量的公式推导,感到既抽象难懂,又枯燥乏味;另外,《生物药剂学与药物动力学》这门课程本身安排的学时就很少,教师课堂上没时间为学生补习高等数学的基础知识,部分学生学习上感觉困难。因此,建议在课程时间的安排上,召开基础课代课教师与相应专业课代课教师的座谈,明确专业课中需要基础课教师重点讲授的内容,进而在时间上两者相衔接,尽早让大学生学习过基础课后,即开始相应专业课的学习,这样既有利于基础课知识的巩固,也为学好专业课打下坚实的基础,同时也不必对相同内容进行重复教育,从而节约教育资源。
2多媒体课件的应用
本院自从2004年在本科药学专业开展《生物药剂学与药物动力学》课程教学以来,全部采用Powerpoint课件进行教学,该教学模式可将抽象的概念直观化,复杂的作用机制简单化,同时辅以鲜明、生动的动画,总体上受到了学生的广泛好评,也使教师从整节课的“写写擦擦”中解放出来;但从听课教师及学生的反馈中也发现不少问题:①个别课件制作的质量问题,如非关键字过多;内容摆放位置不协调;字体大小、颜色对比不合适,动画制作质量参差不齐等;②教师在教学工作中主导作用的减弱,由于在整个教学活动中,全部使用Powerpoint课件,个别教师甘于居于幕后充当“配音演员”的角色,缺少了形体语言的表达,给学生造成照本宣科的感觉,使得师生的互动及学生的学习热情明显的降低;③不同教学内容应采用适宜的授课方式,如教材中生物药剂学部分关于不同制剂在体内、体外的吸收、分布、代谢和排泄,多为文字性的内容,采用Powerpoint课件教学,以动画对药物的体内过程进行生动的演示,可使枯燥的内容变得鲜活起来,使学生更好地理解和记忆,从而增加学生的学习兴趣;而在药代动力学部分,由于存在大量公式的推导,教学过程中,采用Powerpoint进行授课,同时利用Excel中作图及计算功能缩短公式的推导和计算时间,由于屏幕尺寸的限制,致使公式推导的过程前后无法连贯,个别学生反映课件显示速度过快,思维跟不上。因此,在今后的教学工作中,对药代动力学部分的教学应在Excel辅助计算的基础上,结合文献[3]提供的方法“课件与板书相结合,由板书逐步讲解其中的推导过程并随时与学生进行交流,让学生慢慢地跟随教师的讲解把握其来龙去脉,放映的课件中只清晰地列出重要的中间公式及最后的结果”进行教学,或许可收到较好的效果;④多媒体课件的广泛应用,使部分教师其他方面的教学能力出现下降的趋势,由于制作Powerpoint课件,尤其其中的动画需要大量的时间,加上教学中其他教学方式的较少应用,致使部分教师对板书、教案及教学笔记的书写与更新、学生思想动态方面的研究等方面的能力有所下降,因此,应提高对教师多方面的要求和考核,使之各方面的水平不断提高。
3 实验部分的教学
《生物药剂学与药物动力学》是一门实践性很强的课程,实验课是培养学生掌握操作技能的重要教学环节,加强实践教学,突出能力培养是实用型人才教育的重点。在教学过程中,为了培养学生查阅文献、课题设计、操作技能、论文写作和课题汇报的能力。笔者尝试了以下方法:
3.1验证性实验
验证性实验是采用经典的基本实验方法和基本操作技能,验证以往的实验结果。对于验证性实验,实验课前,教师围绕实验内容提出系列问题,让学生带着问题预习实验内容,熟悉相关理论和实验步骤,做到心中有数;上课时教师随机对学生进行提问,增强学生的参与意识,促使学生课前认真预习,当然,学生也可自由说出对同一个问题的不同看法;实验中,学生不一定非要按课本或老师要求去做,可以有自己的主张和创新,允许学生实验失败;实验结束后,各小组成员不得擅自提前离开,要逐组汇报实验结果和心得,共同探讨实验成败的原因;最后,由教师进行总结,提出实验中的观点和注意事项,对实验成功的小组进行表扬,对于实验失败的小组,只要对失败的原因分析的有条有理,同样给予鼓励。
对一些实验前的教师演示性实验,以后的教学活动中可借鉴文献[3]的方法,实施全程录像,录像中用一些特写镜头将实验操作的难点表现出来,学生就可清晰地看到每一个操作步骤;另外,学生如果对某一部分不理解,可以对这部分重复观看,教师只需进行必要的讲解和指导,这样就减少了复杂的示范操作,提高了学生的学习效果。
3.2 综合性实验
综合性实验是提高学生综合能力和创新能力的重要途径,主要涵盖了药剂学、生物药剂学与药物动力学、药物分析学等多学科的内容。在教学活动中,以国家药品临床研究机构I期实验室为依托,把接到的横向课题按实验要求对学生进行讲解,要求学生按照科研的一般程序,在学校图书馆或系部电子教室自行查阅相关文献,按照拟定的格式和目录,以其所学尽力撰写研究者手册、实验方案和知情同意书,选择较优者在全班公开讨论,对一些大胆的设想和有创意的设计方案及时给予表扬和鼓励,并对其可行性组织学生进行讨论,这样既有利于开发学生的潜能,培养创新能力,又可达到教学相长的目的;受试者筛选期间组织学生参与和见证健康受试者的知情同意书的签署和身体检查等各环节,从参与实验中更清楚地认识受试者的入选、剔除的条件;样本采集过程中,分批组织学生参与受试者的管理、监督服药、样本采集、样本的分离及受试者的监护工作;样本检测过程中,指导学生学习高效液相色谱的使用、实验条件的摸索、样本的预处理、进样分析等;数据的统计分析采用专业统计软件进行处理,生成统计报告;然后按照一定的格式撰写实验报告;最后制作幻灯,要求学生随机个别汇报,师生共同评定;最后,要求主要参与者撰写科研论文,在学报的大学生园地版面上发表。在整个实验过程中学生逐步掌握了文献的检索方法、实验前的准备、实验中注意的事项、报告的撰写和科研论文的写作及汇报,目前已在学报的大学生园地上发表了“阿奇霉素分散片生物等效性评价”等科研论文2篇;并且学生从幻灯片制作、课题汇报的过程中体会到了教师授课的艰辛,也对教师在教学过程中偶尔的出现小瑕疵能够给予充分的理解。经过综合性实验项目的学习和训练后,多数学生基本能够应用所学知识、分析并解决较复杂问题,并具有一定的科学思维和创新意识。
3.3 探索性实验
探索性实验是以提高学生独立实验能力、知识的综合运用能力、创新能力为主要目的。从去年开始,本院对药学学生实行导师制培养,就是每个教师都要从班级里随机抽取数名学生,负责学生的日常生活、学习及科研能力的培养。各个教师根据自己的研究领域,先把自己的研究情况介绍给大家,然后分发材料,让学生逐渐熟悉研究内容并跟随教师或教师的硕士研究生学习实验技术,聆听硕士生的课题汇报,再从中国优秀硕士学位论文全文数据库和中国博士学位论文全文数据库中下载相关文献,反复研读,初步掌握基本的科研思路和实验方法,然后自己选题或根据教师的课题制定研究方案和计划,相互学习、共同讨论,促进学生个体之间知识的交叉,同时学生的热情、无拘无束,充满想象力的问题和解决问题的新思路,也不断激发教师的灵感,为其研究带来新的思路。
4 讲授例题与作业设计
药代动力学部分涉及大量的计算,必须通过不断的计算演练,才能熟练掌握各药代参数之间的相互关系及解题思路,因此,例题与作业是课程设计中的必要部分[4]。对于典型例题讲授时应着重于解题思路的点拨;其次,可选择《生物药剂学与药物动力学》(人民卫生出版社)第3版配套的习题集,选择其中与实际应用密切联系的题目进行讲解,也可给学生进行针对性地布置一些作业。下次上课时,先行提问,再相互讨论,鼓励学生积极发言,提出不同的解题思路。从而培养学生解决实际问题的能力。
5 考核工作
5.1 理论课的考核
目前对学生的理论课的考核,主要还是通过传统的闭卷式考试来进行,但闭卷考试因限于考试篇幅和难度的需要,主要考察的是学生对知识本身的记忆能力,而考察理解与应用能力的题目相对较少。考试成绩的高低并不能完全反映学生的学习能力,很大程度上只是片面反映学生的短期记忆能力。文献[5]所介绍的半开卷考试的考核方法,一方面注重学生对知识的理解和应用的培养,另一方面也注重了学生归纳总结能力的培养,值得借鉴。
5.2 实验课的考核
为加强学生实验技能、应用能力和创新能力的培养,我们将实验课的成绩占期末总成绩的比重由原来的15%提高到30%,实验课的考核内容包括:实验前的准备、实验中的操作技能、实验报告的撰写及实验内容的回报等,尤其对整个实验过程中那些表现突出、有独到观点的学生,要求教师应记录在案,给予适当的加分鼓励。
总之,本院从2004年开始开设《生物药剂学与药物动力学》这门课程以来,经过几年的教学实践,在教学内容和方法上虽取得了一点成绩,但应该更清醒地认识到教学中的不足,今后一定努力加强自身素质和业务水平的提高,“以生为本”,博采众长,不断提高教学水平。
[参考文献]
[1]梁文权.生物药剂学与药物动力学[M].3版.北京:人民卫生出版社,2007:1.
[2]景荣荣,张文祥.药物动力学模型的发展对数学教学的启示――数学应用案例研究[J].数理医药学杂志,2004,17(4):380-381.
[3]郭波红,金描真.多媒体课件在生物药剂学实验教学中的应用[J].教育论坛,2008,5(10):91,158.
[4]邹豪, 陈琰,鲁莹,等. 药物动力学教学实践中常见问题的探讨[J]. 药学实践杂志,2008,26(3):226-227.
生物药剂动力学范文第2篇
[关键词] 多媒体技术；生物药剂学
[中图分类号]R94 [文献标识码]B [文章编号]1673-7210（2008）05（c）-109-02
生物药剂学与药物动力学是药学类专业本科生的主要专业课程之一。生物药剂学(Biopharmaceutics)是研究药物及其剂型在体内的吸收、分布、代谢与排泄过程，阐明药物的剂型因素、机体生物因素和药物治疗之间相互关系的科学。而药物动力学(Pharmacokinetics)是应用动力学原理和数学处理方法，定量地描述药物通过各种途径进入体内的吸收、分布、代谢、排泄(即ADME)过程的“量时”变化或“血药浓度经时”变化及动态规律的科学[1]。
生物药剂学与药物动力学是一门实验操作性很强的课程，而实验课是巩固学生学习的理论知识，培养学生掌握操作技能，提高学生分析解决问题能力的有效教学手段。然而，在传统实验教学过程中我们发现，仅用传统的板书教学手段难以在学生的大脑中留下深刻印象，尤其是对于生物药剂学和药物动力学的动物实验部分（如大鼠在体小肠灌流实验和扑热息痛家兔血药浓度测定实验），更难以准确操作。而使用多媒体教学手段，可以将抽象的理论做成生动、形象的课件，引发学生的兴趣，充分调动学生学习的积极性[2~4]。近年来，我教研室录制了相关实验操作的视频，在实验时以播放视频作为主要的教学手段，并辅助以板书、图片进行讲解，取得了较好效果。
1 教学改革内容
1.1 简化实验教材文字
之前使用的生物药剂学实验教材具有理论性、逻辑性强的特点，但其内容抽象、复杂，知识量有限，重点不突出，教学目的不明确，教材内容不符合学生的认知规律。有的太简单，只有文字和简单的插图，缺乏动态效果。在新版的生物药剂学实验教材中，我们在简化文字内容的基础上，使新教材内容更丰富，信息量更充足，联系问题更广泛。如大鼠在体小肠灌流实验中关于大鼠的腹腔麻醉、肠管的剥离、小肠位置的确定等实验内容着重突出；减少文字叙述，代以图表形式勾画实验操作步骤；强调操作中的细节和提出的注意事项，以求文字教材简单、易懂、重点突出。
1.2 加入图片多媒体课件和相关影音文件素材
我们收集了主流教学资料包括杂志、教科书、相关书籍上的图片，并摘录了相关解剖学图谱，还从互联网上下载高清图片。图片素材尽量做到内容简明、重点突出，同时，尽可能减少图片间的频繁切换，以免分散学生的注意力。视频方面，我们摄录了《大鼠在体小肠吸收实验》、《家兔口服扑热息痛血药浓度的测定》等总片长100分钟的资料，内容包括从仪器准备、动物处理、动物给药到动物在体操作的全过程，特别突出在体操作技术中相关步骤等，以上教学片基本涵盖了操作中的重点、难点及应急处理等知识。
1.3 加入实验flas
在教学中，使用flash软件，设计制作了生物药剂学实验内容的动画，可从4个不同方位（正视图、仰视图、俯视图和侧视图）观察实验操作，加深了学生对实验内容的理解。
2 多媒体技术在实验中的应用体会
2.1 简化文字教材，突出重点，易于学生理解和记忆
生物药剂学实验内容具有理论性强、抽象、复杂的特点，如果单纯通过板书的形式来说明实验原理、操作过程、注意事项等，学生不易理解，如能采用相关软件制作关于实验原理的流程图，并以录像视频作为内容，那么学生更易理解该实验的目的和原理。如大鼠在体小肠灌流实验中，关于大鼠的腹腔麻醉、肠管的剥离、小肠位置的确定、插管方向、循环控制等都是该实验的重点内容，学生在第一次做实验时，由于没有直观的接触，常常会出现错误操作导致实验的失败，而对学生播放实验视频录像可以对需要注意的地方重点讲解，加深学生理解，提高生物药剂实验的成功率。
2.2 丰富实验教学模式
以往的实验教学程序是由学生课前预习实验内容，教师在课堂上讲解本次实验相关内容并提出该实验的要求和操作注意事项，学生按讲义或要求进行操作，然后进行数据处理、撰写实验报告。这种教学模式单调、呆板，难以激发学生的学习兴趣，达不到真正学习知识、运用知识、解决实际问题的目的。由于被动接受式学习没有充分调动学生的积极性和主动性，学生普遍存在重理论轻实验的现象。而采用多媒体技术可以激发学生自主学习的兴趣，使认知过程由被动传授转变为主动学习[5]。
2.3 加强理论课教学与实验课教学的结合
生物药剂学与药物动力学理论课的教学中有一节内容为应用药物动力学软件处理数据，在讲解的过程中，让学生应用3P97动力学数据处理软件及自行编写的非隔室模型法计算药动学数的Excel 程序处理自己的实验数据，并与手动计算的实验结果进行比较，这样不仅可以提高理论课学习的效果，还能提高学生对实验课的兴趣，引起学生的重视，真正做到理论学习与实验的有机结合。
3 多媒体技术应用的教学效果
2006学年(未采用多媒体教学)与2007学年(采用多媒体教学)相比，考题难度基本持平，其中理论和实际操作各占50%，难度也基本相当。采用多媒体教学的2007学年学生成绩有明显提高：学生平均成绩为84.8分，较2006学年提高13.5个百分点，优秀率达到15.7%；良好率提高11.5个百分点，达到73.3%；不及格率下降了4.2个百分点。我们在对2007学年学生(总人数366人)的问卷调查中发现，87.5%的学生认为利用多媒体进行教学，效果明显好于传统的教学方法，主要表现在同学上课注意力集中，具有比较高的学习积极性，动物实验操作形象直观，通俗易懂。因此，我们认为，正确处理好多媒体教学和传统教学的关系，能明显提高教学效能，起到事半功倍的作用。
[参考文献]
[1]梁文权.生物药剂学与药物动力学[M].北京：人民卫生出版社，2007.
[2]王定勇，程力慧， 廖华卫，等. 天然药物化学开放性实验的实践与思考[J].广东药学院学报， 2004，20(4): 450.
[3]蒋心惠. 对药学试验传统教学模式的改革与思考[J].山西医科大学学报(基础医学教育版)， 2006，8(2): 197- 199.
[4]张永红，李泳.多媒体教学的应用于思考[J].中国医药导报，2006，3（29）：77.
生物药剂动力学范文第3篇
[关键词] 四氢姜黄素；生物利用度；固体分散体；HPLC-MS/MS
姜黄Curcumae Longae Rhizoma为姜科植物姜黄Curcumae longae L.的干燥根茎，其化学成分主要为姜黄素类及挥发油两大类，此外尚有糖类、甾醇等。姜黄素类主要有姜黄素、去甲氧基姜黄素及双去甲氧基姜黄素。姜黄素具有抗炎、抗氧化、消除氧自由基、保护肝脏、抗纤维化等多种药理作用。姜黄素在体内迅速代谢为葡萄糖醛酸结合物、硫酸结合物、二氢姜黄素、四氢姜黄素及六氢姜黄素，而二氢与六氢又转化为四氢姜黄素[1]。四氢姜黄素（tetrahydroeurcumin，THC）作为姜黄素在体内代谢过程中产生的最为活跃和主要的代谢产物，亦受到国内外广泛关注[2]。研究表明四氢姜黄素具有保肝、抗肿瘤、抗氧化、降血糖[3]、降血脂[4-5]等药理活性。实验室前期研究发现THC对代谢综合征[6]、肥胖型2型糖尿病[7]、高血压[8] 、肥胖[9]以及胰岛素抵抗综合征相关疾病[10]均有较好治疗效果，具有广泛的药理学作用。然而，由于四氢姜黄素水溶性差，导致其口服吸收利用度低[11]，临床应用受到很大限制。本实验建立了快速、灵敏、简便的高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）测定小鼠血浆中四氢姜黄素方法，比较四氢姜黄素及其固体分散体的相对生物利用度，为四氢姜黄素固体分散体的研究开发提供依据。
1 材料
1.1 受试药物
四氢姜黄素（纯度≥99%）、四氢姜黄素固体分散体均由四川省中医药科学院分析测试中心提供。四氢姜黄素固体分散体制备按照业已公开的方法：称取一定量PEG4000，于 70～80 ℃加热至完全熔融，按一定比例加入四氢姜黄素，搅匀，继续加热至完全熔融，迅速放入冰水浴中冷却固化，粉碎过80目筛，即得四氢四氢姜黄素/PEG 固体分散体[10]。
1.2 试剂
四氢姜黄素对照品（纯度≥95.0%，sigma公司生产），批号86J72390V；β-葡萄糖醛酸苷酶（1 mg・kU-1，Sigma Chemical Company，批号SLBD7403V）；地西泮（质量分数≥99.9%，中国食品药品检定研究院）；乙腈、甲醇（色谱纯，E.Merk Chemical Co.）；乙酸乙酯、环己烷、甲酸为色谱纯（市售），其余的醋酸盐、磷酸盐等化学试剂均分析纯（市售）。
1.3 动物
SPF级KM种小鼠，雌雄各半，体重18～22 g，由四川省中医药科学院实验动物中心提供，合格证号SCXK（川）2008-0019。
1.4 仪器
美国Agilent 6410 三重四极杆液质联用系统，配有G1312B四元泵、G1322A真空脱气机、G1329B自动进样器和G1316B柱温箱。使用MassHunter软件控制系统及数据处理；超纯水系统（Millipore，美国）；CP-225D型精密电子天平（Sartorius），可调式（固定式）混匀仪[MX-S（F），京君龙实验仪器（北京）有限公司]，超纯水系统（Millipore，美国），PB-10酸度计（Sartorius），ALLEGRAX-15R台式冷冻离心机（Beckman，美国），离心浓缩仪（LABCONCO，美国）。
2 方法
2.1 HPLC-MS/MS测定小鼠血浆四氢姜黄素（THC）
2.1.1 色谱条件 色谱柱为Agilent SB C18柱 （4.6 mm×50 mm， 1.8 μm） ；流动相乙腈-水（50∶50）含 0.1%的甲酸；流速0.3 mL・min-1；柱温30 ℃；进样量10 μL。
2.1.2 质谱条件 采用电喷雾离子化源（ESI+），正离子模式，喷雾电压4 000 V，源温度为100 ℃；雾化气为氮气，雾化压力为275.8 kPa；去溶剂气为氮气，温度350 ℃，流速为10 L・mL-1；碰撞气为高纯氮气，压力为0.1 MPa；采用多反应监测（MRM）模式对药物离子浓度进行测定，质谱条件如下：四氢姜黄素、地西泮的母离子（m/z）、子离子（m/z）、碰撞碎片电压（V）、毛细管电压（V）分别为373.3，137.1，90，20和285.2，193.1，135，31。
2.1.3 溶液的配置 四氢姜黄素（THC）对照液：精密称取THC对照品适量，乙腈溶解并定容，配成质量浓度为48.6 mg・L-1的对照品乙腈储备液，用乙腈-水 70∶30稀释得相应浓度的工作液。所有对照品溶液均于4 ℃冰箱避光保存待用。
内标对照品溶液：精密称取适量地西泮，乙腈溶解并定容，配成23.4 μg・L-1的乙腈储备液，用乙腈-水 70∶30稀释得402.48 μg・L-1的内标工作液。
磷酸盐缓冲液（pH 6.8，0.1 mmol・L-1）：准确称取6.8 g KH2PO4，用蒸馏水溶解定容至250 mL，称取2 g NaOH，蒸馏水溶解定容至250 mL，量取118 mL NaOH液和250 mL KH2PO4液加蒸馏水定容至1 000 mL即得。
醋酸盐缓冲液（pH 4.5，0.1 mmol・L-1）：称取醋酸钠18.25 g，加冰醋酸9.80 mL，再加蒸馏水稀释至1 000 mL即得。
β-葡萄糖醛酸苷酶工作液：准确称取一定量的β-葡萄糖醛酸苷酶，用磷酸盐缓冲液（pH 6.8，0.1 mmol・L-1）配成5 000 U・mL-1的β-葡萄糖醛酸苷酶工作液，-20 ℃冰箱保存待用。
2.1.4 血浆样品处理 准确移取血浆 100 μL，加入100 μL含500 U的β-葡萄糖醛酸苷酶的磷酸二氢钾溶液，37 ℃水浴孵育1 h，依次加入20 μL 402.48 μg・L-1的地西泮及100 μL醋酸盐缓冲液，涡旋30 s混合均匀，酸化5 min，加4 mL混合萃取液（乙酸乙酯-环己烷 2∶1），涡旋10 min，5 000 r・min-1低温离心15 min，分离上清液，35 ℃真空减压浓缩挥干，加100 μL含0.1%甲酸的乙腈-水 70∶30的溶液，涡旋10 min复溶，最后5 000 r・min-1低温离心15 min，吸取上清液进样。
2.1.5 方法学考查 血浆样品中THC标准曲线的制备：精密吸取空白血浆 100 μL，加入不同浓度THC系列标准溶液40 μL配置成THC血浆标准系列，质量浓度分别为9.06，45.35，75.58，125.97，349.92，583.20，972.00 μg・L-1，每一浓度平行配置3份，按2.1.4血浆样品处理项操作后检测。以血浆样品中THC浓度为横坐标，待测物与内标的峰面积比值为纵坐标，绘制THC标准曲线。
方法回收率的测定：制备THC低、中、高 3 个质量浓度（9.06，349.92，972.00 μg・L-1）的质量控制（QC）样品，每个浓度平行5份，按2.1.4血浆样品处理项操作，以提取后的色谱峰面积与内标溶液的峰面积比值带入回归方程，所得浓度与实际浓度的比值即为方法回收率。
精密度与准确度：制备THC低、中、高3个质量浓度（9.06，349.92，972.00 μg・L-1）为质量控制（QC）样品。每个浓度平行处理5份，按照2.1.4血浆样品处理项操作，每个样品测定1次，于1个工作日内完成，计算日内精密度。同样的QC样品连续重复测3 d，计算日间精密度。
基质效应考查：准确移取空白血浆 200 μL，加入100 μL含500 U的β-葡萄糖醛酸苷酶的磷酸二氢钾溶液，37 ℃水浴孵育1 h，加入100 μL醋酸缓冲盐酸化5 min， 涡旋30 s混合均匀，加4 mL混合萃取液（乙酸乙酯-环己烷 2∶1），涡旋10 min，5 000 r・min-1低温离心15 min，分离上清液，35 ℃真空减压挥干，依次加入40 μL高、中、低3种浓度的THC标准液和20 μL 402.48 μg・L-1的地西泮，以及140 μL含0.1%甲酸的乙腈-水 70∶30的溶液复溶，涡旋10 min，5 000 r・min-1低温离心15 min，吸取上清液进样分析。计算血浆萃取物的基质效应的影响。
稳定性试验：用空白血浆配制低、中、高3个不同质量浓度（9.06，349.92，972.00 μg・L-1）的THC样品各5份，分别进行室温放置试验（25 ℃，24 h）和冷藏放置实验（4 ℃，12 h），最后以实测浓度的RSD值计算THC的稳定性。
2.2 小鼠四氢姜黄素（THC）药动学研究
2.2.1 实验设计 200只SPF级KM种小鼠，雌雄各半，体重18～22 g。按体重性别随机分为2组，每组100只，给药前12 h和给药后2 h禁食不禁水，Ⅰ，Ⅱ组分别灌胃给予四氢姜黄素及四氢姜黄素固体分散体，给药剂量以THC计均为400 mg・kg-1（受试药物均现用现配，称取4 g四氢姜黄素原粉药，加蒸馏水溶解研磨均匀，定容至100 mL，配成40 g・L-1溶液即得；四氢姜黄素固体分散体的配置方法同上，以四氢姜黄素计质量浓度为40 g・L-1）。分别于给药前和给药后15，30，45 min，1，1.5，2，3，4，6，24 h摘除眼球取血于肝素锂抗凝管中，30 min内3 000 r・min-1离心10 min，分离上层血浆（-40 ℃冰箱冻存备测），按血浆样品处理后进样检测，带入回归方程，计算不同时间点的血药浓度。
2.2.2 药动学数据统计分析 将测得的数据采用Phoenix WinNonlin智能分析软件以非房室模型计算药代动力学参数。
生物利用度（F）=AUCTHC固体分散体/AUCTHC×100%，相对生物利用度（F）按均数计算。
3 结果
3.1 HPLC-MS/MS测定小鼠血浆四氢姜黄素（THC）
3.1.1 方法专属性 取小鼠空白血浆0.1 mL，按照2.1.4项下操作，将一定浓度的四氢姜黄素对照溶液加入空白血浆中依同法操作，见图1；将一定浓度的地西泮内标液加入空白血浆中依同法操作，见图2；取受试小鼠服药后的血浆样品，依同法操作，见图3。结果表明，空白血浆中内源性物质不会干扰四氢姜黄素和内标物的测定。
3.1.2 方法学考察 标准曲线和最低检测限：以THC浓度为横坐标，THC和内标物的峰面积比值为纵坐标，求得回归方程为Y=0.002X-0.002（R2=0.999）。根据标准曲线，THC在9.06～972.00 μg・L-1线性关系良好，定量下限为2 μg・L-1。采用标准溶液进行LC-MS/MS检测，检测限（S/N=3）为0.7 μg・L-1。
回收率： THC的平均萃取回收率在75.1%～101.5%，平均方法回收率在79.8%～108%；RSD均小于11%，见表1。
精密度：日内日间精密度RSD均小于13%，符合生物分析方法指导原则的要求，见表2。
基质效应：血样中THC提取回收率较高且稳定，血样中基质对THC的影响均较小（
稳定性考查： THC血浆样品稳定性良好。实测浓度的RSD均小于15%，见表4。
3.2 小鼠四氢姜黄素（THC）药动学研究结果
3.2.1 小鼠口服四氢姜黄素及其固体分散体药动学参数 小鼠单次口服四氢姜黄素及其固体分散体后药物浓度-时间曲线图，见图4，药动学参数见表5。四氢姜黄素固体分散体组达峰时间缩短，消除半衰期延长，分布体积减小，清除率降低，AUC 增大，MRT 延长。
3.2.2 相对生物利用度 由2.2.2所述相对生物利用度计算公式，结果表明四氢姜黄素固体分散体的相对生物利用度是四氢姜黄素的1.34倍。由此可见四氢姜黄素固体分散体能有效的提高四氢姜黄素在小鼠体内血药浓度，使其发挥更好的临床疗效。
4 讨论
由于THC生物利用度低，在血浆中的含量很少，分子化学结构不稳定，其分子量小，因此基质效应对其影响较大，很多检测方法都不能满足其低浓度的检测。笔者采用的HPLC-MS/MS方法，质谱电喷雾电离源（ESI+）将样品离子化，多反应离子监测（MRM）准分子离子峰，具有选择性好、灵敏度高、分析时间短等优点，能够迅速、灵敏的检测THC的血药浓度。实验过程中最初参考文献乙腈蛋白沉淀[1]、乙酸乙酯液-液萃取[12]法，而后又尝试了正己烷-二氯甲烷-异丙醇 2∶1∶0.1的三元萃取，回收率和基质效应始终不能同时达到要求。在经过一系列的实验筛选后，笔者发现毒性小的环己烷按1∶2的比列与乙酸乙酯混合后，提取的血浆样品本底比较干净，基质效应符合生物检测的要求，仪器损耗小，提取时不易乳化，溶剂易吹干，提取方法简便，符合四氢姜黄素在小鼠体内药代动力学研究的检测。实验过程中，分别采用乙腈-水（70∶30），0.1%甲酸或者0.2%的甲酸-乙腈-水（60∶40）， 0.1%甲酸或者0.2%的甲酸；乙腈-水（50∶50），0.1%甲酸或者0.2%的甲酸等对流动相条件进行筛选，最终确定乙腈-水（50∶50），0.1%甲酸此流动相条件下检测灵敏度和保留时间均达到了比较理想的效果[12-17]。
由THC及其固体分散体在小鼠体内的药动学参数可以看出固体分散体组的MRT较四氢姜黄素相比，有明显的延长，这可能是两亲性高分子化合物聚乙二醇能使胃的排空时间延缓，或者它对胃黏膜表面有一定的黏附性能，能使药物黏附于胃黏膜上皮部位，从而延长了药物自胃肠道的滞留的时间，促进药物的吸收，提高其生物利用度[18]；就AUC0-24 h，AUC0-∞和 Cmax来看，固体分散体明显优于四氢姜黄素，说明四氢姜黄素固体分散体能明显提高四氢姜黄素的生物利用度。这可能与课题组所选的辅料聚乙二醇的两亲性性质有关。一方面，当聚乙二醇与四氢姜黄素结合以后，其亲脂性的性质能提高机体的膜通透性，使四氢姜黄素能更好的通过被动扩散进入机体而被吸收；另一方面，聚乙二醇与四氢姜黄素结合后，能使其外表面涂上一层亲水性膜，不但能降低四氢姜黄素界面张力的作用，利用加快其在黏膜黏液层和绒毛间的扩散，而且还能增加其粒子表面的湿润性，加速其溶出和吸收，从而提高其生物利用度[19-20]。
小鼠口服THC固体分散体后，生物利用度有明显提高。由此可见，采用两亲性高分子化合物聚乙二醇，按照一定比例与四氢姜黄素混合，制备成四氢姜黄素固体分散体，能够明显提高四氢姜黄素在小鼠体内的血药浓度，改善其生物利用度。实验室前期试验结果发现，动物性别对此药物的吸收是有差异的，这可能跟体内激素水平有关，还需要进一步探索与研究；另一方面，四氢姜黄素本身就作为一个主要代谢产物，在进入机体以后是以何种形式被吸收，其分布、代谢及排泄机制也尚待进一步研究。
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Pharmacokinetics and relative bioavailability of THC and THC-solid
dispersion orally to mice at single dose
LIAO Li 2， HUA Hua ZHAO Jun-ning LUO Heng YANG An-dong1
（1. Institute of Pharmacology Toxicology of Sichuan Provincial Academy of Traditional Chinese Medicine，
the State Administration of Traditional Chinese Medicine and Key Laboratory of Quality of Biological Evaluation， Authentic
Medicinal Materials in Sichuan Province Engineering Technology Research Center for System Development， Key Laboratory of
Innovation and Quality Evaluation of Chinese Herbal Medicine Research in Sichuan Province， Chengdu 610041， China；
2. Chengdu University of Traditional Chinese Medicine， Chengdu 611730， China）
[Abstract] To establish a fast sensitive， reproducible LC-MS/MS method to study pharmacokinetic properties of THC， and compare relative bioavailability of THC and its solid dispersion in mice. 200 mice were divided randomly into two groups， and administered orally with THC and THC-solid dispersion after fasting （calculate on THC：400 mg・kg-1）， used HPLC-MS/MS method to determine the THC concentration of each period at the following times： baseline （ predose ），15，30，45 min，1，1.5，2，3，4，6，24 h after dosing. Calculating the pharmacokinetic parameters according to the C-t curv， and then use the Phoenix WinNonlin software for data analysis. The calibration curves were linear over the range 9.06-972 μg・L-1 for THC （R2=0.999）. The limit of detection （LOD） was 0.7 μg・L-1， respectively. The average extraction recoveries for THC was above 75%， The methodology recoveries were between 79% and 108%，The intra-day and inter-day RSD were less than 13%， the stability test showed that the plasma samples was stable under different conditions （RSD
生物药剂动力学范文第4篇
【摘要】 目的：建立正常人血浆中红霉胺HPLC-MS测定法，研究地红霉素两种肠溶制剂的人体生物利用度和药动学。方法：以克拉霉素为内标，血浆样品碱化后用乙酸乙酯萃取，经Thermo Hypersil-Hypurity C18柱（150 mm×2.1 mm，5 μm）分离，以MS检测器检测。采用二周期随机交叉试验设计，将18名健康男性志愿者随机等分成两组，分别单剂量口服0.5 g地红霉素肠溶颗粒剂（试验制剂 T）或地红霉素肠溶片（参比制剂 R）。结果：红霉胺与内标分离度好，内源性杂质不干扰测定。红霉胺浓度在3.1～736 μg/L 范围内与峰面积比线性关系良好，最小可定量浓度为3.1 μg/L。回收率为97.0%～99.1%（n=5），日内RSD为4.0%～9.9%（n=5）；日间RSD为4.4%～11.2%（n=15）。 T与R的Tmax分别为（2.6±0.7）h、（2.6±0.8）h；Cmax分别为（339.4±118.1）μg/L和（360.8±139.5）μg/L；AUC0144分别为（3 225.0±986.5）μg·h/L和（3 188.2±1057.9）μg·h/L；T1/2 分别为（44.7±3.5）h和（42.6±5.9）h。与参比制剂相比，试验制剂的相对生物利用度为（103.1±17.5）%。药动学参数经多因数方差分析显示周期间与制剂间差异均无统计学意义（P>0.05），双单侧t检验表明接受T与R生物等效的假设，经计算90%置信区间均在规定值内。结论：T与R为生物等效制剂。
【关键词】 地红霉素；红霉胺；高效液相色谱-质谱法；相对生物利用度
［Abstract］Objective: To establish an HPLC-MS method for determination of erythromycylamine in human plasma and to study the pharmacokinetics and the relative bioavailability of two enteric dirithromycin preparations.Methods:With clarithromycin as its internal standard， the sample of blood plasm，after alkalized，were extracted by acetic ether，then separated on a Thermo Hypersil-Hypurity column (C18 150 mm×2.1 mm，5 μm)，and detected by a MS detector.In a test of two periods of a random crossover study，an oral dose of 0.5 g dirithromycin enteric-granule (T) and its reference (R) were administrated to two groups of healthy volunteers with 9 in each. and then the pharmacokinetics and relative bioavailability were studied.Results: The calibration curve was linear within the range 3.1 to 736 μg/L， the recovery rate of erythromycylamine from plasma was in the range of 97.0%～99.1% (n=5)， inter-day and intra-day RSD were 4.0%～9.9% (n=5) and 4.4%～11.2% (n=15) respectively.The main pharmacokinetics of T and R were as following:AUC0144were (3，225.0±986.5) μg·h/L and (3，188.2±1，057.9)μg·h/L;Tmax were (2.6±0.7)h and (2.6±0.8)h;Cmax were (339.4±118.1)μg/L and (360.8±139.5)μg/L;T1/2were (44.7±3.5)h and (42.6 5.9)h.The result of ANOVA and two one-side t-test statistical analysis showed no significant differences among T and R (P>0.05).The 90% confidence interval was in the regulated range.Conclusions:T and R are bioequivalent.
［Key words］Dirithromycin;Erythromycylamine;HPLC-MS;Relative bioavailability
地红霉素（Dirithromycin）为大环内酯类抗生素，是红霉胺的前体药物，口服给药后很快转变成红霉胺而起作用，其抗菌谱和抗菌活性与红霉素相似。地红霉素在软组织中的药学特性较红霉素有所改善，消除半衰期长，且与其他由细胞色素P450系统代谢的药物相互作用少［1］。因此，常以测定红霉胺的血药浓度来研究地红霉素体内的药动学特征。本实验建立了HPLC-MS法测定红霉胺的血药浓度，采用二周期随机交叉试验设计，比较了地红霉素肠溶颗粒与肠溶片在18名健康受试者体内的药动学及相对生物利用度，旨在评价试验制剂与参比制剂的生物等效性，为临床合理用药提供依据。
1 材料与方法
1.1 仪器
LC-MS2010液相色谱-质谱联用仪，LC-10AD VP低压四元梯度泵，CTO-10A VP柱温箱，SCL-10AD VP系统控制器，LC-MS solution工作站（日本岛津）；DZF-6020型真空干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；TG16-W微量高速离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司）；ER-182A型电子天平（日本AND公司）。
1.2 试药
地红霉素肠溶颗粒（0.25 g/包，海南皇隆制药厂有限公司，批号：050701）；地红霉素肠溶片（商品名：域大，0.25 g/片，湖南维康制药有限公司，批号：20031201）；红霉胺标准品（中国药品生物制品检定所）；克拉霉素标准品（内标，中国药品生物制品检定所，997 IU/mg），乙腈（色谱纯，Caledon Company）；乙酸乙酯（分析纯，天津市大茂化学试剂厂）；甲醇（色谱纯，浙江临海市浙东特种试剂厂）；其它试剂均为国产分析纯（AR级）；所有试验用水均为重蒸馏水。
1.3 受试者及试验设计
受试者均为健康男性，年龄21～25岁，体重52～72 kg，无烟酒嗜好，试验前经询问病史、体格检查和实验室检查未发现异常。无药物过敏史和药物依赖史，无慢性病史，四周内未服用任何可能影响本品吸收、代谢的药物。受试期间统一清淡饮食，不使用除试验（参比）制剂以外的任何药物，不接受烟、酒及含咖啡的饮料，试验前签署知情同意书。
采用二周期随机交叉自身对照试验，将18名受试者等分成二组。分别在二周期内口服地红霉素受试制剂和参比制剂0.5 g，服药前及服药后0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、12.0、24.0、48.0、72.0、96.0、120.0、144.0 h分别取血5 mL。洗脱期为14 d，交叉给药后取血方法和时间相同。取血后离心分取血浆，-20 ℃保存。血浆样品用新建立的HPLC-MS方法测定。
1.4 血样测定
1.4.1 标准溶液配制 红霉胺溶液：精确称取红霉胺18.4 mg于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度（184 μg/mL）。置于4 ℃冰箱中保存，使用时用流动相稀释至所需浓度。内标溶液：称取克拉霉素12.5 mg于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，应用时进一步稀释为12.5 μg/mL，置于4 ℃冰箱中保存备用。
1.4.2 色谱条件及质谱条件 色谱柱：Thermo Hypersil-Hypurity C18（150 mm×2.1 mm，5 μm）；柱温：45 ℃；流动相：10 mmol/L醋酸铵（pH 6.4）-甲醇-乙腈=50 ∶10 ∶30；流速：0.2 mL/min。质谱条件：电喷雾电离源（ESI），选择性正离子监测（SIM），监测质荷比（M/Z）368（红霉胺，M+2H）和237（克拉霉素，M+H）带正电荷的分子离子峰，电离源电压4.5 kV，喷雾气氮气（N2），流速1.5 L/min，脱溶剂温度250 ℃，检测器电压1.5 kV。
1.4.3 血浆样品预处理 取待测血浆0.2 mL于2 mL离心管中，加入内标溶液（12.5 μg/L）50 μL， 加饱和碳酸钠溶液0.1 mL，混匀，加乙酸乙酯1 mL，振荡2 min，14 000 r/min离心5 min，将有机相转移至另一管中，45 ℃真空干燥箱中抽干，残渣用流动相100 μL溶解，取上清液5 μL进样。
1.5 参数的计算与数据处理
从药时曲线获得两种制剂的主要药动学参数，Cmax及Tmax采用实测值，AUC0144以梯形面积法计算，以消除后相血药浓度对数值和时间回归计算消除速率常数K和半衰期T1/2。AUC0∞=AUC0t+Ct/K，以试验制剂AUC0t和参比制剂AUC0t的比值计算生物利用度（F）、AUC0t和Cmax，经对数转换后进行药物间、周期间、个体间的三因素方差分析，再以双单侧t检验进行等效性判断。若受试制剂AUC0t的90%可信限落在参比制剂80%～125%范围内，Cmax的90%可信限落在70%～143%范围内，则认定受试制剂与参比制剂生物等效。Tmax采用原值进行非参数检验。
2 结果
2.1 色谱行为
红霉胺的保留时间约为5.4 min，内标的保留时间约为 3.2 min，基线平稳，血浆内源性物质及其它杂质不干扰样品的分离测定。红霉胺和克拉霉素标准液、空白血样、空白血样中加入标准品及受试者服药后3 h血浆的总离子流图见图1。
2.2 线性关系
用空白血浆将红霉胺标准贮备液稀释成浓度分别为 3.1、9.2、18.4、36.8、73.6、147.2、368.0、736.0 μg/L的系列浓度溶液，漩涡振荡2 min，混匀，余照“血浆样品预处理”项下操作，记录红霉胺及内标的峰面积。以红霉胺和内标峰面积比（A/AIS）与红霉胺浓度（C）进行线性回归，得回归方程为：A/AIS＝0.0139C-0.0052，r2=0.9981，红霉胺浓度在3.1～736.0 μg/L 范围内与峰面积比线性关系良好，最小可定量浓度为3.1 μg/L。
2.3 回收率及精密度
配制含红霉胺浓度分别为3.1、73.6、736.0 μg/L的血浆样品各5份，按“血浆样品预处理”项下操作，记录红霉胺和内标峰面积，按回归方程计算测得浓度，以测得值与加入值的比值计算回收率，并计算日内精密度，高、中、低浓度回收率为（99.1±4.0）%、（97.0±3.7）%、（98.7±9.9）%（n=5），日内RSD为4.0%～10.0%（n=5）。对上述样品连续测定3 d，考察日间精密度，日间精密度为4.4%～11.2%（n=15）。
2.4 血样测定和药物动力学参数
18例健康志愿者单剂量口服地红霉素试验制剂或参比制剂0.5 g后，红霉胺的主要药动学参数见表1，平均血药浓度时间曲线见图2。表1 健康受试者口服0.5 g地红霉素后主要
药动学参数（略）血浆红霉胺平均浓度-时间曲线(0～24 h)
2.5 统计检验结果
对地红霉素试验制剂与参比制剂的Cmax及AUC0144经对数转换后进行方差分析，结果表明主要药物动力学参数没有显著差异（P>0.05），双单侧t检验及90%可信限检验表明试验制剂Cmax及AUC0144的均值落在规定范围内，结果见表2。Tmax原值经非参数检验，两种制剂间差异无统计学意义。表2 健康受试者口服0.5 g地红霉素后Cmax及AUC0144双单侧t检验结果和90％置信区间（略）
3 讨论
有关红霉胺血药浓度测定的方法国内外文献报道的通常采用微生物法［2-3］和HPLC-UV法［4］，也有采用HPLC-MS［5-6］法和HPLC-ECD［7-8］法的报道。与其他大环内酯类药物一样，红霉胺仅在短波长范围内有很弱的紫外吸收，用紫外法测定生物样品时灵敏度低。而
微生物法测定的是样品对敏感菌株的抑菌活性，可能受到血浆蛋白结合、活性代谢物等因素的影响，选择性差。采用ED可实现灵敏检测，但对流动相或样品进行加电压增敏处理时同时增加了基线噪音和干扰峰，影响测定结果。高效液相色谱-质谱联用技术具有色谱分离和质谱分离的双重功能，可以依靠质谱的分辨能力区分不同物质的色谱峰，抗干扰能力强［5-6］。本文新建立的HPLC-MS法，取样量小，样品处理快速简便，方法选择性好，干扰少，回收率高，最小可定量浓度为3.1 μg/L，完全能够满足本试验低浓度药物测定以及药物动力学研究的要求。
试验证实地红霉素肠溶颗粒与肠溶片在健康受试者体内的药动学特征，各药动学参数之间比较差异无统计学意义，说明试验制剂与参比制剂生物等效。
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生物药剂动力学范文第5篇
【摘要】
目的比较葛根素衍生物4ac混悬液及其纳米粒在Beagle犬体内的生物利用度。方法分别于给药后不同时间取血，高效液相色谱（HPLC）法测定血清中葛根素衍生物4ac的血药浓度，应用3P97药动学统计软件对血药浓度数据拟合。结果葛根素衍生物4ac混悬液及其纳米粒在Beagle犬体内过程均符合二室开放模型。结论葛根素衍生物4ac纳米粒较葛根素衍生物4ac混悬液相比能明显提高在Beagle犬体内的生物利用度。
【关键词】 葛根素衍生物4ac； 药物动力学； 高效液相色谱
Abstract：ObjectiveTo study the pharmacokinetics of suspension and nanopaticles in beagle dogs.MethodsBlood was collected at different time. The plasma concentration of the derivatives-4ac was determined by HPLC. The compartment model was calculated with 3p97 program and the pharmacokinetic parameters were compared with SPSS program. ResultsThe suspension and nanopaticles of derivatives-4ac could be fitted to two-compartment model in beagle dogs. ConclusionNanopaticle of derivatives-4ac can obviously improve the bioavailability in beagle dogs.
Key words：Derivatives-4ac； Pharmacokinetics ； HPLC
葛根素是葛根心脑血管活性的主要物质基础［1，2］，临床上常用于治疗冠心病、心绞痛及脑血栓等疾病［3～5］。实验证明，犬口服葛根素的生物利用度低，其绝对生物利用度约为3%，大部分以原形从粪便中排出。为了提高葛根素的生物利用度，制备了葛根素的衍生物4ac及其衍生物4ac的纳米粒。本实验旨在采用高效液相色谱法，测定葛根素衍生物4ac混悬液及其纳米粒在Beagle犬体内的生物利用度。
1 器材
1.1 药品与试剂葛根素衍生物4ac由香港理工大学杨大坚教授提供，经HPLC法测定含量均在98%以上。葛根素衍生物4ac混悬液为4ac加蒸馏水制成的混悬型水针剂；葛根素衍生物4ac纳米粒冻干针剂（4ac-PLA-NP，香港理工大学中药研究所自制）为衍生物4ac经溶剂挥发法制备的纳米胶体溶液经冷冻干燥制成的冻干粉针剂。 乙腈、甲醇均为HPLC级，水为重蒸馏水。
1.2 仪器与色谱条件Agillent1100高效液相色谱仪，DAD二极管阵列检测器，HP1100色谱工作站；Agillent XDB-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；预柱为Agillent XDB-C18柱（4.6 mm×12.5 mm ，5 μm）；梯度洗脱：0 min 乙腈∶水（10∶90） 0.7ml/min；15 min乙腈：水（60∶40）0.7 ml/min；20 min 乙腈∶水（70∶30） 0.7 ml/min；30 min 乙腈∶水（100∶0） 0.7 ml/min；柱温为室温；检测波长为250 nm。
1.3 动物Beagle犬，体重（10±0.1）kg，雌雄兼用，由广州医药工业研究院Beagle犬培育中心供应。
2 方法与结果
2.1 葛根素衍生物4ac纳米粒（4ac-PLA-NP)的制备称取聚乳酸100 mg，4ac30 mg，卵磷脂0.2 ml（预先用二氯甲烷配成25％的溶液），加入1 ml二氯甲烷中溶解，作为有机相；另取普流罗尼克68（F-68）300 mg溶于蒸馏水中，作为连续相；将有机相加入连续相中，搅拌除去有机溶剂即得。
2.2 样品采集取Beagle犬6只，随机分为两组，每组3只，实验前禁食12 h， 4ac混悬水针剂、4ac-PLA-NP冻干针剂分别按含4ac 6 mg/kg静脉注射给药，于给药后0，0.083，0.25，0.5，1.0，3.0，6.0，12，24， 48，72，96，144 h取血，静置30 min后离心，取上层血清备用。
2.3 样品处理精密吸取0.5 ml血清，加入甲醇2.0 ml，旋涡振荡1 min，离心15 min（3 000 r/min），上清液用氮气流吹干，残渣加0.2 ml甲醇溶解，离心10 min（10 000 r/min），取上清液进样。
2.3.1 色谱条件葛根素对照品液、空白血清、含药血清经处理后的溶液的HPLC色谱图见图1～3。由图可见血清中内源性杂质对葛根素的测定无干扰，葛根素的保留时间为8.3 min。
2.3.2 标准曲线制备称取葛根素对照品适量，用甲醇溶解，制成每毫升约含0.1 mg的溶液，作为贮备液。精密吸取此贮备液用甲醇稀释为含葛根素为18.75，12.5，9.375，6.25，3.125 μg/ml的系列标准液。分别吸取以上标准溶液0.5 ml，加入空白血清0.5 ml，按样品处理方法进行处理，得一系列对照品溶液。分别吸取以上系列对照品溶液20 μl，进样测定峰面积。以葛根素浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，得葛根素对照品在血液中的标准曲线，其回归方程为A=149 750C-55.665 （r=0.996 3），在0.156 3 ～0.937 5μg范围内线性关系良好。由于回归方程中b/a＞＞100，因此采用外标一点法定量。
2.3.3 回收率实验取0.5 ml空白血清6份，分别加入不同量的葛根素对照品溶液，旋涡混合均匀，分别加入甲醇2.0 ml，旋涡振荡1 min，离心15 min，3 000 r/min，上清液用氮气流吹干，残渣加0.2 ml甲醇溶解，离心10 min，10 000 r/min，取上清液进样。记录峰面积，求回收率。高、中、低浓度的平均回收率为96.58%。结果见表1。
表1 回收率实验（略）
结果表明，回收率在要求范围内， 该方法合理、可行。
2.3.4 精密度实验取含葛根素的血清样品0.5 ml，加入甲醇2.0 ml，旋涡振荡1 min，离心15 min（3 000 r/min），上清液用氮气流吹干，残渣加0.2 ml甲醇溶解，离心10 min（10 000 r/min），取上清液进样。采用外标一点法计算，求RSD（％）。结果见表2～3。
表2 日内精密度（略）
表3 日间精密度（略）
结果表明，日内及日间精密度均
2.4 数据分析按“2.3”样品处理方法项下对各样品进行处理，进样，采用外标一点法计算出各样品的血药浓度，将测得的血药数据输入计算机，用3P97药动学统计程序处理，结果表明游离4ac及其纳米粒的体内过程均符合二室开放模型。其主要药动学参数见表4。
表4 4ac混悬液及其纳米粒主要药动学参数（略）
从表4数据直观来看，纳米粒在体内血药浓度与时间曲线下的面积远远高于4ac混悬液组，经t检验， 4ac混悬液与纳米粒组比较有极显著性差异（t
图1 空白血清色谱图（略）
图2 血液样品色谱图（略）
图3 葛根素色谱图（略）
3 讨论
在进行含量测定中发现，血清样品中，4ac在Beagle犬体内主要以葛根素的形式存在，分析其原因可能是由于衍生物在犬体内水解，脱乙酰基而成为葛根素的缘故。因此，含量测定中采用葛根素为对照品进行含量测定。
由于葛根素衍生物4ac的脂溶性较强，制备成注射液时需要大量的增溶剂；为此制备了葛根素衍生物4ac的纳米粒，旨在提高其生物利用度，通过Beagle犬体内的生物利用度比较实验可以看出，制成纳米粒后其生物利用度明显提高。分析其主要原因在于消除半衰期明显延长，增加了药物在体内吸收的缘故。
【参考文献】
［1］ 高秀荣，王春梅，秦桂云，等.葛根素注射液改善冠心病微循环的临床观察［J］.中国微循环，2002，6（4）：216.
［2］ 许旭伟，李进禧，汪 涛，等.葛根素对新生大鼠脑细胞内钙超载的影响［J］.中西医结合心脑血管病杂志，2003，1（2）：74.
［3］ 祝 星，鱼运寿，李仁君，等.葛根素对冠心病患者心肌缺血的疗效［J］.第二军医大学学报，2003，24（3）：343.
