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【关键词】乙型肝炎病毒 血清学标志物 时间分辨荧光免疫测定法 酶联免疫吸附试验
乙型病毒性肝炎(乙肝)是目前流行最广泛、危害最严重的病毒性肝炎之一。乙肝血清学标记物(HBv)检查仍作为目前临床诊断、治疗和判断乙肝病毒感染者病程及传染性的重要指标之一。HBV血清标志物(HBV-M)的检测是目前诊断乙型肝炎(乙肝)最常用的指标,其检测方法有很多种。临床常用的免疫检测方法主要有放射免疫法(RIA)、酶联免疫法(ELISA)。随着科技的发展,一些新的检测技术不断被开发。时间分辨荧光免疫分析法(time resolved fluoroimmunometric assay,TRF IA)的研究在国内外广为重视,其在临床检验中的应用日益广泛,特别在免疫分析方面更显示出突出的优越性[1]。本文探讨了酶联免疫吸附试验(ELISA)与时间分辨荧光免疫测定(TRFIA)检测HBVM的差异以及其在床价值,现报道如下:
1 资料与方法
1.1 一般资料。所有病例均为2007年2月~2008年1月本院住院或门诊疑为乙肝患者,共86例,其中男42例,女44例,年龄5~58岁,平均(29.2±18.7)岁。采静脉血分离血清置-70℃保存。
1.2 试剂与方法。上海新波生物技术有限公司生产的HBsAg,抗-HBs,HBeAg,抗-HBe和抗-HBC定量检测试剂盒,批号为20070720;上海荣盛有限公司生产的ELISA法定性试剂盒,批号为20070101;卫生部临检中心提供的乙肝病毒血清学标志物质控品,批号20070521。其操作和结果判读均严格按照说明书和作业指导书的规定进行。对ELISA与TRFlA两法定性结果不符者,均进行双孔复查。双孔复查均阳性者定为阳性结果。
1.3 仪器。Anytest2000型时间分辨荧光免疫分析仪,DYN EX2MRX型酶标仪。
1.4 结果判定。ELISA法定性结果参照试剂说明书中的判定方法,经过本室严格检测,TRFIA的不同浓度标准品对应ELISA法定性检测的结果为:以HBsAg≥1.0ng/ml,抗-HBs≥10mu/ml,HBeAg≥0.5NCU/ml,抗-HBe≥4.0NCU/ml,抗-HBc≥0.6NCU/ml判定为阳性,反之为阴性。
1.5 统计学处理。所有数据经SPSS110软件统计分析,方法学间数据比较用x2检验。
2 结 果
TRFIA法和ELIsA法检测HBVM结果比较。86例血清标本中,除抗-HBe检测结果TRFIA法和ELIsA法差异有显著性(P0.05),具体见表。
3 讨 论
乙肝是一种全球广泛流行的传染病,以HBV感染数和HBsAg携带率估算,全世界HBsAg带毒者有3.5亿人,其中亚、非、拉地区有2.8
亿,而中国就有1.2亿人,占全世界HBsAg携带者的1/3,占亚、非地区的1/2[2]。加强对乙肝的防制是保障我国人民健康、促进经济发展和社会进步的重要措施。因此,筛查正常人群,对健康人群进行计划免疫,需要一种快速、准确、灵敏、简便的检测方法,过筛无偿献血.人员、从业人员体检及婚检,临床上作病程进展的评估及疗效评价等。传统的ELISA方法对乙肝两对半血清标志物定性测定,只能判断其阴阳性,无法得知其真正的浓度,给临床诊断和治疗带来许多不便。而HBV血清标志物定量检测能较为准确地反映其血清中的含量,可以间接反映体内HBV复制活跃程度,对临床药物疗效评价具有重要意义[3]。两对半定量检测结果的有效性在检测的过程中直接进行了标准量化质控,分高中低及三个定值质控品,两对半定性检测的室内质控,ELSA只能间接进行质控,分阴阳性质控品,免疫胶体金检测则不能进行严格的室内质控,从而来保证检测结果的有效性和溯源性。
TRFIA法检测的灵敏度明显高于ELISA法,这与其检测原理有关。TRFIA主要应用的是镧系元素的特点:原子标记技术,用镧系元素“铕”作为示踪物,标记物体积小,对被标记物的空间结构和活性影响小;时间分辨标记物“铕”的荧光寿命长,延缓测草时间等待测样品中的自然荧光完全淬灭后,再测定“铕”的荧光信号,这样就能消除非特异性荧光的干扰,提高了检测灵敏性;波长分辨,镧系元素的发射光和激发光波长间stokes位移大,有利于排除干扰,提高测量的分辨率;解离增强技术,正常情况下,示踪物铕所发出的信号极微弱,加入一种酸性增强液后,铕就会从免疫复合物中解离出来,形成新的螯合物,当被激发光激发后,则会发出极强的荧光信号,便于检测[4]。其结果与ELISA检测结果比较,它有较高灵敏度,较好的重复性,特异性强,以及较宽的线性范围。可检测出ELISA无法检出的低浓度的标本,大大弥补了酶标定性检测的不足之处,能为血清低浓度抗-HBs的幼儿是否再进行疫苗加强接种提供一个有效的判断依据,是目前最有发展前景的分析手段,因此TRFIA值得在临床实验室推广应用。
参考文献
1 郭淑英等.固相时间分辨荧光免疫分析螯合剂中间体-4,-4,-二溴-6,6-二甲基2,2联吡啶的合成.中国卫生检验杂志,2006;16(3):264~266
2 中国预防医学科学院.病毒性肝炎培训教材,2001:44
【摘要】目的 评价贝克曼全自动化学发光免疫分析仪检测甲状腺激素的效果。方法 测定T3、T4、FT3、FT4、TSH含量,分别计算批内精密度、批间精密度、回收率和线性范围。结果 T3、T4、FT3、FT4、TSH的批内精密度分别为4.40%、4.90%、3.00%、4.50%、3.50%,批间精密度分别为6.90%、5.30%、3.50%、6.20%、4.80%,回收率分别为96.7%、95.5%、97.1%、95.6%、96.4%,线性范围分别为0.15~12.3 nmol/L、3.9~387.0 nmol/L、0.3~30.8 pmol/L、1.3~155.0 pmol/L、0.01~150.0 mIU/L。结论 贝克曼全自动化学发光免疫分析系统测定甲状腺功能具有重复性好、准确度高、可报告范围宽、测定速度快等优点,适合于临床应用。
【关键词】化学发光免疫分析法;甲状腺激素
化学发光免疫分析法是20世纪80年代以来发展起来的一项新的标记免疫技术,在临床上有广泛的应用,包括内分泌激素、肿瘤标志物、血药浓度、传染病、心血管疾病标志物、贫血及过敏原等,特别是在甲状腺激素检测中应用更为广泛[1]。本文采用贝克曼全自动化学发光免疫分析仪检测T3、T4、FT3、FT4、TSH,对其方法学进行综合评价。
1 材料与方法
1.1 仪器贝克曼全自动化学发光免疫分析仪。
1.2 试剂发光试剂、质控品、标准品由贝克曼公司提供。
1.3 血清来源试验所需血清样本采自本院门诊和住院患者,每例取3ml血,离心3000 r/min,10分钟,取血清-70℃保存备用。
1.4 检测方法利用化学发光技术和磁性微粒分离技术相结合的测定方法,其反应原理与放免和酶免中的双抗夹心法、竞争法相似,严格按试剂盒操作说明书操作。
1.5 评价指标
1.5.1 批内精密度取含T3、T4、FT3、FT4、TSH高、中、低三种浓度的血清样本,每种浓度同批平行测定10次,计算平均变异系数(CV)。
1.5.2 批间精密度取含T3、T4、FT3、FT4、TSH高、中、低三种浓度的血清样本各10份,每天各测定1次,共测定10天,计算平均变异系数(CV)。
1.5.3回收率:由贝克曼公司提供原装3个浓度的标准品,分别测定T3、T4、FT3、FT4、TSH含量,每个浓度平行测定3次,计算平均回收率。
1.5.4 线性范围收集患者血清标本,取T3、T4、FT3、FT4、TSH浓度高于厂家提供线性范围上限作为高值浓度水平(H),厂家提供稀释液作为低值浓度水平(L),用稀释液稀释高值浓度血清,形成如下系列浓度检测标本:1H+0L、4H+1L、3H+2L、2H+2L、2H+3L、1H+4L、0H+1L。用配制成的系列浓度标本平行测定各项指标含量,取平均值作图,取在坐标纸上呈明显直线趋势的各点值进行直线回归统计,取回归系数r大于0.9的浓度范围为可报告的浓度线性范围。
2 结 果
2.1 批内精密度T3、T4、FT3,FT4、TSH的平均变异系数分别为4.40%、4.90%、3.00%、4.50%、3.50%。
2.2批间精密度T3、T4、FT3,FT4、TSH的平均变异系数分别为6.90%、5.30%、3.50%、6.20%、4.80%。
2.3 回收率T3、T4、FT3,FT4、TSH的平均回收率分别为96.7%、95.5%、97.1%、95.6%、96.4%。
2.4 线性范围T3所测结果得到回归方程为y=1.069x-0.2468,r=0.9966,截距经t检验,ta=1.36,0.95,截距经t检验,ta=0.36,
3 讨 论
血清中三碘甲状原腺氨酸(T3)、四碘甲状原腺氨酸(T4)、游离三碘甲状原腺氨酸(FT3)、游离四碘甲状原腺氨酸(FT4)、促甲状腺激素(TSH)的测定对甲状腺疾病的诊断具有重要价值。以往国内实验室多采用RIA、MIRA检测血清甲状腺激素水平,此法虽较准确,仪器与试剂也较为低廉,但对操作人员水平要求较高,对实验条件及环境有较多要求,且随着标记抗原的放射性衰减,而使计数不稳定及曲线失真,导致结果偏离,结果重复性差,且可产生放射性污染[2,4]。
近年来发展起来的全自动化学发光免疫分析系统是利用化学发光技术和磁性微粒分离技术相结合的测定方法,其反应原理与放免和酶免中的双抗体夹心法、竞争法相似。其优点是[3,5]:(1)成熟的单克隆抗体技术或独特的磁性微粒子技术,保证了反应的高特异性;(2)检测范围宽,具有良好的稀释线性;(3)试剂稳定性好,不需酶促反应,有效期可长达半年;(4)操作简便,分析过程采用全自动化,减少了人工操作误差,重复性好;(5)试剂及标本均采用无吸附材料,故相互间的交叉污染率低,干扰因素少;(6)真正的随机连续检测,样本随到随测,具有急诊优先插入功能。因此全自动化学发光免疫分析系统是目前检测甲状腺激素等指标的较好方法。
【参考文献】
[1] 陶义训.免疫学和免疫学检验[M].第1版.北京:人民卫生出版社,1997:174.
[2] 叶任高,陆再英.内科学[M].第6版.北京:人民卫生出版社,2004:725.
[3] 罗炜,王慧,陈柏铭.化学发光免疫法与放射免疫法测定血清AFP的比较[J].上海医学检验杂志,2000,15(3):149.
1 环境科学专业课程设置概况
环境科学本科专业人才培养规范中提出:“环境科学专业人才的培养要体现知识、能力、素质协调发展的原则。通过设计适当的知识体系为载体来进行能力培养和素质教育,强化知识结构的设计与建设,使每一个知识模块构成一个适当的训练系统,合理区分专业共性知识要求和特色培养要求,满足“厚基础、宽口径、重能力、有特色”的专业人才培养要求。”依据规范对知识领域的要求,并结合本专业的办学特色,我校环境科学专业设置专业课26门,其中必修课14门,选修课12门。具体课程主要包括:环境学概论、环境生态学、环境化学、环境微生物、环境监测、环境经济学、环境毒理学、环境土壤学、水污染控制工程、大气污染控制工程、固体废弃物处理等。为了有效地将各门专业课程整合在一起,培养专业性强、创新能力强、实践性强的人才,本专业教师设计了以废纸回收实践教育活动为平台的教学方法,并将其贯穿于学生的培养方案中。
2 废纸回收活动的实施思路
当今世界,废纸回收利用在减少污染、改善环境、节约资源与能源方面产生了巨大的经济效益与环境效益,是实现造纸工业可持续发展以及社会可持续发展的一个重要的方面。据专家测算:回收1吨废纸能生产0.8吨再生纸,相当于节约4m3木材,400千克煤,400度电,300吨水,300kg化工原料,并减少75%的空气污染,35%的水污染,节省3m3的垃圾填埋场空间。世界上发达国家的废纸回收率高达70%左右,而中国的废纸回收率仅为37.9%,造纸原料主要依赖于原木和进口废纸,利用原木造浆的传统造纸消耗木材、破坏生态,并造成严重的污染。③有媒体报道海南省中部山区过去10年间因为大面积种植浆纸人工林等开发行为,毁掉大片热带雨林。利用本省各地区废纸回收再造纸是平衡生态与经济的有力杠杆。
废纸回收实践教育活动分为四个阶段:(1)活动的宣传。教师以海南省为例讲解活动的目的和要求,协助学生以海南医学院校园办公区为对象,启动以“第二次生命”为主题废纸回收实践活动;(2)活动的实施。①确定回收对象和回收方式。回收对象主要是教师办公区废纸,把教师办公区划分成块,每块都有固定小组负责,回收频次确定为每月一次,回收方式以上门服务为主。②对回收废纸按照相关标准进行科学分类,保密文件需要特殊处理;③规划废纸的临时放置地点,并与清洁服务承包商或垃圾收集商联系,达到废纸被回用再造纸的目的。④指导学生对取得的阶段性回收量进行经济核算,衡量废纸回收活动的经济效益和环境效益。在实践活动进行的过程中,教师指导学生查阅相关资料,定期向老师作阶段性汇报,在学生正式进入专业课程学习后,专业课教师对实践活动中涉及到的知识点进行深入讲解,学生运用专业知识解决实践活动中遇到的问题。(3)成果验收。专业教师对学生的专业素质能力进行考核测评。(4)活动的延展性。从环保意识方面希望把废纸回收这活动从校园区推广到全省乃至全国,号召人人都要具有环保理念,倡议造纸厂利用废纸回收再造纸;从教学方面,不断完善修正该实践活动的培养方案,以求得到推广。
3 教学实践活动对学生素质的培养
环境科学是一门综合性的学科,涉及面广,专业课程门类较多,看似很散,难以掌握,其实各门课程之间有着密切的联系。本专业教师正是抓住这个特点,利用废纸回收实践教育活动的开展,渗透相关课程群内容(见图1),理论与实践的反复结合过程使学生既掌握了扎实的理论知识,又强化了专业技能。
3.1 激发学习兴趣,培养自主学习能力
在国家高度重视可持续发展、环境保护事业的大背景下,越来越多的学生在高考时填报了环境科学专业,但具体环境科学专业的研究内容、研究意义和就业方向学生一无所知。一般本科学生前两年都在修公共课程,真正与专业课、专业课教师的接触是从大三开始,对专业的理解也是从这时开始,接触的滞后性造成了学生专业基础的薄弱性。我校本专业学生从本科入学起参与废纸回收实践教育活动,逐渐了解环境科学专业的研究内容以及环保人的使命,通过对阶段性成果进行经济核算,用数据来说明实践活动带来的巨大效益,学生更有成就感,极大地调动了同学们的专业热情。教师对各组学生取得的实践成果与小论文撰写成果进行评比打分,学生的积极性不断提高,变被动学习为主动学习。
图1 废纸回收实践教学思路构架图
3.2 整合专业课程,夯实专业基础
环境类专业毕业生大多反映在校学习的专业科目多而杂,但又不深入,导致专业基本功不扎实。废纸回收实践教育活动将多门专业课程整合在一起,帮助学生奠定扎实的专业基本功。以海南省某造纸厂为例,造纸原材料为桉树,桉树具有生长快、轮伐期短、技术性强、病虫害少、经济效益好等优点,受到各大造纸厂的亲睐,砍伐其它作物大面积种植桉树。但是桉树有“抽水机”、“抽肥机”、“霸王树”之称,破坏了土壤结构,影响其他物种生存,导致生物多样性降低,生物食物链断裂,生态环境遭到颠覆性的破坏。这部分内容涉及到环境土壤学、环境生态学、环境微生物学、环境生物学等课程。鉴于选择原木造纸对生态的破坏,国外回收废纸再造纸的技术相对成熟,采用回收废纸再造纸所产生的经济效益和环境效益的计算方法在环境经济学课程中可以找到答案。对不同的造纸工艺和不同产品纸对环境的影响,可以通过环境影响评价课程中生命周期 分析法进行评价。造纸工业污染问题一直是环境保护关注的热点,造纸工业生产过程产生的污染物主要有水体污染物、大气污染物和固体废渣三大类型,污染物的检测方法在环境监测课程中有具体说明,以及污染物直接排放对人类健康的影响涉及到环境与健康、环境毒理学等课程。为了减轻造纸工业对环境造成的严重污染,既要从源头上防止污染的发生,又要辅以末端治理技术,从“防”和“治”两方面着手可以较好地解决造纸工业的污染问题。“防”就是要采用清洁生产技术,走循环经济发展的道路,属于清洁生产原理课程的范畴;“治”就是要采取水、气、固相应的污染控制技术,处理达标后排放。涉及到大气污染控制工程、水污染控制工程、固体废弃物处理等课程的知识点。通过废纸回收教学实践活动,把多门专业课程联系起来,使学生更加系统地学习,专业基础更加稳固。
3.3 以科研为导向,培养创新能力
环境问题越来越严重,越来越复杂,环保方面的技术也在迅速发展。固定的教学内容、传统的教学模式已难以满足企业对创新型环境科学专业人才的需求。废纸回收实践教育活动中,学生扮演更加主动的角色,教师提供思路和方向,学生总结掌握了国内外最新的废纸回收率数据以及采用的污染控制工艺等等,可以撰写相关内容的文献综述。学生在活动开展过程中已经对相关专业课程有所了解,在正式的学习过程中摆脱了普通的填鸭式教育,更善于发现、提出新的问题,逐渐学会用科研的思维去看待专业问题,对于有创造的观点或方案的学生可以鼓励其参加大学生创新课题或挑战杯等活动,学生的创新能力不断提高,教学方法实施以来,学生申请国家级和校级创新创业训练项目13项,暑期“三下乡”社会实践项目2项,获得国家级奖项2项,省级奖项4项,校级奖项1项。
4 结束语
环境科学专业在海南医学院还是新办专业,专业的建设与发展任重道远,本专业教师一直致力于探索培养适应社会需要人才的方法,相信以废纸回收综合性实践教育活动为平台,可以培养出更多高素质的创新型人才。
基金资助:海南医学院教育科学研究专项课题(HYZX 201104)
关键词 英语词汇 单词记忆 检测方法
0 前言
单词是英语学习的基础,记忆单词对英语学习尤为重要。学生进入高中后,英语词汇猛增,记忆单词将占去学生很大一部分时间。如果方法不当,不仅记忆效果差,还会极大地打击学生学习英语的兴趣和自信心。①因此有一套良好的记忆和检测英语单词的方法尤为重要。为了解决这个难题,在几年的教学探索和实践中,作者摸索出了一套高效的单词记忆和检测的方法,总结如下。
1 单词记忆法
1.1 朗读、识记、拼写法
英语单词是由26个字母组成,如同汉语拼音,大多数的单词是可以听音写出来的,不规则的单词很少,只要会准确地读出英语字母和音标,很多陌生的单词也可以照着读音写出来。所以在记单词时,只要你记住了单词的发音,就可以拼出80%的单词,这样既背会了单词,又练会了单词的发音,记单词的同时,也为练一口流利而纯正的英语打下了良好的基础。在学习的过程中,练习正确的发音尤为重要。首先,要熟练掌握二十六个字母及其字母组合的正确发音。其次,弄清他们元音和辅音的区别,具体做法如让学生知道a﹑e﹑i﹑o﹑u在开音节和闭音节中的不同发音;在平时的课堂上渗透辅音字母b﹑d﹑f﹑m﹑h﹑k等的发音和一些常见字母组合如:ea﹑oo﹑al﹑ay的发音。例如cape/ cap/said/say/ loud /lord /shout/short等。教师可以先让学生自己比较和探究上述单词的拼写与发音之间的关系,然后引导学生简单归纳,帮助学生理解、掌握和运用英语发音的规律。为自主学习单词和扩展词汇打下良好的基础。我每次教完词汇后,总是让学生大声地把它们朗读出来,在朗读的同时,用手指在空中把所读的字母划出来,如果不是按照读音规则拼写的部分,再停下来,特别地关注一下那些特殊的部分。
1.2 举一反三法
在语言交流中,最基本的语言单位是句子而不是单词。只有学以致用,真正将所学单词用于日常生活、学习、工作环境中,才能算真正掌握了单词。记住了单词在某一语境中的用法,不但可以在遇到此情况时可熟练地运用此单词,还可以举一反三。比如你在阅读中看到这样的句子:The interest on the load is 16% per year,贷款年利息为16%。该句中interest为利息,由此再联想我们学过的单词interest的其他用法:如The older ones soon lost interest(兴趣)in the game。那些年纪大的很快对这游戏失去了兴趣; it will interest you将会让你感兴趣;places of interest(名胜); be in your interest(对你有利); be interested in(对什么感兴趣)等。通过归纳,举一反三,学生就会很快掌握同义词汇在不同语境中的用法,达到灵活运用的效果。
1.3 词根、前缀、后缀记忆法
很多单词是有规律可循的,动词+er/ or/ ant/ ent/ ist构成名词如:teacher, actor, assistant, typist; 名词或形容+ist/ ian 变成名词如:musician, specialist, photographer,electrician;形容词加前缀ir/im/ dis等变成相应的反义词如: irregular, impossible, disable等等,通过归纳总结,找到规律,就能轻而易举地获得很多词汇。其次,争取一串串地背单词,看见一个,就能想起一串。比如,同义的、反义的、形似的、同类的、同根的单词放在一块儿记。如表示“喜爱”的动词like, love, enjoy, care for, care about ,be fond of, be keen to 等放在一起,看它们在意义和用法上有什么区别,这样就不至于把它们混淆。再比如在书面表达中常用来表示上下文逻辑关系的词语大家不妨采取归类记忆法。表示并列关系的有:and, as well, as well as, besides等;表示转折关系的:but, however, yet等;表示递进关系的:especially, what's more, worse still, to make matters more等。
1.4 活学活用记忆法
阅读就是通过增加阅读量,提高阅读速度,掌握一定的阅读技巧。即在地道的语言材料和真实的语言情景中记忆、感知词汇,做到词不离句,句不离文,把词汇的记忆和运用巧妙地融为一体。②开始的时候,太难的文章肯定不适合基础差的同学,所以先可以看一些“书虫”(高中水平)一类的改编小说,练练感觉。当单词量积累到一定程度以后,就可以正式开始提高阅读水平了。大家都知道:读书破万卷,下笔如有神。 如果你阅读了很多文章,作文不会低分的。在背作文的同时,可以用一个小本子,把一些很精彩的词和句子抄下来,经常看看,并举一反三。同样一个词和句子,用在不同的地方,会有不同的效果,同时要对自己有信心,相信自己,付诸努力,坚持下来,你一定能行。
2 单词记忆检测方法
掌握了以上方法,加上勤于用功,平时做到多读、多听、多写,记忆英语单词就会变得轻松有趣,就会在有限的时间内,提高学习效率,减轻学习英语的负担,达到事半功倍的效果。只要灵活运用, 有信心,能坚持,就可以化难为易记好英语单词。
当我们有了良好的记忆单词的方法和手段,那么最有效的检验方式应该是什么呢?大多数教师以听写英语单词作为最常用的检验方式,他们读出汉语意思,让学生写出相应的英语,这样的检验效果明显、直接,但是误导了学生记单词的目的,使学生花大量的时间在记忆单词拼写上,而忽略了它的意思和用法。其实按照高考考纲的要求,高中阶段需要学生熟记书写出来的单词并不是很多,只有3500词需要认识和使用,要学生写出来的只是作文所需要的词汇,所以大部分的单词只需要学生认识就可以了。我们对词汇的检验,完全可以多样性,以认知为主,尽可能大地扩大学生的认知量。
我们可以从听力、认知、拼写三个方面同时检验学生记忆单词的情况。每次教完词汇后,我总是让学生大声地把它们朗读出来,在朗读的同时,用手指在空中把所读的字母划出来, 只停下来去特别地关注一下那些特殊的部分。所以一个单元的单词学生只需要读上两三遍就可以记住90%以上了。然后,在检测他们记忆效果时,以英文的形式呈现给他们,我读出正确的单词,学生听音,然后拼写,再写上单词的意思。简单的听写,达到了听、写、认的三重效果。让学生在简单的训练中,收获成功的喜悦,让单词记忆和拼写不再枯燥无味。
由于血站的标本量大,在做ABO血型鉴定时,传统的玻片法费时费力、结果不易观测,容易出现差错事故。为此,我们引进了一套自动化设备,用微板法做ABO血型正、反定型,不仅实现了检测的标准化、自动化、实验结果的网上传输、实验过程的可追踪性,还实现了凝集实验的数字化结果判读。我们将微板法ABO血型正、反定型与传统的玻片法进行了比较,现报告如下。
1 材料
1.1 仪器 深圳爱康自动血型仪;96孔硬质U形微板(丹麦Nunc公司)。
1.2 试剂 标准血清有长春生物制品研究所博德公司,自制3~5%试剂红细胞(按第2版《输血技术学》[1]制备)
1.3 试验标本的选择 选择已知ABO血型的标本,作为选择试验最佳条件的标本;无偿献血者血液标本(EDTANa2抗凝) 8422份作为微板法与玻片法方法学比较研究的标本;本站采集的无偿献血者血液标本作为常规试验的标本。
2 方法
2.1 自动检测法
2.1.1 正反定型有爱康血型仪进行自动处理,观察结果。
2.2 玻片法
2.2.1 正定型 取特制白瓷板(有10排、10列凹形圆反应孔),分别滴加抗A、抗B标准血清各1滴,在抗A、抗B孔中分别滴加受检者3%~5%红细胞悬液1滴。
2.2.2 反定型 取特制白瓷板,分别滴加A型红细胞及B型红细胞各1滴,在A型红细胞、B型红细胞孔中分别滴加受检者血清1滴。
加完样品及试剂后,将白瓷板不断轻轻转动,血清与细胞充分混匀,观察凝集结果。玻片法以肉眼观察来判断结果。
3 结果
3.1 两种方法检测结果(见表1)
3.2 无偿献血者血液标本检测结果
3.2.1 准确率 采用选择的最佳实验参数,用微板法对本站2011年4月至6月的8422份无偿献血者血液标本进行ABO血型检测,一次判断符合率均达到99.9%以上。
3.2.2 灵敏度 对8422份无偿献血者血液标本进行凝集效果观察,OD值在2.500~5.000的占95.58%,在1.500~2.499的占3.70%,1.000~1.499的占0.62%,0.600~0.999的占0.10%。
3.2.3 凝集强度 微板法OD值>1.500时,肉眼观察均可达到2+以上,而且细胞凝块集中于孔底;微板法OD值
4 讨论
自动检测法具有以下优点[2]:血液标本、标准血清、试剂红细胞等液体的加注均由全自动加样仪完成,孵育、离心、悬浮等实验过程也由仪器来完成,实现了血型鉴定的自动化;孵育、离心、悬浮等实验过程按优化的最佳实验参数制定标准操作规程(SOP),且全自动加样仪加样精度高,保证了实验结果的重复性,实现了血型检测的标准化;微板法实现了血型检测的数字化结果判读,血型结果有原始影像记录,便于查询和追溯,并且可通过局域网自动实验结果;微板法还具有标本处理量大、速度快、试剂用量小、不易出现人为差错事故等优点。
自动检测法采用爱康全自动血型仪处理,血液标本的条码识别、细胞悬液的配制、标准血清加注等处理过程,实现了自动化,结果判读及数据保存、传输,一次判读正确率均在99.8%以上,与夏卫[3]、胡继征[4]文献报道的一致。而玻片法需手工操作,速度慢、费时费力、试剂消耗大,且结果不易观测,易出现差错事故,一次判读正确率低于微板法。通过两种方法相比,微板法正、反定型一次判读正确率及凝集强度明显优于玻片法,有效地减少和杜绝血型定型错误,最大限度避免定型错误而危及患者的生命安全,为安全输血提供可靠保障,值得推广。
参 考 文 献
[1]王培华.输血技术学.人民卫生出版社,2002,152.
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