前言:想要写出一篇令人眼前一亮的文章吗?我们特意为您整理了5篇体育教学的学情分析范文,相信会为您的写作带来帮助,发现更多的写作思路和灵感。
一、情景教学的含义和方法
情景教学指的是在课堂教学的过程中,教师将教学内容利用想象、联想等方式进行加工,使之变成形象的、生动的、有情境的活动场景,并利用一定的技巧引导学生进入情景当中,使学生获得一定的情感体验,从而能够深入理解所学的知识,提高技能,并促进学生身心共同发展的教学方法[2]。
情景教学中情景的创设并不是凭空而来的,而是源自社会生活和实践,强调的是生活情境与教学过程一体化。因此,情景的创设应选择贴近学生实际生活的素材,并综合考虑学生的知识积累、生活经验、兴趣爱好及情感需求等,在遵循学生的认识规律基础之上,创设出能够激发学生兴趣的情景,使学生在生动形象、活泼有趣的教学情境中获得愉悦的情感体验,以充分地理解并熟练地掌握基本知识和运动技能。
二、问题能培养学生勤学善思的品质
由于小学生的年龄较小,他们的生活经历和知识的积累也较少,他们的思维容易受到外在因素的影响,因此,小学体育教师应努力为学生创设贴近他们生活实际的情景,使小学生在熟悉的环境下放松身心,并以问题的形式来激发小学生的探究欲望,培养他们勤学善思的优秀品质。同时,由于小学生有着渴望教师关注的心理,小学体育教师应给予学生一定的期待,以调动学生的学习热情,提高小学体育的教学质量。
例如,在立定跳远的教学过程中,教师可先创设一个问题情境,向小学生们提出问题:蚂蚱、青蛙这样的小动物是怎样跳的呢?引导小学生进行思考,并使其能够描述出蚂蚱、青蛙等动物的跳跃动作。通过创设这样一个问题情景,不仅能更引入教学内容,而且能调动学生思考的积极性。小学生在教师创设的这样一个问题情景中不知不觉就发挥自己的想象力和发散思维,积极地进行思考,如人是怎样跳跃的,立定跳远到底是怎么样的呢?从而加深了对立定跳远的印象,更好地达到了立定跳远的教学目标。
三、游戏激发学生参与体育的兴趣
如果学生能对体育运动抱有极大地兴趣,那么这堂体育课通常都能取得极大地成功。这是由于兴趣是激发学生学习热情的最好的催化剂,它能使学生深入到教学内容的学习当中,化被动学习为主动学习,从而提高小学体育课堂教学的质量[3]。基于此,小学体育教师在应用情景教学时应充分结合小学生的兴趣特点,尽力激发学生参与体育运动的兴趣。小学生天然便对游戏有着极大地兴趣,因此体育教师在进行教学设计师应综合考虑小学生的兴趣特点,设计内容丰富,形式多样的游戏情景,使学生能够在轻松愉悦的游戏氛围中掌握体育运动的知识和技能,达到小学体育课堂教学的目的和要求。
例如,在上述立定跳远的教学过程中,教师以问题引导学生理解立定跳远,同时,教师还可以设计一个与立定跳远相关的游戏,比如“青蛙过河”,激发学生的兴趣,使小学生在游戏的情景中熟练掌握立定跳远的技巧。此外,由于小学生对游戏有着天然的热爱,在体育课堂教学结束之后他们通常也会自动自觉地进行这个游戏,这在不知不觉中巩固了立定跳远的技术要领,达到了小学体育课堂教学的要求。
四、竞赛能培养学生的竞争意识和团队精神
竞赛能够促使学生发现自身的优势和不足,激发学生的竞争意识,而良性的竞争环境更能有效地促进学生身心的发展,为他们以后的发展打好基础。因此,在小学体育教学中教师应注重引进竞赛机制,设计内容丰富,充满趣味的竞赛情景,以激发学生的竞争意识,并锻炼学生团队合作的能力。
例如在上述立定跳远的教学过程中,小学体育教师设计了“青蛙过河”这一游戏激发学生的兴趣。此外,教师还可以引进竞赛机制,将学生分成两组,进行组与组之间的竞赛。而在学生熟练掌握了立定跳远的技能之后,体育教师可以组织学生进行立定跳远比赛。教师可预先设置一定的距离,如1.2m,1.3m等,让学生进行比赛,比谁跳的更远。同时还可以进行团队赛,将学生分为两组,比较两组学生的成绩。在这样的竞争机制下,小学生不服输的竞争意识能够得到有效激发,同时也培养了学生兼顾大局,团队合作的精神。
总之,小学体育教师在课堂教学中充分应用情景教学法能够有效地调动学生的学习积极性,提高学生参与体育运动的热情,进而提高小学体育教学的质量。因此,小学体育教师应结合教学内容和要求,善用情景教学,激发小学生体育学习的热情,提高其学习质量,达到体育教学的目的。
参考文献:
[1]武荣华.情景教学在小学体育课堂教学中的应用[J].山西电教,2012,11(15):31.
关键词:小学教学;利用情境;有效提问
中图分类号:G622 文献识别码:A 文章编号:1001-828X(2016)033-000-01
一、合理捕捉,巧妙运用情境
教材精心设计了贴近学生生活的“情境图”,其中蕴含了丰富的教学信息,也存在多种多样的教学问题。只有合理的挖掘“情境图”中的教学资源,才能让“情境图”在教学中发挥重要作用。
1.准确地提取信息。提取信息能力是解决教学问题的基础,也是学生应该具备的基本教学能力之一。小学生的逻辑思维能力正在完善,语言表达能力也有限,因此培养学生认真观察,全面分析,准确提取变得极为重要。
2.注重隐含信息。随着知识学习的深入,隐含的教学信息越来越多。当表面的教学信息不能满足学习的需要的时候,隐含教学信息的提取和利用变得尤为重要。例如,再数学教学中,在二年级下册《租船》这一课的学习中,对情境中“限乘”和“至少”的理解是学习的关键,也是需要教师引导学生理解的教学信息。“限乘4人”是一条隐含的教学信息,是学生第一次接触“限乘”的概念。首先要引导学生明确“限乘4人”就是每条船可以坐1人,2人,3人,4人,但是最多只可以坐4人。为了解决“至少要租几条船”的问题,需要保证每条船坐尽可能多的人,也就是4人。
3.精炼有效信息。教学的学习过程就是解决问题的过程,学习的重要目标之一是要发散教学思维,能够利用多种策略解决实际问题。而小学生往往缺乏生活经验和学习能力,特别是在接触新知识的时候,迁移能力有限。所以,为了促进学生尝试用不同方法解决问题,对信息适当的分析和复习是十分必要的。
二、加强提问的时效性
《教学课程标准》中指出“义务教育阶段教学学习的总体目标要让学生能够增强发现和提出问题的能力、分析和解决问题的能力。”因此,在教学中要重视培养学生的提问意识,鼓励学生细心发现生活和学习中的教学问题,大胆的提出质疑或困惑。其中,根据情境提问就是一种有效的学习方式。
1.直接提出问题。对于信息比较单一,数量较少,只有一个或两个信息的简单情境,学生直接提出问题。而涉及到信息多而杂时,提问的方向只能与本课学习内容相关,这时可以让学生在提取信息之后针对主要学习内容,有限制的鼓励学生提出问题,再探究解决的方法。例如,在数学教学中,三年级上册《需要多少钱》一课学习的两位数乘以一位数,学生提问之前,教师可以明确要提出与乘法有关的教学问题。在这个要求下,学生能够提出“买2个太阳镜需要多少元?”“买3个游泳圈需要多少元?”等乘法问题。而这些问题正是本课的学习重点。可以直接鼓励学生用自己喜欢的方法尝试解决。
2.有针对性的提问。限制学生提出问题的运算法则或是运算步骤的数量,不仅可以直奔教学重点,提高教学效率,而且可以帮助学生更好的学会提问。有时学生提出问题如果直接研究会增加课堂难度,不利于全体共同探究,教师在提问之前可以增加一个限制,这样一来更有指向性,学生的问题也更加准确。同时又对授课内容进行了巩固。
3.明确主要问题。面对教学信息比较多的复杂情境,学生可能很难直接提出与学习内容相关的教学问题。或者是教学信息不明显,提问随意性大。这样的情况如果教师直接提出问题更加符合实际需要。《买文具》是一课学习的主要内容是掌握三步混合运算的运算顺序,如果盲目的提问比较浪费课堂时间,教师可以直接出示淘气买3个计算器和1支钢笔需要多少元的教学问题,让学生在小组合作中探究、掌握本节课的主要内容。为了能更好的培养学生发现问题,提出问题的能力,在练习环节鼓励学生观察淘气提出问题特点,仿照再提出这样的问题,然后列式计算。这样一来,不仅鼓励了学生提出问题,而且教会了学生如何提出有价值的教学问题。
4.重视提问习惯的养成。“良好的开端是成功的一半”,养成良好的学习习惯会让学生受益终生。了解学习重点,发现自己的困惑,带着问题去学习会更有利于{动小学生的学习热情。学生先要观察情境,提取教学信息并进行语言描述,再提问并记录下来,然后尝试列式,判断是否能够解决。最后了解书上的问题和解决方法。发现本课学习的主要内容是除法,进而修正提出的问题。这样经过一段时间的训练,学生的提问能力就会有明显提高。
“一切为了学生,为了学生的一切”,每个学生的学习能力、接受水平都不相同,只有以学生为本的教学才是最好的设计,师生共同参与的学习模式,让所有学生参与其中,提高其学习的主动性和效率。我们尽最大可能地发挥情境图的作用,不断提高学生的学习应用能力,让学生练就一双发现问题的慧眼,成为新一代有知识有创造思维的人。
参考文献:
[1]薛飞.小学语文情境教学设计最优化研究[D].苏州大学,2014.
【关键词】幼师学校;学前教育专业;体育技能;体育知识
近年来,随着我国社会长期稳定,经济持续增长,教育改革不断深化,素质教育全面推进,普通高等幼师学校体育工作更是取得了令人瞩目的成绩。学校体育管理工作更加科学、规范,体育场馆、设施建设逐步完善,体育课程改革全面推到加强,科研水平不断提高。但是,同时也暴露出了一些问题,特别是在国际高等教育大众化思潮席卷全球和国外先进的大学体育发展模式的影响下,更凸现出我国高等学校体育发展还具有广阔的空间。
现在的一些普通高等学校体育课程面临潜在的危机。在一些发达国家,学校教育和学校体育发展程度很高,民族体质水平也很高。在这种情况下,他们有的大学取消了体育必修课,有的仅作为选修课开设。大学体育在世界范围内面临着挑战和危机。
长期以来我国教师教育的目标偏重于培养学科专家型教师,在课程结构上教育专业课比重明显偏低,课程设置过于单一或不合理。一定程度上影响了幼儿园教师的专业化发展。学前体育是学前教育的重要组成部分,直接关系到终身体育观念的形成。目前国内外关于高职的体育课题很多,有专业改革、课程改革、实践教学改革以及关于学前体育专业的体育实践教学方面的,但是针对高等幼儿师范专科学校的体育教育专业的课程方面的研究不是很多。
学前教育越来越受到国家及社会各界的重视和关注,完善学前教育阶段的各项制度,提高我国学前教育阶段的教育质量,成为我国教育中长期发展规划的重要组成部分。提高学前教育阶段的教育质量离不开对学前教育阶段幼儿德智体美劳诸育质量的全面提升幼儿体育关系着幼儿教育的质量,对幼儿的身体成长,心理和智力发展以及社会适应能力提高都起着至关重要的作用。但是,幼儿的年龄、生理、心理等特点限制了幼儿进行体育运动的能力,使幼儿无法科学、有效地进行体育锻炼,这就要求幼儿园教师要运用自身的幼儿体育知识和技能正确引导、组织幼儿开展体育活动,而幼儿教师是否具有高超的体育教学能力和合格的体育教学知识,取决于培养幼儿教师的学校#因此,了解学前教育专业本科生体育教学知识与能力的培养现状,研究其发展对策是非常重要的。
一、学前教育专业学生体育教学知识与能力不足的表现为:
(一)现有教材和课程设置不能满足学生幼儿体育教学的需求
高校学前教育专业课程设置以及教材的完善与水平决定了学前教育专业学生的体育教学知识结构水平。但是,现阶段我国学前教育专业的课程设置和教材安排却不足以达到学前教育专业学生体育教育知识结构培养的要求,特别是以下两个问题最为突出。第一,课程设置缺乏针对性和专业性,虽然我国学前教育专业设立了与专业相关的幼儿体育课程,但这样的课程设置并没有满足学前教育专业学生体育教学知识与能力的培养要求。第二,幼儿体育相关内容的学习时数偏少。
(二)学前教育专业学生所学体育内容缺乏全面性
开设学前教育专业的高校对学前教育专业学生开设的幼儿体育教学内容应该包括幼儿体操动作、幼儿体育游戏、运动器械、幼儿球类活动、运动保健知识、幼儿队列队形等几项。这是幼儿教师应该学习和掌握的内容,它们之间有着内在的逻辑关系。
(三)幼儿体育教学实践教育不够,缺少经验获得,实践是检验真理的唯一标准,只有通过实践才能检验学前教育专业学生的体育教学能力,才能检验高校对学前教育专业学生的培养情况。调查发现,学前教育专业学生的见习时间短,实习时间安排过于靠后集中,实习过程模式化,实践不够深入,实习内容大多以观摩为主,仅学习幼儿园教师的常规,实际动手操作少,学生难以在见习,实习生活中获得丰富的实践经验,不能将自己的所学应用到所教。
(四)学前教育专业培养目标不明确,教学方法落后,培养目标决定着培养内容、培养方式等一系列培养环节。学前教育专业学生作为今后的幼儿教师,其体育教学能力是必不可少的一项教学能力和职业能力。没有明确的培养目标,也就对学前教育专业学生的培养内容、培养方式等培养环节模糊不清,对学生应当有哪些能力、培养学生什么样的知识和技能也不甚了解。
二、对石家庄幼儿师范学校体育教学应该采取的措施建议
(一)合理设置课程,制定科学的教学计划
师范学校体育课程的设置一定要做到实事求是,从实际出发。课程的设置不仅要符合国家有关政策同时也要考虑到学生的个性差异,将体育课程视情况分为选修课、必修课和自修课。这样学生就能根据自己的情况做出选择。要培养学生锻炼意识,体育的目的在于强身健体,因此在教学的过程之中不仅要帮助学生掌握专业的技能,同时还要培养学生的参与意识和运动意识。
(二)灵活运用体育器材
器材的作用绝不是简单地帮助学生进行固定项目的锻炼,教师要根据实际情况使用器材,帮助学生学习技能的同时也要调动学生的学习积极性,培养学生的合作意识和参与意识。
(三)提高教师队伍的素质
体育教学需要教师拥有专业的素质。教师是教学的主体,学生则是学习的主体。教师要注意不断学习不断进步,这样才能够紧跟时代步伐。教学的过程之中要注意不断培养学生的主体意识,让学生主动自发的学习,让学生意识到自己是学习主人翁。体育教学既是对学生生理方面的教学同时也是对学生心理方面的教学,教师要灵活地运用所学的知识,促进学生的全面发展。
(四)帮助学生树立终生学习的意识
体育锻炼应该是贯穿人一生的事情,学生要将师范阶段的体育学习当成一个起点而不是终点。所以教师在教学的时候要根据学生的兴趣爱好教授给学生最感兴趣的体育项目,帮助学生树立起终生锻炼和终身学习的意识。课外锻炼应成为体育教学的延伸部分,教师要鼓励学生积极参加。培养学生对于体育的兴趣,帮助学生培养坚持锻炼的好习惯,最终帮助学生树立终身学习的意识。
作者简介:
关键词:新课程;高中数学;情景问题教学
一、高中数学“情景问题”教学的定义
分析新课程背景下高中数学“情景问题”教学的优势,首先必须了解“情景问题”教学的定义。“情景问题”的定义包括两方面的内容,一是情景,二是问题。情景是指一种课堂中的气氛,新课程改革的背景,需要的不再是老师之于学生的传统化的传道授业,而是师生之间的一种相互交流,因此需要一种更加和谐的课堂气氛优
化这一种沟通交流的需要;问题是指在创造一定的课堂气氛之下,老师通过设计一定的情景,提出一定的问题来激发学生的求知欲,并产生解决问题的欲望,由此达到更加人性化的教学过程。结合这两方面的内容,高中数学的“情景问题”教学方法加入现实的背景,提供现实背景下相关的资源和材料,来丰富整个教学过程。
二、高中学生“情景问题”教学的理论依据
高中数学的学习过程存在难点,主要原因是高中数学的学习更加的抽象化和具有一定的逻辑性,对于思维的要求比较高,学生思维的培训尚未达到一定的高度,所以这对于教师本身的教学也会造成一定的困扰。引进“情景问题”教学是为了化抽象为具体,同时更加的生动化、活跃化,改变传统教学过程中引进概念、定义,进而通过一些例题来进一步解析。
新课程改革不仅要求进一步把握学生个体之间的差异性,同时也从理论和实际的进一步结合来强化教学本身。高中数学的新课程改革需要引入实际背景下的数学教学内容,化抽象为具体
能够让学生更易于接受,并以一种更加强烈的求知欲来参与数学学习。
三、高中数学“情景问题”教学的优势
高中数学引用“情景问题”的教学方法有着现实的意义,结合“情景问题”教学的定义和理论依据,其教学优势主要包括这样
几点:
其一,高中数学“情景问题”教学更加灵活化和新颖化,改变传统板书和例题结合的教学方式,在这一种新形式下的“情景问题”教学更好地让我们看到老师作为课堂中的主体,发挥了老师的创
新性和主观能动性,而学生作为参与其中的主体,也更能够接受,不仅仅更加容易接受数学知识,也能掌握学习方法和技能,以更加具有主动性的方式参与进来,更好地激发了学生学习的兴趣;其二,高中数学“情景问题”教学能够更好地发掘学生的潜能。相比较传统高中数学单纯以考试为目的,“情景问题”教学更实用化。高中数学的学习本身就应该更多地发挥自我的学习能力,探索能力,才能更加熟练地掌握和应用知识,而“情景问题”教学可以说是一种更加人性化的教学。其三,高中数学“情景问题”教学能够更好地增加师生之间的互动,从而培养相互感情。相比较传统的教学方式,学生一直处于一个被动的姿态,被动的接受知识会使学生存在一种抵触心理,不利于知识的学习和接受,而“情景问题”教学则是一种教学相长的学习,以一种更加平等的姿态来相互学习,从中获得启发和收益,让学生以一种更加主动的姿态来学习更能让学生愿
意学习,学会学习,同时可以增加师生之间的相互交流沟通,培养相互的感情。
基于新课程背景的高中数学“情景问题”教学的优势,我们看到这一种创新化的教学方式有着现实的意义,如何把握优势,结合新时代的需要来进一步优化,或许是我们要继续思考的问题。
参考文献:
【关键词】 无血清培养基 免疫 细胞培养 细胞因子 肿瘤
0 引言
CIK细胞(Cytokineinduced killer,CIK)是将人外周血单个核细胞,在体外用多种细胞因子(如IFNγ、IL2、IL1及OKT3等)共同培养一段时间后获得的一群异质细胞。具有极强的增殖能力及杀伤肿瘤细胞的能力。Critzapis等[1]报道,CIK细胞分泌多种细胞因子进一步提高免疫效应细胞的细胞毒作用从而杀伤肿瘤细胞。治疗所需的CIK细胞在体外培养时所用的条件对细胞的活性有很大影响。现在常用于细胞培养的完全培养基,因含有人AB血清,虽经HBV、HCV及HIV的检测,但仍有可能传播其他疾病,安全性低;并且存在批次差异、不宜质控,质量不能保证。无血清培养基则可达到生物洁净要求,成分明确,质量稳定,便于质控,克服了人AB血清的缺点,能减少病人意外感染的机会,对于免疫治疗的推广应用有重要意义。为此,我们比较了无血清培养基(AIMV)与完全培养基(含10%胎牛血清RPMI 1640)培养CIK细胞分泌细胞因子水平。
1 材料与方法
1.1 材料
健康足月产胎儿脐带静脉血50ml(枸橼酸钠抗凝),产妇各项生化指标检测正常。RPMI1640培养基、淋巴细胞分离液和无血清培养基购自GIBCO公司,细胞因子购自Bioscience公司, 流式试剂CD45FITC/CD4PE/CD8ECD/CD3PC5、CD3FITC CD16+CD56PE和PI染液购自BeckmanColuter公司,胎牛血清购自美国Hyclone公司。
1.2 方法
1.2.1 细胞培养
脐血用淋巴细胞分离液作密度梯度2500r/min离心30min分离的外周血单个核细胞, 分别用完全培养基(RPMI 1640,含10%胎牛血清,100μg/ml链霉素,100U/ml青霉素)和无血清培养基调整细胞数为1×106个/ml,接种于24孔培养板,930μl/孔。第1天加入rhIFNγ 1 000u/ml,培养24h后加入rhIL2 300u/ml、rhIL1 100u/ml及OKT 350ng/ml继续培养,每隔4d更换培养基,调细胞数为1×106个/ml,补加rhIL2 300u/ml,每8d在补加rhIL2的同时补加OKT 350ng/ml。YTMLC、GLC和A549用含10%的胎牛血清、100u/ml青霉素、100μg/ml链霉素的RPMI 1640常规培养。设不加细胞因子的CBMNCs培养作为对照。
1.2.2 细胞表型分析
于培养的第0、4、8、10、12、14、17、21d对以上各组效应细胞进行分析,每组每次测4个复孔。
1.2.3 细胞增殖能力测定
于培养的第0、4、8、10、12、14、17、21d分别取细胞用台盼蓝拒染法计数所培养的活细胞浓度,根据流式检测的CIK的比例,计量液量,推算CIK细胞总数。
1.2.4 CIK细胞分泌IL2、IFNγ、TNFα细胞因子水平测定
于培养的第0、4、8、10、12、14、17、21d分别取细胞,充分洗涤,调整细胞浓度为2×106/ml培养24h后,收集上清,用ELISA法定量测定细胞培养上清中IL2、IFNγ、TNFα,设4个平行孔。
2 结果
2.1 AIMV与完全培养基培养CIK细胞增殖能力的比较
实验表明,AIMV培养细胞较完全培养基培养细胞增殖迟缓。完全培养基增殖高峰期在第12d,增殖平台为第10~12d,最高增殖倍数为638.4倍;而AIMV培养基增殖高峰期在第14d,增殖平台为第14~17d,最高增殖倍数为678.7倍。虽然AIMV培养细胞较完全培养基培养细胞增殖迟缓,但其增殖平台期较长,增殖倍数较完全培养基高,见图1。
图1 AIMV与完全培养基培养CIK细胞增殖能力
2.2 AIMV与完全培养基培养细胞表型比较
实验结果表明,两种培养基培养的细胞CD3+、CD8+、CD3+CD56+细胞所占百分比逐渐增多,CD3+CD56+细胞在AIMV培养基中,增长高峰在14~17d,所占相对百分率由(0.21±0.04)上升为(31.53±1.65),增长了150.14倍,完全培养基增长高峰在12~14d,所占相对百分率由(0.21±0.04)上升为(30.90±2.28),增长了147.14倍。对照组CBMNCs培养体系中未出现明显的细胞表型转化,各种细胞成分均呈递减趋势,见表1、图2。
2.3 AIMV与完全培养基培养的CIK细胞分泌细胞因子水平
2.3.1 IL2水平
AIMV与完全培养基培养的CIK细胞均分泌IL12,从第4d分泌量均稳定升高,都于12d达到高峰,第14d略有下降为,以后逐渐下降。但AIMV培养基第12d的IL2水平(222.525±19.889)pg/ml明显高于完全培养基培养组(189.075±6.343)pg/ml,且下降水平也慢于CM组,见图3。
A:培养前;B:完全培养基培养后;C:AIMV培养基后表1 AIMV与完全培养基培养细胞不同时间的表型变化
2.3.2 IFNγ水平
AIMV与完全培养基培养的CIK细胞均分泌IFNγ,在第4d IFNγ水平开始升高,第14~17d分泌量增大,完全培养基培养组第17d达到高峰为(246.854±4.758) pg/ml,而AIMV组14d达到高峰(227.88±3.048)pg/ml,高峰期后均迅速下降,见图4。
2.3.3 TNFα水平
AIMV与完全培养基诱导培养的CIK细胞均分泌TNFα,第4~17dTNFα水平均平稳升高,完全培养基组第17d达到高峰为(247.032±9.117) pg/ml,第21d略有下降为(186.953±3.815)pg/ml,而AIMV组14d达到高峰为(222.53±8.965)pg/ml,之后TNFα水平开始下降,见图5。
3 讨论
CIK生物免疫治疗已作为肿瘤综合治疗中的一种重要手段,能清除恶性肿瘤患者术后、放化疗后微小残留病灶及调节患者的免疫能力。但现在用于CIK扩增培养的培养基一般为AB血清培养基,但人AB血清存在安全性低,不宜质控等缺点,无血清培养基正得到越来越广泛的应用。多数研究表明,无血清培养基可代替含血清的完全培养基,二者所得培养物的数目和功能相当[24];但也有不同的观点,认为应用无血清培养基所得细胞功能受到损害[5,6]。无血清培养基AIMV是美国Gibco公司专为体外培养淋巴细胞设计的产品,可用于临床试验。因为人AB血清存在个体差异、质量不稳定等诸多的不确定因素,因而我们选择美国Gibco公司的胎牛血清配制完全培养基作为标准对照,与无血清培养基AIMV作对比,探讨无血清培养基代替完全培养基的可行性。
我们从细胞增殖能力、细胞表型分析及体外CIK细胞分泌的细胞因子等几个方面进行比较。在细胞增殖能力方面,虽然AIMV培养基培养的CIK细胞较完全培养基培养细胞增殖迟缓,完全培养基增殖高峰期在第12天,增殖平台为第10~12天,而AIMV培养基增殖高峰期在第14天,增殖平台为第14~17天,但AIMV培养基培养的CIK细胞增殖平台期较长,增殖倍数(678.7倍)较完全培养基(638.4倍)高。这说明无血清培养基支持细胞增殖能力的更为稳定可靠,也提示使用不同的培养基在回输时间上应有所区别。在两种培养基培养单个核细胞诱导增殖的过程中,各细胞表型虽在培养过程中有一定的差异,但在增殖高峰期无明显差别。
CIK细胞具有较强的杀瘤活性,其作用可能与其在增殖过程中能分泌某些细胞因子有关,其主要效应细胞为CD3+CD56+细胞,并出现大量增殖,Lopez等[7]发现CD56+细胞能高表达IFNγ和TNFα,Hoyle等[8]用FACS检测到CIK细胞能表达IL2、IFNγ及TNFα,这与我们的研究结果:CIK在体外诱导培养过程中能分泌IL2、IFNγ、TNFα一致。细胞因子在抗肿瘤的网络调控机制非常复杂,IL2、IFNγ、TNFα在体内外抗肿瘤的过程起着重要的抗肿瘤及调节机体免疫功能的作用。分泌IL2,从第4天分泌量均稳定升高,都于12天达到高峰,以后逐渐下降。但AIMV培养基第12天的IL2水平(222.525±19.889)pg/ml明显高于完全培养基组(189.075±6.343)pg/ml,下降水平也慢于CM组;IFNγ水平在第4天均开始升高,第14 ~17天分泌量增大,完全培养基组第17天达到高峰为(246.854±4.758) pg/ml,而AIMV组14天达到高峰(227.88±3.048)pg/ml;而TNFα,第4~17天TNFα水平均平稳升高,完全培养基组第17天达到高峰为(247.032±9.117) pg/ml,而AIMV组14天达到高峰为(222.53±8.965)pg/ml。可见,无论是AIMV培养基还是完全培养基其分泌细胞因子的趋势是一致的,只是分泌IFNγ、TNFα水平AIMV培养基(14天)较全培养基(17天)早,但分泌水平无明显差别(P>0.05)。AIMV培养基分泌细胞因子高峰与CIK效应细胞CD3+CD56+细胞增殖高峰一致(14天),因CIK细胞回输时间最好应为在CIK细胞增殖高峰及细胞因子分泌高峰时,这有利于发挥其最佳疗效,从这方面考虑,AIMV培养基优于全培养基。
我们的实验表明,无血清培养基成分明确,来源稳定,功能可靠,易于质控,有利于保障患者治疗的安全。可完全替代完全培养基,避免不必要的医疗纠纷,因而在生物治疗中有巨大的优势和广阔的应用前景。
参考文献
[1] Critzapis A D, Dimitroulopoulos D, Paraskevas E, et al. Large scale expansion of CD3+CD56+ lymphocytes capable of lying autologous tumor cells with cytokinerich supernatants\[J\]. Cancer Immunol Immunother,2002,51(8):440448.
[2]Lefebvre P, Winter J N, Kahn L E, et al. Megakaryocyte ex vivo expansion potential of three hematopoietic sources in serum and serumfree medium \[J\]. J Hematother,1999,8(2):199208.
[3]Bulter M, Burgener A, Patrick M, et al .Application of a serumfree medium for the growth of Vero cells and the production of reovirus\[J\].Biotechnol Prog,2000,16(5):854858.
[4]Kambe N, Kambe M, Chang HW, et al. An improved proved procedure for the development of human mast cells from dispersed fetal liver cells in serumfree culture medium \[J\]. J Immunol Methods, 2000,240(12):101110.
[5]Sekhar M, Yu JM, Soma T, et al. Murine longterm repopulating ability is compromised by ex vivo culture in serumfree medium despite preservation of committed progenitors\[J\]. J He matother, 1997,6(6):543549.
[6]Slunt JB, Taketomi EA, PlattsMills TA, et al. Human Tcell responses to Trichopyton tonsurans: Inhibition using the serum free medium Aim V\[J\]. Clin Exp Allergy, 1997,27(10):11841192.