中医骨伤科研究方向
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中医骨伤科研究方向范文第1篇
[关键词] 津沽推拿；学术流派；源流
[中图分类号] R244 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）11（c）-0120-03
Investigation on the origin of academic schools of "Jin-Gu massage"
DONG Hua WANG Jingui
Department of Massage， the First Affiliated Hospital of Tianjin University of TCM， Tianjin 300193， China
[Abstract] Jin-Gu massage is burgeoning massage innovative schools in Tianjin， but its theoretical basis stems from the massage innovative theory of massage masters Hu Xiuzhang， Li Molin and orthopedics masters Ye Xixian combining with professor Wang Jingui. This paper aims at analyzing and discussing the characteristics of Jin-Gu massage and its two important research directions：massage in the treatment of soft tissue injury disease and massage in the treatment of functional medical diseases by discussing the origin of Jin-Gu massage， so as to further enrich the academic connotation of Jin-Gu massage， and expand its influence.
[Key words] Jin-Gu massage； Academic schools； Origin
王金贵教授将自己在推拿专业领域多年积累的临床与科研经验梳理后，融合胡秀璋、李墨林、叶希贤三位天津推拿名家的特色手法与理论精髓，整体出一套具有天津地域特色的、疗效肯定的推拿治疗体系——“津沽推拿”创新流派。虽然名为创新流派，实际上是将天津地区特有的推拿名家经验加以继承、创新，藉此规范了推拿诊疗过程，提高了治疗效果，并极大地丰富了各流派原有的疾病谱，提高了推拿专业在天津地区乃至全国的生命力。
1 津沽推拿历史源流
天津是中国北方第二大城市，毗邻北京，因漕运而兴起，取“天子津渡”之意而得天子赐名[1]。“津”、“沽”均为天津的别名，既可单用，又可合称。清末民初直至解放初期，天津因其独特的地理位置，一直在政治舞台上扮演着重要角色，各界精英也随之云集至此，也因此促进了天津地区各行业的飞速发展。推拿因其独特的手法治疗体系与绿色无副作用的治疗理念受到众多患者的欢迎。众多推拿界的流派创始人纷纷留驻天津发展，为天津后来形成多个推拿流派奠定了人文基础。
1.1 胡秀璋腹部推拿
胡秀璋老先生先后跟师于安纯如、石汉卿两位名家门下，分别学习腹部推拿和外伤推拿。在津行医数十载，运用手法治疗内、外、妇、儿各科疾病，效果显著，并留下《腹部推拿学简编》、《推拿学讲义》等著作。胡老腹部推拿的特点[2-3]：①以脏腑与经络的关系为基础并善加利用，特别强调冲脉调理周身气血（即腹部推拿治疗全身疾病的理论源泉）的生理功能；②胡秀璋腹部推拿的独到之处——分层导疗理念，将腹部推拿理论化、系统化；③强调推拿功法的习练，指出医者只有做到了“心、意、气、力”四者合一，方能以自身的正气攻伐患者邪气；④胡秀璋认为只有规范使用手法才能取得应有的疗效，同时保护医者自身健康，是推拿手法规范化的先驱。胡秀璋的推拿理论基础丰厚，充分运用藏象理论，讲究调控本脏以改变相应系统的功能，因此在功能性内科病治疗上有着深厚的潜力可以挖掘。
1.2 李墨林按摩疗法
李墨林老先生擅长以手法治疗软质损伤类疾患。李墨林自幼随父研习正骨按摩技术，后又受业于少林。目前留世的李墨林著作有《按摩》、《李墨林按摩手法》等。李墨林按摩疗法的特点是：①重视经络腧穴的治疗作用，特别是经穴在舒筋通络、活血散瘀、麻醉止痛方面的功效；②对指针（又称穴位指压法）手法运用的淋漓尽致，并将配穴与现代解剖相结合，取得事半功倍之疗效；③重视手法补泻的灵活运用，在单次操作及不同的治疗阶段适时调整手法力道。
1.3 叶希贤推拿手法
叶希贤老先生先师从屈连海学习正骨，后至国医学馆学习中医。叶希贤在伤科疾病治疗领域颇有建树，凭借其在骨伤科方面特有的治疗手法，获得了多位国家首脑的肯定，赢得多项国家奖励和荣誉。他撰写的《中医按摩治疗肩凝症十种手法论述》、《中医按摩治疗腰椎间盘脱出症十种手法论述》、《中医正骨讲义》等著作至今作为中医骨伤科的重要学习资料而被广泛传播。叶希贤治疗伤科疾病的特点[4-5]：①重视药物在伤科疾病中的治疗作用，特别是与手法的协同作用；②提出伤筋治疗重在顺理；③总结提出了包括治疗“九步按摩手法”“十步手法”等伤科手法治疗体系用于肩周炎和腰椎间盘突出症的治疗，在伤科疾病治疗中具有重要的指导作用。
三大推拿流派代表了天津地区近代的推拿发展水平，在当时均属于全国领先水平。随着医疗技术的发展，三大推拿流派都显现出了一定的缺陷。如胡秀璋腹部推拿原有适应证逐步被现代医学所取代，生命力正逐渐减弱。李墨林按摩疗法强调通过腧穴、经络的调节，放松关节和软组织，过度依赖自行恢复而错过了治疗的最佳时期。叶希贤正骨手法强调理筋整复，纠正解剖位置的异常，但按照原有的操作理念，把握不好易引发医源性损伤。如果不加以发展创新，天津地区的推拿疗法将逐渐退出历史的舞台。
2 津沽推拿的形成
与其说王金贵教授创立了“津沽推拿”，不如说是挖掘整理、提出了具有天津地方特色的“津沽推拿”。他主要针对两方面疾病——软组织损伤性疾病和功能性内科病——进行了系统的理论梳理和技能技法整理。
2.1 软组织损伤性疾病
王金贵教授以叶希贤与李墨林推拿理念为基础，结合自己的创新性理论，针对软组织损伤性疾病提出了“松筋易骨”推拿疗法[6-8]。软组织损伤性疾病属于中医“筋出槽，骨错缝”范畴，由于各种急慢性损伤导致经脉瘀阻、筋肉挛急、气血凝滞，经云“不通则痛”而发此病。王金贵教授将自己总结的手法适时应用理论、软组织损伤时相辨证理论以及综合多种中医传统外治疗法的“处方式配伍”综合治疗的创新理念引入“津沽推拿”，针对“筋出槽、骨错缝”分时辨证施治，在疾病不同发展阶段适时应用李墨林按摩疗法和叶希贤正骨手法，取得了显著的临床疗效，并经过了科研验证，形成“松筋易骨推拿治疗软组织损伤性疾病”这一研究方向。
“松筋”手法主要是针对“筋出槽”疾患存在的筋脉挛急、气血运行不畅的情况，借鉴李墨林手法特点，将指针手法在针对性选择的经穴或神经走行部位施以指压法，辅以弹拨及牵拉手法，不仅疗效确切，同时又减轻了传统手法治疗过程中伴随出现的疼痛等不适。“易骨”手法则是在“骨错缝”类疾病的治疗中，借鉴叶希贤“九步按摩手法”和“十步手法”中的操作手法和治疗理念，通过被动运动患者关节，纠正异常的解剖位置，恢复紊乱的关节结构。同时，在“松筋易骨”手法的基础上、配合多种中医传统外治法，并进行“处方式配伍”，结果在提高疗效、缩短疗程、改善预后及减少治疗过程中出现的不良反应方面均有显著提高。
2.2 功能性内科疾病
胡秀璋腹部推拿认为推拿功法锻炼和手法规范化是一切疗效的基础，重视脏腑经络、“伏冲之脉”的介导作用，强调分层导疗理念。王金贵教授在原有腹部推拿传统理论基础上，从脑-肠互动途径解析腹部推拿治疗功能性内科病的机制，围绕开展了多项国家级课题，为“推拿治疗功能性内科疾病”机制研究提供了充足的理论依据。在机制研究的过程中提出“通脉健脾”“通脉调气”“通脉调神”为主的三套腹部推拿治疗方案，并将多种中医传统外治法进行“处方式配伍”，用于治疗肠易激综合征、紧张性头痛、心理生理性失眠等功能性内科病，确立“通脉”为功能性内科病治疗总纲，继承发展了传统腹部推拿原有适应证，在手法治疗内科疾病方面积累了丰富的经验[9-11]。
推拿与针灸、中药同为中医经典治疗手段，是祖国医学的重要组成部分，并且因其无创性疗法与没有药物的毒副作用也是相对其他学科所具有的明显优势。但随着时代变迁，特别是“”后西医东进，中医发展遇到瓶颈，推拿的地位更是日益衰落，直至今日以盲人为从业主体，治疗对象局限于运动系统疾病。
此外，由于推拿学科自身特点——历代传承多为口传心授，少有专著，仅存的资料多散见于其它著作之中，且多散落于民间。推拿的古籍文献作为一种古老的信息资源，其存在方式与传播方式已无法适应现阶段社会的需求[12]，然而推拿特别是内科推拿起源于天津，发展于天津，因此，就必须尽快利用现代科学手段将其数字化，使大量散落在民间的记录资料重新焕发时代风貌，然后将回顾性研究与前瞻性研究相结合，王金贵教授通过走访传人、搜集文献，收集大量的历史资料。从产、学、研不同角度对资料进行挖掘和整理，并融入自己的学术经验，通过“原始创新”，总结出了“津沽推拿”治疗流派。在继承胡秀璋、李墨林、叶希贤三位名家的学术成就基础上，又将王金贵教授总结提出的软组织损伤时相辨证、手法适时应用、多种中医传统外治法“处方式配伍”等治疗理念有机融合，在推拿治疗软组织损伤和功能性内科疾病”的临床和科研上取得了一定成绩，形成具有天津地域特色的推拿创新流派——津沽推拿。希望借此改变推拿仅仅治疗运动系统疾病的单一局面，使推拿专业实现跨越性发展，巩固天津推拿专业的学术地位，最终成为全国推拿专业的一支奇葩。
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中医骨伤科研究方向范文第2篇
[关键词]抗肿瘤活性； 霍山石斛； 糖蛋白； 细胞毒活性
兰科植物霍山石斛Dendrobium huoshanense Tang et Cheng，局限分布于安徽省霍山县及邻近地区，其炮制后的干品名为霍斗或金霍斗[1]，霍山石斛的功效作用一直槊鳌⑶灞静菹晗讣窃兀具有益精强阴、保肝养胃、生津止渴、补虚赢、轻身延年等功效[2]，从 20 世纪 50 年代末开始，国内科研人员开始霍山石斛资源保护、可持续开发利用等方面研究，取得了一系列成果，特别是其显著的抗癌功效吸引着国内学者对其开展了大量科学研究[36]。
多糖以2种方式发挥抗肿瘤的活性：一种方式是通过增强机体免疫力进而激活免疫系统引起肿瘤细胞凋亡[714]；另一种方式是直接以其细胞毒活性而杀伤肿瘤细胞[1520]。但目前多糖的抗肿瘤活性的研究只限于分离提纯后的多糖组分的药理药效实验，尚无确切的证据证明和解释多糖对肿瘤细胞的细胞毒活性的具体物质基础及结构基础[2123]。
霍山石斛多糖具有抗肿瘤活性，那么其基础活性物质到底是什么？本团队在实验过程中发现，采用水提醇沉提取霍山石斛粗多糖，再用Sevage法[24]脱蛋白后得到的脱蛋白多糖对人肝癌细胞HepG2的毒活性明显低于没有经过脱蛋白处理的霍山石斛粗多糖，国内一些学者也发现类似现象[2526] 。同时，国内外有研究显示植物糖蛋白有较强的抗肿瘤、增强免疫力的作用[2731] 。因此，根据对粗制霍山石斛多糖和脱蛋白多糖抗肿瘤比对效果，假设霍山石斛多糖中存在一些能被有机溶剂破坏或除去的糖复合物，如糖蛋白，这类物质是构成霍山石斛多糖抗肿瘤的基础物质之一。为验证假设，利用低盐溶液浸提加硫酸铵分级沉淀分离提取出不同的霍山石斛蛋白组分，再经DEAE Bsarose Fast Flow 离子柱和SephadexG200凝胶柱分离得到糖蛋白，以粗制多糖、脱蛋白多糖和糖蛋白为研究对象，检验霍山石斛糖蛋白是否具备对人肝癌细胞HepG2的毒活性。
1材料
实验材料为根系生长3年以上，当年春季抽条越冬后的霍山石斛鲜茎（去叶），按统计学方法五点取样[32]，2016年3月采自安徽省霍山县衡山镇柳林河栽培基地（六安臻和生物科技有限公司），由邓辉副教授鉴定。人肝癌细胞HepG2（上海奥陆生物科技有限公司），阿霉素 （意大利Actavis Italy SpA， 批号H20130186）；DEAE Bsarose Fast Flow利穗科技（苏州）公司产品；Sephadex G200 Sigma 公司产品；NaHCO3、硫酸、苯酚、葡萄糖、无水乙醇、正丁醇、氯仿、丙酮、考马斯亮蓝G250/R250、硝酸银、碱性品红、偏重亚硫酸钠、高碘酸、活性炭、甲醇、冰乙酸等均为国产分析纯。
色谱柱（26 cm×55 cm， 16 cm×80 cm），利穗科技（苏州）有限公司；UV2100 型紫外可见分光光度计，尤尼柯（上海）仪器有限公司；旋转蒸发仪，天津市纽森科技有限公司；Mini垂直电泳仪，北京六一仪器厂；Allegra15R 台式高速冷冻离心机，美国BECKMAN公司； CO150型CO2培养箱，美国Thermo公司；Multiskan Spectrum全波长酶标仪，美国Thermo公司。
2方法和结果
21霍山石斛多糖的分离提取将同一种石斛切成薄片后混合，60 ℃烘干至恒重，85 ℃无水乙醇索氏提取至回流液无色，挥干溶剂，药渣按照料液比1∶5加入蒸馏水于80 ℃水浴冷凝回流提取4次，每次3 h[12]。合并滤液并减压浓缩获得粗多糖溶液。上述粗多糖溶液，按1∶4加入无水乙醇，4 ℃冰箱静置24 h，4 000 r min-1离心5 min，循环操作3～4次[13]，合并沉淀，60 ℃干燥至恒重，即为粗制多糖[33]。
采用Sevage法[1415]脱蛋白，具体步骤：加入适量蒸馏水，按照样品溶液萃取剂4∶1加入Sevage试剂（氯仿正丁醇 4∶1），混匀，振荡30 min。以4 000 r・min-1离心5 min，弃除下层氯仿及中层变性蛋白。取上部水层重复去蛋白操作，至无明显中层为止。收集去蛋白后的上部水层备用。将上述多糖水溶液，通过超滤装置超滤，滤膜截留相对分子质量为1 000，脱去小分子物质，得到纯化后的多糖浓缩溶液。按1∶4加入无水乙醇，4 ℃冰箱静置12 h，4 000 r・min-1离心10 min，循环操作3次[13]，合并沉淀，60 ℃干燥至恒重，即为脱蛋白多糖。
22霍山石斛多糖的细胞毒活性检测取处于对数生长期的人肝癌细胞HepG2，用025%胰蛋白酶消化，细胞计数并用含10%胎牛血清的RPMI 1640 培养液调细胞浓度为1×104～3×104个/mL，接种于96 孔板，每孔100 μL，放置于37 ℃，5% CO2的培养箱中培养24 h 后，每孔分别加入25，50，100，200，400，600，800，1 000 mg・L-1的样液100 μL，设6 个平行孔。给样后于37 ℃继续培养72 h，弃上清液，每孔加入200 μL 新鲜配制的05 g・L-1 MTT，继续培养4 h，弃上清液，每孔加二甲基亚砜（DMSO）150 μL 溶解，微型振荡器振荡混匀，酶标仪测定A，参考波长490 nm，检测波长570 nm，以RPMI 1640 培养液作阴性（空白）对照，以阿霉素作阳性对照。按以下公式计算生长抑制率，生长抑制率=[1-（A实验组-A空白组） /（A对照组-A空白组） ]×100%，按文献计算测试样品的半数抑制浓度（IC50） [34]。MTT比色法检测结果显示，霍山石斛脱蛋白多糖对人肝癌细胞HepG2的IC50为95915 mg・L-1，霍山石斛粗制多糖对人肝癌细胞HepG2的IC50为78638 mg・L-1，阳性对照阿霉素的IC50为092 mg・L-1。
23霍山石斛蛋白的分离提取将干燥粉碎均匀的霍山石斛粉末进行低盐溶液浸提（Nacl 03 mol・L-1、料液比1∶15，室温，12 h），离心（4 ℃，8 000 r・min-1，20 min），取上清液，用饱和度为30%，70%，100%硫酸铵溶液依次分级沉淀（4 ℃，12 h），离心（4 ℃，8 000 r・min-1，20 min），流水透析48 h（02 g・L-1叠氮化钠），聚乙二醇浓缩，分装为蛋白溶液PRⅠ，PRⅡ，PRⅢ，进行SDSPAGE电泳检测。
24霍山石斛蛋白的SDSPAGE电泳及蛋白染色和糖染色SDSPAGE电泳[3536]，制备5%浓缩胶、12%分离胶，恒压电泳，考马斯亮蓝染色和PAS染色，采用凝胶成像系统数据处理软件，根据蛋白Marker，计算出糖蛋白的相对分子质量。SDSPAGE 电泳结果见图1，可知霍山石斛蛋白溶液PRⅠ，PRⅡ，PRⅢ泳道中均含有未知蛋白条带，但只有蛋白溶液PRⅡ泳道中含有3条较明显的糖蛋白条带，采用凝胶成像权自配的成像数据理软件，以蛋白Marker相对迁移率为标准，计算出这3种糖蛋白的相对分子质量分别为225，198，156 kDa。选择蛋白溶液PRⅡ组分进行进一步分离纯化。
26霍山石斛糖蛋白复合物的细胞毒活性检测MTT 比色法检测霍山石斛糖蛋白复合物对人肝癌细胞HepG2的IC50，操作步骤同22。结果显示，霍山石斛糖蛋白复合物对人肝癌细胞HepG2的IC50为53423 mg・L-1，阳性对照阿霉素的IC50为091 mg・L-1。
27霍山石斛糖蛋白的凝胶排阻色谱纯化取糖蛋白复合物浓缩液，用Sephadex G200 凝胶柱（16 cm×80 cm）进行进一步分离纯化，水洗脱，收集洗脱液，在考马斯亮蓝G250染色测定蛋白的量；用苯酚硫酸法检测糖的量。合并同一个检出峰中既有蛋白又有糖的检出管，结果从多糖蛋白复合物中得到霍山石斛糖蛋白RG1，RG2，RG3组分，其糖和蛋白的质量分数分别为1122%，1348%，1837%和8878%，8652%，8163%，然后分别装入透析袋透析，直至AgNO3检测透析液无浑浊后，聚乙二醇浓缩4 ℃保存。
物质基础之一。为此，分别制备了霍山石斛粗制多糖、脱蛋白多糖和多糖蛋白复合物，并采用MTT方法检测对其进行了人肝癌细胞HepG2的毒活性实验。结果表明，对人肝癌细胞HepG2的毒活性，霍山石斛多糖蛋白复合物>粗制多糖>脱蛋白多糖；实验进一步分离纯化了霍山石斛多糖蛋白复合物，得到了3种小分子量糖蛋白组分RG1，RG2和RG3，前两者具有细胞毒活性，且具有协同作用，实验结果印证了推测，当然实验并不排除多糖和蛋白本身也具有抗肿瘤活性。同时，上述纯化的糖蛋白组分是否为单一成分，是否同时具备增强免疫的功效，其主要构成单元和抗肿瘤的结构基础是什么，仍需开展更多的研究工作。
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[收稿日期]20160909
