前言:想要写出一篇令人眼前一亮的文章吗?我们特意为您整理了5篇动物实验研究范文,相信会为您的写作带来帮助,发现更多的写作思路和灵感。
关键词:抗氧化实验 老龄小鼠 氧化应激 动物实验
氧化应激是指体内氧化与抗氧化作用失衡、倾向于氧化作用而导致组织损伤[1]。氧化应激的发生,使机体内许多细胞分子生物,如DNA、脂质、蛋白质等易受到自由基引起的氧化损伤,导致细胞和组织功能障碍,并与多种疾病的发生密切相关[2]。因此抗氧化物质研究对各种氧化应激相关疾病的防控意义重大。近年研究表明人工合成抗氧化剂副作用较多,可能对人体多种脏器产生不利影响,故天然的抗氧化物日渐受青睐[2]。本研究对含有多种药食同源成分的某保健食品胶囊进行动物实验,探讨其抗氧化功效。
1 材料与方法
1.1 样品
由某厂家提供的保健食品胶囊,配方组成:三七450 g、红景天450 g、枸杞子500 g、五味子300 g, 提取浓缩制成干膏粉255 g, 再加葡萄籽提取物33.4 g及其他辅料,制成1 000粒(0.5 g/粒)胶囊。人体服用推荐剂量2.7 g/d, 按成人体重60 kg推算折合剂量为0.045 g/kg·bw。
1.2 实验动物
SPF级ICR种雄性8~10月龄小鼠40只(湖南斯莱克景达实验动物有限公司),实验动物生产许可证号:SCXK(湘)2013-0004;实验期间小鼠饲养于22 ℃~26 ℃、湿度50%~56%的屏障环境中。实验动物使用许可证号:SYXK(湘)2015-0012。
1.3 仪器与试剂
动物称量秤、离心机、水浴箱和紫外可见分光光度计等;丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)及蛋白质羰基试剂盒(南京建成生物工程研究所)。
1.4 方法
试验初始、中期、末期均对小鼠进行体重监测。试验初始,采尾尖血制成4%溶血液,用试剂盒测定其MDA水平。根据MDA含量将40只小鼠平均分为1个对照组和低、中、高3个剂量组(0.225、0.450和1.350 g/kg·bw),保证各组试验前MDA值均衡。各剂量组小鼠经口灌胃给予相应剂量的某胶囊内容物,溶剂对照组给予等体积蒸馏水,灌胃1次/d, 灌胃体积为0.2 mL/10 g·bw, 连续30 d。试验末期,采尾尖血测定4%溶血液中MDA含量、全血中GSH含量;摘眼球采血,离心后取血清测定SOD活力及蛋白质羰基含量。
1.5 数据处理
计量数据以x¯±s表示。用Excel 2007、spss 19.0软件统计分析。4组数据如果方差齐,则用单因素方差分析进行总体比较;方差不齐时Dunnett法进行多个剂量组与1个对照组均数间的两两比较,P<0.05有统计学意义。
2 结 果
2.1 老龄小鼠体重变化
实验初始、中期、末期,3个剂量组的小鼠体重及增重与对照组差异均无统计学意义,见表1。
2.2 抗氧化试验结果
试验末期各组间小鼠溶血液中MDA含量差异有统计学意义(F=4.16,P=0.013);与对照组比较,高剂量组的MDA含量降低,见表2。
试验末期各组间小鼠血清中SOD活力和全血中GSH含量差异均有统计学意义(F=3.38,P=0.028;F=3.24,P=0.033);与对照组比较,高剂量组SOD活力增加、GSH含量升高;各剂量组小鼠血清中蛋白质羰基含量差异无统计学意义(F=0.54,P>0.05),见表3。
表1 某胶囊对小鼠体重的影响(g)
表2 某胶囊对小鼠4%溶血液中MDA含量的影响
表3 某胶囊对小鼠血清中GSH含量、SOD活力和蛋白质羰基含量的影响
3 讨 论
氧自由基反应和脂质过氧化反应在机体代谢中起重要作用。MDA是机体内自由基作用于脂质过氧化的终末产物,大量产生时可导致细胞膜损伤[3]。SOD是生物体中清除自由基的主要物质,SOD水平常作为象征衰老的直观指标[4]。GSH是机体内一种强抗氧化剂,可消除自由基并参与细胞解毒及细胞损伤修复,有抑制脂质过氧化、保护细胞膜、恢复细胞功能的作用[5]。蛋白羰基是机体内多种氨基酸在蛋白质氧化修饰过程中产生的早期标志,能直接反映蛋白质的损伤程度[6]。
本研究样品胶囊以三七、红景天、枸杞子、五味子和葡萄籽提取物为主要原料。研究表明三七多糖有较强的体外抗氧化活性[7],明显降低血清中的MDA含量,并提高GSH-Px活力[8];红景天中主要抗氧化物质包括红景天苷和黄酮类物质。侯红平等[9]发现红景天苷的抗氧化作用可有效保护慢性阻塞性肺疾病体外细胞模型,但机体摄取红景天提取物有最佳剂量,剂量过大时反而降低机体的抗氧化能力[10];苗婷婷等[11]研究发现枸杞多糖可能通过清除自由基、提高抗氧化酶活性、上调免疫应答、抑制神经系统的老化、调节细胞凋亡等途径延缓衰老进程。多项动物实验表明枸杞多糖可通过提高小鼠体内SOD活性、降低MDA含量[12],降低氧化产物含量[13],起到延缓衰老的作用;有研究发现,五味子提取物有效成分不仅可直接清除自由基[14],且对皮肤细胞的氧化应激有保护作用[15]。此外五味子中多糖[16]、总木脂素类成分及五味子乙素[17]有良好的抗氧化能力;方欢乐等[18]发现葡萄籽原花青素对D-半乳糖致衰老模型小鼠氧化应激反应的各项生化指标及肝脏组织病理状态有一定改善作用,且葡萄籽对SD大鼠无胚胎毒性和致畸毒性,安全性较高[19]。
本研究用的样品胶囊以几种药食同源物质合理配伍,其中1.350 g/kg·bw剂量能降低小鼠血中MDA水平、提高小鼠血清中SOD活力、提高小鼠全血中GSH含量,说明该胶囊内容物可降低动物体内脂质过氧化程度、增加抗氧化酶抑制自由基反应能力及增强机体受到的氧化压力程度,实验结果与以上单个成分的抗氧化资料基本类似。本研究各剂量组小鼠血清中蛋白质羰基含量与对照组差异均无统计学意义,说明此胶囊对动物体内蛋白质氧化损伤的保护作用不明显,也可能由于动物血清中蛋白质羰基含量较低,检测值存在较大的人工误差。
综上所述,提示含有三七、红景天、枸杞子、五味子和葡萄籽提取物为主要原料的某胶囊,对实验动物有抗氧化功能。
参考文献
[1] Al Shahrani M,Heales S,Hargreaves I,et al.Oxidative Stress:Mechanistic Insights into Inherited Mitochondrial Disorders and Parkinson’s Disease[J].J Clin Med,2017,6(11):100.
[2] 高冬,任成蓉,宋光运.氧化-抗氧化状态与临床疾病的相关性[J].海峡预防医学杂志,2015,21(2):24-26.
[3] Huang YY,Wu CC,Ye YB,et al.The increase of ROS caused by the interference of DEHP with JNK/p38/p53 pathway as the reason for hepatotoxicity[J].Int J Environ Res Public Health,2019,16(3):1-16.
[4] 李红波,王小琴,熊飞,等.六味地黄丸对D-半乳糖致衰老大鼠抗氧化功能影响的实验研究[J].中国中医药科技,2019,26(1):35-37.
[5] 张艺,叶升.还原型谷胱甘肽生理功能及其临床应用[J].生命的化学,2020,40(12):2226-2235.
[6] 罗胜勇,栗原博,乐智勇,等.冬虫夏草对氧化损伤小鼠抗氧化作用研究[J].食品研究与开发,2019,40(13):63-67.
[7] 黄上峰,陆飞燕,黄元河,等.三七多糖抗氧化活性研究[J].微量元素与健康研究,2018,35(1):30-32.
[8] 周艳梅,马妮,高明菊,等.三七葡萄籽软胶囊抗氧化功能实验研究[J].人参研究,2020,32(2):40-42.
[9] 侯红平,张广平,高云航,等.红景天苷对慢性阻塞性肺疾病体外细胞模型的保护作用及抗氧化应激机制[J].中药新药与临床药理,2020,31(12):1389-1393.
[10] 罗兰.红景天提取物对运动小鼠抗氧化能力的影响[J].中国老年学杂志,2018,38(23):5815-5817.
[11] 苗婷婷,严青,王君洁,等.枸杞多糖抗衰老研究进展[J].亚太传统医药,2019,15(6):178-180.
[12] 刘晴.枸杞多糖对CCl4诱导的大鼠肝纤维化的保护作用及机制研究[D].南京:南京农业大学,2016.
[13] 王彩霞.枸杞多糖对衰老小鼠皮肤组织总抗氧化能力及脂褐质的影响[J].中国民族民间医药2020,29(6):7-9.
[14] 李振,孟宪纬,管延珍,等.南、北五味子提取物的抑菌及抗氧化作用研究[J].中国调味品,2017,42(1):28-30.
[15] 曹波,路婷婷,魏菲,等.南五味子提取物对UVB辐射的防护作用观察[J].中国皮肤性病学杂志,2016,30(8):771-775,798.
[16] 王珊珊,李泰雅,谷舞,等.北五味子多糖热水浸提工艺优化及体外抗氧化性能研究[J].粮油食品科技,2017,25(1):64-69.
[17] 马莹慧,冯波,朱鹤云,等.北五味子中总木脂素类成分的抗氧化及抗炎活性研究[J].食品研究与开发,2019,40(11):25-29.
一、研究专题和期限
专题1、实验动物比较、相关标准研究领域
研究目标:对常用啮齿类实验动物进行比较研究并建立数据库;制定填补国内空白的若干实验动物地方标准;凡涉及本专题项目需将有关研究成果纳入*实验动物资源中心统一管理。
研究内容:
1、对常用大、小鼠、豚鼠和地鼠进行比较生物学和比较医学系统研究,提出各自在生物医学等主要研究领域应用和回避的依据、选择原则、运用方法;
2、对常用实验动物组织器官超微形态学结构进行比较研究并建立数据库;
3、建立兔、犬、猴心血管和心电图数据库并进行分析评价;
4、制定实验用羊标准、啮齿类实验动物垫料标准,大、小鼠运输标准(鼓励多家单位联合申报)。
进度要求:年9月30日前完成
专题2、实验动物新技术的建立及应用研究
研究目标:建立若干种实验动物质量检测、遗传工程和保种育种新技术;建立斑马鱼主要脏器三维电子图像。
研究内容:
1、从病原学、血清学以及分子生物学领域研究实验动物中支原体、泰泽氏菌、螺杆菌、CAR杆菌的特性,确立先进、可靠的检测方法;
2、以DNA和RNA各一种病毒的主要抗原基因进行真核表达,结合单克隆抗体技术建立诊断技术平台,提升实验动物质量控制水平;
3、选择4-6个品系作为供体和受体,构建2-5个染色体替换的小鼠新品系,初步建立PCR-LDR小鼠基因分型技术平台;
4、建立新的小鼠内源基因修饰技术,实现对小鼠内源基因的即时可逆调节,提高小鼠遗传操作的效率,完善小鼠遗传操作生物技术平台的建设;
5、在组织学研究的基础上,采用IT技术初步建立斑马鱼的某种三维电子脏器;
6、建立大鼠体外授精技术、冷冻技术、辅助体外受精技术(人工授精、ICSI);
7、建立2-4种实验动物人工哺乳和无菌技术,并培育2-4种无菌动物。
进度要求:年9月30日前完成
专题3、动物模型及其效果评价体系的建立与应用研究
研究目标:建立若干种人类重要疾病的动物模型,并要求对每一种模型建立效果评价体系;凡涉及本专题项目需将有关研究成果纳入*实验动物资源中心统一管理。
研究内容:
1、建立若干种人类重要疾病的动物模型,重点建立不育大鼠模型、大、小鼠脑卒中模型、前列腺疾病模型、小型猪腹壁拉链模型、原位大肠癌模型等,并要求对以上模型建立效果评价体系;
2、建立和完善肿瘤高转移动物模型筛选技术。
进度要求:年9月30日前完成
二、申请方式
1)本指南公开。凡符合课题制要求、有意承担研究任务的法人、自然人均可以从“*科技”网站上进入“在线受理科研计划项目课题可行性方案”,并下载相关表格《*市科学技术委员会科研计划项目课题可行性方案(*版)》,按照要求认真填写。书面可行性报告要求同时附上相应的知识产权状况查新报告。鼓励多家单位联合申报,实行资源共享,并在申请材料中明确各自承担的工作和职责,并附上合作协议或合同。
2)课题责任人年龄不限。鼓励通过课题培养优秀的中青年学术骨干。作为课题责任人和主要科研人员,不得同期参与承担的863、973、国家科技攻关和*市重大、重点科研课题数超过三项。
3)每一课题的申请人可以提出不超过2名的拟回避自己课题评审的同行专家名单(名单可以随课题可行性方案一同提交)。
4)本专项课题的申请起始日年7月4日,截止日期为年7月25日。课题申报时需提交书面可行性方案一式8份,并通过“*科技”网站提交可行性方案和所有表格。书面可行性方案集中受理时间为*年7月21日至7月25日,每个工作日上午9:00—下午4:30。所有书面文件请采用A4纸双面印刷,普通纸质材料作为封面,不采用胶圈、文件夹等带有突出棱边的装订方式。
5)网上填报备注:
1)登陆“*科技”网,进入网上办事专栏;
2)点击《科研计划项目课题可行性方案》受理并进入申报页面:
-【初次填写】转入申报指南页面,点击"专题名称"中相应的指南专题后开始申报项目(需要设置“项目名称”、“依托单位”、“登录密码”);
-【继续填写】输入已申报的项目名称、依托单位、密码后继续该项目的填报。
[关键词] 补肾中药;骨髓基质干细胞;碱性磷酸酶;矿化结节
[中图分类号] R274 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701(2013)08-0001-03
骨质疏松症是中老年人最常见的慢性病之一,其特征主要表现为骨的微观结构退化、骨量减少。中医学认为骨质疏松症发生的重要原因是肾气虚衰,补肾中药方剂是治疗骨质疏松症较为有效的药方。目前在补肾中药促进成骨的基础研究方面取得了一些成果[1],但是目前有关补肾中药复方的研究仍在探索阶段。本实验自拟对成骨有作用的补肾中药进行组合, 对体外培养的大鼠骨髓基质干细胞进行诱导,从细胞水平检测补肾复方对骨髓基质干细胞的影响,观察成骨情况。
1 材料与方法
1.1 动物
选用出生6周龄雄性SD大鼠,体重不限,购于温州医学院实验动物中心,合格证书:SCXK(浙)2006-0026。
1.2 中药药材
药材(羊霍、杜仲、骨碎补、补骨脂、党参、熟地、川牛膝、云苓、白术、煅龙骨、炒山药、生蛎、丹皮)购自浙江温州地区医药公司。
1.3 仪器与试剂
Thermo二氧化碳培养箱;Nikon 倒置生物显微镜;扫描电镜,上海泰思肯贸易有限公司;RPMI-1640培养基、胰蛋白酶、MTT试剂、地塞米松、维生素C、β-甘油磷酸钠、四环素盐酸盐, 均为Sigma 公司产品;胎牛血清,上海劲马生物科技有限公司;碱性磷酸酶试剂盒,南京建成生物工程研究所。
1.4 方法
1.4.1 补肾中药水提取液的制备 取羊霍、杜仲、骨碎补、补骨脂、党参、熟地、川牛膝、云苓、白术、煅龙骨、炒山药、生蛎、丹皮,按比例称重混合后,加蒸馏水浸泡并煮沸3次,每次3 h,合并滤液并浓缩,用75%乙醇沉淀后静置于冰箱过夜,次日过滤回收乙醇,用0.5%NaOH调pH至7.0,制成含生药1 g/mL的药液,冷藏备用。
1.4.2 大鼠骨髓基质干细胞的分离与培养鉴定[2] 取出生6周左右的雄性SD大鼠,体重不限(由温州医学院实验动物中心提供)。颈椎脱位法处死,无菌条件下取股骨,剪断两骨端,无血清培养液吹打髓腔并冲出骨髓。将组织均匀平铺加10%DMEM培养基接种于10 cm培养皿内,放置于5%CO2、37℃培养箱培养。3 d换液1次,待细胞长满瓶底时后传代,利用第3代细胞进行实验。倒置显微镜下观察细胞形态并用钙钴法进行碱性磷酸酶染色。
1.4.3 细胞增殖功能测定 采用MTT法[3]测定补肾中药方剂对大鼠成骨细胞增殖的影响。细胞消化传代后,调整细胞浓度加入96孔细胞培养板中,每孔加入培养液,放入5% CO2 37℃培养箱内培养。24 h后显微镜下观察细胞生长合适后,分别换入含1 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、40 mg/L、100 mg/L、200 mg/L补肾中药的DMEM培养基,共6组,每组12孔;对照为空白组,为单用20ng/mL的地塞米松。含不同浓度补肾方剂培养1、3、7、10 d。采用MTT法于490 nm波长,在酶标仪上测试各孔光吸收值。本检测方法重复3次,分别计算对照组与实验组的增殖率。
1.4.4 细胞功能的表达 大鼠骨髓基质干以每孔1×105个/孔的密度被接种于6孔培养板,加入培养液,3 d后分别换入含0 mg/L、1 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、40 mg/L、100 mg/L、200 mg/L补肾中药的DMEM培养基,定期更换培养液及干预药物,不进行传代直至检测。
①细胞分化功能测定(ALP活性测定) 分别取各组(药液浓度分别为0 mg/L、1 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、40 mg/L、100 mg/L、200 mg/L,共7组)培养至第7天的成骨细胞,倒除原培养液,经胰蛋白酶消化后吸出消化液,加入0.9%NaCl吹打后低温冻溶至破碎,离心后上清液行酶免法测定碱性磷酸酶含量。②细胞矿化功能测定 同上述方法培养至第14天,利用von Kossa染色法显示矿化结节。培养14 d后采用多聚甲醛进行固定。以直径>200 μm边界清晰的结节,为矿化结节的计数标准[1]。
1.5 统计学方法
采用SPSS16.0软件处理,数据以(x±s)表示,多组间采用方差分析,然后行两两t检验,以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 成骨细胞的鉴定
倒置相差显微镜下观察细胞形态,培养1 d后大部分的细胞为圆形,大小不等漂浮于培养液;培养2 d后部分细胞贴壁,形态主要为梭形、多角形或纺锤形等几种形状(图1)。培养后7 d贴壁细胞增多可见伪足,瓶底长满梭形或多角形细胞(图2);10 d可见贴壁细胞形多呈梭形(图3)。von Kossa染色矿化结节(图4)。
2.2 补肾中药方剂对大鼠MSCs增殖的影响
如表1所示,在1 d时100 mg/组高于空白组(t = 6.21,P < 0.001),且200 mg/组也高于空白组(t = 10.27,P < 0.001),差异有统计学意义(P < 0.05);在3 d时浓度为20 mg/L(t = 6.89,P < 0.001)、40 mg/L(t = 6.63,P < 0.001)、100 mg/L(t = 14.49,P < 0.001)、200 mg/L(t = 22.21,P < 0.001)的OD值均高于空白组,差异有统计学意义(P < 0.05);在7 d时浓度为20 mg/L(t = 15.39,P < 0.001)、40 mg/L(t = 24.36,P < 0.001)、100 mg/L(t = 32.84,P < 0.001)、200 mg/L(t = 29.80,P < 0.001) 的OD值均高于空白组,差异有统计学意义(P
2.3 对矿化结节数的影响
如表2所示,选取第14天,浓度20 mg/L组、40 mg/L组、100 mg/组、200 mg/组的矿化结节数与空白组比较,差异均具有统计学意义(P
3 讨论
骨髓间充质干细胞是存在于骨髓中的间充质干细胞,它具有多向分化潜能,能够自我更新,可在体外培养。骨髓间充质干细胞在一定的诱导条件下可以向软骨细胞、成骨细胞、脂肪细胞、神经细胞、心肌细胞等多个方向分化[4]。成骨细胞是体内骨形成的主要细胞也是骨代谢的重要功能细胞,对维持骨的代谢平衡非常重要[5]。成骨细胞功能障碍或数量减少,都会导致骨组织代谢异常、骨质疏松等多种疾病的发生。骨质疏松症在中医学上被认为是肾气虚衰所致,因此近年来越来越多的研究利用补肾中药来治疗骨质疏松症。
本研究发现,不同浓度组的补肾中药均可促进骨髓间充质干细胞的增殖, 增强碱性磷酸酶的活性。碱性磷酸酶是骨髓间充质干细胞成骨分化的主要特征性酶,也是最早出现的指标,其由成骨细胞产生并可反映分化程度的高低。目前比较普遍的观点认为,碱性磷酸酶在体外的钙化中起着关键的作用[6],碱性磷酸酶活性的高表达标志着成骨细胞的分化成熟[7]。相较于碱性磷酸酶,矿化结节为骨形成的标志,它的形成代表了细胞进一步成骨分化成熟[8]。本实验结果显示,不同浓度的补肾中药在不同程度上能刺激骨髓间充质干细胞的增殖分化成骨。
传统医学认为“肾主藏精”,肾精可以生骨养髓的。本方剂所涵盖的多味补肾中药中部分作为单味中药在体外有促进向骨髓基质干细胞成骨分化的作用。殷晓雪等[9]的研究发现羊藿可以上调BMP-2基因的表达,促进成骨细胞的增殖和分化。徐展望等[10]的研究发现补骨脂能促进大鼠成骨细胞的增殖。张立等[11]的研究发现杜仲也能通过刺激成骨细胞的增殖分化促进骨的重建。此外,Wang等[12]的研究指出骨碎补能促进人成骨细胞增殖作用。本实验中的补肾中药是在上述单味补肾药物的基础上经过组合构成,它能够促进大鼠体外骨髓间充质干细胞增殖及其向成骨细胞分化。
通过本实验可以发现,补肾中药对骨髓基质干细胞增值的影响。在低浓度不但没有毒害作用,而且随着浓度的增加,细胞增值作用递增。中药具有诱导分化的作用,和空白组相比(空白组也加入了诱导成骨液),中药有诱导基质干细胞向成骨细胞分化的作用。中期的ALP和细胞分化成熟晚期的矿化结节表明,药物对细胞的分化成熟作用明显,特别是对成骨晚期的骨矿化,补肾中药显示出极佳的促成骨作用。
[参考文献]
[1] 金慰芳,朱文菁,王洪复,等. 补肾中药HUECS对培养成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响[J]. 中国骨质疏松杂志,2001,7(8):9-10.
[2] 补肾方剂对大鼠骨髓基质干细胞增殖与分化的影响[J]. 中国药物与临床,2007,7(5):329-331.
[3] 张荣华,舒晓春. 中药复方补肾活血液对成骨细胞影响的实验研究[J]. 中国病理生理杂志,2003,19(6):769-772.
[4] Mahmood A,Lu D,Wang L,et al. Intracerebral transplantation of marrow stromal cells cultured with neurotrophic factors promotes functional recovery inrats subjected to traumatic brain injury[J].Neurotrauma,2002,9(12):1609-1617.
[5] Iwamoto J,Sato Y,Takeda T,et al. Bone quality and vitamin K2 in type 2 diabetes:Review of preclinical and clinical studies[J]. Nutrition Reviews,2011,69(3):162-1676.
[6] Hwang R,Lee EJ,Kim MH,et al. Calcyclin,a Ca2+ ion-binding protein,contributes to the anabolic effects of simvastatin on bone[J]. J Bio Chem,2004,279(20):21239-21247.
[7] Nguyen H,Qian JJ,Bhatnagar RS,et al. Enhanced cell attachment and osteoblastic activity by P15 peptide coated matrix in hydrogels[J]. Biochem Biophys Res Commun,2003,311(1):179-186.
[8] Bellows CG,Aubin JE,Heersche JN,et al. Mineralized bone nodules formed in vitro from enzymatically released rat calvaria cell populations[J]. Calcif Tissue Int,1986,38(3):143-154.
[9] 殷晓雪,陈仲强,党耕町,等. 羊藿苷对人成骨细胞增殖与分化的影响[J]. 中国中药杂志,2005,30(4):289-291.
[10] 徐展望,张建新,谭国庆,等. 中药骨碎补提取液对兔骨髓基质细胞体外成骨分化的影响[J]. 中医正骨,2006,18(6):15-17.
[11] 张立,葛焕琦,白立纬,等. 杜仲叶醇防治糖尿病合并去势大鼠骨质疏松症的实验研究[J]. 中国老年学杂志,2003,23(6):370-372.
【关键词】 中药; 治疗; 静脉炎
The Research of Goat Animal Experiment in Vein Preventing Superficial Transfusion Phlebitis with Self Made “Qiwei Tongmai Heated Application”/FANG Xiao-li.//Medical Innovation of China,2012,9(25):003-005
【Abstract】 Objective:To discuss the effect of intervening superficial transfusion phlebitis with self made “Qiwei tongmai heated application”.Method:UUO group:No intervention was given to goat every time except for injecting 20% mannit through superficial vein in hind leg.Control group:After injecting 20% mannit through superficial vein in hind leg of goat,50% magnesium sulfate was used for wet packing every time around the venipuncture site.Treatment group:After injecting 20% mannit through superficial vein in hind leg of goat,self made “Qiwei tongmai heated application” was used for heat packing every time around the venipuncture site,and moved before next puncture.Observe the change of cell around the goat superficial vein wall with light microscope.Result:In the UUO group,plenty of inflammatory cells were observed assembling in the the goat superficial vein wall,and thrombus formed.In the control group,some inflammatory cells were also observed gathering in the goat superficial vein wall,and the cell from cells wall were seen dropsy,but slighter than that of UUO group.In the experimental group,no inflammatory cells were observed assembling in the goat superficial vein wall,and the vein wall intact relatively and not dropsy.Conclusion:Partial external application of self made “Qiwei tongmai heated application”can promote blood circulation,remove blood stasis,clear heat,ease pain,and prevent the form of superficial phlebophlogosis,much better than wet dressing with 50% magnesium sulfate.It is cheap,and has easy operability in nursing,no side effect such as skin stimulus.It is worth promoting in clinical practice.
【Key words】 Chinese medicine; Treatment; Phlebitis
First-author’s address:The Orthopedic Hospital of Wendeng,Wendeng 264400,China
【摘要】实验研究是现代医学的常用方法和手段,动物模型中医药研究中发挥着巨大作用。复制中医动物模型的难度大,造模方法多样,有待进一步研究。我们从中医药研究应用动物模型意义、应用价值、复制模型的要求及存在的问题等方面谈几点看法。
【关键词】中医药;实验研究;动物模型;应用价值;
1 中医药实验研究中开展动物实验的意义和动物模型的应用价值
1.1 提供发病率低、潜伏期长和病程长的疾病材料 临床上不易见到的疾病可用动物模型随时复制出来,如遗传性疾病、免疫性疾病等在临床上发病率较低,研究人员可以有意识地提高在动物种群中的发病率,随时进行研究;肿瘤、呼吸道疾病、心血管疾病等,发生发展缓慢、潜伏期和病程较长,在人体上很难进行长期观察,而许多动物生命周期较短,在实验室可以进行长期实验和研究。
1.2 严格控制实验条件,比较可靠地证实治疗效果 人类疾病的转归除药物治疗外还受着多种因素的影响,如:气候环境、精神情绪、饮食劳逸等,这些因素在一定条件下会导致疾病好转或恶化。临床上还可见到由于患者产生强烈的治愈欲求,对接受治疗产生良好的疗效愿望,心理上产生一种有效偏见,从而出现治疗有效的反应,即所谓“假阳性”现象;反之,临床上也常见到患者在治疗中因饮食起居不慎或受到精神刺激等因素的影响,导致疾病恶化。这些都会造成医生在治疗疾病中产生错误的疗效判断。所以要比较可靠地评论药物治疗效果就需要严格控制,而对于动物来说则较容易严格控制。
1.3 有利于样品收集和简化实验操作,缩短研究周期,加快中医发展 动物模型作为人类疾病的“缩影”或“复制品”,便于研究者按实验目的与需要随时采集各种样品,或处死动物收集样品,以了解疾病的全过程,这在临床上是根本办不到的。实验动物的小型化发展趋势也有利于动物饲养管理和简化实验操作。有些问题单凭临床经验积累需要花费很长时间才能得到解决,或者虽花费很长时间,问题仍有得不到解决,而通过动物实验有些问题就可以得到迅速解决。
2 复制中医动物模型的基本要求
2.1 符合中医的理论特点 中医学具有完整独特的理论体系,在实验动物模型制作方面,必须以中医学的基本理论为指导,采用气温变化、饮食失宜、过服药物及手术结扎等造型法,所做出的动物模型表现的“ 证” 基本符合中医临床实际,能较好地反映中医病因病机理论的重点。
2.2 重复性好,较好再现所研究人类疾病 理想的动物模型应是规范化的,能够准确地重复再现。建立疾病动物模型的最终目的是为了研究探求防治人类疾病的规律,无论复制何种病理动物模型,其表现和体证与中医证的临床表现特征大体一致。因此,对疾病动物模型的评估主要取决于模型与人类疾病的相似或可比程度。一个理想的疾病动物模型应能再现所要研究的人类疾病,即动物疾病表现与人类疾病相似。
2.3 简单易行,造模时间较短 复制的动物模型应力求可靠地反映人类疾病,即可特异性地反映某种疾病或某种功能、代谢与结构变化。动物模型应具备某种疾病的主要症状和体征,还应考虑到今后的临床应用和便于控制其疾病发展,以利于进行研究。故要求模型复制方法简单易行,实验设计力求以急性实验为主,缩短造模时间,一般应选小动物复制人类疾病模型。
2.4 观察指标具有直观性与客观性 动物模型的观测指标力求客观性、直观性及重复性,既能如实反映实验所提问题的特征变化,又便于操作。如把小鼠的体温、心率、活动度、精神表现、眼球的凹凸、耳廓色泽、游泳时间作为“阳证”、“阴证”的观测指标,两者呈鲜明的对比,形象地显示了“阳”与“阴”的特征。
3 中医动物模型应用中存在的问题
3.1 动物模型很难用“四诊”方法加以判别 在病人身上通过望、闻、问、切可以得到完整的四诊资料,做出较为准确的诊断辨证,但是对复制动物模型要想得到详尽的四诊资料困难较大,动物既无主诉,又无法通过脉诊、舌诊来给动物辨证。例如阳虚、气虚和寒证的造模动物都可出现进食减少、大便溏、耐寒力低等现象,因此单凭这些症状、体征较难判断此模型属何证。应加强对中医“证”动物模型本质的研究,制定出动物模型的各项定量、半定量客观指标。
3.2 造模因素选择缺少标准 目前有关造模的因素很多,究竟哪种造模因素比较符合临床实际,能造出较为典型的中医证型,目前还有待于进一步研究。
3.3 照搬西医动物模型 未能以中医理论为依据,单纯把西医疾病模型当成中医证的模型,中医的证候不完全等同于西医疾病的症状,临床上常可以看到同一种西医疾病,中医可能诊断为多种证候,而对不同的西医疾病,中医也可能诊治方法完全相同,所以要研究中医、发展中医,不能完全照搬西医动物模型,应根据中医特点,复制体现中医药特色的动物模型,但这并不排除运用西医现代科学技术对中医药进行深人细致的研究。
随着现代医学的发展,实验研究越来越受到人们的重视。经过近几十年的不懈努力,我国目前已建立中医动物模型150余种,这仅仅是初步的探索,还有待于进一步研究。中医药只有通过大量实验研究,借用现代先进技术和方法,才能使中医药逐渐发扬光大,逐步走向世界,为人类健康事业做出更大贡献。
参考文献
[1] 施新猷主编。现代医学实验动物学.北京 人民军医出版社,2000
[2] 马超英主编.实验中医学基础,北京.中国协和医科大学出版社,2000