医学检验的理解

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医学检验的理解范文第1篇

【中图分类号】d919．4

【文献标识码】b

【文章编号】1007—9297(20__)01—0000一o1

捩伤(sprian)即扭伤，是关节活动范围超过正常

生理限度，与关节有关的肌腱、肌肉、韧带或关节囊，

因承受过大张力引起损伤，可伴发小块骨撕脱，lll手捩

伤大多发生于拇指掌指关节及其他手指的近指关节。

翻这类损伤在日常检案中经常遇到．但由其导致的骨

关节炎(osteoarthritis。oa)在法医学损伤程度评定方面

却极少见，现报道l例。

案件资料

某男，32岁，农民，体健。某年3月份因纠纷被人

抓住左手将无名指用力外掰，当即感疼痛难忍，次日

该指肿胀明显，不能活动，随到当地乡卫生院诊治，拍

手部x线片示：左手诸骨骨质均匀、连续。未见异常。

以“手软组织损伤”贴敷院治膏药3帖，历22天，肿胀

消失，但活动仍感疼痛。3个月后发现伤指近端关节肿

大，有麻木感，不能屈曲。叉到市骨科医院就医，经x

线、mri等临床检查，诊断为骨关节炎。于6月20日

做伤情鉴定。检验见：左手无名指近端关节肿大，围径

较健侧增大1．1cm，触之硬，骨性标志消失，屈曲固定

于中立位35。，可对指握物，无挛缩及感觉障碍。再次

作x线检查示：骨质连续但密度略增高，关节间隙变

宽；mri影像提示：关节周围组织呈长t1、t2信号，与

周围其他组织有明显对比。

讨论

骨关节炎是临床常见的一种疾病，又称骨关节

病，增生性骨关节炎，是指关节软骨完整性破坏受限，

关节边缘和软骨下骨相应的病理改变而引起的关节

症候群。[31常表现局部疼痛、肿胀、活动受限，触之发

硬。其诊断主要依据分析受伤机制，结合临床表现进

行诊断鉴别，个别病例由于肿胀失去骨性标志，则需

影像学检查。[41 x线常示关节密度增高且不均匀，关节

面唇样增生，关节间隙变宽：ct一般有广泛的密度增

高影；由于变性，mri影像上呈长tl、t2信号特征。阁

骨关节炎的产生绝大多数缺少明确的病因．而少数继

发于创伤、感染、各种遗传发育或神经系统异常的疾

病。嘲因外伤、退变等原因也可引发骨关节炎，各关节

均可发生。近端指间关节的单关节骨关节炎，常提示

为非原发性。戳伤及扭伤，由于指关节过度伸直和侧

弯，使关节韧带受过度牵拉，超过它的弹性程度。创伤

后骨关节炎常继发于关节内骨折或骨折脱位，所以其

损伤是最大的危险因素。本案例虽两次x均未检出骨

折，但从其受伤机制，结合临床症状和检查，仍可明确

为创伤性骨关节炎。

这类损伤的法医临床学鉴定，现行的《人体轻伤

鉴定标准(试行)》和《人体轻微伤鉴定标准》都有涉

及，但均没有明确规定．不同鉴定人掌握的尺度不一。

笔者认为，损伤是骨关节炎形成的重要因素之一，而

手捩伤与创伤性骨关节炎有直接的因果关系，应参照

《人体轻伤鉴定标准(试行)》第3条及第23条规定，

评定为轻伤。

参考文献

【11 范清宇，唐农轩．软伤与骨关节损伤诊断治疗学fm】．北京：人民军医

1ti版社，20__．340

【2】张文武，张铁良．刨伤诊疗学【m】．天津：天津科技翻译出版公司出

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【3】陈百成，张静．骨关节炎[m】．北京：人民卫生1ti版社。20__．2．

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出版社．20__．305

【5】蔡宗尧，彭仁罗。于新华．磁共振成像读片指南【m】．南京．江苏科学技

术出版社．20__．5

【6】李恩，薛延，王洪复。等．骨质疏松鉴别诊断与治疗【m】．北京：人民卫

医学检验的理解范文第2篇

关键词：静脉采血不当 生化检验 结果差异

【中图分类号】R9 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2013）10-0582-01

1 资料与方法

1.1 一般资料。

1.1.1 材料。①真空分离胶采血管。②各种生化项目试剂均采用试剂盒所带的标准品。③仪器为TDZ5-WS台式多管自动平衡离心机，奥林巴斯AU400全自动生化分析仪。

1.1.2 对象。筛选经健康体检均为健康者100名，男54名，年龄23～45岁，女46名，年龄22～39岁。共分3批，每批由不同的护士采血。

1.2 方法。将这100名健康者随机分为A、B两组，A组50名，B组50名，均选择肘正中静脉采血，采血方法均为真空采血法，均按照日常操作随机选择一侧进行采血，即首先将一次性的采血针置于采血器上，剌人肘正中静脉后，再将真空试管插入采血器上，由真空试管中的负压自行抽吸静脉血人试管内，真空试管为血清试管，用于检查生化项目，松开止血带。A组均严格按照日常操作规范进行肘正中静脉血采集，而B组未严格日常按照操作进行肘正中静脉血采集，存在静脉采血不当，包括止血带的放松时间、采血部分、采血器的应用等。

1.3 标本处理。应用真空采血法采血的肘正中静脉血为非抗凝血标本，标本离心前使其自行凝集，置于室温（22～25qc）放置30～60min，血液标本可白发完全凝集。离心时，采用TDZ5-WS台式多管自动平衡离心机，离心温度设定在20℃左右，离心速度RCF（1000～1200）xg，离心时间为5～10min。离心完成后，标本的分离应尽快完成。

1.4 试验项目。生化项目检验包括总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK―MB）、乳酸脱氢酶（LDH）、血糖、尿素（UREA）、肌酐（Scr）、血清钾（K）、血清钠（Na）、血清氯（CL）。

1.5 统计学方法。采用SPSS13.0统计软件进行统计分析，采用X2检验，P

2 结果

2.1 两组试验者的血清标本溶血发生率的比较。两组试验者真空采血法采取的血清标本，在室温下放置2h后，发生溶血的几率B组明显高于A组0.09%，结果具有统计学意义（P

3 讨论

在基层检验科日常的工作中，影响检验结果的因素很多，血液采集前患者的状态、静脉采血的过程、血液标本送检的过程、检验人员的操作误差等。在这些影响因素中，静脉血液的采集是影响检验结果准确性很重要的原因之一。因此，当检验结果差异很大，临床医生无法解释时，往往认为是检验科人员操作不当导致的结果不准确，这种说法是片面的也是不科学的。要确保生化检验结果的准确性和科学性，需要各科室之间互相配合，加强协作，共同提高。

目前医疗诊治过程中存在许多由于静脉血液采集不当，从而导致临床检验结果的不准确，最终影响患者病情的诊治。而引起静脉采血不当的一般包括止血带的放松时间、采血部分、采血器的应用等，这些均可造成血液标本溶血以及细胞成分、比例的改变。

综上所述，采集合格的血液标本是保证临床检验结果准确性、真实性和科学性的一个重要前提。如果采集方式不当，必将造成血液标本的不合格，从而导致临床检验结果的不准确，进而不能准确的反映患者的疾病情况，导致病情的延误。用不符合质量要求的标本进行检验，不如不进行这项检验。静脉采血不当，既浪费了人力、物力，又延误了患者的病情诊治。因此，要求各临床科室医生和护士与检验科建立良好的沟通渠道，共同努力避免由于主观误差而导致的临床检验结果偏差，提高临床检验质量，更好地为患者提供服务。

参考文献

医学检验的理解范文第3篇

【关键词】词汇 高职学生 学习策略

作者简介：田晓芳 女 1979年12月 河南人 天津职业大学 讲师 硕士 研究方向：英语教学

基金项目：天津市高教学会“十二五”高等教育科学研究课题青年专项： 以工学结合为理念的高职英语词汇学习策略研究与实践课题的阶段性研究成果（批准号：125q204）；本论文为2012年度天津职业大学校基金项目的阶段性研究成果（批准号：20122203）。

一、引言

随着我国改革开放的进一步深化和市场的国际化，当前社会和企业需要的是具有听、说、读、写、译等能力的英语应用型、复合型人才。以工学结合为理念的高职公共英语课程，要体现其基础性作用，另一方面，要立足于职业教育培养人才的实际，充分发挥其服务专业的作用。但是，高职学生基础薄弱，英语语言运用能力需要加强，其词汇基础更是薄弱，因此，有必要进行词汇策略的训练。

词汇学习策略是以学习策略为基础的，它指的是学习者在学习词汇时所运用的策略，西方很多学者对词汇学习策略理论进行了研究。而我国学者Gu and Johnson （1996）采用问卷调查和测试的方式对一些中国的大学生进行词汇学习策略的调查。王文宇（1998）在50名英语专业大学生中研究词汇学习观念和学习策略的关系。以上研究主要是对大学本科生进行的词汇学习策略的研究，对高职英语教学中词汇学习策略的相关实证研究则很少。因此，本文从实证的角度对高职英语词汇学习策略进行研究，有重要的理论和现实意义。

二、实证研究

为了解学生具体语言应用能力掌握情况，笔者通过问卷调查等形式对所教班级的学生进行调研。问卷一共分为2个部分，第一部分是关于学生的词汇学习观念调查，第二部分是关于词汇学习策略的调查。对本校11级和12级的学生发放问卷230份，收回有效问卷223份。男生86 人；女生137 人。他们对英语的学习都在8年以上，这说明他们都有一定的学习英语的经验并对英语学习有一定程度的认识和了解。其中，通过英语应用能力A级考试的同学为69人，占30.9%；未通过英语应用能力A级考试的同学为154人，占69.1%。可见，学生的英语基础一般。

通过从实证的角度，运用SPSS分析软件工具，来研究高职学生词汇学习策略及其对语言应用能力培养作用。有针对性地调研学生的词汇学习策略状况，并提出具体的应对策略。

1）词汇学习观念分析

通过问卷调查得知，在学生英语词汇学习观念中，单词需要在用中学的均值得分较高，为3.91031。具体体现在题2“许多单词的意义都可以通过阅读来获得”、题4“学单词是应留意一个词的固定搭配和短语”和题6“词汇量可以通过阅读来扩大”。说明学生对单词学习的观念的认识很准确，知道该如何学习英语词汇。

2）词汇学习策略分析：

在英语词汇学习策略的4个策略中，学生的情感策略的均值得分最高，为4.1614。其次为认知策略和社交策略，其均值分别为3.3530和3.0501。得分最低的是元认知策略，其均值为2.9834。说明学生的词汇学习策略的运用主要是采用情感策略和认知策略来进行词汇学习。

而通过对英语词汇学习策略的4个策略的各项分别进行平均值和标准差的分析，得知：

第一、在学生英语词汇学习元认知策略中，选择注意的均值得分较高，为3.11928。主动学习的均值得分次之，为2.95197。说明学生会注意到词的重点等，其主动学习意识和能力不高。具体体现在题32“我知道哪些词是我学习的重点”、题51“我知道哪些词我能猜出来哪些词我不能猜出来”。

第二、在认知策略中的第一个阶段首次处理中，学生运用词典进行英语词汇学习的策略均值得分最高，为3.70099。其次为记笔记策略，其均值为3.53674。猜测策略运用最低，其均值为3.45328。在认知策略中的第二个阶段强化中，重复策略的均值为3.29415，编码策略的均值为2.91494。说明学生运用重复的策略要高与编码的策略。在认知策略中的第三个阶段试用中，其均值较低，为3.17436。说明学生最常用的认知策略为用词典、记笔记、猜测和重复的策略。

第三、在学生英语词汇学习情感策略中，题9“乐于帮助请教自己的同学学习单词”的均值得分较高，为4.5740。题10“学单词遇到困难时会及时调整情绪”的均值得分次之，为4.0314。题11“学单词遇到困难时会及时调整情绪”的均值得分最低，为3.8789。说明学生愿意帮助同学和善于调整学习情绪，能够运用情感策略来进行英语词汇学习。

第四、在学生词汇学习策略的社交策略中，题“遇到生词我会问同学它的意思学生会求助于同学”得分最高，其均值为3.7713；题“遇到生词我会问同学它的意思”得分一般，其均值为3.2511；题“会和同学组成小组学习单词并练习运用”得分较低，其均值为2.7399；题“会找机会和老外交流来提高自己的英语词汇”得分最低，其均值为2.6861。说明学生在词汇学习中，会求助于同学而不是求助于老师、与同学组成小组，更不会求助于老外，说明学生没有积极的运用社交策略，不善于运用社交策略。

3） 实验组和控制组学生成绩的独立样本T检验：

医学检验的理解范文第4篇

关键词：思政课；营销专业；演绎教学；实践

作者简介：李象春，男，本科，教授，研究方向为高校思想政治教育；李丹，女，本科，副教授，研究方向为高职思想政治教育。

中图分类号：G711 文献标识码：A 文章编号：1671-0568（2013）20-0125-03

演绎是从一般原理走向个别结论的哲学思维方法。演绎在教学上的目的是要通过逻辑分析，从一般理论中寻找并还原个别的具体现象和事实，从而发现新知、深化理论，建立具有共性与个性相统一的、结构严谨的教学体系。

《思想道德修养与法律基础》作为校思政公共课，所阐述的是一般思想道德与法律基础理论。在对不同专业学生的施教过程中，要进一步提高为专业人才培养服务的教学质量，就必须依据该专业对从业者思想道德与法律行为的要求，进行个性化演绎，以引导学生认识本专业领域内《思想道德修养与法律基础》的个性现象与事实，为学生把在公共生活领域和专业工作领域中践行本课理论统一起来。为此，我们在营销专业学生中施教《思想道德修养与法律基础》课实践中进行演绎教学改革，从营销专业的个性出发，拓展了营绡专业思想道德教育视野，丰富了营绡专业法律、法规知识，取得了思政公共课为专业人才培养服务的较好效果。

一、在“思想道德”基础上进行“营销专业思想道德”演绎

相对于共性“思想道德”来说，具体的“专业思想道德”则是对具体专业岗位工作者的特殊要求，它是属于专业工作者思想道德的个性。因此，要提高为专业人才培养服务的教学质量，就必须在共性理论指导下追根溯源演绎出具体“专业思想道德”，并在丰富生动的个性中发现新知，丰富理论，把“思想道德修养”教学与具体的“专业思想道德”教学有机统一起来，体现思政课为具体专业人才培养服务的教学特色。让学生在学习“思想道德修养”一般理论的同时，为学生从事本专业个性化的“思想道德修养”实践奠定基础。因此，教师在教学中应以具体专业工作岗位对从业者的思想道德要求为依据，把握和处理好教材，充实个性化、专业性的实践教学案例和项目。

现在使用的《思想道德修养与法律基础》统编教材，是供高校各专业共用的公共教材。该教材虽然设有“第六章培育职业精神树立家庭美德”的内容，但阐述“职业精神”时仍然局限于一般“职业精神”和共性“职业道德”，并未也不可能囊括各个专业的个性思想与道德知识。作为应用型专业的“思想道德修养”教育，应当在思想道德规范上体现具体的专业特色，逐一把“思想”与具体“专业思想”、“道德”与具体“专业道德”有机地统一起来，这只能靠教师在处理教学内容、展开教学设计时加以解决。因此，在教学设计中，教师应当把上述共性职业精神和共性职业道德的基本要求，追根溯源演绎为具体的专业精神、思想与道德，建立起具有共性与个性相统一、结构严谨的教学体系，以实现由一般理论向具体专业实践的飞跃。

为把“思想道德修养”教学与具体专业思想道德教育相结合，我们在市场营销专业的施教中，以统编教材为基础，演绎并阐述了“树立营销专业理想，坚定营销专业信念”、“立足营销岗位，发扬爱国主义精神”、“领悟营销职业的人生真谛，立足营销岗位创造人生价值”、“加强营销职业道德修养，提高营销职业道德”等思想道德理论，把共性理想信念和道德修养与营销专业理想信念和道德行为规范有机地统一起来。

为引导学生实现从一般职业理想向具体专业职业理想实践的飞跃，我们在教学中选用了与营销职业相关的典型案例和项目，作为实现飞跃的桥梁。例如，在进行营销专业职业理想教育方面，选用“北京营销大王的故事”、“王永庆从米店小老板到塑胶大王的成功秘诀”等真人真事，具体生动地演绎了科学的营销职业理想与光明的营销前途的在联系，为学生确立营销职业理想，坚定营销职业信念展示出具体生动、形象逼真学习楷模。同时，还采用了“制定营销职业生涯规划”、“市场营销历史文化的探讨”等项目，让学生能在职业生涯规划中确立和巩固营销职业理想，并从市场营销的历史文化探讨中汲取睿智和力量，为顺利实现营销职业理想奠定坚实的思想认识基础。

在“道德修养”方面，把“道德修养”与市场营销主体的道德行为规范有机地统一起来。在营销专业的道德教学中，选用“人品重于商品”、“善待顾客得人心”、“海尔售后服务观念”，“声望的价值”等正面营销道德案例。同时，引用“损人不利已的价格战”、“宰客黑酒吧”、“三聚氰胺”、“苏丹红”、“塑化剂”等反面营销道德案例。通过对正、反营销道德行为及其后果的演绎，既较好地发挥了教师的主导作用，又充分调动了学生主体的积极性。不但让学生认识了市场营销行为道德的经济意义，而且深化了对一般道德理论和营销道德伦理内在联系的认识。这对体现应用型院校“思想道德修养”教学的专业性，增强教学的针对性，提高实效性具有重要意义，对引导学生实现从一般思想道德理论向具体专业的思想道德实践飞跃具有决定性作用。

二、在“法律基础”上进行“专业法律法规”演绎

高校各专业共用的《思想道德修养与法律基础》统编教材，在法律法规方面只概述了宪法、实体法和程序法。即使在第六章中所涉及的职业活动法律，仍只是各种职业的共性法律知识。如《民法通则》、《公司法》、《合同法》、《劳动合同法》、《民事诉讼法》、《仲裁法》等，很难囊括各种不同专业特定的“职业法律法规”。对此，在教学中从四个方面进行演绎。

1.从宪法来进行演绎。宪法是“母法”，专业性法律法规都是对“母法”的具体化。如宪法基本原则中的“公民权利原则”、“法治原则”等，在具体专业工作领域如何遵循，就必须通过专业工作领域的具体案例或项目来进行演绎。例如，给营销专业学生讲授这些宪法原则时，通过选用“买强卖”、“合同诈骗”等案例和商业纠纷“调解”、“仲裁”、“诉讼”等项目，演绎出主体平等、买卖自愿、公平交易、诚实守信，禁止滥用权利等商事法律原则。再如，宪法规定的公民平等权、人身自由权、社会经济权等基本权利，以及遵守宪法和法律、依法纳税等公民的基本义务。在讲授这些共性权利和义务时，通过“协商签约”、“侵权赔偿”等案例和项目，演绎出订立买卖合同的平等协商权、专利权、商标权、财产权、人身财产安全权、获得赔偿权、人格尊严权等具体权利，以及承担违约、违法责任，公平竞争，不掺杂使假，保证产品质量，接受监督，依法纳税等具体义务。

2.从刑法来进行演绎。刑法是关于各领域犯罪的普遍性法则，囊括了各专业领域“犯罪”行为的共性及刑罚法则。例如，刑法规定的十大类犯罪都是一般性分类，尚未涉及具体专业工作领域的具体犯罪行为。在对营销专业学生施教中，除营销专业课中所列举的法律法规案例外，还从近年的“3・15”报道中选用了有关营销方面的具体案例来进行演绎。通过“夺命电热毯”、“火锅爆炸”、“毒豆腐”、“毒玩具”等典型案例，从刑法规定的破坏社会主义市场经济秩序罪中，演绎出造假售假、商业欺诈、不公平竞争等具体的营销违法犯罪行为；从侵犯公民人身权利、民利罪中，演绎出假冒伪劣商品损人害人等具体的营销违法犯罪行为；从侵犯财产罪、妨害社会管理罪中，演绎出合同诈骗、地沟油、无证作坊、有毒食品等具体的营销违法犯罪行为；从贪污贿赂罪中演绎出商业贿赂、、走私贩私等具体的营销违法犯罪行为。

3.通过具体案例进行演绎。在教材所阐述的专业性法律中，通过选用相应的具体案例来进行演绎，可进一步体现法规的个性化内涵。例如，工商专业的市场主体法，以及环境保护法、产品质量法、食品安全法、商标法等，这些法律法规均属商法范畴，如果缺乏具体商业案例的演绎，空洞的法律规定是较难让人理解和掌握的，因而有待于教师在教学设计中把“法律基础”与具体营销的合法行为或违法、犯罪行为有机地统一起来。为此，我们有针对性地增选和充实了“野蛮装卸”、“违规运输危险品”、“私印私贴名牌商标”等具体案例，把商事法律法规演绎得淋漓尽致，发人深省。这不但有利于进一步提高学生对商业法律法规的理解能力和应用能力，还能让学生通过掌握什么是营销的合法行为，什么是营销违法行为和犯罪行为，进而深化对“法律基础”的认知，全面增强法律意识，提高法律素质。

4.通过具体项目来进行演绎。例如，“拟订商业合同文本”、“产品‘三包’实施方案”等项目都必须依法制作。在项目教学方面，精选“贸易或加工合同文本的制订”、“产品‘三包’说明书制作”、“安全运输规范”、“贸易谈判计划的制订”、“市场营销策划书的制订”、“发盘、回盘的法律效力分析”等，把“法律基础”中的“公司法”、“合同法”等与“市场主体行为规范”有机地统一起来。在依法制作这些项目中，先通过教师示范，再组织学生独立完成类似的项目。其实，这就是教师在“做中教”，学生在“做中学”的教学模式。在这种把“教、学、做”融为一体的教学模式中，学生在“做”中最容易从个性和共性的内在联系上，熟悉具体“专业法律法规”实践，理解“法律基础”理论。

三、把演绎和归纳结合起来，深化理论教学

演绎和归纳是科学研究常用的方法，也是进一步深化理论教学的重要方法。在教学中演绎是从一般理论推论出个别事实的方法，归纳则是从个别事实中概括出一般理论的方法。

长期以来，在《思想道德修养与法律基础》课的教学中，都是采用先抛出教材中归纳好的抽象理论，再用具体事例进行论证的实证教学模式。现在反其道而行之，先依据学生所学专业，运用相关案例或项目演绎个性化的思想道德与法律法规，这些专业性的典型案例或项目非常生动、具体，也最贴近学生所学专业和毕业后的工作实际，因而是学生所喜闻乐见的，他们学习起来也兴致盎然。在演绎的基础上，再从生动具体的案例或项目中归纳出一般的理论，把专业性的个性化案例或项目，同教材阐述的一般理论紧密联系起来，让学生在具体案例或项目中不但欣然接受理论，而且深化了对理论的认识。例如，给营销专业学生讲授“加强道德修养锤炼道德品质”时，首先讲述“张瑞敏砸冰箱”的故事。1984年12月26日，35岁的张瑞敏“临危受命”，走马上任担任海尔冰箱厂厂长。张瑞敏一上任就提出：“有缺陷的产品就是废品。”在这种思想指导下，1985年张瑞敏带头把76台有质量缺陷的冰箱用大锤全部砸烂。如今在海尔科技馆里的那把“闻名遐尔”的大铁锤，仍在向人们诉说着质量与品牌的故事。这一锤砸出的不仅仅是质量意识，更是一种对顾客负责的诚信观念。从此，质量意识、诚信观念深深扎根于海尔人心中，引导海尔成长成为世界闻名的跨国大公司。

在演绎这个真实故事的基础上进一步归纳：从张瑞敏砸冰箱的故事中，不难发现“质量就是品牌，诚信就是生命”商场虽如战场，胜负难料，但真正的商人从来都是“人品重于商品”。只有坚守诚信的品德，才能树立品牌，赢得市场，把企业做大做强。教师三言两语的归纳，升华了教材阐述的“诚信理论”。

综合运用归纳――演绎法的过程，也是培养学生创新性思维能力的过程。创新就是在实践中不断从已知去发现未知，又用新知去指导新的实践，不断获得新认识、制造新工具、从事新实践的过程。创新离不开创新思维，创新思维就是在实践中不断由感性认识上升为理性认识，不断由新的认识向新的实践飞跃的过程。归纳和演绎的关系就是一般与个别不断转化的辩证关系。因此，在教学中坚持以实践性案例和项目为基础，把归纳和演绎结合起来，从演绎到归纳，又从归纳到演绎的过程，就是使个性与共性二者相互渗透、相互转化、相互统一的过程，是启迪睿智、创新思维、诱发灵感、培养创新能力的过程。

参考文献：

[1]基本原理概论编写组.基本原理概论[M].北京：高等教育出版社，2010.

[2]陈潭，程瑛.案例教学法及其课堂教学模型构建[J].湖南师范大学教育科学学报，2004，（4）.

[3]黄春雷.职业院校行动教学法的实施与规范[J].中国西部科技，2007，（20）.

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医学检验的理解范文第5篇

[关键词]肝细胞生长因子；骨髓间充质干细胞；颗粒脂肪移植；血管形成；基因转染

[中图分类号]R62 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455（2014）15-1260-04

Experimental study of transplanted mesenchymal stem cells transfected with adenoviral ventor mediated HGF gene enhance angiogenesis of grain fat grafts

WANG You-hu1，LIU Yi2

（1.Department of Otorhionolaryngology，Nead and Neck Surgery，The First Hospital Lanzhou University，Lanzhou 730000，Gansu，China；2.PLA Center of Plastic Surgery，Lanzhou General Hospital of Lanzhou Command， Lanzhou 730050，Gansu，China）

Abstract： Objective To investigate the angiogenetic effect of transplanting mesenchyma stem cells （MSCs） transfected with HGF gene on fat grafts. Methods MSCs of male Wistar rats were collected and cultured in vitro，and were transfected with Ad - GFP or Ad-HGF.The transfection infectivity of Ad - GFP to MSCs was assayed by fluorescent microsopy and flow cytometry.150rats were randomly divided into 5groups： control group （group A，30rats），MSCs group （group B，30 rats），Ad-HGF group （group C， 30rats），MSCs transplanted with Ad-GFP group（groupD，30rats）， MSCs transplanted with Ad-HGF group（groupE， 30 rats）.Then free fat tissue from inguinal region，mixed with MSCs，Ad-HGF，MSCs transplanted with Ad-GFP and MSCs transplanted with Ad-HGF respective，were transplanted to rats back， but control group were only mixed with DMEM-LG. fat grafts were obtained on day 3，5，7，14，28，60 implantation，The expression of CD34 in fat grafts were detected by immunohistochemistry. Results Transfection efficiency was correlated with the multiplicity of infection （MOI）and a highest transfection efficiency （86.4）could be achieved at MOI of 100.MSC expressed HGF at a high level after being transfected with the Ad-HGF for 48h .The HGF expression could maintain for at least two weeks.Microvesselquantity in group E was much more than that in other group （P

Key words：HGF；MSC；Fat grafts transplant；angiogenesis；gene transfection

Traktueue等[1]预测脂肪移植将来在修复组织缺损中将扮演重要的角色，但是颗粒脂肪移植后存在最大问题是移植脂肪因缺血、缺氧后液化坏死，易被吸收或形成囊肿、纤维化，从而影响远期效果。因此，脂肪移植要取得进一步的进展，就要深入研究脂肪移植后的再血管化[2-3]。

骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）是一类重要的干细胞，可跨胚层分化为各类细胞。其容易分离和培养扩增，同时具有可移植性，易于外源基因转染和表达，是基因治疗理想的载体细胞。肝细胞生长因子（ hepatic growth factor，HGF）是一种多功能的细胞因子，其生物学活性通过单一受体c-Met（c-met protoncogene product） 介导，引起细胞内一系列信号转导途径的级联激活，从而调节细胞的增殖、分化、运动和血管生成等。基于此，我们用腺病毒为载体，把HGF基因导入骨髓间充质干细胞，然后与颗粒脂肪混合移植，充分发挥MSCs多项分化潜能和HGF强大的血管效应，旨在为颗粒脂肪移植建立新生血管诱导生物组织工程模式。

1 材料和方法

1.1实验材料：Ad-GFP（携带绿色荧光蛋白的重组腺病毒）和Ad-HGF（携带人肝细胞生长因子基因的重组腺病毒），兰州总医院哈小琴老师惠赠；Percoll试剂（Amersham Pharmacia Biotech公司）；兔抗人CD34多克隆抗体及SP试剂盒（武汉博士德生物工程公司）；DMEM-LG培养基（Gibco公司）；OLYMPUS XT70型荧光倒置显微镜（OLYMPUS公司，日本）；流式细胞仪（BD公司，美国）；Imge-Pro Plus 图像分析软件（Version 4.1）（美国Media Cybernetics公司）。

1.2MSCs的分离、培养与扩增：应用Percoll（1.073g/ml）密度梯度离心法从健康雄性Wistar大鼠（体重120g）的骨髓中分离得到单核细胞，接种于含10%胎牛血清的DMEM-LG培养液中，置于37℃、5%CO2 条件下培养，72h后换液。原代培养6d左右形成细胞克隆，约10天形成贴壁细胞层。胰蛋白酶消化后传代扩增，第3～5代用于实验。

1.3重组腺病毒介导GFP基因/HGF基因转染MSCs：将细胞以1×106 接种于6孔板，贴壁后，弃去培养上清，加入含不同感染强度的Ad-GFP病毒颗粒的DMEM-LG培养基（0、25、50、100、200pfu/ cell）孵育2h，换含5%血清的培养基继续培养48h检测荧光。转染48h后在荧光显微镜下观察绿色荧光强度并用流式细胞仪检测转染效率。Ad-HGF感染采用Ad-GFP转染率最高的病毒强度。

1.4实验动物分组处理及指标检测

1.4.1实验动物分组处理：150只雌性Wistar大鼠（兰州总医院动物实验科提、供）随机分为：空白对照组（A组 n=30）、Ad-HGF组（B组 n=30）MSC组（C组n=30）、Ad-GFP感染MSC组（D组 n=30）、Ad-HGF感染MSC组（E组 n=30）。用3%的戊巴比妥钠腹腔注射麻醉（40mg/kg）取腹股沟区脂肪1ml，均匀剪成小块，用生理盐水冲洗。A组 颗粒脂肪1ml+0.4mlDMEM-LG；B组 颗粒脂肪1ml+0.4ml DMEM-LG+1х108pfuAd-HGF液；C组颗粒脂肪1ml+0.4mlDMEM-LG+1×106MSC；D组颗粒脂肪1ml+0.4ml DMEM-LG+1×106MSC（携带GFP基因）；E组颗粒脂肪1ml+0.4mlDME-LG+1×106MSC（携带HGF基因）均匀震动5min，用注射器接12号针头注射于背部的皮肤与肌肉之间。3、5、7、14、28、60天每次各组取5只脱颈处死，并沿被膜分离出移植物，标本用10%富尔马林固定，规制成石蜡切片， HE染色进行组织病理学观察。

1.4.2 血管染色和血管计数方法：按照免疫组化SP法操作步骤进行，工作液浓度为1：150。每张切片分别在周边区和中央区各选3个高倍（×4OO）视野，每个视野中进行微血管计数，然后求其均值。凡是染成棕色单个内皮细胞或内皮细胞簇均作为1个血管计数。

1.5统计学分析：所有数据采用SPSS11.5统计学软件进行处理，数据用均数±标准差（x±s）表示， 并进行单因素方差分析和多个样本均数之间的多重比较，P

2 结果

2.1MSCs 的体外培养：从骨髓中分离获取的单个核细胞培养24h后逐渐出现贴壁细胞，换液逐渐除去未贴壁细胞，培养4天可见似分裂中的成纤维样细胞，6天可见多个细胞克隆形成似，12～14天细胞形态不一、多呈梭形，90%以上融合。传代细胞于24h内贴壁，10～12天融合。

2.2GFP基因/HGF基因在MSC中的高表达：Ad-GFP转染对数生长期MSCs 48h后在荧光显微镜下观察，在低倍的视野下呈“满天星”状，在高倍视野发绿色荧光的MSC，呈不规则形，有些细胞的轮廓清晰可见，有些融合成片（如图1）。当MOI=100时，用FCM检测GFP表达率89.6%，感染效率最高，说明重组腺病毒能够有效的感染MSC。ELISA检测HGF分泌量结果显示，感染MSC后HGF基因可在短期内高效表达，48h表达量最高（如图2）。

2.3 移植颗粒脂肪组织的病理学变化：所有移植体均被纤维被膜包裹。移植后5、7天，E组有大量的血管长入移植物（如图3）。镜下，早期脂肪移植物内及周围有单核细胞、淋巴细胞、浆细胞及中性粒细胞浸润，其中A、B、C、D中央液化坏死明显，只有周边脂肪组织结构完好；而E组坏死较少，且新生血管丰富，有些血管呈垂直状向移植物延伸移植物。移植后26、60天E组包裹纤维被膜厚，而间隔较薄，体积保持明显好于其他4组，细胞分化成熟。

2.4平均微血管密度记数：免疫组化染色后血管呈棕黄色，切片背景清晰，微血管形态不规则，管腔由染成棕黄色的内皮细胞围成（如图4）。腔内可见红细胞，部分血管无明显管腔呈条索状，有的只见到单个或成团的内皮细胞， Ad-HGF转染MSC组7天新生血管达到高峰，14天后趋于稳定。与其他4组相比较，在第3天无差异，但在术后5、7、14、28、60天时均有差异（P

3 讨论

随着目前分子生物学、基因转染等技术的发展，为加速颗粒脂肪移植后血管的重建提供了新的思路。

HGF是一种特异的促内皮细胞生长因子，具有很强促血管内皮细胞有丝分裂、增生，抑制凋亡作用。在兔与小鼠缺血模型中，HGF 能刺激新生血管生成，且不论在体内还是体外试验HGF 的血管生成活性比血管内皮生长因子（VEGF）及碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）更为强大[4]。但是，HGF半衰期短，费用高，局部给药困难等缺点而难以推广应用。而我们在HGF基因加速创面血管新生方面已取得了一定的进展[5]。

本实验以腺病毒为介导，将HGF基因导入体外培养的MSCs中，和大鼠自体颗粒脂肪混合移植到其背部，发挥HGF强大的血管作用和MSC多项分化作用，共同协同促进颗粒脂肪移植体的新生血管。实验结果显示，Ad- HGF转染MSC组新生血管生成7天达高峰，提前于其他四组和文献报道[6]的14天，且无论在早期还是长期移植体血管的数量明显多于其他4组（P

MSCs不仅免疫毒性很低，易于外源基因转染和表达等优点，而且移植后可促进新生血管的生成，其途径：①MSC产生VEGF、bFGF、PDGF血管生成素；②能分化成血管内皮细胞和平滑肌细胞[9]。实验结果也显示MSC组的新生血管平均数量多余空白对照组。至于MSC是否像文献报道那样能分化成血管内皮细胞和平滑肌细胞，有待进一证明。

本实验选用腺病毒为载体，该病毒有以下优点：安全、无致畸，致病及致癌性；对分裂细胞及癌细胞株的转染效率达到90%～100%；腺病毒感染细胞时DNA不整合到宿主细胞染色体中；腺病毒容易制备、纯化和浓缩，可达到较高滴度；腺病毒载体插入外原基因的容量较大。实验结果显示通过腺病毒介导，GFP基因/HGF基因成功导入MSCs，并高效表达。

综上所述，骨髓间充质干细胞经转染肝细胞生长因子基因后能持续的表达HGF，从而有效的促进自体颗粒脂肪移植后新生血管的生成，有望提高脂肪移植的远期效果。但是要将基因治疗与干细胞移植真正应用于临床，必须进一步研究这种促血管生物工程模式的安全性、稳定性和可控性。

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