保密制度的意义

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保密制度的意义范文第1篇

【摘要】 【目的】 建立体外诱导骨髓间质干细胞分化的平滑肌细胞模型，探索骨髓间质干细胞分化的平滑肌细胞在动脉粥样硬化发生发展过程中的作用。【方法】采用贴壁法从SD大鼠骨髓中分离骨髓间质干细胞(BMSC)，运用条件培养基诱导BMSC分化成平滑肌细胞(SMC)，采用免疫荧光法分析骨髓间质干细胞及其分化后的细胞特异性标志物。羟脯氨酸测定法检测两种细胞合成细胞外基质能力，粘附和迁移实验检测两种细胞的粘附和迁移能力。【结果】 ①分离的BMSC呈长梭形，呈骨髓间质干细胞表型。经条件培养基诱导分化15 d后，诱导分化的细胞形态呈梭形平滑肌样。表达平滑肌细胞特异性蛋白标志物α-肌动蛋白(α-SMC)和平滑肌肌球蛋白重链1(SM-MHC1)，呈平滑肌细胞表型，命名为骨髓间质干细胞分化的平滑肌细胞(BMSC-SMC)。②羟脯氨酸测定结果显示，未处理BMSC-SMC合成较高量的胶原，其合成量低于VSMC的合成量，经80 mg/L ox-LDL处理72 h后，BMSC-SMC合成胶原的能力显著降低(P < 0.01)。③细胞粘附实验结果发现，未处理BMSC-SMC有中等数量的细胞发生粘附，经80 mg/L ox-LDL处理1 h后，BMSC-SMC细胞粘附的数目少量增加，但两者比较差异无统计学意义(P > 0.05);经80 mg/L ox-LDL处理24 h后，BMSC-SMC细胞迁移的数目显著增多，与未处理BMSC-SMC比较，差异具有统计学意义(P < 0.01)。【结论】 ①经条件培养基诱导培养后，骨髓干细胞表达平滑肌特异性标志物，SMα-SMC和SM-MHC1，提示骨髓干细胞能成功分化成平滑肌细胞。②骨髓干细胞诱导成平滑肌细胞后，具有血管平滑肌细胞的一些生物学特征，如增殖能力和分泌胞外基质能力，同时保留了骨髓干细胞的一些生物学特征，如高迁移能力，为其在促动脉粥样硬化因素作用下，跨内皮细胞层和增殖的平滑肌细胞层迁移创造了有利的条件。

【关键词】 氧化型低密度脂蛋白; 骨髓间质干细胞; 诱导分化; 血管平滑肌细胞

Abstract： 【Objective】 To establish the model of smooth muscle cell differentiated from bone mesenchymal stem cell (BMSC-SMC) in vitro and investigate the roles of BMSC-SMC in the occurrence and development of artherosclerosis (As). 【Methods】 BMSC was isolated from the femoral bone of SD rats by adherent method， and VSMC from thoracic aorta. BMSC-SMC was differentiated from BMSC by special condition medium. The specific markers of BMSC and smooth muscle cell differentiated from bone mesenchymal stem cell (BMSC-SMC) were identified by immunofluorescence (IF) staining. After treated with 80 mg/L ox-LDL for 72 h， hydroxyproline assay was performed to detect the extracellular matrix synthesis capacity， and adhesion and migration experiments were used to assay the adhesive and migratory capacity of BMSC-SMC and VSMC. 【Results】 ① The isolated BMSC present a slim-spindle appearance. The cells (BMSC-SMC) induced by condition medium containing b-FGF and TGF-β for 中膜血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells，VSMC)迁移到内皮下层并异常增殖或凋亡是动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)形成的重要步骤，近年的研究发现[1]骨髓干细胞分化而来的平滑肌细胞参与动脉粥样硬化的发生和发展，但骨髓干细胞(bone mesenchymal stem cell， BMSC)分化而来的平滑肌细胞在新生血管内膜中究竟是修复血管，还是促进了动脉粥样硬化的发生，迄今为止，尚不清楚。本研究在体外诱导骨髓干细胞分化为平滑肌细胞简称骨髓间质干细胞分化的平滑肌细胞(smooth muscle cell differentiated from bone mesenchymal stem cell， BMSC-SMC)，并通过羟脯氨酸测定法检测细胞合成细胞外基质能力，粘附和迁移实验检测细胞的粘附和迁移能力，探讨BMSC-SMC在动脉粥样硬化发生发展中的作用。

1 材料与方法

1.1 材 料

胎牛血清、L-DMEM、胰蛋白酶均为美国GIBCO 公司产品;L-谷氨酰胺、油红O、b-FGF、TGF-β均为美国Sigma 公司产品;羟脯氨酸测定试剂盒购自南京建成生物研究所;其余试剂均为分析纯;4 ～ 6周SD大鼠由湖南农业大学动物科技学院实验动物中心提供，合格证号：scxk(湘)：2003-0003。

1.2 方 法

1.2.1 细胞培养

①大鼠BMSC分离、培养、纯化：参照文献[2，3]方法，取4 ～ 6周SD大鼠体质量100 ～ 120 g，雌雄不限。断颈处死大鼠，无菌条件下取出股骨、胫骨，并彻底清除附着其上的肌肉组织，去除股骨、胫骨两端骨髓，显露骨髓腔，用含有肝素(200 U/mL)的PBS冲出骨髓腔内骨髓，1 000 r/min离心6 min，弃去上层脂肪和上清。收集细胞沉淀，使用含150 mL/L胎牛血清的L-DMEM培养液制成均匀的细胞混悬液，按照1 × 105/mL的密度接种至50 cm2培养瓶中，在37 ℃、体积分数为5% CO2、饱和湿度条件下培养。②大鼠血管平滑肌细胞培养：参照本实验室方法，SD大鼠，雌雄不限，体质量150 ～ 200 g，4 ～ 6周龄。腹腔麻醉后，无菌操作取出胸主动脉段，置于含PBS液的平皿中漂洗3次，将凝块洗干净后剥除外膜的纤维脂肪层，然后纵行切开血管，刮除内膜即内皮细胞迅速撕下中膜内、中层，切成约1 mm宽的小条，浸泡在含血清的PBS液中，并将切好的小组织块种植于培养瓶壁。置于37 ℃ 恒温箱，2 h左右，加入含200 mL/L胎牛血清的H-DMEM培养液，待细胞铺满瓶底后0.25%胰蛋白酶进行消化传代，每2 ～ 3 d一次，即大鼠VSMC。

1.2.2 定向诱导BMSC向SMC分化

参照文献[4]方法将含150 mL/L胎牛血清的H-DMEM中加入碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF，2.5 ng/mL)和转化生长因子(TGF-β，5 ng/mL)，孵育第4代MSC，每2 ～ 3 d一次。诱导15 d，待细胞铺满瓶底后，2.5 g/L胰蛋白酶进行消化传代。

1.2.3 免疫荧光检测分化平滑肌细胞表明标志物

细胞培养于预先放有无菌盖玻片的6孔培养板，处理结束后，每种抗原检测都分为实验组和对照组。取生长状况良好的细胞用磷酸盐缓冲液(PBS)洗3遍，20 g/L多聚甲醛4 ℃固定15 min，PBS洗3次，每次5 min，0.5% Triton X-100穿透10 min，PBS洗3次，每次5 min。30 mL/L山羊血清室温下封闭1 h，1：100加入SMα-actin和SM-MHC1小鼠抗大鼠一抗工作液，室温下孵育1 h，PBS洗3遍，每次5 min，1：500 加入CY3标记二抗，室温1 h，PBS洗3遍，每次5 min，封片剂封片，荧光显微镜下观察，KAPPAImageBase 图像系统成像。

1.2.4 氧化低密度脂蛋白的制备

参照文献[5]的方法制备氧化低密度脂蛋白，正常人血浆低密度脂蛋白(密度1.040 ～ 1.063 mg/mL)采用序列超速离心法制备。将LDL置于PBS溶液中，4 ℃透析36 h，充分去除EDTA后，用含10 μmol/L CuSO4 的PBS溶液(pH7.2)，37 ℃透析20 h，进行氧化修饰。氧化修饰后的LDL(ox-LDL)置含100 μmol/L EDTA 的PBS中，4 ℃透析24 h，终止氧化。超滤除菌，BCA试剂定量蛋白，调蛋白浓度至1 g/L用于实验。

1.2.5 胶原含量测定实验检测ox-LDL对BMSC-SMC及VSMC细胞胶原合成量的影响

BMSC-SMC及VSMC细胞分别以1.0 × 105个/mL的密度种于6孔板，培养24 h后，再以无血清DMEM培养24 h，换成100 mL/L胎牛血清的DMEM培养液，将细胞分为实验组和对照组，实验组分别用80 mg/L ox-LDL处理，对照组H-DMEM培养，培养72 h后，分别以2.5 g/L胰蛋白酶消化细胞，分别收集和处理细胞，具体方法参照羟脯氨酸测定试剂盒，计算羟脯氨酸量。

1.2.6 细胞粘附实验检测ox-LDL对BMSC-SMC及VSMC细胞粘附的影响

用无包被的6孔平底培养板和一定浓度的FN包被的6孔平底培养板，4 ℃静置过夜，用含热变性的牛血清白蛋白(BSA，1 mg/mL)的Tris缓冲盐冲洗30 min。胰蛋白酶消化BMSC-SMC及VSMC细胞后，将细胞分为实验组和对照组，实验组分别用含80 mg/L ox-LDL的H-DMEM培养液重悬细胞，制成细胞密度为1.0 × 105个/mL的细胞悬液，对照组用H-DMEM培养液重悬细胞，制成细胞密度为1.0 × 105个/mL细胞悬液，每孔接种100 μL的细胞悬液， 37 ℃温箱内静置1 h，未粘连的细胞可洗去，粘附的细胞用40 g/L的多聚甲醛固定，HE染色，用光学显微镜观察粘附反应，按固定视野记5个高倍视野( × 100)的细胞数，每次实验做3孔，取均值。

1.2.7 细胞迁移实验检测ox-LDL对BMSC-SMC及VSMC细胞迁移的影响

BMSC-SMC及VSMC细胞用2.5 g/L胰蛋白酶消化平滑肌细胞，分别收集和计数细胞，制成细胞悬液;将细胞悬液按1.0 × 105个/mL的密度种于6孔板中。再加入含100 mL/L胎牛血清的DMEM，放入37 ℃和体积分数5% CO2的孵箱中静置培养48 h，换用无血清的DMEM培养基，培养24 h，使细胞同步化，去上清培养液，无菌PBS洗涤3次，用200 μL的无菌Tip头沿6孔板中央迅速画一直线，用PBS清洗3次，将孔分为实验组和对照组，实验组用含80 mg/L ox-LDL的H-DMEM培养液培养细胞，对照组用H-DMEM培养液细胞，37 ℃温箱内静置24 h，每组重复3次;分别于24 h后取出，相差显微镜下观察，拍照。

1.3 统计学处理

实验所得数据采用x ± s表示，用SPSS13.0进行统计处理，采用两组间t检验比较，P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 骨髓间质干细胞源性SMC和血管SMC表型鉴定

用免疫荧光法检测VSMC早、晚期标志物SMα-actin和SM-MHC1[6]。结果表明，诱导的BMSC-SMC表达VSMC的早、晚期标志物SMα-actin和SM-MHC1，在胞浆内呈丝状，细胞骨架样分布，呈平滑肌细胞表型(图1 B、D)。其表达情况与VSMC相似(图1 A、C)。

2.2 骨髓间质干细胞源性SMC和血管SMC细胞合成细胞外基质能力

利用羟脯氨酸测定试剂盒，检测细胞合成胶原的含量，其原理是，羟脯氨酸在胶原蛋白中占13.4%，在弹性蛋白中占极少量，其它蛋白中均不存在。羟脯氨酸在氧化剂的作用下所产生的氧化产物与二甲氨基苯甲醛作用呈现紫红色，根据其呈现的深浅可推算出其含量。检测结果显示，未处理BMSC-SMC合成较高量的胶原，而其合成量低于VSMC的合成量，经80 mg/L ox-LDL处理72 h后，BMSC-SMC合成胶原的能力显著降低(P < 0.01)，相同处理VSMC合成胶原的能力亦降低(P < 0.05，图2)。

2.3 骨髓间质干细胞源性SMC和血管SMC细胞粘附能力

细胞粘附实验结果发现，细胞培养1 h后，未处理BMSC-SMC有中等数量的细胞发生粘附(图3C)，经80 mg/L ox-LDL处理1 h后，BMSC-SMC细胞粘附的数目少量增加(图3D)，但两者比较无显著性差异(P > 0.05)。同时未处理VSMC亦有中等数量的细胞发生粘附(图3A)，经80 mg/L ox-LDL处理1 h后，细胞粘附的数目有所减少(图3B)，但两者比较无显著性差异(P > 0.05)。

2.4 骨髓间质干细胞源性SMC和血管SMC细胞迁移能力

细胞损伤-修复实验是经典的检测细胞迁移能力的实验，检测发现，损伤细胞24 h后，未处理BMSC-SMC有中等数量的细胞发生迁移，少量细胞迁移至划痕的中线，经80 mg/L ox-LDL处理24 h后，BMSC-SMC细胞迁移的数目显著增多，许多细胞迁移至的划痕的中线对面，与未处理BMSC-SMC比较，具有显著性差异(P < 0.01，图4B和D)，相同处理VSMC的细胞数目和距离亦增强(P < 0.05，图4F和H)，但增强幅度较BMSC-SMC小[7]。

3 讨 论

ox-LDL由低密度脂蛋白(LDL)在体内氧化形成，它是AS发生、发展乃至不稳定斑块形成的关键因子[8]，其在AS中的病理作用已公认[9-10]。目前在体外研究中用的低密度脂蛋白大多是用超速离心法制备，所制备的LDL要求4 ℃避光保存，保存时间不超过3周，天然的低密度脂蛋白经氧化修饰形成的脂蛋白，称为ox-LDL，用过度金属离子Cu2+、Fe2+等，在体外适宜条件下与LDL孵育一段时间后，能使LDL发生氧化变构，成为ox-LDL[11]。

VSMC从血管的中层向内膜下迁移，并以自分泌、旁分泌的形式分泌大量的细胞外基质、生长因子、细胞因子和血管活性物质在高血压、动脉粥样硬化、冠脉搭桥术及血管成形术后再狭窄等多种血管损伤性疾病的形成过程中起着重要的作用[12-13]。而细胞-细胞之间以及细胞-细胞外基质之间的正常粘附是细胞生长、分化、迁移以及损伤修复的基础，并负责细胞内外信号的传递，也是心血管系统所有组成成分维持正常功能的前提条件，粘附功能的异常在心血管疾病发病机制中也起着关键的作用[14]。VSMC的增殖和迁移以及细胞外基质的重构在AS的发生发展中起重要作用[15-17]。VSMC 从动脉血管中层到血管内皮层的迁移，使血管功能异常。VSMC从内膜基底层移行入内膜层，导致内膜增厚，形成纤维帽，最终形成动脉粥样硬化斑块[18]。然后局部炎症环境可以引起胶原酶的表达，抑制蛋白水解酶抑制剂的表达，从而使纤维帽变得薄弱易于破裂，进而引发血栓的形成，VSMC增生、迁移的程度决定了预后。

BMSC能进行自我更新，能够分化成脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞和肌细胞等不同的细胞[19-21]。局部的环境和细胞群体决定了其分化方向[22]，在体外TGF-β可诱导BMSC分化为VSMC[6]。2002年，Sata[1]提出血液干细胞分化而来的平滑肌细胞参与动脉粥样硬化的发生和发展。

在本研究中我们对BMSC-SMC和VSMC合成细胞外基质能力、粘附能力以及迁移能力进行分析，结果显示，经ox-LDL处理后，BMSC-SMC及VSMC合成胶原的能力都显著降低;但细胞粘附能力均无差别; BMSC-SMC及VSMC细胞迁移的数目均显著增多，并且BMSC-SMC的增强幅度更大。上述结果提示，在ox-LDL的作用下，BMSC-SMC合成胶原能力的下降，可能与其迁移能力有关，但与其粘附能力无关，说明BMSC细胞在向VSMC细胞分化的过程中，出现了一些与VSMC具有相似性细胞生物学特征，同时保留了其BMSC细胞的一些特征。而且BMSC-SMC的迁移能力较VSMC强，为其在促动脉粥样硬化因素作用下，跨内皮细胞层和增殖的平滑肌细胞层迁移创造了有利的条件。

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保密制度的意义范文第2篇

关键词：荷叶水提物；氧化低密度脂蛋白；单核细胞趋化蛋白1；血管细胞黏附分子1

中图分类号：R285 文献标识码：A 文章编号：1673-7717（2011）04-0799-04

Water Extract of The Lotus Leaf Suppressed Expression of Monocyte Chemoattractant

Protein-1（MCP-1） and Vascular Cell Adhesion Molecule 1（VCAM-1） Induced By

Oxidized Low Density Lipoprotein （Ox-LDL） in Human Umbilical Vein Endothelial Cells

ZHANG She-bing, XU Xin, MA Shao-chun, TANG Liang-qiu, JIANG Zhi-ping，FAN Wen-mao,

CHEN Jin-feng，CHANG Guan-nan, YANG Li-jun

（Department of Cardiology, Yuebei People's Hospital, Shaoguan 512026，Guangdong，China）

收稿日期：2010-11-25

基金项目：广东省“建设中医药强省”科研立项（2009066）；韶关市科技信息局资助项目［韶科（卫）2009-01］

作者简介：张社兵（1971-），男，湖南郴州人，副主任医师，医学博士，研究方向：冠心病心律失常。

通讯作者：徐新（1956-），男，江苏无锡人，教授，硕士研究生导师，硕士，研究方向：动脉粥样硬化。

Abstract:Objective:To investigate the expressions of monocyte chemoattractant protein-1（MCP-1） and vascular cell adhesion molecule 1（VCAM-1） induced by oxidized low-density lipoprotein（Ox-LDL） in human umbilical vein endothelial cells（HUVECs） suppressed by water extract of the lotus leaf.Methods:HUVECs were cultured and treated with Ox-LDL of 3 different concentrations （25 microg/L, 50 microg/L, and 100 microg/L） for 24 hours. We determined mRNA expressions of MCP-1 and VCAM-1 by semi-quantitative reverse-transcription polymerase chain reaction （RT-PCR） .Concentration of MCP-1 and VCAM-1 protein in medium was measured using the enzyme linked-immuno-sorbent assay （ELISA） method. Pretreated HUVECs with water extract of the lotus leaf 24 hours before adding Ox-LDL ,then cells were treated with Ox-LDL（50 microg/L） for 24 hours. mRNA expressions of MCP-1 and VCAM-1 were determined by semi-quantitative RT-PCR. Concentration of MCP-1 and VCAM-1 protein in medium was measured using the ELISA method.Results：Exposure of HUVECs to Ox-LDL （25 microg /L，50 microg /L and 100 microg /L respectively） resulted in upregulation of MCP-1 and VCAM-1,both mRNA and protein expressions, in a dose-dependent manner. Expressions of MCP-1 and VCAM-1 induced by Ox-LDL（50 microg /L） were significantly suppressed by water extract of the lotus leaf in a dose-dependent manner. Conclusions:our results suggest that Ox-LDL can induce expressions of MCP-1 and VCAM-1 in a dose-dependent manner in HUVECs, and this process can be suppressed by water extract of the lotus leaf.

Key words:water extract of the lotus leaf；oxidized low-density lipoprotein；monocyte chemoattractant protein-1；vascular cell adhesion molecule 1

氧化低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein，Ox-LDL）是动脉粥样硬化最明确的危险因子之一，Ox-LDL可能通过诱导内皮细胞表达黏附分子和趋化因子，募集单核细胞向血管内皮黏附，从而在动脉粥样硬化的发生中起重要作用。荷叶为睡莲科植物莲的叶，又名藕叶，种植于我国南方大部分省份，荷叶药、食两用，既往研究表明，荷叶中的生物活性物质具有降脂、减肥、降血压等多种作用【sup】［1-4］【/sup】。本研究旨在探讨荷叶水提物能否抑制Ox-LDL诱导的血管内皮细胞表达趋化因子和黏附分子。

1 材料与方法

荷叶水提物（由湘南学院关章顺教授提供），提取方法按文献【sup】［11］【/sup】，人脐静脉内皮细胞［ATCC, USA.（CRL-1730）］，新生小牛血清（中南大学湘雅中心实验室），RPMI 1640培养基（GIBCO），Ox-LDL（北京协和三友公司），Trizol（Molecular Research Center, Inc），RevertAid【sup】TM【/sup】 First strand Cdna Synthesis Kit（Fermentas），台盼蓝染色细胞存活率检测试剂盒（江苏碧云天生物技术研究所），TaKaRa Taq【sup】TM【/sup】 Hot start version［宝生物工程（大连）有限公司］，DNA Ladder Marker［宝生物工程（大连）有限公司］，引物设计与合成（北京奥科生物技术有限责任公司），MCP-1和VCAM-I ELISA试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司）

1.1 人脐静脉内皮细胞的培养 人脐静脉内皮细胞株（human umbilical vascular endothelial cells，HUVECs）用含10%小牛血清的RPMI1640完全培养基（含10mmol/L的HEPES，2mmol/L谷氨酰胺，1.5g/L碳酸氢钠，10%小牛血清），37℃、5%CO【sub】2【/sub】培养箱中培养，隔天换液，生长至85%融合时接种于6孔板，接种密度为1×10【sup】6【/sup】/孔。台盼蓝染色检测细胞活力大于90%。待细胞贴壁生长占孔板底面积约50%满后，随机分组用于实验，每组重复3孔。

1.2 Ox-LDL刺激和药物干预实验 Ox-LDL刺激组为细胞中分别加入25mg/L、50mg/L、100mg/L的Ox-LDL，共同孵育24h，药物干预组则分别在细胞中加入10mg/L、20mg/L、40mg/L的荷叶水提物（用含DMSO的无血清培养基配制，DMSO含量＜1‰）共同孵育24h，去上清，分别再加50mg/L的Ox-LDL刺激24h，收集细胞用于提取总RNA，空白对照组细胞中除不加Ox-LDL和药物外其余条件同刺激组。

1.3 半定量RT-PCR方法检测细胞的单核细胞趋化蛋白1（monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1）和血管细胞黏附分子1（vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1）的mRNA的表达：收集细胞，用Trizol提取细胞总RNA，经紫外分光光度仪（Beckman DU-640）测定OD 260/280比值在1.8-2.0，半定量RT-PCR检测MCP-1和VCAM-1的mRNA表达，RT-PCR操作按试剂盒说明书进行。RT反应条件：70℃ 5min，25℃ 5min，25℃ 10min，42℃ 60min，70℃ 10min。人MCP-1引物：上游引物5’-CAT AGC AGC CAC CTT CAT TCC-3’，下游引物：5’-GAG TTT GGG TTT GCT TGT CCA-3’，PCR扩增片段长254 bp。人VCAM-1引物序列：上游：5’-TCT ACG CTG ACA ATG AAT CC-3’，下游：5’-ACT TGA CTG TGA TCG GCT TC-3’，扩增长度178bp；GAPDH引物序列：上游：5’-TCGGAGTCAACGGATTTGGTCGTA-3’，下游：5’-ATGGACTGTGGTCATGAGTCCTTC-3’，扩增长度521bp。引物由北京奥科生物技术有限责任公司合成。MCP-1反应条件：94℃变性30秒、55℃退火30秒、72℃延伸60秒，30个循环；最后72℃延伸7min。VCAM-1反应条件：94℃ 5min,（94℃ 40s，59℃ 40s，72℃ 40s）30个循环，然后72℃ 5min。PCR产物用2%琼脂糖凝胶电泳，以MCP-1和VCAM-1扩增条带的吸光度值（A value）与GAPDH条带的吸光度之比作为MCP-1和VCAM-1 mRNA的表达量。

1.4 酶联免疫吸附法（Enzyme Linked-Immuno-Sorbent Assay，ELISA）测定细胞上清MCP-1和VCAM-1含量 采用酶联免疫吸附法测定细胞上清中MCP-1和VCAM-1的蛋白水平，检测灵敏度为15.6-1000pg/mL,操作步骤严格按照试剂盒及酶标仪的说明书进行。批内批间变异系数均控制

1.5 统计学处理 数据以均数±标准差（±s）表示，用SPSS 13.0统计软件分析，多个样本均数比较用One-Way ANOVA，两两比较用LSD法，P

2 结 果

2.1 不同浓度Ox-LDL刺激后HUVECs的MCP-1 mRNA和VCAM-1 mRNA的表达及细胞上清MCP-1和VCAM-1含量变化

如图1、2、3所示，分别用25 mg/L、50 mg/L和100 mg/L的Ox-LDL刺激HUVECs后，MCP-1和VCAM-1 mRNA的表达及细胞上清中的含量呈浓度依赖性上调（P

2.2 荷叶水提物干预后MCP-1 mRNA和VCAM-1 mRNA的表达及细胞上清MCP-1和VCAM-1含量变化

如图4、5、6示，荷叶水提物干预后，HUVECs的MCP-1 mRNA和VCAM-1 mRNA的表达及细胞上清MCP-1和VCAM-1含量呈浓度依赖性下降。

3 讨 论

在动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）的发生发展过程中，循环单核细胞趋化、聚集、黏附到血管内皮是AS的最早期事件，其继而浸入到血管内皮下，参与血管壁的炎症反应和泡沫细胞的形成【sup】［5］【/sup】。由血管内皮细胞产生的趋化因子和黏附分子在介导循环单核细胞趋化、聚集、黏附到血管内皮的过程中起了至关重要的作用。既往研究表明MCP-1和VCAM-I参与了动脉粥样硬化形成，其作用在于趋化单核细胞向内皮募集，促进清道夫受体的表达，诱导血管平滑肌细胞的增殖和移动等【sup】［6-8］【/sup】。

保密制度的意义范文第3篇

一、加强领导，深入学习领会

及时召开全局干部职工大会对新修订的《保密法》进行学习，深刻了解保密法修订的时代背景、主要思路和重要意义，特别是对新修订的部分进行了全面、系统的剖析和阐述。要求局机关各科室、各直属单位根据自身特点，有针对性学习和运用保密法相关知识，全局干部职工保密法制观念、意识得到极大的增强。

进一步完善局保密工作领导小组，领导组下设办公室，负责保密工作的日常事务。领导小组定期不定期对全局的保密工作进行检查、督促和指导，确保各项保密工作措施得到较好落实，保密工作做到事事有人管，件件有人抓，责任具体，任务明确，措施得力。

二、健全完善保密管理工作制度

在抓好保密法制宣传教育的基础上，进一步健全完善干部、保密要害部门部位工作人员岗位职责，进一步规范会议保密制度、文件管理制度、电子传输保密制度等，建立并形成机关事务保密安全管理工作科学化、规范化、制度化的长效机制。

三、加强教育，强化意识，促进检查

为切实做好保密工作重要性的宣传教育，局机关在局办公会议上宣传保密知识和保密案例、在局务会上传达学习有关保密工作要求，还为局机关、各直属单位发放《保密手册》。

保密制度的意义范文第4篇

关键词　竞争情报　竞争情报系统　CIO管理　反情报活动

竞争是现代市场经济的本质表现，市场经济条件下，企业竞争日益激烈，企业竞争是经济竞争的主流，现代企业的成长离不开竞争情报，企业要在竞争上取得优势，就必须明确认识和发挥竞争情报对企业的作用。企业只有依靠竞争情报才能不断更新企业面貌，提高企业经济效益，增强企业竞争能力，才能更好地满足社会的需求，适应社会经济的发展和激烈竞争的要求。

1　竞争情报的整体作用竞争情报（Competitive Intelligence）具有企业决策的智囊作用，市场导向的尖兵作用，商品营销的警示作用，技术交流协作的参谋作用，市场投资经济价值的揭示作用，是现代企业生存的重要基础和战略武器。竞争情报的基本作用就是增强世界的有序性，对现代企业来讲，竞争情报是企业生产经营有序的保证、管理有序的基础、决策有序的依据、控制有序的灵魂。竞争情报比一般的经济情报更加具有目的性、时效性、实用性。首先，它是企业感知外部环境变化的预警系统，能帮助企业及时洞悉政治的、经济的、社会的、市场的变化以及这些变化对企业可能构成的威胁和机遇。其次，它是企业为适应未知环境变化而作出战略决策和竞争策略的支持系统，为企业的竞争决策提供依据和论证。第三，它是现代企业经营管理的智囊团和思想库，是企业领导集团的重要参谋。

2　竞争情报系统的管理工作竞争情报系统的管理工作包括对情报的管理和情报人员的管理工作。要使竞争情报系统最有效的为企业发挥作用，必须是收集、分析、服务反馈、管理决策各环节紧密配合。对竞争情报的管理是从情报的收集、分析研究、利用与决策开始。竞争情报收集人员通过各种渠道收集到情报后，立即传送给研究部门进行分析，做到情报的进一步精化，由表及里、由此及彼、去粗取精、去伪存真，提炼出高价值、智能化的情报，供决策层及相关部门应用，让其在最短的时间内作出好的战略决策，以此来赢得市场与竞争。尤其是对竞争对手的企业实力、未来目标、现行战略进行仔细分析，了解本企业在市场中的地位，作出抢占市场前的准备。通过分析后的情报是智能性、增值性的产品，它由CIO（Chief Information Officer：信息经理）反馈给各部门主管及决策层，从而采取及时有效的措施，赢得竞争，企业的竞争情报系统才算发挥了作用。

当今有很多企业是建而不用。所谓“建而不用”即跟着风潮建立相应的竞争情报系统，却不会去应用它，这是企业的重大失误。这不仅是企业人员与资金的浪费，也使企业失去很多良好的机遇，企业也因此可能走向衰落。

人是关键性因素。对情报人员的管理尤为重要。首先要保证其素质与技术水平，情报人员要学会如何快速、广泛地收集情报，无论是从书籍、报刊、产品目录等收集，还是从第三方获得情报，都需有细致、全面、认真的态度，还要保证了解计算机现代技术，拥有很好的人际圈子，争分夺秒的意识，做到以上这些，才能收集到情报。情报人员还需对情报有分析研究的能力，要有一定的逻辑思维与市场分析能力，善于抓住事物的本质，做好系统分析，形成规范化、条理化的情报送交CIO，再由CIO发送给决策部门处理利用。情报人员还需要有很强的保密意识，对情报系统的任何资料都需妥善保管，以免被其他公司窃取利用，对本公司造成不利和损失。设想如果情报人员都不能做到“不该说的一句都不说”，那么，公司的竞争情报系统必定是个失败的部门，也就没有任何存在的意义。

CIO的素质是情报系统的决定性因素。首先，CIO要有领导艺术，如果他在系统中能有高超的领导才能，独特的领导艺术魅力，这个系统就有了好的首领。CIO必须是一个卓越的管理专家。对企业综合、复杂的情报系统进行全面有效的管理、开发和利用，建立多方位多功能的情报体系，最大限度地实现情报资源的共享，以辅助公司高层决策和长远规划。CIO还必须有战略远见。CIO能否及时获取和处理与本公司经营活动有关的最新情报，帮助公司确立新的战略方向和经营策略往往就成为企业能否立于不败之地的关键所在。协调能力也是必不可少的。CIO一方面直接对最高决策者CEO（Chief Enterprise Officer）负责，另一方面还要全面统筹调控情报系统各分支机构和部门。商业经营头脑是CIO的基础。有着管理IS和公司商业部门的双重经验，拥有卓越的领导才能和灵活的商业经营头脑的高级复合型人才，他们通过对财务报表、管理报告和用户信息数据的分析和集成，开发出具有新活力的信息，并直接应用到企业的经营决策中，从而极大地加快了企业在市场竞争中的反应能力。所以在建立企业竞争情报系统之前，选择优秀的CIO是首要管理工作。企业董事会还应时刻监督管理CIO的工作，保证了CIO的工作，情报工作即做对了一半。

另外，企业还应对情报人员也实行相应的奖惩措施。其收集到的情报如果给企业创造了时机与效益，就应给予奖励，这样才能激励情报人员的工作积极性。相反，若企业因为未得到情报而失去了机会，则应进行教育与惩罚。情报系统应该成为一个非常有活力的系统。这样才算管理好了。

3　企业反情报活动企业除了研究分析竞争对手情报、竞争环境情报、竞争策略情报、竞争目标情报以外，还需对本企业的情报进行自我保护，可采取以下措施：

（1）建立内部人员情报保密制度。

（2）提高全员保密意识，签定保密协议。

（3）建立内部技术保密制度。

（4）建立经济部门保密制度。

（5）建立宣传保密制度。在产品文献、产品展览会、产品鉴定会、订货会、交易会等宣传过程中，注意保密。

（6）建立废品处理制度。

（7）建立产品保密制度与有形载体保密制度。

企业要生存，必须获取竞争性情报。现代企业注重情报信息工作，建立起好的信息工作模式，通过企业内部信息机构和外部信息源、信息咨询机构获取竞争性情报，并对其收集的关于竞争对手、竞争环境、竞争策略的情报进行深层次的研究，同时企业必须对竞争情报系统进行良好的管理。管理是关键，只有建立了严格、有序、良好的管理系统，才能使企业步入完善的发展轨道，而且CIO要有一定的素质，并作好反情报工作。只有这样，才能使企业在竞争中领先一步，蒸蒸日上。

1　曹建勋，张曼。 关于发展企业竞争情报业务的思考。 管理信息系统，1995（1）

2　邸德海。 现代信息技术对企业组织的影响及其对策。 管理信息系统，1997（4）

3　乌家培，秦海清。 竞争信息和企业战略。 中国工业经济，1995（12）

4　俞晓军。 信息革命与企业组织变革。 中国工业经济，1996（6）

保密制度的意义范文第5篇

关键词： 军队院校 保密工作 创新发展

总书记在党的十七大报告中提出的科学发展观，内容丰富、内涵深刻、论述精辟，是中国化的最新成果，是我国经济社会发展的重要指导方针，也是部队院校保密工作发展的行动指南。全面深入学习领会和贯彻落实科学发展观，对做好当前和今后一个时期的保密工作意义重大。我对如何深入学习贯彻落实科学发展观推进军队院校保密工作创新发展谈谈体会。

一、推进院校保密工作发展必须坚持以思想理念创新为先导

随着全球经济、信息科技发展，特别是我国改革开放及市场经济向纵深推进，保密工作遇到了许多新情况、新问题、新特点。要适应新变化，迎接新挑战，保密工作必须坚持科学发展，以思想理念的创新发展为先导，这是保密工作发展的重要前提和基础。所谓思想理念上的创新发展，就是要与时俱进，解放思想，突破传统陈旧的、单一封闭的保密观，确立全方位、多元化、高科技和开拓性的保密思想。实现这一新的思想观念，当前必须克服“三种偏见”，即“无密可保”、“有密难保”和“保密影响工作”的思想。应树立三个观念：一是越是改革开放，越要加强保密工作的观念；二是保密就是“保安全，保发展”的观念；三是善于把握新特点、新规律、破解新问题的观念。只有坚持思想理念上的创新发展，把先进保密思想灌注到每个学员的头脑中，才能催生保密强势动力源。

二、强化院校保密工作必须坚持把做人的工作置于首位

科学发展观的核心是以人为本。在保密领域的发展，具体到工作管理，就是要以人为重点目标。人既是保密工作管理者，又是保密工作管理对象。人是做好保密工作的基础，做好保密工作是事在人为。尤其对特定群体，更是管理目标的重中之重。当前应着力从三个方面抓好：第一，抓人员。抓准这个重点，准确确定要害部门的人员，明确岗位责任和要求，监督其履行职责到位。第二，抓教育培训。部队保密委员会要充分发挥本级机构职能作用，重点抓好人员的保密教育培训，要做到教育培训计划、时间、人员“三落实”。通过抓教育培训，全面提高人员的政治思想和业务素质，增强保密工作的服务意识、责任意识和忧患意识。同时，也要努力做到“三个到位”。一是讲到位。要坚持不懈地对各级领导干部和学员进行经常性的保密教育和保密提醒，讲形势、讲责任、讲危害，把保密工作的重要性讲深，把保密工作面临的严峻形势讲透，把有关人员的保密责任讲清，把泄密的危害和后果讲清楚。二是做到位。要把各项关于加强保密工作的各项方针政策和措施落到实处，特别是机构人员要到位，技术装备配备要到位，经费保障要到位。三是查到位。要善于运用保密督查手段特别是技术检查等硬手段，及早发现问题，及时纠正问题，采取切实有效的措施堵塞漏洞，消除隐患。

三、抓好院校保密工作重点必须坚持以制度变革发展为主体

新时期、新形势保密工作，最突出的特点是信息技术高度发展和日新月异，这些使得保密工作的技术性成分进一步突出。与过去保密工作相比较，在保密制度内容、注意的重点和采取的措施等各个方面无不体现时代的明显特征。因此，必须针对当今时代保密工作的特点，加大保密制度变革的力度，使它适应满足信息化条件下保密工作的需求。在保密制度建设上，一是要建立健全教育培训制度建设。现阶段，信息技术几乎涉及我们工作和生活的方方面面，不知不觉就可能泄密，给个人、单位，甚至院校、国家造成不可弥补的损失和安全稳定方面的严重后果。因此，必须建立对所有人员进行相关教育培训的制度，使每一个人在从事工作之前，能够详尽地了解和掌握相关的保密知识和措施，做到有备无患。二是要加强管控制度的改革创新。对计算机网络等信息技术的管控，必须适应它特点的技术管控手段和措施，以技术管技术，以技术控制技术，一系列管控制度要切实起到应有的作用。三是建立健全有关责任和处罚制度。必须让每一个人都明确自己的责任，尤其是出现问题以后所承担的责任，时时敲响警钟，绷紧保密工作这根弦，消除任何侥幸和麻痹思想，引以为戒。