一百岁感言

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一百岁感言范文第1篇

【摘要】 目的: 监测急性髓性白血病(AML)患者接受异基因造血干细胞移植(alloHSCT)后外周血中的T细胞受体重排删除环(TRECs)水平， 了解移植后早期的T细胞免疫重建情况。方法: AML患者15例分别在alloHSCT前以及alloHSCT后每隔2周收集外周血， 采用实时定量PCR法检测外周血单个核细胞(PBMNCs)中的TRECs水平; 7例年龄相近的正常人外周血样本作为对照。流式检测CD45RA+细胞亚群和CD45RO+细胞亚群的阳性率。结果: alloHSCT组移植前的TRECs平均拷贝数为(1.42±1.51)拷贝/1000 PBMNCs， 明显低于正常组的(3.03±0.45)拷贝/1000 PBMNCs水平; 移植后第12周的TRECs平均拷贝数为(1.67±1.93)拷贝/1000 PBMNCs， 与正常相比仍然较低。移植后8周内以CD45RO+/CD4+细胞的扩增为主， 而外周血TRECs水平在alloHSCT后4周左右出现短暂地升高趋势， 随后又下降， 至alloHSCT 8周后才开始稳步上升。有急性移植物抗宿主病(aGVHD)病史的移植患者的外周血TRECs水平显著降低， 明显低于无aGVHD病史移植患者的外周血TRECs水平。3例移植后早期复发的患者的外周血TRECs水平降至基线水平或检测不到。结论: 不同个体T细胞免疫重建时间存在差异; AML患者在alloHSCT后早期(90 d内)的胸腺输出功能仍处于恢复阶段， 移植后4周内的免疫重建仍以来源于供者细胞的外周扩增为主; 外周血TRECs水平可能与AML患者alloHSCT后病情的发展、 转归有关。

【关键词】 造血干细胞移植， 异基因; T细胞受体重排删除环; 免疫重建

异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation， alloHSCT)是目前治疗急性髓性白血病(acute myelogenous leukemia， AML)等恶性血液病的有效方法之一， 已广泛应用于临床。造血干细胞移植后造血功能的全面重建主要包括两个方面， 即造血细胞数量和功能的恢复， 后者主要是指免疫功能重建。临床上往往将中性粒细胞和血小板的恢复作为造血恢复的指标， 容易忽视免疫功能的恢复。免疫功能重建现在被认为是评价移植疗效的重要因素之一， alloHSCT后重建T细胞特异性免疫功能， 需要来源于胸腺依赖途径所产生的初始T细胞， 即经胸腺发育而输出的nave细胞， 而目前能够作为nave T细胞的标志的是T细胞受体删除DNA环(Tcell receptor excision DNA circles， TRECs)[1-3]。为了解AML患者接受alloHSCT后早期的T细胞免疫重建情况， 我们对其胸腺近期输出功能(外周血TRECs水平)进行了监测， 并对外周血CD45RA+/CD4+、 CD45RO+/CD4+及CD45RA+/CD8+细胞亚群进行了流式细胞术分析。

1 对象和方法

1.1 对象 接受alloHSCT治疗的AML患者15(男13， 女2)例， 年龄18～56(中位年龄35.7)岁， 其中M2 5例， M3 2例， M4 5例， M5 3例; 供者为HLA位点完全相合同胞或无关供者; 采用联合氟达拉宾的减量清髓预处理方案; 移植后受者全部植活(中性粒细胞连续3 d≥0.5×109/L为粒细胞植活， 血小板连续7 d≥20×109/L为血小板植活)， 所有受者移植后均为完全供受者嵌合体; 所有患者alloHSCT后临床上未采用改变细胞亚群数量的特殊治疗方案， 并均告知同意及医院伦理委员会同意。分别于移植前、 移植后每间隔2周收集患者外周血样本; 同时收集7例与移植组年龄相近的正常人(均为男性)外周血样本作为对照， 年龄17～48(中位年龄31.6)岁。

1.2 方法

1.2.1 流式细胞术检测CD45分子表达和DNA提取 按常规方法收集各样本的外周血单个核细胞(PBMNCs)， 计数后一部分细胞用于免疫荧光标记(鼠抗人CD4+、 CD8+、 CD45RA、 CD45RO mAb， Fermentas)， 利用流式细胞术进行CD45RA+/CD4+、 CD45RO+/CD4+及CD45RA+/CD8+细胞亚群阳性率的检测; 剩余细胞提取DNA(QIAprep Spin Miniprep Kit， QIAgen)， 并用紫外分光光度计检测DNA的浓度及纯度。

1.2.2 引物设计 从T细胞受体(TCR)δ基因组序列(ACCESSION AE000661)中于δRec基因片段的下游设计一下游引物(T1)和在ψJα的上游设计一上游引物(T2)[2]， 引物的方向恰好与一般的PCR引物相反(所检测的是δRec和ψJα的两个基因片段删除后重组形成的环形DNA， 即TRECs)， 并在该扩增片段中间设一荧光素标记探针(T3); 选择RAG2基因作为细胞定量对照: 分别在RAG2基因组序列(ACCESSION M94633)中设计一对引物(R1和R2)及一荧光素标记探针(R3)。引物和探针由德国柏林TIB生物公司合成。

1.2.3 RAG2TREC标准品的构建 利用两对引物分别扩增所需的RAG2和TRECs的基因片段， 经序列分析证实后分别将其连接到TA载体上(TOPO TA Cloning Kit， Invitrogen)， 转入感受态细菌扩增， 抽提、 纯化质粒后再经酶切、 PCR和测序证实目的基因片段的准确性; 用凝胶电泳和紫外分光光度计检测质粒的浓度及纯度， 根据质粒分子量换算为拷贝数， 稀释标准质粒， 将其调整为梯度浓度: 107、 106、 105、 104、 103、 102和10拷贝/2 μL。

1.2.4 实时定量PCR 每一标本分别检测2次RAG2和2次TRECs， 总反应体积为25 μL， 其中含标准品2 μL或约100 ng基因组DNA， 0.5 μmoL/L引物， 0.2 mmoL/L dNTP， 1.5 U Ampli TaqGold(ABI， USA)， 0.1 μmoL/L的6 FAM TAMRA探针和PCR缓冲液(含4 mmoL/L MgCl2)。在95℃ 10 min变性后， 共进行45个循环扩增， 每一循环包括95℃ 30 s和64℃ 1 min。反应在MJ Opticon Monitor(BIORAD)中进行。反应分别设标准组(7个浓度)、 阳性对照组(两个平行反应)、 阴性对照(两个平行反应)及样品组。

1.3 统计学分析 根据所检测样本中RAG2的实测数值来确定所检测样本中所含的细胞数(每个细胞含2个RAG2拷贝)， 然后计算每1000个PBMNCs中所含的TRECs拷贝数， 计算公式为: n=2×1000×[TRECs(1)+TRECs(2)]/[RAG2(1)+RAG2(2)]; 使用SPSS 13.0软件包进行统计学处理， 采用非参数检验的MannWhitney U检验进行组间比较; 各组样本中的平均TRECs水平以x±s表示。

2 结果

2.1 alloHSCT后CD45RA+细胞亚群及CD45RO+细胞亚群阳性率的变化 alloHSCT后各时间组的CD45RA+细胞亚群和CD45RO+细胞亚群的平均阳性率显示出一定的变化趋势(图1)。CD45RO+/CD4+、 CD45RA+/CD8+细胞亚群的阳性率在移植后第4周时均明显较低， 随后逐步上升， 8～12周又出现下降趋势; CD45RA+/CD4+细胞亚群的阳性率在移植后12周内均维持在较低水平; 移植后8周内以CD45RO+/CD4+细胞的扩增为主。

图1 alloHSCT后90 d内CD45RA+细胞亚群及CD45RO+细胞亚群阳性率变化2.2 实时定量PCR的敏感性、 重复性和特异性 最大敏感性可达到10个拷贝/μL， 且1×107～1×102拷贝/μL的重复性良好; 模板在10个拷贝数以下时结果不稳定， 故将检出限为10拷贝数以上; 经电泳可见到符合目的片段大小的条带(RAG2为245 bp， TRECs为390 bp)。标准曲线的斜率(slope)均为-0.28， 系列稀释的标准品浓度与循环阈值具有较好的相关关系(r=0.996， 0.998)。无模板对照未见任何扩增。

2.3 alloHSCT后外周血TRECs水平的变化 PBMNCs中的TRECs水平有着较大的个体差异。正常对照组外周血中的TRECs平均拷贝数为(3.03±0.45拷贝/1000 PBMNCs); alloHSCT组移植前的TRECs平均拷贝数为(1.42±1.51拷贝/1000 PBMNCs)， 明显低于正常组(MannWhitney U检验， P

alloHSCT后有急性移植物抗宿主病(acute graft vs host disease， aGVHD)病史的移植患者(3例发生肠道aGVHD， 2例发生皮肤aGVHD)外周血TRECs水平显著降低(0.07±0.14拷贝/1000 PBMNCs)， 明显低于同时期无急性GVHD病史的移植患者外周血TRECs水平(0.82±1.12拷贝/1000 PBMNCs)， 甚至趋于基线水平(MannWhitney U检验， P

图2 alloHSCT后90 d内的外周血TRECs水平变化

3 讨论

TRECs是T细胞受体α基因重排形成过程中需删除TCRδ基因而产生的环形DNA， 它的含量代表了TCR基因初始重排形成有功能TCR基因时的nave T细胞的含量。通过实时定量PCR检测TRECs水平以确定nave T细胞含量， 能够确切地了解胸腺新近输出nave T细胞的功能， 帮助进一步了解移植后T细胞免疫重建情况。国外自2000年始将TRECs的定量检测用于白血病骨髓移植后免疫功能重建的分析， 我们也曾将其用于检测正常人外周血T细胞、 慢性粒细胞白血病患者和苯中毒患者胸腺近期输出功能[2-4]， 但将TRECs水平检测用于AML患者移植后早期T细胞免疫功能重建分析， 国内尚未见报道。

既往的研究已发现胸腺近期输出功能随着年龄的增加而逐渐下降， 且受者的年龄是移植后T细胞免疫重建的重要影响因素[1， 5]。本研究中alloHSCT组的年龄与正常组的年龄相近， 可以排除年龄分组差异对TRECs含量检测的影响， 可以进行alloHSCT组与正常组的TRECs水平的比较。外周血中TRECs水平有着较大的个体差异， alloHSCT组移植前的TRECs平均拷贝数为(1.42±1.51)拷贝/1000 PBMNCs， 明显低于正常组(3.03±0.45拷贝/1000 PBMNCs)(P

CD45RO+/CD4+、 CD45RA+/CD8+细胞亚群的阳性率在移植后第4周时明显降低， 随后逐步上升， 8～12周又出现下降趋势， 并且移植后8周内以CD45RO+/CD4+细胞的扩增为主; 而外周血TRECs水平在alloHSCT后4周左右出现短暂的升高趋势， 后又复降， 至alloHSCT后第8周左右才开始稳步上升。这些结果提示移植后早期免疫重建仍以来源于供者细胞的外周扩增为主， 移植后8周之后方显示出经胸腺发育而输出的nave细胞的情况。

既往的研究报道成年患者的TRECs水平在移植后随着时间的延长而逐渐恢复， 一般在移植2年后可恢复到正常水平， 但也可能由于原发病和预处理方案等因素影响而存在较大的个体差异[6]。本研究中的大部分AML患者在alloHSCT后12周左右的TRECs水平可稍高于移植前水平， 但总体与正常相比仍然较低， 提示AML患者移植后虽然达到了临床缓解， 但其TRECs水平较正常水平低， 说明其胸腺输出功能仍处于恢复阶段， T细胞免疫功能尚未达到完全重建。我们还发现alloHSCT后无论是正在进行的急性GVHD还是曾发生过急性GVHD， 都能导致外周血TRECs水平低下， 提示急性GVHD可能导致胸腺功能的损伤， 抑制了胸腺依赖途径的T细胞免疫重建。发生GVHD患者的TRECs水平降低， 一方面可能是GVHD对胸腺上皮细胞的损伤而导致胸腺功能的低下， 另一方面也有可能是相关免疫激活使T细胞分化、 增殖加快而稀释TRECs的结果。另外， 国外有学者提出TRECs水平可能作为造血干细胞移植后疗效及预后的评价指标[7]， 我们亦发现3例alloHSCT后早期复发的AML患者复发后未检出TRECs水平(复发前为1.03、 4.03、 3.12拷贝/1000 PBMNCs)， 提示外周血TRECs水平可能与AML患者alloHSCT后病情的发展、 转归有关。

我们初步提供了AML患者alloHSCT后早期的胸腺近期输出功能恢复情况， 有助于正确评价T细胞免疫重建， 为评估临床疗效及预后提供初步的基础研究资料， 有待进一步积累病例数， 结合各种可能影响T细胞免疫功能的相关因素分析， 获得更详尽的研究结果。本课题组已建立了分别分析TCR Vβ各亚家族nave T细胞输出情况的方法[8]， 我们将进一步对移植后TCR各亚家族的TRECs水平分别进行定量检测， 以期做出更系统更全面的免疫重建的评价。

参考文献

[1] Naylor K， Li G， Vallejo AN， et al. The influence of age on T cell generation and TCR persity[J]. J Immunol， 2005， 174(11): 7446-7452.

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[3] Li B， Li YQ， Yang LJ， et al. Decreased Tcell receptor excision DNA circles in peripheral blood mononuclear cells among benzeneexposed workers[J]. Int J Immunogenet， 2009， 36(2): 107-111.

[4] 耿素霞， 李扬秋， 陈少华， 等. 慢性粒细胞白血病患者外周血初始T细胞水平和T细胞受体Vβ谱系利用特点[J]. 中华血液学杂志， 2005， 26(7): 413-416.

[5] Mitchell WA， Meng I， Nicholson SA， et al. Thymic output， ageing and zinc[J]. Biogerontology， 2006， 7(5-6): 461-470.

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一百岁感言范文第2篇

我爱大自然，其次就是艺术；

我双手烤着生命之火取暖；

火萎了，我也准备走了。

这是英国诗人沃尔特・兰德晚年写下的诗句，题目是《生与死》。杨绛喜欢这个关于火焰的譬喻，把它译成中文，置于晚年散文集《杨绛散文》的卷首题词。

105岁，不可谓不长寿。但火萎了，她利利落落起身，便也走了。

作为一个文化世纪老人，杨绛的身体状态一直牵着很多人的心。这段时间，先是“病危”的传言让许多颗心被提到嗓子眼，又是各方辟谣让它们放回肚子里。正当人们以为不过是一场寻常小恙时，猝不及防地，却等来了最终被官方证实的消息：作家、翻译家、中国社会科学院荣誉学部委员、外国文学研究所研究员杨季康（笔名：杨绛）先生，以105岁高龄于2016年5月25日1时10分在京逝世。

杨绛有遗愿，希望去世不作为新闻，火化后再发讣告。但在这样一个新媒体、自媒体迭出的时代里，可以想来，这个遗愿实现起来太难。一时间，缅怀和悼词呼啸而来，无处不是“最贤的妻，最才的女”，乃至假托她“百岁感言”的“世界是自己的，与他人毫无关系”。这种山呼海啸，大概不是杨绛自己愿意看到的吧――2012年，社科院院长陈奎元看望她时，她曾提出了三个要求：一、去世后，不开追悼会；二、不受奠仪；三、至多七八至亲送送。

作为一个有影响的文化人，她低调得有些不可思议，像个古代的隐士。这些年来，她闭门谢客，拒绝采访，甚至不参加自己文集的会。九十大寿，一百大寿，这些对旁人来说格外重要的节点，她也都谢绝了上门祝寿。她爱用“隐身衣”的比喻，许多年里，她都披着一件“隐身衣”，“保其天真，成其自然，潜心一志完成自己能做的事”。

因了这“潜心一志”，四十年代，她有成名剧本《弄真成假》《称心如意》，被称为“喜剧双璧”，被和李健吾垂青；上世纪八九十年代，她有长篇小说《洗澡》、散文《干校六记》等，成了一个重要的现代知识分子创作现象；新世o以来，93岁时写了她和钱钟书、女儿阿瑗的《我们仨》，96岁时出了《走在人生边上――自问自答》，103岁时出了《洗澡》的续集《洗澡之后》。还有翻译，包括最为重要的《堂吉诃德》；还有为丈夫编的作品，包括由商务印书馆推出的72卷本的钱钟书手稿集。很难想象，若不是披着“隐身衣”，这琐碎杂乱的工作，如何能够延续许多年，并安安心心地完成。

“我无法确知自己还能往前走多远，寿命是不由自主的，但我很清楚我快‘回家’了。我得洗净这一百年沾染的污秽回家。我没有‘登泰山而小天下’之感，只在自己的小天地里过平静的生活。”这是她在2011年100岁诞辰时，于《文汇报・笔会》上所做的一次笔谈专访。她早已做好火焰枯萎的准备。“边上”，是她对于年岁的自我意识，是她以一种并不清晰唯一的模样游走于文学史上的姿态，也是她为人生划定的位置。

（选自《北京晚报》2016年5月27日，有删节）

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杨绛先生走了，人间再无“我们仨”。

一百岁感言范文第3篇

昨天是张退票的支票，明天是张信用卡，只有今天才是现金；要善加利用。

每日自励

凡是内心能够想到、相信的，都是可以达到的。

每日短文 编织富足人生

一辈子多长？一百年够长了。它代表什么？100乘以52周，等于5200周。再乘以一周7天，等于36400天。或者接近90万小时。

一百岁的人瑞，原来活得并不够长，它使我看清楚生命的短暂与时间的珍贵，如果不善用，倏忽即逝。时间，真的不多，就拿一天来说吧，只二十四小时，扣除睡觉与工作，加上一点点电视，一点点晃荡，便一无所有了，只是如果连时间都没了，还有什么，在我看来，把时间全部用来工作的人最蠢，因为他将没有时间可用来享受。人生本来就有两种目的，一是得到你想要的，但第二则是享受你所得到的，这才是重点。

大文豪萧伯纳的生活感言提供我很大的思考："生活对我而言，不是一根蜡烛，而是一枝光芒万丈的火炬。"是的，人生不该演成蜡烛，蜡炬成灰泪始干。

富足人生的最佳诠释，也许是忙世人之所闲，闲世人之所忙吧。薄伽丘说过："没有来世，幸福就在人间。"这个想法，一直是我的座右铭，人真的没有来世，只有一辈子，必须更用心经营，工作只是一种媒介，藉由钱而通往美好生活；如果工作并未使人精致、优雅、美化，努力便是一种错，它反而会使人通往坟墓。

每个人都必须想想，有钱干嘛？我只想用它使生活更有品味，并且切记，柴米油盐酱醋茶，不可不要；琴棋书画诗酒花，非要不可，横批，活得像人。

活得像人是门大学问，有些人忙得像狗，有些累得像猪，有些做牛做马，个个都如活着的僵尸，会动的死人，年轻的糟老头，这种活法，不要也罢。

富足在当下，如同日休禅师所言："人生只有三天，活在昨天的人迷惑，活在明天的等待，只有活在今天最踏实。"今天便是这一刻，每个分分秒秒，与自己擦身而过的生活，如果全做得好，人生就好多了；我开始懂得牵着孩子的手走在雨中，为了替他们留一点亲子间难得的回忆，就如同我父亲留给我的回忆一样，我思考着，有一天孩子大了，他的小脑袋瓜里存有什么回忆。

儿子与我是铁马族，我们骑着它穿梭在大街小巷，发现他口中的秘密花园，在一条山涧里找着山蟹，一湾清流中赏着原生孔雀鱼，还有几座天然池塘，夜来临之前的傍晚，除了余晖之外，还有几许美好。

夜深了，我喜欢关上电视，静静地坐在屋顶花园中任由微风轻拂，星光闪烁，夜成为我白天忙碌的馈赏。沐浴开始成为美事，记得有位心理学家便这么说，沐浴是一个人一天里最美好的独处。我好喜欢这种想法，也奉行不渝，在忙了一天之后，放一小杯盖的熏衣草精油，阖上眼，好好享受半小时梦一般地温存，我的精油常更换，有时迷上温泉，有时恋恋迷迭香，有时泡着老姜精油，或是浸泡在中药草里。

白天像白天，黑夜是黑夜，我因而找着富足。不同阶段的人，理应有不同的使命感，三十岁是工作的人，四十岁该升格为懂生活、会生活的人，五十岁则是优闲人生的开始，六十岁，我向往的是精致而优雅的生活，七十岁时，该从心所欲而不逾矩，不该再有物质大梦，想着中乐透，不如想想如何过生活。

人生处处有富足，打造家屋也是好办法；我自比成问题老小孩，很喜欢自我提问，比方说，问一问，如果厨房不是厨房，那会是什么？我的答案之一是艺术馆，我便花心思于这个假设的追寻，新厨房多了两个艺品柜，摆放旅行得来的战利品，配上投影灯，简直美呆了，再把音箱对准做饭之地，挂三幅画，两盆长青藤盆栽，厨房便不再只有油烟味，反而多了气质与品味。4政治政客笑话 4民族民间笑话 4无厘头笑话 4文化愚呆笑话

我常伫足海边，捡了许多漂流木，有些造形诡异，有时朴拙，有些可以当笔架，有些可以做挂钟，每一样东西都有其特色，我东拼西凑，竟也成为艺品，放在家中各角落，韵味十足。这些事全都不必花太多钱，但得花心，花了心，便有了回忆，心灵便富足了。

花心不难，但也很难，至少必须放下贪求，少了野心，减少欲望，才能多出时间，度假、旅行、闲晃、赏鸟、溯溪、观星、品茗、清谈、浮潜……让生活更像人的生活。生活家格恩斯坦就说："心动而不行动的人，美好永远不会降临。"我因心动而有所行动。苏轼的诗，再次跃于心上--钟鼓江南岸，归鸟梦自惊；浮云世故改，孤月此心明。

我离职就闲的这些年，除了钱少得一点之外，美的事可经历多了，至少过一段神清气爽，闲散郊区野寺，沽酒谈心；半醒半醉，观那露台花开，山头紫气，风帆摇曳度一生的妙哉。因而看见夏的曼丽，秋的瑟瑟，冬的雪白，花园里绿的绿了，黄的黄了，红的红了。

临流而弹，竹涧焚香，登峰远眺，坐看云起，松亭试泉，曲水流觞，烟波钓叟，蓬窗高卧，妙不可言。人生如此，你说夫复何求？

每日文摘 留个缺口给别人

一位著名企业家在作报告，一位听众问：“你在事业上取得了巨大的成功，请问，对你来说，最重要的是什么？”

企业家没有直接回答，他拿起粉笔在黑板上画了一个圈，只是并没有画圆满，留下一个缺口。他反问道：“这是什么？”“零”。“圈”/“未完成的事业”/“成功”，台下的听众七嘴八舌地答道。

他对这些回答未置可否：“其实，这只是一个未画完整的句号。你们问我为什么会取得辉煌的业绩，道理很简单：我不会把事情做得很圆满，就像画个句号，一定要留个缺口，让我的下属去填满它。”

留个缺口给他人，并不说明自己的能力不强。实际上，这是一种管理的智慧，是一种更高层次上带有全局性的圆满。给猴子一棵树，让它不停地攀登；给老虎一座山，让它自由纵横。也许，这就是企业管理用人的最高境界。

每日一诗 关于金钱

有了钱，你可以买楼，但不可以买到一个家。

有了钱，你可以买钟，但不可以买到时间。

有了钱，你可以买到一张床，但不可以买到充足的睡眠。

有了钱，你可以买一本书，但不可以买到知识。

有了钱，你可以买到医疗服务，但不可以买到健康。

有了钱，你可以买到地位，但不可以买到尊重。