酸浆多糖提取工艺论文

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1材料与方法

1．1供试品溶液的制备取酸浆粗多糖置于50mL锥形瓶中，加适量纯水，沸水浴使溶解，趁热过滤，并用热水洗残渣，将洗液与锥形瓶中溶液混合，转移至100mL容量瓶中，并稀释至刻度，摇匀即得。

1．2葡萄糖标准曲线绘制精密称取葡萄糖10．31mg，置于10mL容量瓶中，加适量水溶解，并稀释至刻度，摇匀。精密吸取0．0、0．1、0．2、0．4、0．6、0．8mL于25mL比色管，分别加水补1．0mL。上述溶液分别加3，5-二硝基水杨酸试液1．5mL，于沸水浴中加热5min，流水冷却，加水稀释至25mL刻度。以相应溶液为空白，在520nm处测定吸收度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

1．3酸浆果实中多糖含量的测定精密量取供试品溶液2．5mL，置于50mL锥形瓶中，加水2．5mL，加6mol/L盐酸溶液5mL，在沸水浴中加热30min，用流水冷却后加酚酞指示液1滴，用40%氢氧化钠溶液调节至微红色，转移至25mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得总糖溶液。精密量取供试品溶液5mL，置于10mL容量瓶中，加酚酞指示液1滴，用40%氢氧化钠溶液调节至微红色，加水至刻度，摇匀，即得单糖溶液。精密量取上述总糖溶液和单糖溶液1mL，分别置于10mL具塞刻度试管中，加纯水至2mL，分别精密加入3，5-二硝基水杨酸试液2mL，混匀，在100℃水浴中加热5min，取出，立即用冰水浴冷却至室温，加水3mL摇匀。用相应的试剂作空白，照分光光度法在520nm处依法显色，测定吸光度，从标准曲线回归方程中计算出总糖和单糖浓度，由总糖含量减去单糖含量，即得多糖的含量。

1．4单因素实验设计选择料液比、醇沉浓度、提取时间、提取次数4个影响因素进行单因素实验，其中料液比分别为1∶30、1∶40、1∶50、1∶60、1∶70，醇沉浓度分别为55%、65%、75%、85%、95%，提取时间分别为1h、1．5h、2h、2．5h、3h，提取次数分别为1、2、3次。

1．5正交实验设计根据相关文献及单因素实验，选择料液比、醇沉浓度、提取时间、提取次数4个影响因素，每个因素取3个水平，以多糖提取率为主要考察指标，选用L9(34)正交表进行实验。

2结果

以粗多糖的含量为指标，在料液比为1∶60、乙醇浓度为85%、提取时间2．5h、提取次数为2次时，提取出的多糖含量最高。单因素实验设计的因素水平见表1，正交实验表如表2。按照上述最佳提取工艺提取条件，对一组样品进行验证，测定多糖的提取含量为10．5353、10．5533、10．7517、10．5866、10．6721mg/g。

3讨论

在本实验中采用热水提取法，料液比1∶60，醇沉浓度为95%，提取次数为2次，提取时间为1．5时提取率最高。测定多糖含量采用的3，5-二硝基水杨酸法不使用硫酸，分别测定总糖和单糖的含量后，进而计算出样品中酸浆多糖的含量，方法学验证表明，该法精密度、重现性等良好，是一种简便、实用的有效分析方法。此外，应用3，5-二硝基水杨酸法时，还应注意，样品测试液制备过程中，酸水解必须控制适宜时间，时间短则多糖水解不完全，时间长则单糖和盐酸发生化学反应生成糖醛，不能和3，5-二硝基水杨酸发生缩合反应。

作者：马洪波单位：吉林医药学院