HPLC法测定安坤益母草片盐酸水苏碱含量

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【摘要】目的建立安坤益母草片中盐酸水苏碱的含量测定方法。方法采用氨基柱，以乙腈-水（体积比78∶22）为流动相，检测波长是202nm，流速是1mL·min-1，柱温是30℃。结果盐酸水苏碱在5.625～28.125μg内有良好的线性关系，r＝0.9992，回收率为100.3％，RSD为2.4％。结论本法专属性强，准确、简便，可为安坤益母草片的质量标准提供依据。

【关键词】安坤益母草片；高效液相色谱法；盐酸水苏碱

安坤益母草片是由作者经由安坤益母草膏改剂型而得，由益母草、川芎、白芍、地黄、当归等药材组成。具有养经调血、化淤生新的功效，临床上主要用于血淤气滞引起的月经不调、行经腹痛、量少色暗、产后淤血不净等症，取得满意效果。益母草是方中君药，盐酸水苏碱是有效成分之一，其测定方法有雷氏盐沉淀溶解比色法［1］、紫外分光光度法［2］、薄层扫描法［3］、hplc法［4］等。为更好地控制制剂质量，确保临床疗效，本文采用HPLC法测定盐酸水苏碱的含量，结果表明方法专属性强、精密度高、分离度好，可用于控制安坤益母草片中盐酸水苏碱的含量测定。

1仪器与试药

WATERS2695-2996型高效液相色谱仪（美国）。安坤益母草片（自制）；盐酸水苏碱对照品（批号：712-9903，中国药品生物制品检定所）；甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：氨基柱（250mm×4.6mm,5μm），大连依利特公司；流动相：乙腈-水（体积比78∶22）；流速：1mL·min-1；检测波长：202nm；柱温：30℃；进样量：15μL。在此条件下，供试品中盐酸水苏碱峰能达到基线分离，理论板数按盐酸水苏碱峰计应不低于4000，分离度均是3.6。见图1～3。

图1盐酸水苏碱对照品HPLC图谱（略）

Fig.1HPLCchromatogramofstachydrinehydrochloride

图2安坤益母草片HPLC图谱（略）

Fig.2HPLCchromatogramofAnkunMotherworttablets

图3安坤益母草空白片HPLC图谱（略）

Fig.3HPLCchromatogramofblankcontrolofAnkunMotherworttablets

2.2溶液的配制

2.2.1对照品溶液的制备精密称取盐酸水苏碱对照品11.25mg置10mL量瓶中，加甲醇使溶解，并稀释至刻度，得到1.125mg/mL的盐酸水苏碱对照品溶液。

2.2.2供试品溶液的制备取本品5片（0.25g/片），除去薄膜衣，研细，精密称取0.25g，置具塞锥形瓶中，精密加入20mL乙醇，超声处理30min，滤过，滤渣及容器用20mL乙醇分次洗涤，滤过，合并滤液，蒸干，残渣加乙醇溶解并转移至10mL的量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，离心（5000r/min，5min），取上清液作为供试品溶液。

2.2.3盐酸水苏碱空白供试液的制备按处方称取除益母草外的药材提取，取处方比例辅料，按安坤益母草片制备工艺制得安坤益母草空白片，再按“2.2.2”项下制备方法制得空白对照供试液。

2.3标准曲线的制备

精密量取盐酸水苏碱对照品溶液(1.125mg/mL)5、7、10、15、20、25μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定盐酸水苏碱色谱峰面积，以盐酸水苏碱微克数为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：y=5.89×104x-1.52×104(r=0.9992)，线性范围：5.625～28.125μg。

2.4干扰试验

按“2.1”色谱条件，取盐酸水苏碱对照品溶液、供试品溶液、空白供试液，分别注入液相色谱仪，结果表明供试品色谱在与对照品色谱相应位置上，有一相同的色谱峰，而空白供试液在此保留时间内不出峰，表明其他成分对测定盐酸水苏碱无干扰。

2.5精密度试验

取对照品溶液(1.125mg/mL)15μL，重复进样6次，记录盐酸水苏碱的峰面积。结果盐酸水苏碱峰面积RSD＝0.8％。

2.6稳定性试验

取上述供试品溶液15μL，分别在0、2、4、8、16、24h进样，记录盐酸水苏碱的峰面积，结果盐酸水苏碱峰面积的RSD=1.2%(n=6),表明供试品溶液在制备后24h内测定基本稳定。

2.7重复性试验

取同一批安坤益母草片(批号:20070412)6份,按“2.2.2”项方法处理样品并测定盐酸水苏碱峰面积,计算盐酸水苏碱含量，结果RSD=1.7%，表明此方法测定盐酸水苏碱含量重复性好。

2.8加样回收试验

精密称取已知含量的样品(批号20070406，盐酸水苏碱含量10.8mg/片)6份，每份取样量为供试品取样量（0.25g/片）的50％，按“2.2.2”项方法操作，以当前取样含量的1∶1，分别精密加入盐酸水苏碱对照品溶液（1.08mg/mL）5mL，制备加样回收供试品溶液，按含量测定条件测定，计算回收率，结果见表1。

表1盐酸水苏碱回收率试验结果(n=6)（略）

Tab.1RecoveryofStachydrineHydrochloride

2.9样品测定

取5批（批号20070510、20070513、20070520、20070517、20070519）10个样品，按“2.2.2”项方法制备供试品溶液，进样测定。结果安坤益母草片盐酸水苏碱平均含量是10.33mg/片。

3讨论

盐酸水苏碱结构中既含有碱性的NH4+，又含有酸性的COOH-，分子量小，极性大，在常规的C18柱中难保留［5］。以常规的生物碱分析方法很难将盐酸水苏碱分离，最后参考文献［6］改用氨基柱，以乙腈-水（体积比78∶22）为流动相，在此条件下，盐酸水苏碱不仅能得到较好的保留，而且与其他峰完全分离，分离度达到要求。

【参考文献】

［1］徐履琴.用硫代氰酸铬铵剩余比色法测定益母草中生物碱［J］.中草药,1985,(11):7-8.

［2］卢日刚.分光光度法测定益母草冲剂中生物碱的含量［J］.药学学报，1986,21(9):522-524.

［3］周世玉，徐智明.薄层扫描法测定益母草膏中盐酸水苏碱的含量［J］.华西药学杂志,1999,14(5-6):395-396.

［4］杨雪萍，何召允.HPLC法测定安宫止血颗粒中盐酸水苏碱的含量［J］.江西中医药，2007，38（2）：51.

［5］严优芍，李卫民，高英，等.HPLC法测定益母草不同制剂中水苏碱［J］.中草药，2006，37（1）：70-72.

［6］秦永平，毛兴荣，梁茂植，等.RP-HPLC法测定产妇安口服液中水

苏碱的含量［J］.华西药学杂志,2003,18(4):287-290.