三仙壮骨胶囊提取工艺

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摘要：目的优选三仙壮骨胶囊水提部位的最佳提取工艺。方法采用高效液相色谱法测定川续断皂苷VI的含量，并以川续断皂苷VI的含量作为指标，采用正交设计试验考察三仙壮骨胶囊的最佳提取工艺。结果最佳提取工艺为:加10倍量的水煎煮2次，每次1h。结论该提取方法合理、可行，为生产提供了实验依据。

关键词：三仙壮骨胶囊；提取工艺；高效液相色谱法；川续断皂苷VI

三仙壮骨胶囊是由续断、淫羊藿、独一味、当归等几味中药组成，本品为研制者常年行医的经验方，临床用于治疗跌打损伤、筋骨扭伤、瘀积肿痛。方中续断、淫羊藿、独一味主要含有皂苷类成分及黄酮苷类成分，在水中溶解性较好，故此三味药材采用水煎煮方式提取。本研究采用正交设计法，以川续断皂苷VI为指标，用高效液相色谱法测定其含量［1-4］，以优选三仙壮骨胶囊水提部位的最佳工艺。

1材料与试剂

Waters2695高效液相色谱仪，Waters2996PDA检测器,Empowers色谱工作站，DiamonsilC18柱（5μm，250mm×4.6mm，迪马公司）。KQ100型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；BSZZ4S型电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)。

川续断皂苷VI对照品（中国药品生物制品检定所，批号：111685200401）；乙腈为色谱纯；水为屈臣氏蒸馏水；其他试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1正交试验设计

按处方称取续断、淫羊藿、独一味药材，加水进行煎煮，在煎煮过程中，采用L9(34)表安排正交试验，以续断中川续断皂苷Ⅵ的含量为指标，对提取效果影响较大的加水量、煎煮次数及煎煮时间3个因素进行考察，各因素水平见表1。表1因素水平表

2.2川续断皂苷VI含量测定

2.2.1色谱条件色谱柱为DiamonsilC18柱（5μm，250mm×4.6mm）；流动相为乙腈水（体积比30∶70）；检测波长为210nm；柱温为25℃；流速为1mL/min；进样量为10μL。

2.2.2对照品溶液的制备精密称取川续断皂苷VI对照品3.09mg，置2mL容量瓶中，用甲醇溶解配制成质量浓度为1.545mg/mL的对照品溶液。

2.2.3供试品液的制备取水提取液适量（相当于续断药材0.75g），置圆底烧瓶中，减压浓缩至干，精密加入甲醇25mL，称定重量，超声提取30min，放冷，用甲醇补足重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.2.4标准曲线的制备精密吸取对照品溶液2、4、8、12、16、20μL，依次注入高效液相色谱仪，各重复3次，记录峰面积。以川续断皂苷VI峰面积均值（A）对进样质量浓度（ρ）进行线性回归，得回归方程为A=191595.75ρ97704.96，r=0.9998（n=6）。表明川续断皂苷VI在3.09～30.9μg/mL之间与峰面积具有良好线性关系。

2.2.5样品含量测定精密吸取供试品溶液及对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪，按“2.2.1”项下条件进行测定，测得的川续断皂苷Ⅵ对照品和样品色谱图见图1。

2.2.6精密度试验精密吸取同一对照品溶液10μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，连续测定6次，结果RSD值为0.66%(n=6)，表明本法精密度良好。

2.2.7重复性试验分别取同一批号样品6份，按“2.2.3”项方法制备溶液，依法测定川续断皂苷Ⅵ的含量，结果测得含量的RSD值为0.92%(n=6),表明本法重复性良好。

2.2.8稳定性试验精密吸取同一供试品溶液10μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件，间隔不同时间进行测定，结果RSD值为0.50%(n=5)，表明供试品溶液在4h内测定基本稳定。

2.2.9加样回收率试验取已知含量的样品，分别加入一定量的对照品，置圆底烧瓶中，按“2.2.3”项方法制备供试品溶液并在上述条件下测定，其平均回收率为100.30%，RSD为2.84%(n=6)。

2.3正交实验结果

结果见表2、表3。表2正交试验结果表3方差分析表从表2、表3中可见，因素A、因素C对实验结果有显著影响，因素B对实验结果影响较小。综合正交实验结果及节约生产成本的角度考虑，确定最佳工艺为A3B2C2，即加10倍量水煎煮2次，每次1h。按最佳工艺对3批样品进行验证实验，结果3批样品的平均含量分别为11.57、12.19和12.02mg/粒，可见该工艺稳定可行。

3讨论

3.1有关续断等药材成分提取的研究报道很多，综合文献研究和预试验，采用水煎煮方式进行提取，并以川续断皂苷VI含量作为考察工艺的指标，采用L9（34）正交实验表进行试验，得出三仙壮骨胶囊的水提部位最佳工艺条件。该工艺简便可行，有良好的可操作性。

3.2鉴于川续断皂苷Ⅵ有防止骨质疏松、增强骨密度的作用,与续断的传统功效吻合［5］,本文对提取液中川续断皂苷Ⅵ的含量进行了测定,其总量转移率为90.03%。

【参考文献】

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典:2005版一部［M］.北京：化学工业出版社，2005:231.

［2］谭洪根，林生，张启伟，等.高效液相色谱法测定续断药材中川续断皂苷Ⅵ的含量［J］.中国中药杂志，2006，31（9）:726-727.

［3］马新飞，陆兔林，毛春芹,等.HPLC法测定不同续断炮制品中川续断皂苷Ⅵ［J］.中草药，2007，38（5）：707-708.

［4］王初.发汗与不发汗续断中水溶性浸出物和川续断皂苷VI的比较［J］.中草药，2007，38（6）：865-866.

［5］王岩,周莉玲,李锐.川续断的研究进展［J］.时珍国医国药，2004，4（13）：233-234.