无机阳离子对全蝎抗凝活性影响

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摘要：目的研究全蝎中无机阳离子对全蝎抗凝活性的影响。方法以凝血酶时间为指标，分别在全蝎提取液中加入相应不同浓度的无机阳离子，考察其对全蝎抗凝活性的影响。结果加入无机阳离子后，明显缩短了全蝎的凝血酶时间（P＜0．01）。结论铵离子等无机阳离子对全蝎提取液抗凝活性有明显的影响。

关键词：全蝎；抗凝活性；凝血酶时间；无机阳离子

〔Abstract〕ObjectiveTostudytheeffectofinorganicionsinscorpinonanticoagulatingactionofscorpin．MethodsTakingthethrombintimeasthetargets，theinorganicionswithdifferentconcentrationwererespectivelymixedinthescorpinextractionandtheireffectsonanticoagulatingactionofscorpinweremeasured．ResultThethrombintimewasdistinctlyshortened（P＜0．01）aftertheionsjoiningintotheextraction．ConclusionTheionsareveryeffectivetotheanticoagulatingactionofthescorpinextraction．

〔Keywords〕scorpin;anticoagulatingactive;thrombintime;inorganicions

全蝎作为传统的中药材，具有熄风止痉、解毒散结、通络止痛等功效。全蝎除了含蝎毒素、三甲胺、牛磺酸、甜菜碱、胆甾醇、卵磷脂、甘油酯、棕榈酸、硬脂酸、铵盐17种氨基酸等，还含有Ca、Mg、Fe、Cu、Zn、Mn、Pb等元素［1，2］1415。实验证明全蝎提取液具有明显的抗凝、抗血栓及促纤溶作用［3，10］。为进一步研究全蝎抗凝活性的影响因素，本文探索了8种无机阳离子（NH4＋、Ca2＋、Mg2＋、Fe2＋、Cu2＋、Zn2＋、Mn2＋、Pb2＋）对全蝎抗凝活性的影响，为临床应用提供依据。

1实验材料

1．1仪器

Start－4半自动四通道血凝仪（法国s11AGO公司）；4300－Pro紫外分光光度计（瑞士安玛西亚公司）；HR2838型匀浆机（菲利普公司）；移液枪。

1．2试药

全蝎（购自老百姓大药房），凝血酶（上海太阳生物技术有限公司），血浆（自制），生理盐水；NH4Cl，NaCl，CuCl2，CaCl2，MgCl2，FeCl2，MnCl2，PbCl2，ZnCl2，无水乙醇，均为分析纯。

2方法与结果

2．1供试品溶液的制备［3，10］

筛去尘渣，称取全蝎50g，用8倍量的蒸馏水浸泡过夜，用匀浆机以10000r／min匀浆，然后煎煮3次（均为8倍量蒸馏水），每次30min，过滤，合并滤液，水浴浓缩至含生药1g／mL，3000r／min离心20min，分别加无水乙醇至60％的浓度，4℃放置过夜，3000r／min离心20min，取上清液，水浴浓缩至含生药1g／mL溶液，3000r／min离心20min，取上清液于4℃低温冰箱中保存备用。

2．2凝血酶时间的测定方法［4，5］

先取凝血酶用生理盐水稀释至一定的倍数，然后取待测血浆（参比血浆）0．1mL，37℃保持2min，加入37℃预温凝血酶0．1mL摇匀，立即开始测定，记录凝固时间，调节凝血酶时间，使空白时间在20～22s。

2．3NH4＋Cl对全蝎抗凝活性的影响

分别取NH4Cl供试液，加至NH4＋的浓度为0、0．014、0．028、0．042、0．056、0．070、0．140、0．420、0．700、0．900、1．125、1．540μmol／mL中。加入血浆，全蝎提取液0．1mL，凝血酶0．1mL，测凝血时间。每个浓度重复测5次。结果如表1。通过对照在全蝎提取液中加入NH4Cl前后的凝血时间表明，明显缩短了全蝎提取液的抗凝时间（P＜0．01）。2．4NH4＋影响全蝎抗凝活性的确认

由于用NH4Cl提供NH4＋，为了确定其中的Cl－对全蝎提取液的抗凝活性的是否产生影响，用0．01、0．14、1．54μmol／mL的NH4Cl、NaCl溶液，加入全蝎提取液中，按“2．3”项下方法加血浆、凝血酶，测凝血时间，每个浓度重复测5次，取平均值。结果发现NaCl溶液对全蝎提取液的抗凝活性无影响，NH4Cl明显降低了其抗凝作用，缩短了凝血时间。这表明是NH4＋而不是Cl－对全蝎抗凝时间有影响（P＜0．01），降低了全蝎抗凝活性。如图1。

2．5NH4＋自身抗凝作用测定

为了确定NH4＋本身是否对血浆有抗凝活性，加入NH4＋至0、0．014、0．028、0．042、0．056、0．070、0．140μmol／mL，用生理盐水代替全蝎提取液，其余同方法“2．3”，测凝血时间。发现凝血时间还稍有增加，见表2。经过数理统计分析，NH4＋并无抗凝作用（P＞0．05）。

2．6其他无机元素对全蝎抗凝活性的影响

按“2．3－2．5”项下的方法，分别探讨了加入Pb2＋，Mn2＋，Mg2＋，Cu2＋，Fe2＋，Zn2＋，Ca2＋至0．1，0．2，0．3，0．4，0．5μmol／mL后对全蝎抗凝活性的影响，通过测凝血时间，发现在我们的浓度范围，凝血时间都明显缩短了（P＜0．01），但不同无机阳离子缩短的程度稍有差别。结果如图2。

3讨论

 许多中药材里的微量无机阳离子对药材的药性药效有很大的影响。全蝎的主要活性成分是蛋白质、氨基酸等物质，其中蛋白质含量最高［6］，是主要活性物质。全蝎的抗凝作用与其中的蛋白质有关［3］11。在实验中，所试验的无机阳离子本身无抗凝作用（P＞0．05），虽然无机阳离子使凝血时间稍有增加（9s以内），有轻微的促凝性，但与加到全蝎提取液中缩短的凝血时间（117s以上）相比是很小的。不难看出，不是无机阳离子的轻微促凝作用抵消了全蝎提取液抗凝作用，而是这些无机阳离子加入到全蝎提取液中后与之发生作用使凝血时间缩短，明显降低了其抗凝活性（P＜0．01）。

每克全蝎中含有微克级的Ca、Mg、Fe、Cu、Zn、Mn、Pb及铵离子等［1］1415，这些微量离子的存在可能影响了全蝎毒蛋白结构，从而影响全蝎的药效作用。在实验中，全蝎中加入微克级的这些离子后，全蝎的抗凝作用明显降低了。不同来源的全蝎所含无机阳离子的量有所变化［1］［7］1414，实验中加入微量元素的量在其变化范围内，全蝎中含有的无机阳离子很可能会减低全蝎抗凝活性。在实际应用中尽量避免与这些无机阳离子混用，可提高全蝎的抗凝药效。

【参考文献】

［1］张继平，姚晖，蔡丽云，等．鲜品炮制全蝎与市售全蝎药材宏量和微量元素含量的比较研究．中成药，2005（12）：1414－1416．

［2］王芳，金昌东，王振月，等．全蝎的微量元素分析．微量元素与健康研究，1995，12（4）：34－36．

［3］彭延古，雷田香，付东云，等．全蝎抗凝活性成分的定性分析．湖南中医学院学报，2005，25（6）：10－11．

［4］彭延古，许光明，徐爱良，等．全蝎抗凝活性成分的研究．湖南中医学院学报，2006，26（1）：16－17．

［5］郝晓元，彭延古，肖长江．全蝎提取液对血液凝固的影响．中国血栓与止血杂志，2001，7（4）：158－159．

［6］高广生．全蝎不同炮制品中氨基酸含量分析．山东医药工业，2000，19（6）：17－18．

［7］周祖文．影响中药微量元素的相关因素研究概况．微量元素与健康研究，2002，9（l）：66－68．