葛根素高效液相色谱
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提要：目的：测定葛粉中葛根素的含量。方法：用HPLC法测定，以MeOH－H2O－HAc（30：70：0.5）为流动相，250nm为检测波长。结果：葛根素呈良好的线性关系，平均回收率为98.6%,RSD为1.76%。结论：该法简单、快速、准确。
关键词：葛粉;葛根素;HPLC
Abstract:Object:DeterminationofPuerariainPuerariaPowderMethods:PuerariaweredeterminedbyHPLC.ThemobilephasewasMeOH－H2O－HAc（30：70：0.5）.Detectionwavelengthwasat250nm.Results:Puerariashowedagoodlinearrelationship.Theaveragerecoverywas98.6%andRSDwas1.76%.Conclusion:Thismethodwassimple,quickandaccurate.
Keywords:PuerariaPowder;Pueraria;HPLC
葛根为豆科植物野葛Puerarialobata(Willd.)Ohwi的干燥根,是常用中药材,具有解肌退热，生津，透疹，升阳止泻功效，用于外感发热头痛、项背强痛，口渴，消渴，麻疹不透，热痢，泄泻，高血压颈项强痛等[1]。现代研究证实，葛根中的主要有效成分为葛根素等异黄酮类化合物，具有抗炎解热、扩张冠状动脉血管、增加冠状动脉血流量的作用，同时也有降低血压的作用。有关葛根中葛根素等异黄酮的含量测定研究已有不少报道[2-5]，但对葛粉中葛根素含量测定报道不多。本文对葛粉中葛根素的提取条件和测试条件等进行比较研究,并采用高效液相色谱法对葛粉样品进行了定量分析,结果令人满意。
1实验部分
1.1仪器与试剂
岛津LC－10Atvp高效液相色谱仪；SPD－10Avp紫外检测器；岛津UV－265紫外分光光度仪，多功能榨汁机/搅拌机SG300－I（上海科骏电器有限公司）。甲醇（色谱纯），水（二次蒸馏），其余均为分析纯。葛根素对照品（中国药品生物制品检定所）；鲜葛（浙江省永嘉县潘坑乡）。
1.2色谱条件
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；色谱柱C18diamonsil5ul(150×4.6mmI.D)，MeOH－H2O－HAc（30：70：0.5）为流动相，紫外检测波长250nm。
2结果与讨论
2.1提取溶剂浓度的选择
精密称取同一样品约0.1g,分别加30%乙醇、50%乙醇和80%乙醇10ml，超声提取60分钟，进样5ul,比较峰面积，实验结果表明30%乙醇提取最好。
2.2超声提取时间的选择
精密称取同一样品约0.1g,分别加30%乙醇10ml，超声提取30分钟、45分钟、60分钟，进样5ul,比较峰面积，实验结果表明超声60分钟为最佳提取条件。
2.3流动相及流速的选择
试验时曾采用下述流动相进行测定：甲醇－水（25：75）、甲醇－水－醋酸（30：70：0.5）、甲醇－水（30：70）为流动相，结果采用甲醇－水－冰醋酸（30：70：0.5）为流动相，样品分离好。而流速也以1.0ml/min为合适。
2.4标样溶液的制备
称取一定量葛根素对照品,用30%乙醇溶解配制成浓度为13ug/ml的葛根素标准液。
2.5葛粉制备
取鲜葛用水洗净切片,称取20g放入搅拌机内，搅拌三次，每次1分钟，每次加水200ml，150ml，100ml，合并浆汁放置二天，去掉上面的水，下面的粉浆用定量滤纸过滤，低温干燥，放入干燥器中备用。
2.6供试品溶液制备
精确称取一定量葛粉于10mL容量瓶中,加30%乙醇10ml,超声提取1h,滤纸过滤,滤液过0.45um滤膜作为供试品溶液。
2.7线性关系考察
在上述色谱条件下，分别进标样溶液0.5、3、5、7、10μl，测得各峰面积。以葛根素为横座标（A），以峰面积（Y）为纵座标，计算得回归方程：Y=3.90×106x+728.14,相关系数r＝0.9999；结果紫外检测葛根素在0.0065-0.13μg范围内呈良好线性关系。
2.8精密度试验
取上述标样溶液，连续进样5次，测定，RSD为1.11%。
2.9重复性试验
取同一样品重复测定5次，RSD为1.61%。
2.10稳定性试验
取上述供试品溶液，0、2、5、7、10h进样，RSD为2.1%，10小时内进样稳定。
2.11回收率试验
取已知含量的样品，分别加入葛根素标样，按上述方法测定5次，平均回收率为98.6%,RSD为1.76%。见表1。
2.12样品分析
精密吸取标样溶液5μl与供试品溶液5μl，注入液相色谱仪，测定，结果:葛粉中葛根素的含量为0.06%（n=3），见下图。
3讨论
本文采用高效液相色谱法测定葛粉中葛根素的含量,方法简单、快速、准确，结果满意，可用于葛粉中葛根素的含量测定。
[参考文献]
[1]中国药典2005版一部.2005:233-234.
[2]章育中，杨凡。高效液相色谱法测定葛根及其片剂中异黄酮的含量.药物分析杂志，1984,4(2):67.
[3]张蕾,潘扬，朱蓉贞，等。不同品种及产地的葛根中葛根素含量的比较。中国中药杂志，1995,20(7):399.
[4]肖学凤,高岚。HPLC法测定不同产地葛根中葛根素的含量。中草药，2001,32(3):220.
[5]迟霁菲,张国刚.高效液相色谱法测定不同产地葛根中葛根素的含量.中南药学2006,l14(14):307-308
