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六神祛暑水薄层鉴别

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六神祛暑水薄层鉴别

【摘要】目的建立六神祛暑水薄层鉴别方法。方法用薄层色谱法分别鉴别六神祛暑水中的大黄、桂皮、广藿香、陈皮、辣椒等药材。结果薄层色谱可检出大黄、桂皮、广藿香、陈皮、辣椒等5种药材对应的斑点,且斑点清晰,阴性没干扰。结论建立的薄层鉴别方法简单,可作为六神祛暑水质量控制方法。

【关键词】六神祛暑水;薄层色谱;大黄;桂皮;广藿香;陈皮;辣椒

Abstract:ObjectiveToestablishthemethodsofTLCidentificationofLiushenQushulotion.MethodsRadixetRhizomaRhei,PericarpiumCitriReticulatae,capsicum,HerbaPogostemonis,CortexCinnamomitoestablishthemethodsofTLCidentificationofLiushenQushulotionResultsRadixetRhizomaRhei,PericarpiumCitriReticulatae,capsicum,HerbaPogostemonis,CortexCinnamomiinLiushenQushulotioncanbeidentifiedwithTLCclearly.ConclusionThemethodsaresimple,rapidandthespotsareveryclear,whichcouldbeusedforqualitycontrolofLiushenQushulotion.

Keywords:LiushenQushulotion;TLC;RadixetRhizomaRhei;PericarpiumCitriReticulatae;capsicum;HerbaPogostemonis;CortexCinnamomi

六神祛暑水是由樟脑、桂皮、广藿香、茴香、姜等11味中药组成的复方酒剂。主要用于因中暑而引起的头晕、恶心、腹痛的治疗。中华人民共和国卫生部药品标准[1]中仅有性状的描述及检查项,为控制其内在质量,本文对六神祛暑水处方中广藿香、桂皮、大黄、陈皮、辣椒等5味药材进行了薄层鉴别方法的研究,以控制该药的质量。

1仪器与试药

ZF90型暗箱式紫外投射仪(上海顾村电光仪器厂);YoKoPN电动喷雾器(武汉药科新技术开发有限公司)。辣椒素(110839-200403)、大黄酚(110796-200513)、大黄素(110756-200110)、大黄酸(0757-200206)、橙皮苷(110721-200512)、大黄素甲醚(110758-200509)、芦荟大黄素(0795-9803)、桂皮醛(11171-200513)等对照品均由中国药品生物制品检定所提供。薄层层析硅胶G(化学纯,青岛海洋化工有限公司制造);预制薄层层析硅胶G板(化学纯,青岛麦克硅胶干燥剂有限公司);其余试剂均为分析纯。六神祛暑水及各味药材由广州星群(药业)股份有限公司提供,广藿香、桂皮、大黄、陈皮、辣椒等5味对照药材均由广东药学院李书渊老师鉴别;六神祛暑水中藿香、茴香、桂皮、大黄、陈皮、辣椒等药材阴性均按制剂工艺制备。

2薄层鉴别

2.1大黄取本品20mL,水浴蒸干至约5mL,用水5mL溶解,置分液漏斗中用乙醚萃取3次,每次10mL,合并乙醚层,置水浴上蒸干,残渣加乙醇0.5mL使溶解,作为供试品溶液。另取缺大黄的阴性样品,按供试品制备方法同法制成阴性对照溶液。取大黄药材粉末0.5g,加70%(体积分数)乙醇20mL,超声处理25min,滤过,取滤液同法制成大黄对照药材溶液。取大黄素、大黄酚、大黄酸、大黄素甲醚、芦荟大黄素对照品,加乙醇制成浓度均为1.5mg/mL的溶液,照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VIB)试验,吸取上述供试品溶液、大黄对照药材溶液、阴性对照溶液各1μL及大黄混合对照品溶液2μL,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以正己烷乙酸乙酯甲酸(体积比30∶10∶0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱与对照品色谱相应的位置上,显相同的橙黄色荧光斑点,阴性对照色谱在相应位置上无干扰。结果见图1。

B.大黄阴性对照;1~5.六神祛暑水(批号分别为DN51001、DN51002、DN51003、DN51004、DN51005)

S1.大黄对照药材;S.大黄混合对照品(由上至下为大黄酚、大黄素甲醚、大黄素、大黄酸、芦荟大黄素)

图1大黄的薄层鉴别(UV365nm)(略)

Fig.1TLCchromatogramofRadixetRhizomaRhei

2.2桂皮量取样品20mL,用石油醚(30~60℃)25mL提取,弃去石油醚层,石油醚提取后的下层液,加蒸馏水20mL,用乙酸乙酯提取3次,每次20mL,合并乙酸乙酯层,水浴蒸干,热风吹至没有樟脑味,加乙酸乙酯0.5mL溶解,作为供试品溶液。取桂皮药材粉末0.5g,加入乙醇10mL,冷浸20min,滤过,滤液挥干至2mL,作为对照药材溶液。另取缺桂皮的阴性样品,按供试品制备方法同法制成阴性对照溶液。取桂皮醛对照品,加乙醇制成浓度为1μg/mL的对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VIB)试验,吸取供试品溶液、阴性对照溶液各3μL,桂皮对照药材溶液及桂皮醛对照品溶液1μL,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以石油醚(60~90℃)乙酸乙酯(体积比18∶2)为展开剂,薄层板预饱和15min,展开,取出,晾干,喷以2,4二硝基苯肼试液。供试品色谱中,在与对照药材及对照品色谱相应的位置上显相同的橙黄色斑点,阴性对照色谱在相应位置上无干扰,结果见图2。

2.3广藿香取广藿香药材粉末2g,加乙醇20mL,超声20min,滤过,滤液水浴蒸干,残渣加甲醇1mL溶解,作为对照药材溶液。

取缺广藿香的阴性样品,按“2.1”项下供试品制备方法同法制成阴性对照溶液。另取百秋李醇对照品,加入乙酸乙酯制成浓度为1mg/mL的溶液,作为对照品溶液。吸取鉴定“2.1”项下供试品溶液,广藿香对照药材溶液、阴性对照溶液及百秋李醇对照品溶液各2μL,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以环己烷丙酮(体积比10∶3)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,105℃烘至可见紫红色斑点。供试品色谱中,在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上显相同的紫红色斑点,阴性对照色谱在相应位置上无干扰,结果见图3。

B.桂皮阴性对照;1~3.六神祛暑水(批号分别为DN51001、DN51002、DN51003)S1.桂皮对照药材;S.桂皮醛对照品

图2桂皮的薄层鉴别(略)

Fig.2TLCchromatogramofCortexCinnamomi

B.广藿香阴性对照;1~3.六神祛暑水(批号分别为DN51001、DN51002、DN51003)S1.广藿香对照药材S.百秋李醇对照品

图3广藿香的薄层鉴别(略)

Fig.3TLCchromatogramofHerbaPogostemonis

2.4辣椒取本品25mL,水浴蒸干,加水20mL溶解,置分液漏斗中用乙醚萃取3次(下层液保留待用),每次20mL,合并乙醚层,蒸干,加10%KOH甲醇溶液20mL溶解,移至锥形瓶中放置12h,加入5mL水,用乙醚萃取3次,每次20mL,合并乙醚层,用水洗2次,每次20mL,蒸干,用乙醇0.5mL溶解,作为供试品溶液。另取缺辣椒的阴性样品,同法制成阴性对照溶液。取辣椒素对照品,加乙醇制成浓度为1mg/mL的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VIB)试验,吸取供试品溶液、阴性对照溶液及对照品溶液各2μL,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以丙酮甲苯正己烷(体积比2∶2∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,置碘蒸气中熏至斑点显褐色。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的褐色斑点,阴性对照色谱在相应位置上无干扰,结果见图4。

B.辣椒阴性对照;1~4.六神祛暑水(批号分别为DN51001、DN51002、DN51003、DN51004)S1.辣椒对照药材;S.辣椒素对照品

图4辣椒的薄层鉴别(略)

Fig.4TLCchromatogramofFructusCapsicum

2.5陈皮取“2.4”项下乙醚提取后没有皂化的下层液,移入分液漏斗中,用乙酸乙酯振摇提取3次,每次20mL,合并乙酸乙酯层,蒸干,残渣加乙醇0.5mL溶解,作为供试品溶液。另取缺陈皮的阴性样品,同法制成阴性对照溶液。再取陈皮药材粉末3g,加乙醇30mL,超声20min滤过,取滤液浓缩成0.5mL,作为对照药材溶液。取橙皮苷对照品,加甲醇制成饱和溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VIB)试验,吸取供试品溶液,对照药材溶液、阴性对照溶液各1μL,对照品溶液5μL,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以乙酸乙酯甲醇水(体积比100∶17∶13)展开3cm,再以甲苯醋酸乙酯甲酸水(体积比20∶10∶1∶1)上层液展开8cm,取出,晾干,喷以1%三氯化铝甲醇试液,加热吹干,置紫外光灯(365nm)下检视(显色后10min内观察)。供试品色谱中,在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上,显相同的荧光斑点,阴性对照色谱在相应位置上无干扰,结果见图5。

3讨论

3.1在辣椒的鉴定中,若样品不水解直接采用乙醚提取液点样,辣椒素含量低,杂质多,背景深,根本观察不到鉴定斑点。因此采用加入10%KOH甲醇溶液放置一晚皂化,再用乙醚提纯的方法,使辣椒素的含量大大增加,同时去除大部分的干扰,使得薄层鉴定中辣椒素斑点清晰、明显,阴性无干扰。

B.陈皮阴性对照;1~5.六神祛暑水(批号分别为DN51001、DN51002、DN51003、DN51004、DN51005)S1.陈皮对照药材;S.橙皮苷对照品

图5陈皮的薄层鉴别(UV365nm)(略)

Fig.5TLCchromatogramofPericarpiumCitriReticulatae

3.2大黄中主要含有蒽醌衍生物,主要为大黄酸、大黄素、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚等苷元。中国药典2005版中大黄药材这5种成分的薄层鉴定,样品需要经过水解前处理[2]17。经本文实验证明,经过水解后,制剂中各蒽醌鉴别斑点反而不明显,而采取直接用乙醚提取本品的方法,就可直接鉴别5个斑点,这可能由于在该制剂的生产过程中,大黄中大部分的苷己分解为苷元。药典中鉴定大黄的展开剂为石油醚(30~60℃)甲酸乙酯甲酸(体积比15∶5∶1)的上层溶液,该展开剂对温度和湿度都很敏感,难控制展开效果。而本文采用正己烷乙酸乙酯甲酸(体积比30∶10∶0.5),在一般情况下能分离出3个鉴定斑点,当湿度控制较低时,就能很好地鉴别出大黄中5个鉴定斑点。

3.3陈皮的薄层色谱鉴定一般采用0.5%NaOH的硅胶G薄层板进行二次展开,1%三氯化铝甲醇显色方法鉴别[2]132,结果发现,此方法本品中的大黄对其鉴定有干扰。采用聚酰胺膜代替0.5%NaOH的硅胶G薄层板,1%三氯化铝甲醇显色,橙皮苷鉴定斑点清晰,阴性无干扰,主要是聚酰胺薄膜能增强三氯化铝与橙皮苷反应产生的荧光显色;但观察斑点时要注意显色后10min以内观察,否则阴性会出现干扰。

3.4在桂皮的薄层鉴别中,样品中的樟脑成分会影响桂皮醛斑点的鉴定,先采用石油醚提取,去除大部分樟脑成分,再经热风吹去剩余樟脑。

【参考文献】

[1]WS3-B-2490-97Z13-45.中华人民共和国卫生部药品标准[S].

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典:2005年版一部[S].北京:化学工业出版社,2005.

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