六神祛暑水薄层鉴别

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【摘要】目的建立六神祛暑水的薄层鉴别方法。方法用薄层色谱法分别鉴别六神祛暑水中的大黄、桂皮、广藿香、陈皮、辣椒等药材。结果薄层色谱可检出大黄、桂皮、广藿香、陈皮、辣椒等5种药材对应的斑点，且斑点清晰，阴性没干扰。结论建立的薄层鉴别方法简单，可作为六神祛暑水质量控制方法。

【关键词】六神祛暑水；薄层色谱；大黄；桂皮；广藿香；陈皮；辣椒

Abstract:ObjectiveToestablishthemethodsofTLCidentificationofLiushenQushulotion.MethodsRadixetRhizomaRhei,PericarpiumCitriReticulatae,capsicum,HerbaPogostemonis,CortexCinnamomitoestablishthemethodsofTLCidentificationofLiushenQushulotionResultsRadixetRhizomaRhei,PericarpiumCitriReticulatae,capsicum,HerbaPogostemonis,CortexCinnamomiinLiushenQushulotioncanbeidentifiedwithTLCclearly.ConclusionThemethodsaresimple,rapidandthespotsareveryclear,whichcouldbeusedforqualitycontrolofLiushenQushulotion.

Keywords:LiushenQushulotion;TLC；RadixetRhizomaRhei;PericarpiumCitriReticulatae;capsicum;HerbaPogostemonis;CortexCinnamomi

六神祛暑水是由樟脑、桂皮、广藿香、茴香、姜等11味中药组成的复方酒剂。主要用于因中暑而引起的头晕、恶心、腹痛的治疗。中华人民共和国卫生部药品标准［1］中仅有性状的描述及检查项，为控制其内在质量，本文对六神祛暑水处方中广藿香、桂皮、大黄、陈皮、辣椒等5味药材进行了薄层鉴别方法的研究，以控制该药的质量。

1仪器与试药

ZF90型暗箱式紫外投射仪（上海顾村电光仪器厂）；YoKoPN电动喷雾器（武汉药科新技术开发有限公司）。辣椒素（110839-200403）、大黄酚（110796-200513）、大黄素（110756-200110）、大黄酸（0757-200206）、橙皮苷（110721-200512）、大黄素甲醚（110758-200509）、芦荟大黄素（0795-9803）、桂皮醛（11171-200513）等对照品均由中国药品生物制品检定所提供。薄层层析硅胶G（化学纯，青岛海洋化工有限公司制造）；预制薄层层析硅胶G板（化学纯，青岛麦克硅胶干燥剂有限公司）；其余试剂均为分析纯。六神祛暑水及各味药材由广州星群（药业）股份有限公司提供，广藿香、桂皮、大黄、陈皮、辣椒等5味对照药材均由广东药学院李书渊老师鉴别；六神祛暑水中藿香、茴香、桂皮、大黄、陈皮、辣椒等药材阴性均按制剂工艺制备。

2薄层鉴别

2.1大黄取本品20mL，水浴蒸干至约5mL，用水5mL溶解，置分液漏斗中用乙醚萃取3次，每次10mL，合并乙醚层，置水浴上蒸干，残渣加乙醇0.5mL使溶解，作为供试品溶液。另取缺大黄的阴性样品，按供试品制备方法同法制成阴性对照溶液。取大黄药材粉末0.5g，加70%（体积分数）乙醇20mL，超声处理25min，滤过，取滤液同法制成大黄对照药材溶液。取大黄素、大黄酚、大黄酸、大黄素甲醚、芦荟大黄素对照品，加乙醇制成浓度均为1.5mg/mL的溶液，照薄层色谱法（《中国药典》2005年版一部附录VIB）试验，吸取上述供试品溶液、大黄对照药材溶液、阴性对照溶液各1μL及大黄混合对照品溶液2μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷乙酸乙酯甲酸（体积比30∶10∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点，阴性对照色谱在相应位置上无干扰。结果见图1。

B.大黄阴性对照;1~5.六神祛暑水(批号分别为DN51001、DN51002、DN51003、DN51004、DN51005)

S1.大黄对照药材;S.大黄混合对照品(由上至下为大黄酚、大黄素甲醚、大黄素、大黄酸、芦荟大黄素)

图1大黄的薄层鉴别(UV365nm)（略）

Fig.1TLCchromatogramofRadixetRhizomaRhei

2.2桂皮量取样品20mL，用石油醚（30~60℃）25mL提取，弃去石油醚层，石油醚提取后的下层液，加蒸馏水20mL，用乙酸乙酯提取3次，每次20mL，合并乙酸乙酯层，水浴蒸干，热风吹至没有樟脑味，加乙酸乙酯0.5mL溶解，作为供试品溶液。取桂皮药材粉末0.5g，加入乙醇10mL，冷浸20min，滤过，滤液挥干至2mL，作为对照药材溶液。另取缺桂皮的阴性样品，按供试品制备方法同法制成阴性对照溶液。取桂皮醛对照品，加乙醇制成浓度为1μg/mL的对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005年版一部附录VIB）试验，吸取供试品溶液、阴性对照溶液各3μL，桂皮对照药材溶液及桂皮醛对照品溶液1μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚（60~90℃）乙酸乙酯（体积比18∶2）为展开剂，薄层板预饱和15min，展开，取出，晾干，喷以2,4二硝基苯肼试液。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上显相同的橙黄色斑点，阴性对照色谱在相应位置上无干扰，结果见图2。

2.3广藿香取广藿香药材粉末2g,加乙醇20mL，超声20min，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加甲醇1mL溶解，作为对照药材溶液。

取缺广藿香的阴性样品，按“2.1”项下供试品制备方法同法制成阴性对照溶液。另取百秋李醇对照品，加入乙酸乙酯制成浓度为1mg/mL的溶液，作为对照品溶液。吸取鉴定“2.1”项下供试品溶液，广藿香对照药材溶液、阴性对照溶液及百秋李醇对照品溶液各2μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷丙酮（体积比10∶3）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，105℃烘至可见紫红色斑点。供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上显相同的紫红色斑点，阴性对照色谱在相应位置上无干扰，结果见图3。

B.桂皮阴性对照;1~3.六神祛暑水(批号分别为DN51001、DN51002、DN51003)S1.桂皮对照药材;S.桂皮醛对照品

图2桂皮的薄层鉴别（略）

Fig.2TLCchromatogramofCortexCinnamomi

B.广藿香阴性对照;1~3.六神祛暑水(批号分别为DN51001、DN51002、DN51003)S1.广藿香对照药材S.百秋李醇对照品

图3广藿香的薄层鉴别（略）

Fig.3TLCchromatogramofHerbaPogostemonis

2.4辣椒取本品25mL，水浴蒸干，加水20mL溶解，置分液漏斗中用乙醚萃取3次(下层液保留待用)，每次20mL，合并乙醚层，蒸干，加10%KOH甲醇溶液20mL溶解，移至锥形瓶中放置12h，加入5mL水，用乙醚萃取3次，每次20mL，合并乙醚层，用水洗2次，每次20mL，蒸干，用乙醇0.5mL溶解，作为供试品溶液。另取缺辣椒的阴性样品，同法制成阴性对照溶液。取辣椒素对照品，加乙醇制成浓度为1mg/mL的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005年版一部附录VIB）试验，吸取供试品溶液、阴性对照溶液及对照品溶液各2μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以丙酮甲苯正己烷（体积比2∶2∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏至斑点显褐色。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的褐色斑点，阴性对照色谱在相应位置上无干扰，结果见图4。

B.辣椒阴性对照;1~4.六神祛暑水(批号分别为DN51001、DN51002、DN51003、DN51004)S1.辣椒对照药材;S.辣椒素对照品

图4辣椒的薄层鉴别（略）

Fig.4TLCchromatogramofFructusCapsicum

2.5陈皮取“2.4”项下乙醚提取后没有皂化的下层液，移入分液漏斗中，用乙酸乙酯振摇提取3次，每次20mL，合并乙酸乙酯层，蒸干，残渣加乙醇0.5mL溶解，作为供试品溶液。另取缺陈皮的阴性样品，同法制成阴性对照溶液。再取陈皮药材粉末3g，加乙醇30mL，超声20min滤过，取滤液浓缩成0.5mL，作为对照药材溶液。取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005年版一部附录VIB）试验，吸取供试品溶液，对照药材溶液、阴性对照溶液各1μL,对照品溶液5μL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸乙酯甲醇水(体积比100∶17∶13)展开3cm，再以甲苯醋酸乙酯甲酸水(体积比20∶10∶1∶1)上层液展开8cm，取出，晾干，喷以1%三氯化铝甲醇试液,加热吹干，置紫外光灯(365nm)下检视（显色后10min内观察）。供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点，阴性对照色谱在相应位置上无干扰，结果见图5。

3讨论

3.1在辣椒的鉴定中，若样品不水解直接采用乙醚提取液点样，辣椒素含量低，杂质多，背景深，根本观察不到鉴定斑点。因此采用加入10%KOH甲醇溶液放置一晚皂化，再用乙醚提纯的方法，使辣椒素的含量大大增加，同时去除大部分的干扰，使得薄层鉴定中辣椒素斑点清晰、明显，阴性无干扰。

B.陈皮阴性对照;1~5.六神祛暑水(批号分别为DN51001、DN51002、DN51003、DN51004、DN51005)S1.陈皮对照药材;S.橙皮苷对照品

图5陈皮的薄层鉴别(UV365nm)（略）

Fig.5TLCchromatogramofPericarpiumCitriReticulatae

3.2大黄中主要含有蒽醌衍生物，主要为大黄酸、大黄素、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚等苷元。中国药典2005版中大黄药材这5种成分的薄层鉴定，样品需要经过水解前处理［2］17。经本文实验证明，经过水解后，制剂中各蒽醌鉴别斑点反而不明显，而采取直接用乙醚提取本品的方法，就可直接鉴别5个斑点，这可能由于在该制剂的生产过程中，大黄中大部分的苷己分解为苷元。药典中鉴定大黄的展开剂为石油醚（30~60℃）甲酸乙酯甲酸（体积比15∶5∶1）的上层溶液，该展开剂对温度和湿度都很敏感，难控制展开效果。而本文采用正己烷乙酸乙酯甲酸（体积比30∶10∶0.5），在一般情况下能分离出3个鉴定斑点，当湿度控制较低时，就能很好地鉴别出大黄中5个鉴定斑点。

3.3陈皮的薄层色谱鉴定一般采用0.5%NaOH的硅胶G薄层板进行二次展开，1%三氯化铝甲醇显色方法鉴别［2］132，结果发现，此方法本品中的大黄对其鉴定有干扰。采用聚酰胺膜代替0.5%NaOH的硅胶G薄层板，1%三氯化铝甲醇显色，橙皮苷鉴定斑点清晰，阴性无干扰，主要是聚酰胺薄膜能增强三氯化铝与橙皮苷反应产生的荧光显色；但观察斑点时要注意显色后10min以内观察，否则阴性会出现干扰。

3.4在桂皮的薄层鉴别中，样品中的樟脑成分会影响桂皮醛斑点的鉴定，先采用石油醚提取，去除大部分樟脑成分，再经热风吹去剩余樟脑。

【参考文献】

［1］WS3-B-2490-97Z13-45.中华人民共和国卫生部药品标准［S］.

［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典:2005年版一部［S］.北京:化学工业出版社,2005.