HPLC法测定拈痛丸盐酸小檗碱含量

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【摘要】目的测定拈痛丸中盐酸小檗碱的含量。方法采用离子对色谱法，DiamonsilC18柱，乙腈水（体积比52∶48）（每1000mL加磷酸二氢钾3.4g，十二烷基硫酸钠1.7g）为流动相，流速为1.0mL·min-1，检测波长265nm，柱温为室温。结果盐酸小檗碱平均回收率为99.8%，RSD为2.89%（n=6）。结论该法可用于拈痛丸中盐酸小檗碱的含量测定。

【关键词】拈痛丸；盐酸小檗碱；离子对色谱法；含量测定

Abstract:ObjectiveTodevelopamethodforthecontentdeterminationofberberinehydrochlorideinNiantongwan.MethodsTheanalysiswasperformedonaDiamonsilC18columnusingacetonitrilewater(52∶48,containing3.4gofpotassiumdihydrogenphosphateand1.7gofsodiumlaurylsulfateper1000mL）asmobilephase.Theflowratewas1.0mL·min-1andthedetectionwavelength265nm.ResultsTheaveragerecoveryforberberinehydrochloridewas99.8%withRSD2.89%(n=6).ConclusionThemethodcanbeusedforthecontentdeterminationofberberinehydrochlorideinNiantongwan.

Keywords:Niantongwan；berberinehydrochloride；hplc

拈痛丸为香港注册的中药成方制剂，由广藿香、延胡索、厚朴、黄连等18味中药制成，具有解表化湿、理气和胃、燥湿除满、温中止痛之功效。临床用于治疗外感风邪、湿滞困阻所致的恶寒发热、腹痛吐泻、头晕目眩、身体上下诸痛，兼治因寒湿气滞所致的脘腹胀痛、不思饮食。此产品目前无质量标准。本文建立了拈痛丸中盐酸小檗碱含量测定的离子对色谱法，该法具有分离效果好、灵敏、准确等优点，可用于该产品的质量控制。

1仪器与试药

LC10ATVP型高效液相色谱仪（日本岛津），SPD10ATVP型紫外可见检测器（日本岛津），HW2000色谱工作站（南京千谱软件有限公司）。DL360超声波清洗器（宁波石浦海天电子仪器厂），工作频率（4.5±0.05）kHz，输出功率240W。盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号110713－200208），拈痛丸（中港药业公司，每包1g，每盒12包）；乙腈、十二烷基硫酸钠为色谱纯，磷酸二氢钾为分析纯，水为双蒸水。

2实验部分

2.1样品液制备

2.1.1对照品溶液的制备精密称取在100℃干燥5h的盐酸小檗碱对照品19.8mg，置200mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液(盐酸小檗碱浓度为99μg·mL-1)。

2.1.2供试品溶液的制备取拈痛丸样品10包，研碎，取约1.5g，精密称定，置100mL量瓶中，加入盐酸甲醇（体积比1∶100）约95mL，60℃水浴中加热15min，取出，超声处理30min，室温放置过夜，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，续滤液045μm滤膜过滤，作为供试品溶液。

2.1.3阴性对照液的制备取处方组成中除黄连外的其余成分制成不含黄连的阴性对照品，按“21.2”项下的制备方法处理得阴性对照液。

2.2色谱条件及系统适用性试验色谱柱为DiamonsilC18柱（250mm×4.6mm，5μm，迪马公司），乙腈水（体积比52∶48）（每1000mL加磷酸二氢钾3.4g，十二烷基硫酸钠1.7g）为流动相，流速为1.0mL·min-1，检测波长265nm，柱温为室温。分别取对照品溶液（盐酸小檗碱浓度为29.7μg·mL-1）、供试品溶液和阴性对照溶液10μL注入色谱仪，理论塔板数以盐酸小檗碱计算应不低于6500；盐酸小檗碱的拖尾因子为1.16，保留时间约为21.8min，盐酸小檗碱与其他组分可基线分离，阴性样品不干扰样品测定，见图1。

A.对照品;B.样品;C.阴性1.盐酸小檗碱

图1盐酸小檗碱对照品、样品及阴性的高效液相色谱图（略）

Fig.1HPLCchromatogramsofberberinehydrochloride(A)andsample(B)andnegative(C)

2.3方法学考察

2.3.1标准曲线制备分别吸取一定量的盐酸小檗碱对照品贮备液，加甲醇稀释成盐酸小檗碱浓度为4.95、9.9、19.8、29.7、39.6、49.5、59.4μg·mL-1的溶液。依次进样10μL，每个浓度测定3次以上。以峰面积（A）对对照品溶液系列浓度（C）进行回归，得盐酸小檗碱回归方程A=44782C+42971，r＝0.9999。表明盐酸小檗碱浓度在4.95～59.4μg·mL-1之间与峰面积线性关系良好。

2.3.2精密度试验取质量浓度为29.7μg·mL-1的盐酸小檗碱对照品溶液10μL，连续测定5次，其峰面积的平均值为1387708，RSD为1.38%，表明仪器精密度良好。

2.3.3稳定性试验取供试品溶液（CK20060201）在0，2，4，6，8h分别进样10μL，记录峰面积，结果盐酸小檗碱峰面积的平均值为1341450，RSD为216%，表明供试品溶液在8h内稳定。

2.3.4重复性试验取同一批号（CK20060201）样品6份，照“212”方法制备，进样测定，结果盐酸小檗碱平均含量为1.914μg·mL-1，RSD为0.85%，表明方法精密度良好。

2.3.5加样回收率试验精密称取同一批号样品（CK20060201）共6份，加入相应量的盐酸小檗碱对照品，照“2.1.2”方法处理并测定，计算回收率，结果见表1。盐酸小檗碱平均回收率为99.8%，RSD为2.89%，表明本方法准确可靠。

2.4样品测定取拈痛丸样品3批，照“2.1.2”方法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液（29.7μg·mL-1）与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，计算样品中盐酸小檗碱的含量，结果见表2。

表1盐酸小檗碱回收率试验结果（n=6）（略）

Tab.1Resultsofrecoverytest(n=6)

表2样品测定结果（n=3）（略）

Tab.2Resultsofsampledetermination(n=3)

3讨论

3.1盐酸小檗碱是中药黄连的有效成分，含量较高，故以其为指标来控制拈痛丸的质量。

3.2本文分别选用乙腈0.05mol/L磷酸二氢钾溶液［1］、乙腈0.1%磷酸溶液［2］为流动相测定盐酸小檗碱，但分离效果不好。参照文献［3］采用离子对色谱法，并调整乙腈与水的体积比为52∶48，方得满意结果。

3.3采用盐酸甲醇（体积比1∶100）［4］为溶剂，分别超声提取20、30、40、50、60min，结果表明30min即可提取完全，所以选择超声时间为30min。

3.4盐酸小檗碱的含量测定，文献报道的测定波长有345nm［4］、347nm［5］、265nm［6］，测定中曾以345、347nm为测定波长，但盐酸小檗碱与其他峰的分离度达不到要求，且峰型不好，以265nm为测定波长，盐酸小檗碱峰型及与其他峰的分离好，所以本文选择测定波长为265nm。

【参考文献】

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