舒肝保健茶齐墩果酸含量测定

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【摘要】目的建立舒肝保健茶中齐墩果酸的含量测定方法。方法采用RPHPLC法，以WaterssymmetryshieldC18柱（3.9mm×150mm，5μm）为色谱柱，乙腈水（体积比71∶29）为流动相，流速为1.0mL/min，检测波长为220nm，柱温25℃。结果在0.0790～1.264μg范围内，齐墩果酸的进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系，r=0.9999，平均回收率为96.5%，RSD为1.0%（n=6）。结论本法灵敏、简便、重现性好,结果准确、可靠，可用于舒肝保健茶的质量控制。

【关键词】反相高效液相色谱法；舒肝保健茶；齐墩果酸

舒肝保健茶是由天津中医药大学中医药研究院制剂中心新研发的一种复方保健品，主要由藏茵陈、栀子、淡竹叶、甘草等成分组成，具有清热解毒、舒肝利胆的作用，可用于预防肝炎，主要用于病毒性肝炎、脂肪肝、消化不良的防御和治疗。藏茵陈是此方中的君药，其主要有效成分是齐墩果酸。文献报道齐墩果酸已成为有效的抗肝炎的单体成分，具有保肝、解肝毒的作用［1］。本文建立了舒肝保健茶中主要药效活性成分齐墩果酸的HPLC含量测定方法，结果令人满意。

1仪器与试药

Waters2695液相色谱系统：四单元数码梯度泵、在线真空脱气机、自动进样器、柱温箱、Waters2487DAD检测器、Empower工作站；METTLERTOLEDOAX205（瑞士）十万分之一天平；BP121S万分之一天平（瑞士沙脱利斯公司）。

舒肝保健茶（批号：061211，061212，061213）由天津中医药大学中医药研究院制剂中心提供；齐墩果酸对照品（批号：110709-200304）购于中国药品生物制品检定所；乙腈为色谱纯，水为高纯水。其它试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，采用WaterssymmetryshieldC18柱（3.9mm×150mm，5μm），流动相为乙腈水（体积比71∶29），检测波长为220nm，流速为1.0mL/min，采用25℃柱温。理论塔板数按齐墩果酸色谱峰计算不低于4000。

2.2对照品溶液的制备

精密称取齐墩果酸对照品适量，加80%（质量分数）乙腈制成0.1mg/mL的溶液，即得。

2.3供试品溶液的制备

取舒肝保健茶，研细，取约2g，精密称定，加入水20mL溶解，再用乙醚萃取3次，每次20mL，分取乙醚层，合并，蒸干，用80%（质量分数）乙腈溶解，转移至5mL容量瓶中定容至刻度,滤过，作为供试液。

2.4阴性对照溶液的制备

取处方量，以相同工艺制备缺藏茵陈阴性制剂，依“2.3”项下方法操作即得。

2.5专属性试验

分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果为：齐墩果酸对照品和供试品色谱图中齐墩果酸峰与其它组分峰基线分离，分离度大于1.5，保留时间为17.490min；阴性对照色谱图中与齐墩果酸对照品以及供试品色谱图中相对应的保留时间处无色谱峰出现，表明其它组分对齐墩果酸的测定无干扰,见图1。

2.6线性关系考察

精密称取50℃减压干燥至恒重的齐墩果酸对照品6.32mg，置50mL容量瓶中，加80%（质量分数）乙腈溶解并定容至刻度，摇匀（质量浓度为126.4μg/mL），分别用80%（质量分数）乙腈配成浓度为126.4、63.2、31.6、15.8、7.90μg/mL的对照品溶液，各取10μL进样，按“2.1”项下色谱条件测定，以峰面积（A）为纵坐标，对照品浓度（ρ）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：A=1754.3(ρ)+1355；r=0.9999，齐墩果酸在0.0790～1.264μg/mL范围内呈良好的线性关系。

2.7精密度试验

精密吸取同一份供试品溶液，连续进样6次，测定齐墩果酸峰面积值，RSD为1.7%（n=6），表明精密度良好。

图1HPLC色谱图（略）

A.对照品;B.样品;C.阴性对照（缺藏茵陈）

Fig.1HPLCChromatograms（Acontrolstandard;BSample;CNegativesample）

2.8稳定性试验

按“2.3”项下操作制备一份供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10、12h测定齐墩果酸峰面积，RSD为0.35%，结果显示供试品溶液在12h内稳定。

2.9重复性试验

取同一批号供试品（批号：061211）6份，各约2g，精密称定，分别按“2.3”项下操作制备供试品溶液，测定，得平均质量分数为147.9μg/g，RSD为1.4%（n=6），表明该方法的重复性较好。

2.10加样回收率试验

取本品（批号：061211，质量分数：147.9μg/mL）9份，各约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加质量浓度为126.4μg/mL的齐墩果酸对照品溶液适量，挥干，加入水20mL溶解，再用乙醚萃取3次，每次20mL，分取乙醚层，合并，蒸干，用80%(质量分数）乙腈溶解，转移至5mL容量瓶中定容至刻度，滤过，测定每份的含量，计算回收率，平均回收率为96.5%，RSD为1.0%（n=9），结果见表1。

表1加样回收率试验结果（略）

Tab.1Resultsofrecoverytest

2.11样品含量测定

分别按“2.3”项下操作，制备不同批号（061211，061212，061213）的供试品溶液，在“2.1”项下色谱条件下进行测定。测定结果见表2。

表2样品含量测定结果（略）

Tab.2Analyticalresultsofsample

3讨论

3.1供试品处理方法的选择

在供试品的处理过程中，首先采取的是用甲醇直接超声提取的方法，但在用80%(质量分数）乙腈复溶时，溶液出现了分层现象，原因可能是提取物中含有的蔗糖溶于水相而形成分层；于是再采取水溶解-有机溶剂萃取的方法处理，选择了乙酸乙酯、乙醚、三氯甲烷3种溶剂进行考察，结果发现乙醚的效果最好，且乙醚的沸点低，回收简便，故选用乙醚处理［2］。处理过程中对于乙醚的萃取次数也做了考察，结果显示乙醚萃取3次，每次20mL效果最好。最终确定了水溶解乙醚萃取的处理方法。

3.2流动相的选择

由于齐墩果酸极性较小，曾以甲醇水（体积比90∶10）为流动相进行考察［3］，结果样品中齐墩果酸分离效果不理想，于是改为以乙腈水为流动相［4］，分离效果要好于甲醇水，并最终确定在乙腈水（体积比71∶29）的条件下，齐墩果酸峰形较好，在样品中能达到完全分离，阴性样品中无干扰。

【参考文献】

［1］杜瑜,李焕德．齐墩果酸的研究进展［J］.中国药房,2006，17(4):304-306.

［2］段雪云,许腊英,毛维伦,等．HPLC测定乌梅饮片中熊果酸和齐墩果酸的含量［J］.中成药,2006,28(7):982-984.

［3］房霞,彭向前．HPLC法测定通脉活络康颗粒中齐墩果酸含量［J］.中国药品标准,2006,7(6):43-45.

［4］李琴韵,张雷.HPLC测定左归颗粒中熊果酸和齐墩果酸含量［J］.中国中药杂志,2005,30(4):308-309