人群输血传播病毒感染
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【摘要】目的了解不同人群输血传播病毒(TTV)的感染状况。方法采用套式PCR法检测血清标本中TTVDNA，并对其中1株TTV的部分基因序列进行了测定。结果不同人群TTVDNA阳性率分别为：正常体检人群10.3%，献血员43.7%，吸毒者15.6%，血液透析病人54.4%，妓女65.0%，慢性丙型肝炎病人25.0%，非甲～庚型肝炎0/11。结论TTV在各类人群中均有较高的感染率。
Detectionoftransfusiontransmittedvirus(TTV)indifferentpopulationsofChina
【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheprevalenceoftransfusiontransmittedvirus(TTV)indifferentpopulationsofChina.MethodsTTVDNAwasdetectedinseracollectedfromdifferentpopulationsbynestedPCR.PartialgeneofaTTVisolatewasdirectlysequenced.ResultsTheprevalencesofTTVinvariouspopulationswereasfollows:10.3%(31/301)ingeneralpopulationwhenreceivingphysicalcheckup;43.7%(14/32)inblooddonors;15.6%(5/32)inintravenousdrugaddicts;54.4%(6/11)inhemodialysispatients;65%(13/32)inprostitutes;25%(4/16)inpatientswithchronichepatitisC.Noneofthe11patientswithnonA-GhepatitiswasdetectedTTVDNA.ConclusionHighprevalenceofTTVinfectionwasfoundindifferentpopulationsofChina.
【Keywords】Transfusiontransmittedvirus(TTV)Polymerase;chainreaction(PCR)NonA-Ehepatitisvirus
椐国内外报道，在急性散发性病毒性肝炎中约10%～20%为非甲～戊型肝炎，其中能检测到庚型肝炎病毒(HGV)者仅占2%～20%［1，2］，且HGV的致病性尚有争议，提示存在新型肝炎病毒的可能性。1997年底，日本学者［3］应用代表性差异分析法(RepresentativeDifferentiationAnalysis.RDA)从1名输血后非甲～戊型肝炎病人中分离到1种新病毒，称为输血传播病毒(TTV)。据报道［4］，该病毒感染与血清丙氨酸转氨酶(ALT)异常有关，且在各型肝炎病人中均有较高的感染率。为了解我国人群TTV感染状况，我们应用套式聚合酶链反应法(nPCR)，对不同地区不同人群进行了TTVDNA检测，并对其中1株TTVDNA部分基因序列进行了测定。现将结果报告如下。
对象与方法
一、研究对象：献血员、血液透析患者、吸毒者、妓女的血清标本采自深圳、安徽、云南、青岛；常规体检人群、慢性丙型肝炎病人以及非甲～庚型肝炎患者血清标本采自北京。所有血清标本均直接送到北京医科大学微生物学系，置－20℃下保存备检。
二、检测方法：酶联免疫法(EIA)检测甲～庚型肝炎病毒的血清学指标；套式逆转录聚合酶链反应法(RT-nPCR)检测HGVRNA。TTVDNA检测参照日本报道的TTV序列引物，采用套式PCR法(nPCR)，外引物为P1：5′-gcagcagcatatggatatgt-3′，P2：5′-tgactgtgctaaagcctcta-3′；内引物为P3：5′-catacacatgaatgccaggc-3′，P4：5′-gtacttcttgctggt
gaaat-3′。TTVDNA提取采用SDS-蛋白酶K裂解法。第一轮和第二轮的PCR循环参数为94℃，30秒；55℃，30秒；72℃，50秒，终末延伸5分钟，两轮均为30个循环。扩增产物经溴化乙锭染色，2%琼脂糖凝胶电泳，然后在紫外灯下观察鉴定。每次PCR均设阴性、阳性和空白对照。
三、PCR产物序列测定：扩增产物经0.7%低熔点琼脂糖凝胶电泳分离，切下目的DNA条带，用原平公司纯化试剂盒进行回收纯化，采用双脱氧链末端终止法直接测序，测序试剂盒购自Promega公司，测序仪为Bio-Rad公司产品。
结果
一、不同人群TTVDNA的检出情况：由表1可见，TTVDNA阳性率以妓女最高，以下依次为血液透析病人、献血员、慢性丙型肝炎病人、静脉吸毒者和常规体检人群，11名非甲～庚型肝炎病人中未检出TTVDNA。
TTV与乙型(HBV)、丙型(HCV)、戊型(HEV)和庚型肝炎病毒(HGV)合并感染情况见表2。TTV与HCV合并感染最为常见，其次是与HBV，与HEV和HGV合并感染较为少见。此外，还可见与HBV和HCV、与HCV和HGV，以及与HCV、HEV和HGV重叠感染者。单独TTVDNA感染仅占37.8%。
表1不同人群TTVDNA检出情况
检测人群检测人数TTVDNA阳性例数(%)
常规体检人群30131(10.3)
献血员3214(43.8)
静脉吸毒者325(15.6)
血液透析病人116(54.5)
妓女2013(65.0)
慢性丙型肝炎病人164(25.0)
非甲～庚型肝炎病人110(0.0)
表2TTV与HBV、HCV、HEV和HGV合并感染情况
合并感染组别例数构成比(%)
TTV＋HBV＋511.1
TTV＋HCV＋1533.3
TTV＋HEV＋12.2
TTV＋HGV＋12.2
TTV＋HBV＋HCV＋36.7
TTV＋HCV＋HGV＋12.2
TTV＋HCV＋HEV＋HGV＋24.5
单独TTV＋1737.8
合计45100.0
二、1株TTV部分基因序列测定：为确定nPCR检测TTVDNA结果的可靠性，我们对1株TTVDNA阳性的nPCR产物直接进行了序列测定，并与日本报道的TTVDNA序列(AB008394)进行了比较(图1)，其同源性为98.7%。
Atttacagacccacaactactagtacacacagaccccacaaaag
B-------------------------------------------
Agctttgttccttactctttaaactttggaaatggtaaaatgcc
B-----------------------------------------g-
Aaggaggtagtagtaatgtgcctattagaatgagagctaaatgg
B---------c---------------------------------
Atatccaacattatttcaccagcaagaagt
B-----------------------------
1从我国分离的1株TTVDNA的部分核苷酸序列(B)与日本株(A：B008394)比较
讨论
1997年底日本学者［3］报道，从输血后非甲～庚型肝炎病人中分离到一种DNA病毒，称为TTV，该病毒在暴发性肝炎和原因不明的慢性肝病中有相当高的流行，并认为与血清ALT异常有关［4］，为探讨非甲～庚型肝炎病毒提供了新的线索。对我国不同人群TTV感染状况检测结果表明，在正常体检人群中TTVDNA阳性率为10.3%，与日本(12%)［4］和英国(10%)［5］的报告接近。在正常人群中存在如此高的携带率，其意义有待探讨。慢性丙型肝炎的TTVDNA阳性率为25%(4/16)，与英国报告一致。本研究表明，TTV可与其他型肝炎病毒合并感染，也可单独感染，但绝大多数TTVDNA阳性者的血清ALT正常。有学者报告，大多数TTV阳性病例肝脏无明显生化或组织学改变，从而认为TTV可能与HGV相似，是一种与疾病无关的人类病毒［5］。
本次检测的丙型肝炎病人均有献血史，TTVDNA检出率为25%，妓女中均无献血史，但TTVDNA检出率高达65%，提示TTV经血传播外，还可能存在性接触传播。非甲～庚型肝炎病人中未检测到TTVDNA，可能与样本量小有关。
虽然所测定的TTVDNA部分基因序列的片段较短，与日本株的同源性为98.7%，表明该区段比较保守；本研究设计的引物适用于TTVDNA的检测。
对TTV的研究尚处于起步阶段，关于该病毒的分子生物学、流行病学及其致病性等有待进一步研究。
参考文献
1LinnenJ,JrWagesJ,Zhang-KeckZY,etal.MolecularcloninganddiseaseassociationofhepatitisGvirus:atransfusion-transmissibleagent.Science,1996,271∶505-509.
2LearyTP,MuerhoffSA,SimonsJN,etal.SequenceandgenomicorganizationofGBV-C:anovelmemberoftheflaviviradaeassiciatedwithhumannonA-Ehepatitis.JMedVirol,1996,48∶60-67.
3NishizawaT,OkamotoH,KonishiK,etal.AnovelDNAvirus(TTV)associatedwithelevatedtransaminaselevelsinposttransfusionhepatitisofunknownetiology.BiochemBiophyCom,1997,241∶92-97.
4OkamotoH,NishizawaT,KatoN,etal.MolecularcloningandcharacterizationofanovelDNAvirus(TTV)associatedwithposttransfusionhepatitisofunknwonetiology.HepatolRes,1998,10∶1-16.
5NaoumovNV,PetrovaEP,ThomasMG,etal.PresenceofanewlydescribedhumanDNAvirus(TTV)inpatientswithliverdisease.Lancet,1998,352∶195-197.
