清肺口服液质量标准

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摘要：目的建立清肺口服液的质量标准。方法采用薄层色谱法鉴别制剂中葶苈子、黄芩和虎杖；采用高效液相色谱方法测定盐酸麻黄碱的含量。结果薄层鉴别能检出葶苈子、黄芩和虎杖的斑点，且斑点清晰。盐酸麻黄碱在16.41～525.0μg/mL之间与峰面积呈良好线性关系，r=1.000,平均加样回收率为99.89%，RSD为1.42%。结论该方法可用于清肺口服液的质量控制。

关键词：清肺口服液；盐酸麻黄碱；薄层色谱法；高效液相色谱法

Abstract:ObjectiveToestablishthequalitystandardofQingfeioralliquor.MethodsThequalityofDescurainiasophia,ScutellariabaicalensisGeorgiandPolygonumcuspidatumwasidentifiedbyTLC.ThecontentofephedrinehydrochloridewasdeterminedbyHPLC.ResultsThespotsonTLCplateswereclearwithoutinterferenceintheblankcontrol.Thelinerrangeofephedrinehydrochloridewas1641~525.0μg/mL(r=1.000).Theaveragerecoveryofephedrinehydrochloridewas99.89%andRSD1.42%.ConclusionThemethodcanbeusedforthequalitycontrolofQingfeioralliquor.

Keywords:Qingfeioralliquor;ephedrinehydrochloride;thinlayerchromatography;HPLC

清肺口服液由麻黄、葶苈子、黄芩、虎杖等中药精制而成，具有宣肺开闭、清热解毒、化痰止咳之功效，主治小儿病毒性肺炎痰热闭肺证。麻黄为君药，主要含有麻黄碱、伪麻黄碱等生物碱类成分［1］，其中麻黄碱含量较高，且为活性成分。为了更好地控制制剂的内在质量，本文建立了制剂中葶苈子、黄芩和虎杖的薄层鉴别方法及麻黄碱的HPLC含量测定方法。

1仪器与试剂

美国Waters515泵，Waters2487紫外可见检测器，Rheodyne进样器，中科院大连化学物理所WDL95色谱工作站；PBQI型薄层自动涂布器；薄层层析显色加热器；硅胶G（青岛海洋化工集团）；乙醇、甲醇为色谱纯（美国Tedia公司）；水为重蒸馏水；其余试剂均为分析纯。

盐酸麻黄碱对照品（批号171241200303，HPLC法检查纯度大于99%）、黄芩苷对照品（批号110715200212）、大黄素对照品（批号0757200206）、黄芩对照药材（批号120955200406）均购自中国药品生物制品检定所。葶苈子药材经江苏省药检所鉴定为十字花科植物独行菜（Lepidiumapetalum）的干燥成熟种子，习称“北葶苈子”；并标化后作为对照药材使用。清肺口服液(南京中医药大学研制，批号：050914，050915，050916)。

2薄层鉴别

2.1黄芩［2］取清肺口服液1mL，加甲醇2mL，摇匀，离心，取上清液作为供试品溶液。取缺黄芩阴性制剂1mL,同法制成缺黄芩的阴性制剂溶液。另取黄芩苷对照品，用甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。取黄芩对照药材1g，加甲醇20mL，超声处理20min,滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇溶液1mL使溶解，即得，作为黄芩对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005版一部附录ⅥB）试验，吸取上述4种溶液各5μL，分别点于同一以含4%醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯丁酮甲酸水(体积比5∶3∶1∶1)为展开剂，预平衡30min，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同的暗绿色斑点；缺黄芩的阴性制剂无干扰。见图1。

1.缺黄芩的阴性制剂;2.黄芩对照药材;3.黄芩苷对照品;4-6.清肺口服液

图1清肺口服液黄芩薄层色谱图（略）

Fig.1TLCchromatogramofScutellariabaicalensisGeorgi

2.2虎杖［3］取清肺口服液10mL，加2.5mol/L硫酸溶液10mL，水浴加热30min，放冷，用三氯甲烷振摇提取2次，每次5mL，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷2mL使溶解，作为供试品溶液。另取虎杖对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取大黄素对照品、大黄素甲醚对照品，加甲醇制成每1mL含各1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005版一部附录ⅥB）试验，吸取上述4种溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30～60℃）甲酸乙酯甲酸(体积比15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点。见图2。

1.虎杖对照药材;2.大黄素对照品;3.大黄素甲醚对照品;4-6.清肺口服液

图2清肺口服液虎杖薄层色谱图（略）

Fig.2TLCchromatogramofPolygonumcuspidatum

2.3葶苈子［4］取清肺口服液10mL，置分液漏斗中，加水饱和正丁醇10mL振摇提取，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液。另取缺葶苈子阴性制剂1mL,同法制成缺葶苈子的阴性制剂溶液。再取北葶苈子对照药材粉末1g，加甲醇10mL，密塞，浸泡24h，超声处理20min，滤过，滤液作为对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005版一部附录ⅥB）试验，吸取上述3种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以水饱和正丁醇冰醋酸水(体积比9∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同蓝色荧光斑点。缺葶苈子的阴性制剂无干扰，见图3。

1.缺葶苈子的阴性制剂;2.葶苈子对照药材;3-5.清肺口服液

图3清肺口服液葶苈子薄层色谱图（略）

Fig.3TLCchromatogramofDescurainiasophia

3含量测定

3.1对照品溶液的制备精密称取于五氧化二磷干燥器中干燥6h的盐酸麻黄碱对照品适量，用流动相制成每1mL含01mg的溶液，即得。3.2供试品溶液的制备取清肺口服液5mL，置分液漏斗中，加5%（质量分数）氨水10mL，摇匀，用三氯甲烷振摇提取4次（10×2，5×2mL）合并三氯甲烷液，用5%（质量分数）氨水5mL洗涤以去除杂质，水层用三氯甲烷5mL振摇提取1次，合并三氯甲烷液，用0.05mol/L盐酸溶液振摇提取3次（10，5，5mL），提取液置25mL量瓶中，用10%（质量分数）氢氧化钠溶液调pH至4，加水稀释至刻度，即得。

3.3色谱条件与系统适应性试验色谱柱：LichrospherC18（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈水三乙胺磷酸（体积比5∶95∶0.05∶0.1）；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；检测波长：210nm。理论塔板数按盐酸麻黄碱计算应不低于3000。

3.4线性关系考察精密称取于60℃干燥至恒重的盐酸麻黄碱对照品10.50mg，置10mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，制成盐酸麻黄碱标准贮备液（1.050mg/mL）。分别配成525.0、262.5、131.3、65.63、32.81、16.41μg/mL的系列对照品溶液，分别吸取上述溶液20μL，注入液相色谱仪，测定，以峰面积（A）为纵坐标，对照品质量浓度（ρ）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：A＝2.098×104ρ-27840.877，r＝1.0000。表明盐酸麻黄碱在16.41～525.0μg/mL之间与峰面积呈良好的线性关系。

3.5空白试验原方去除麻黄药材，按制剂工艺制备缺麻黄的阴性制剂。取阴性制剂5mL，置分液漏斗中，按含量测定方法分析，空白样品色谱在盐酸麻黄碱相应保留时间上没有干扰峰。见图4。

A.缺麻黄的阴性制剂;B.盐酸麻黄碱对照品;C.清肺口服液1.盐酸麻黄碱

图4HPLC色谱图（略）

Fig.4HPLCchromatogram

3.6稳定性考察取同一批号（050914）制剂，每隔2h进样1次，共测6次，结果峰面积RSD=0.67%，表明供试品溶液在12h内稳定。

3.7重复性试验取同一批号（050914）制剂5份，分别按照供试品溶液制备方法制备，依法测定，盐酸麻黄碱的平均含量为0.4261mg/mL,RSD=1.93％。

3.8加样回收率试验取已知盐酸麻黄碱含量的制剂样品(批号：050914，含量:0.4261mg/mL)，进行加样回收率试验。取本品2.5mL，共6份，分别加入1.050mg/mL盐酸麻黄碱对照液0.8、0.8、1.0、1.0、1.2、1.2mL置分液漏斗中，按“3.2”项方法制备供试品溶液，依法测定，并计算盐酸麻黄碱回收率为99.54％，RSD=2.90％，结果见表1。

表1盐酸麻黄碱回收率试验（略）

Tab.1Recoverytestofephedrinehydrochloride

3.9制剂样品测定3批制剂样品，如法测定，根据外标一点法计算样品含量，结果见表2。

表2盐酸麻黄碱的含量测定结果（略）

Tab.2Contentofephedrinehydrochlorideinthesample

4讨论

4.1由于测定波长处于末端吸收附近，以乙腈水系统为流动相，基线噪音较小，但由于麻黄碱为生物碱成分，需加入缓冲体系进行色谱分析，经试验研究表明，在乙腈水三乙胺磷酸（体积比5∶95∶0.05∶0.1）(pH3)的条件下，可使盐酸麻黄碱呈现良好分离。故选乙腈水三乙胺磷酸（体积比5∶95∶0.05∶0.1）为流动相。

4.2麻黄碱为清肺口服液的活性成分，可用来作为中成药的定量指标成分。

4.3该方法简便可靠，精密度高，分离度好，可用于清肺口服液的含量测定和质量控制。

【参考文献】

［1］国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草精选本（下册）［M］.上海:科学技术技术出版社，1998：1685.

［2］黄江虹.定喘汤加减方颗粒中麻黄和黄芩TLC鉴别［J］.国际医药卫生导报，2006，12(24):78-79.

［3］国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部［M］.北京：化学工业出版社，2005：145.

［4］李海鹰，李静.车前子与其伪品炒葶苈子的鉴别［J］.基层医药杂志，2001，15(1):36-37.