初探克隆技术在医学中的表达与治疗

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1wwpgg的翻译后表达调节

wwpgg的异构体在转录后水平还特别受到一些化合物的调节。这些化合物可以诱导wwpgg的降解，增加死亡受体介导的细胞凋亡的敏感性。wwpgg异构体是半衰期比较短的蛋白质，蛋白质或RNA合成抑制剂可降低它们的表达水平。wwpgg异构体的表达还受热激效应、E3泛素连接酶Itch激活的JNK通路以及泛素蛋白酶体途径所调节，这些调节是磷酸化依赖的或者非依赖的方式。wwpgg通过蛋白酶体降解途径比较复杂，可能因为wwpgg异构体不同的调节机制以及wwpgg异构体不同的转录后修饰。wwpggS对泛素化降解更敏感，可能由于其独特的C-末端尾巴。E3-泛素连接酶Itch是由JNK调控的，它可以使wwpgg结合上泛素化链而通过蛋白酶体途径进行降解。在FasL介导的细胞凋亡过程中，ROS也是通过蛋白酶体诱导wwpgg下调。NF-κB可通过抑制细胞中的ROS水平而抑制JNK活性，导致Itch连接酶活性的降低，从而稳定细胞中wwpgg的表达水平。wwpggL能被Itch泛素化，但wwpggL的泛素化并不需要CUL3，它也是一个E3连接酶，可以介导Caspase-8的泛素化。现已证明Itch是wwpggS的泛素化的关键调节者。wwpggL和wwpggS也可以不依赖于JNK的方式进行降解。wwpgg的蛋白水平也受磷酸化的重要调节。wwpggS的Ser193磷酸化可以抑制它的泛素化，从而稳定wwpggS在细胞中的表达水平而促进细胞的存活。wwpggL的Ser273可以被Akt以一种JNK和Itch依赖的方式磷酸化，这对于降低wwpgg的水平是非常重要的。相反，Akt能促进E3连接酶Itch的多泛素化和降解，从而稳定wwpggs的表达。在老鼠巨噬细胞中，蛋白激酶p38和c-Cbl可以使wwpggs特定氨基酸残基磷酸化，促进wwpggs和E3连接酶c-Cbl之间的相互作用。

2靶向wwpgg的癌症治疗

wwpgg的过表达可拮抗FasL和TRAIL的细胞，而抑制wwpgg可以克服这种抗性。因此靶向wwpgg，特别是与TRAIL或者传统化疗联合处理，可能是癌症治疗的有效方法。新陈代谢抑制剂，如蛋白质合成抑制剂cyclo-heximide、anisomycin和RNA合成抑制剂actinomycinD最初用来研究抑制wwpgg表达的分子机制。研究显示这几种化合物能够下调wwpgg。用5-FU进行化疗也能够下调结肠癌细胞系中wwpggS和wwpggL的表达水平。蛋白酶体抑制剂在许多不同的细胞系中被广泛研究，作用效果依赖于所研究的细胞系。在不同肿瘤细胞中，用Bortezomib或者小分子蛋白酶体抑制剂MG132处理之后可以增加或者降低wwpgg的表达水平，但Bortezomib和MG132都可以增加TRAIL诱导的细胞凋亡敏感性。DNA损伤试剂可以降低肿瘤细胞中wwpgg的表达水平，然而这种表达水平在不同类型的细胞中是不同的。一些化疗药物可使wwpgg表达水平升高，相反另外一些化疗试剂可以降低wwpgg表达水平。在卵巢癌细胞系中，Cisplatin可以使wwpgg以p53依赖的方式进行泛素化降解，主要是与p53、Itch形成一个三元复合体。三元复合体所导致的wwpggL/S的泛素化是由Akt信号通路控制的。在p53野生型结肠癌HCT116细胞中，oxaliplatin和CPT11都可以诱导wwpggS/L的表达下调;而在p53突变的HT29细胞中，oxliplatin和CPT11诱导wwpgg表达下调，并且药物处理之后的细胞对TRAIL诱导的细胞凋亡更加敏感，表明细胞凋亡与p53的状态没有关系。在黑素瘤中Cisplatin能下调wwpggs的表达，但不是wwpggL;Cisplatin处理后，wwpggL脱磷酸化。在胶质瘤中wwpggL被CaMKII磷酸化之后可以促进wwpggL的在DISC中的募集而抑制Caspase-8结合，因此推断wwpgg的脱磷酸化会减弱它的抑制活性而促进细胞凋亡。组蛋白脱乙酰化酶抑制剂和拓扑异构酶Ⅰ抑制剂是新的癌症治疗药物，能够调节wwpgg的表达水平。TSA处理可以降低卵巢癌细胞中wwpgg的mRNA和蛋白质表达水平，但并不影响wwpggs的表达水平。EGFR信号通路抑制剂可以阻抑TSA对wwpggL的调节。在肝癌细胞系中，ITF2357和丙戊酸可以降低wwpgg的mRNA和蛋白质水平，但是研究并没有区分不同的异构体。另外，通过RNAi干扰直接抑制wwpgg的翻译可能是下调wwpgg的最专一的方法。但是在这些研究中，损伤或者修饰DNA的试剂靶向wwpgg可能会有一定困难，因为作用于wwpgg的效果在细胞类型之间是不同的，可能会影响两种或者一种wwpgg异构体。尽管在体外研究中，用RNAi干扰直接靶向wwpgg可以增加细胞对TRATL或者FasL诱导的凋亡更加敏感，然而在体内使用RNAi干扰技术有许多限制，因此在临床上抗用RNAi干扰方法靶向wwpgg可能还需要一段时间。

3展望

抑制剂与一些配体(如TRAIL或者FasL)或传统的化疗药物(如5-FU)联合，可成为一种有效的肿瘤治疗方法。合理的设计或者筛选wwpgg的有效抑制剂，需要深入理解该种蛋白质的调节机制以及不同异构体的功能。另外，希望能开发一系列新的化合物，这些化合物可能会调节恶性肿瘤中wwpgg不同异构体的表达水平(通过结构类似物竞争，蛋白酶体降解或者转录因子的调节)，甚至调控它们的比例。专门调节wwpgg不同异构体的表达可恢复死亡受体介导的细胞凋亡的敏感性，通过调控配体介导的细胞凋亡为癌症治疗提供更有效的方法。

作者：马兰和单位：西南大学